一种降低僵蚕灰分含量的方法

1.本发明涉及农业技术领域，具体为一种降低僵蚕灰分含量的方法。


背景技术：

2.僵蚕味辛、咸，性平，是蚕蛾科昆虫家蚕(bombyx mori)4～5龄幼虫感染(或人工接种)白僵菌(beauveria bassiana)而致死的干燥体，亦称僵虫、天虫和姜虫等，是我国传统中药材，具有祛风解痉，化痰散结，清热解毒、消肿、调节脂肪代谢及神经系统等功效。其药用十分广泛，在我国500余种常用中药方剂中，需要僵蚕药材的多达100余种。
3.随着僵蚕在保健食品、医药等领域的广泛应用，其需求正逐年增加。但目前在养蚕过程中僵蚕发病率很低，自然感染而成的僵蚕数量很少，不能满足中药市场对僵蚕的需求。因此，僵蚕规模化人工养殖已成必然趋势。
4.在规模化人工养殖僵蚕的过程中，对僵蚕质量检验的标准规定为：杂质不得超过3％、水分不得超过13.0％、每1000g含黄曲霉毒素b1不得超过5ug、总灰分不得超过7.0％；该僵蚕质量标准中前三个因素(杂质含量、水分含量和每1000g黄曲霉毒素b1含量)可通过筛选、日晒等方法控制；但关于总灰分不得超过7.0％这一要求，目前规模化生产僵蚕灰分含量往往在7.0％左右，无法稳定在7.0％以下，这成为影响僵蚕质量的瓶颈。因此，如何有效降低僵蚕灰分含量、提高僵蚕的养殖质量是本领域亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.本发明意在提供一种降低僵蚕灰分含量的方法，先通过人工对家蚕接种白僵菌，然后对接种后的家蚕进行濒死处理，最后对病蚕进行储存管理，从而有效的将僵蚕灰分含量控制在7％以内，实现有效降低僵蚕灰分含量、提高僵蚕的养殖质量。
6.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.一种降低僵蚕灰分含量的方法，包括以下步骤：
8.s1、准备家蚕
9.家蚕在小蚕期采用塑料薄膜防干育，日给桑3次；4～5龄采用地蚕育，日给桑3次；
10.s2、接种白僵菌
11.在5龄起蚕期，将菌液均匀的喷洒到每一只起蚕体表，喷后30min饷食；
12.s3、对接种后的家蚕进行濒死处理
13.当5％～10％家蚕濒死0～12h停止给桑，待其全部自然僵死；
14.s4、病蚕进行储存管理
15.把濒死蚕择出单独放于蚕箔，至该箔蚕全部僵死后，存放于另一铺好干净牛皮纸蚕箔内，待蚕发僵后，自然晾干保存。
16.进一步地，在s1中，家蚕的品种为蜀水
×
川山，冷藏浸酸种。
17.进一步地，在s2中，喷洒的菌液包括白僵菌菌株和白僵菌孢子乳化剂；其中，白僵菌菌株为球孢白僵菌分离株，白僵菌孢子乳化剂为吐温80；菌液中白僵菌孢子粉与蚁量的
质量比为4：10。
18.进一步地，在s2中，菌液的配制方法为：先将吐温80倒入水温25℃温水中稀释均匀，再倒入白僵菌孢子粉，充分搅拌，防止白僵菌孢子粉悬浮于吐温80液体表面，温度保持在24～26℃。
19.进一步地，在s2中，接种时蚕室内自然温度为25～27℃，蚕室湿度保持于75％，并维持到接种后30min。
20.进一步地，在s2中，利用电动喷雾器将菌液均匀喷于5龄起蚕体表，确保菌液能均匀喷雾到每个蚕头上；为保证接种全面、均匀，喷雾时不断搅拌，防止孢子粉漂浮在水面上，采用来回喷雾方法喷雾2次。
21.技术方案的有益效果是：
22.1、本发明通过对家蚕接种白僵菌，并在接种后5％～10％的家蚕濒死0～12h停止给桑，减少了家蚕僵死前中肠内未消化的桑叶，既保证了僵蚕产量，又将僵蚕灰分含量控制在7％以内，提高了僵蚕质量；
23.2、本发明的逻辑清晰，操作过程简单，易于实际推广运用。
具体实施方式
