一种红曲霉多糖制备方法

1.本发明涉及生物发酵技术领域，具体涉及一种红曲霉多糖制备方法。


背景技术：

2.红曲多糖属于真菌多糖，无毒副作用，常用于食品和保健食品原辅料，且在国际上，真菌多糖又被称为“生物反应调节物”，简称brm(biological response modifier)，研究表明，红曲多糖的活性成分对异源、同源、甚至遗传性的肿瘤都有一定影响。此外，其还具有抗菌、抗病毒及抗凝聚的作用。
3.已有的对红曲霉菌的研究大多集中在色素、γ-氨基丁酸及洛伐他汀等次级代谢产物上，而对红曲霉菌代谢的红曲多糖的生物活性及如何高产红曲多糖发酵等方面研究较少。现有技术中，红曲多糖大都采用固态培养，其培养周期长，且易被杂菌污染而导致生产失败，并且还存在的问题是，固态发酵以手工操作为主，操作步骤繁琐，劳动强度大，周期长，并且质量稳定性不高，不适宜规模化生产，且制备得到的产品中红曲多糖含量较低。
4.近年来，一些研究人员通过开发不同的红曲菌种而使红曲多糖的生产技术得到了一定进展，如公开号为cn106929428a的中国专利公开了一种液态发酵制取红曲多糖的方法及制品，其公开了一种诱变菌株红曲红曲菌(monascus anka yang yz2001)，其还公开采用诱变菌株红曲菌液态发酵制取红曲多糖的方法及制品，得到的红曲菌丝体提取物的红曲多糖含量高达95～99％。其适合工业化推广生产，且得到的菌丝体提取物中红曲多糖的含量较高。然而该方法仅适用于生物保藏编号为cgmcc 8167的诱变菌株丛毛红曲菌，原料来源单一，且该方法并不能适用其它红曲菌种。因此，开发更多的可工业化加工生产，且能提高生产效率并生产得到纯度较高的红曲多糖产品的加工方法，迫在眉睫。


技术实现要素：

5.本发明所解决的技术问题在于提供一种能提高生产效率并生产得到纯度较高的红曲多糖产品、且能工业化加工生产的红曲霉菌丝多糖制备方法。
6.本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
7.一种红曲霉多糖制备方法，其特征在于，包括：
8.菌丝体制备：将红曲霉菌种活化后接种得到红曲霉种子液，将红曲霉种子液进一步发酵后收集菌丝体，烘干备用；所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为cicc 5045；
9.粗多糖提取：将烘干后的菌丝体与碱液混合后浸提得到浸提液，将浸提液超滤浓缩得到浓缩液，超滤浓缩时温度为20～30℃，超滤时的转子转速为7500～8500r/min；将浓缩液用sevag试剂脱蛋白后，得到红曲霉粗多糖；
10.初步纯化：用deae-52纤维素层析柱对红曲霉粗多糖进行初步分离纯化，得到多糖溶液；
11.二次纯化：用sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱对所述多糖溶液进一步分离纯
化，得到红曲多糖产品。
12.进一步地，菌丝体制备步骤中，红曲霉种子液为浓度为1
×
105～1
×
107mg/ml的红曲霉孢子悬浮液。
13.进一步地，菌丝体制备步骤中，将红曲霉种子液加入培养基，然后在28～32℃、120～180rpm的恒温摇床中避光发酵48～72h。
14.进一步地，所述红曲霉种子液与培养基的体积比为10～20:100；所述培养基包括：葡萄糖40～60g/l、蛋白胨5～10g/l、mgso
4 0.5～1g/l、酵母粉3～5g/l、kh2po
4 1.0～1.5g/l。
15.进一步地，粗多糖提取步骤中，所述碱液为naoh溶液，naoh溶液的浓度为0.15～0.25m，烘干的菌丝体与naoh溶液的料液比为1:25～35；浸提温度为90～95℃，浸提时间为2～3h。
16.进一步地，粗多糖提取步骤中，超滤浓缩时采用的超滤膜的截留分子量为10k mwco。
17.进一步地，粗多糖提取步骤中，sevag试剂脱蛋白的方法为：将浓缩液与sevag试剂按1：3～5的体积比混合，离心取上清液，将上清液于65～75℃的条件下恒温加热2.5～3.5h，然后加入上清液4～5倍体积的无水乙醇，混匀后，在3～5℃的条件下静置10～14h，离心取沉淀，经纯水溶解、冻干得红曲霉粗多糖。
18.进一步地，初步提纯步骤中，将红曲霉粗多糖配置成浓度为4.5～5.5mg/ml的多糖溶液，多糖溶液上样后分别用0、0.1、0.3、0.5、0.7m nacl溶液以1ml/min流速梯度洗脱，检测并收集得到多糖溶液。
19.进一步地，二次纯化过程中，将经过deae-52纤维素层析柱初步纯化而得到的多糖溶液配置成浓度为4.5～5.5mg/ml的溶液，在sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱上样后，用去离子水以0.4～0.6ml/min的流速洗脱，检测并收集得到红曲多糖产品。
20.进一步地，所述红曲多糖产品中红曲多糖的纯度为95.23
±
3.66％。
21.进一步地，菌丝体制备步骤中，发酵完成后，高温灭菌时间为15～25min，温度为121℃，压力为0～0.25mpa。
22.有益效果：本发明所述的红曲霉多糖制备方法，能有效防止杂菌污染、霉菌毒素和杂质代谢物的产生，并高效进行液态发酵生产，进而经过独特的提取和纯化工艺而得到高纯度的红曲多糖，最终产品中红曲多糖的纯度可达95.23
±
3.66％，具有很好的经济价值。且不同批次产量及纯度稳定，适合批量加工生产。
23.本发明所述的红曲霉多糖制备方法，对菌种编号为cicc 5045的丛毛红曲菌(monascus pilosus)发酵后，采用碱提和超滤浓缩结合方式，实现了丛毛红曲菌丝体多糖的快速提取，有效提高了从毛红曲菌丝体多糖的提取效率的同时，能初步去除大分子杂质，进一步结合后续的初步纯化和二次纯化，进一步去除杂质，从而制备得到的红曲多糖产品纯度较高，有效将从毛红曲菌丝体多糖的纯度从36.86％提高到98.65％。
具体实施方式
24.为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例进一步阐述本发明。
25.实施例1
26.所述的红曲霉多糖制备方法，包括：
27.菌丝体制备：
28.将