24.下面结合实施方式对本发明作进一步的详细说明：
25.一种降低僵蚕灰分含量的方法，包括以下步骤：
26.s1、准备家蚕
27.选用品种为蜀水
×
川山的家蚕，冷藏浸酸种；家蚕在小蚕期采用塑料薄膜防干育，日给桑3次；4～5龄采用地蚕育，日给桑3次；
28.s2、接种白僵菌
29.在5龄起蚕期，将菌液均匀的喷洒到每一只起蚕体表；其中，喷洒的菌液包括白僵菌菌株和白僵菌孢子乳化剂；白僵菌菌株为球孢白僵菌分离株，白僵菌孢子乳化剂为吐温80；菌液中白僵菌孢子粉与蚁量的质量比为4：10；
30.菌液的配制方法为：先将吐温80倒入水温25℃温水中稀释均匀，再倒入白僵菌孢子粉，充分搅拌，防止白僵菌孢子粉悬浮于吐温80液体表面，温度保持在24～26℃；
31.接种的条件：蚕室内自然温度为25～27℃，蚕室湿度保持于75％，并维持到接种后30min；
32.接种菌液：采用体表喷施方法接种菌液，利用电动喷雾器将菌液均匀喷于5龄起蚕体表，确保菌液能均匀喷雾到每个蚕头上，喷后30min饷食；为保证接种全面、均匀，喷雾时不断搅拌，防止孢子粉漂浮在水面上，采用来回喷雾方法喷雾2次；
33.s3、对接种后的家蚕进行濒死处理
34.当5％～10％家蚕濒死0～12h停止给桑，待其全部自然僵死；
35.s4、病蚕进行储存管理
36.把濒死蚕择出单独放于蚕箔，至该箔蚕全部僵死后，存放于另一铺好干净牛皮纸蚕箔内逐个并排存放，待蚕发僵后，自然晾干保存。
37.具体实验过程如下：
38.1材料与方法
39.1.1试验材料
40.供试家蚕品种为蜀水
×
川山，冷藏浸酸种，由云南禄劝宝瑞蚕业有限责任公司提供；供试白僵菌菌株为球孢白僵菌(beauveriabassia-na nb)分离株，由四川省农业科学院蚕业研究所分离培养；供试白僵菌孢子乳化剂为吐温80(tween80，聚山梨酯-80)，成都市科隆化学品有限公司生产。
41.供试主要仪器：万分之一fa2104s型电子天平(上海天平仪器厂)，dhg-9030a型电热鼓风恒温干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)，rjm-2.8-12型马弗炉(沈阳市长城工业电炉厂)，另有电炉、坩埚、坩埚钳等。
42.1.2试验方法
43.1.2.1家蚕饲养
44.饲养试验地点设在重庆三峡农业科学院甘宁基地专业化蚕房内，蚕房具有升、降温及补湿条件；蚕种于8月22日出库，催青按重庆市质量技术监督局《桑蚕种第8部分：桑蚕种催青技术规程》(db50/t 573.8—2014)进行，催青后收蚁，一日孵化率99％。小蚕期采用塑料薄膜防干育，日给桑3次；4～5龄采用地蚕育，日给桑3次。
45.1.2.2白僵菌接种
46.接种环境准备：蚕室内自然温度保持于25～27℃，通过人工补湿，保证蚕室湿度保持于75％并维持到接种后30min。
47.菌液配制：按4g白僵菌孢子粉/10g蚁量的比例配制菌液；配制时，先将吐温80倒入水温25℃温水中稀释均匀，再倒入白僵菌孢子粉，充分搅拌，防止白僵菌孢子粉悬浮于吐温80液体表面，温度保持在25℃左右待用。
48.喷雾接种：采用体表喷施方法，使用20l电动喷雾器将菌液均匀喷于5龄起蚕体表，确保菌液能均匀喷雾到每个蚕头上，喷后30min饷食；为保证接种全面、均匀，喷雾时要不断搅拌，防止孢子粉漂浮在水面上，采用来回喷雾方法喷雾2次。
49.1.2.3试验处理
50.在接种后第4d进行处理，设置三个处理一个对照。每个处理(含对照)供试蚕头数量300头(一个蚕簸)，每个处理3个重复。处理一，当5％～10％(即15～30头)家蚕濒死时停止给桑，待其全部自然僵死。处理二，5％～10％家蚕濒死12h(即正常给桑一次)后停止给桑，待其全部自然僵死。处理三，5％～10％(15～30头)家蚕濒死足18h(即正常给桑2次)后停止给桑，待其全部自然僵死。对照组家蚕施菌后，一直给桑(即家蚕感病后继续按正常给桑时间给桑)，直到全部自然僵死。
51.1.2.4感病家蚕管理
52.家蚕感病后食欲显著下降，蚕体开始变软，此时需把濒死蚕择出单独放于蚕箔，至该箔蚕全部僵死后，分区对号将各区僵蚕人工捡出存放于另一铺好干净牛皮纸蚕箔内逐个并排存放，2d左右发僵后，自然晾干保存。
53.1.2.5灰分测定
54.样品预处理：将样品放入26℃干燥箱平衡3d。坩埚预处理：将干燥的坩埚放入525
±
25℃的马弗炉灼烧30min后，冷却至200℃左右，取出放入干燥器中继续冷却至室温，称量，重复上述步骤直至恒重，待用。称样：称取预处理样品5g左右于已经恒重的坩埚内，先以小火加热使样品充分炭化至无烟。处理：将炭化完全的试样转入525
±
25℃的马弗炉，灰化
直至无炭粒为止，待炉温冷却至200℃左右后，放入干燥器冷却至室温称重，计算灰分含量。
55.灰分含量(％)＝灰化后样品恒定质量g/灰化前初始样品质量g
×
100
56.1.3调查项目
57.本试验设计3个调查项目，分别为濒死蚕个体重、僵蚕个体重、僵蚕灰分占比。濒死蚕个体重指标旨在调查每个处理(含对照)濒死蚕个体重量，反映不同给桑处置试验下未僵化蚕头重量差异。调查时，分别随机抽取每个处理(含对照)濒死蚕30头称重，求其平均数即为“濒死蚕个体重”，平均数保留小数点后两位。僵蚕个体重指标调查时间节点：蚕体变硬并着生满白僵菌孢子时，旨在调查每个处理(含对照)僵蚕个体重量，反映不同给桑处置试验下僵蚕个体重量差异。调查时，分别随机抽取每个处理(含对照)僵蚕30头称重，求其平均数即为“僵蚕个体重”，平均数保留小数点后两位。僵蚕灰分占比指标是衡量僵蚕品质的重要指标，该指标旨在调查僵蚕灰分含量。每个处理(包括对照)的3个重复混合抽样，各随机抽样30头僵蚕进行灰分含量检测。
58.2结果与分析
59.2.1濒死蚕个体重与僵蚕个体重比较
60.从表1可以看出，僵蚕个体重与濒死蚕个体重呈正相关，即濒死蚕体重越重，僵蚕越重；且不同处理间濒死蚕个体重与僵蚕个体重存在显著性差异，濒死蚕个体重：处理一(3.44g)﹤处理二(3.69g)﹤处理三(4.11g)﹤对照(4.21g)，僵蚕个体重：处理一(0.61g)﹤处理二(0.64g)﹤处理三(0.73g)、对照(0.74g)。即表明止桑时间越早其濒死蚕个体重及僵蚕个体重越小，生产中要合理把握止桑时间。
61.表1濒死蚕个体重与僵蚕个体重比较
[0062][0063]
注：平均值统计分析采用ibm spss 16.0软件，差异性分析方法为one-wayanovo，duncan氏新复极差法，单因素方法分析，数据的表示方法为同列不同小写字母表示在0.05水平差异显著。
[0064]
2.2僵蚕灰分含量比较
[0065]
僵蚕灰分含量结果见表2，各处理僵蚕灰分含量由小及大依次为处理一(6.85％)、处理二(6.96％)、处理三(7.52％)、对照(7.85％)。其中处理一及处理二僵蚕灰分含量符合僵蚕质量检验标准(灰分含量不超过7％)，分别低于指标2.14％和0.57％；处理三及对照不符合僵蚕质量检验标准，灰分含量超过指标7.43％和12.14％。结果表明：家蚕接种白僵菌
孢子后，当有5％～10％家蚕濒死或5％～10％家蚕濒死12h(即正常给桑一次)停止给桑，僵蚕中灰分含量符合僵蚕质量检验标准；家蚕接种白僵菌孢子后，5％～10％家蚕濒死足18h(即正常给桑2次)或家蚕感病后继续按正常给桑时间给桑，僵蚕中灰分含量不符合僵蚕质量检验标准。因此建议僵蚕生产中，在家蚕接种白僵菌孢子后，在正常给桑一次后停止给桑，既满足僵蚕产量需求，又能能够有效降低僵蚕中灰分含量。
[0066]
表2僵蚕灰分含量检测结果
[0067][0068]
3讨论
[0069]
掌握好蚕头接种白僵菌孢子、出现濒死蚕后的止桑时间能有效降低僵蚕灰分含量，是一种提高僵蚕质量的养殖方法，它关系到僵蚕质量，同时也应该重视饲养僵蚕的经济效益。而本试验研究发现，僵蚕体重越大，其体内灰分越高，这与家蚕食桑量有关，食桑越多，僵蚕体重越大。因此僵蚕生产中，要从家蚕五龄盛食期开始增加日给桑次数，充分饱食，以最大限度地增加蚕头个体重，当5％～10％的家蚕濒死12h后停止给桑，减少了家蚕僵死前中肠内未消化的桑叶，既保证了僵蚕产量，又能够将僵蚕灰分含量控制在7％以内，实现提高僵蚕质量、提高经济效益。
[0070]
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

技术特征：
1.一种降低僵蚕灰分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、准备家蚕家蚕在小蚕期采用塑料薄膜防干育，日给桑3次；4～5龄采用地蚕育，日给桑3次；s2、接种白僵菌在5龄起蚕期，将菌液均匀的喷洒到每一只起蚕体表，喷后30min饷食；s3、对接种后的家蚕进行濒死处理当5％～10％家蚕濒死0～12h停止给桑，待其全部自然僵死；s4、病蚕进行储存管理把濒死蚕择出单独放于蚕箔，至该箔蚕全部僵死后，存放于另一铺好干净牛皮纸蚕箔内，待蚕发僵后，自然晾干保存。2.根据权利要求1所述的一种降低僵蚕灰分含量的方法，其特征在于：在s1中，家蚕的品种为蜀水
×
川山，冷藏浸酸种。3.根据权利要求1所述的一种降低僵蚕灰分含量的方法，其特征在于：在s2中，喷洒的菌液包括白僵菌菌株和白僵菌孢子乳化剂；其中，白僵菌菌株为球孢白僵菌分离株，白僵菌孢子乳化剂为吐温80；菌液中白僵菌孢子粉与蚁量的质量比为4：10。4.根据权利要求3所述的一种降低僵蚕灰分含量的方法，其特征在于：在s2中，菌液的配制方法为：先将吐温80倒入水温25℃温水中稀释均匀，再倒入白僵菌孢子粉，充分搅拌，防止白僵菌孢子粉悬浮于吐温80液体表面，温度保持在24～26℃。5.根据权利要求1所述的一种降低僵蚕灰分含量的方法，其特征在于：在s2中，接种时蚕室内自然温度为25～27℃，蚕室湿度保持于75％，并维持到接种后30min。6.根据权利要求1所述的一种降低僵蚕灰分含量的方法，其特征在于：在s2中，利用电动喷雾器将菌液均匀喷于5龄起蚕体表，确保菌液能均匀喷雾到每个蚕头上；为保证接种全面、均匀，喷雾时不断搅拌，防止孢子粉漂浮在水面上，采用来回喷雾方法喷雾2次。

技术总结
本发明属于农业技术领域，具体涉及一种降低僵蚕灰分含量的方法，包括S1、准备家蚕：在小蚕期采用塑料薄膜防干育，日给桑3次；4～5龄采用地蚕育，日给桑3次；S2、接种白僵菌：在5龄起蚕期，将菌液均匀的喷洒到每一只起蚕体表，喷后30min饷食；S3、对接种后的家蚕进行濒死处理：当5％～10％家蚕濒死0～12h停止给桑，待其全部自然僵死；S4、病蚕进行储存管理：把濒死蚕择出单独存放于蚕箔，待其发僵后，自然晾干保存。本发明先对家蚕接种白僵菌，然后对接种后的家蚕进行濒死处理，最后对病蚕进行储存管理，有效的将僵蚕灰分含量控制在7％以内，降低了僵蚕灰分含量，提高了僵蚕的养殖质量。提高了僵蚕的养殖质量。


技术研发人员：任杰群 陈力 谭立新 郑章云 唐松 余华献 张明海 郭铭建 夏川林 彭耀武
受保护的技术使用者：重庆三峡农业科学院（重庆市万州区甘宁蚕种场）
技术研发日：2023.05.18
技术公布日：2023/8/6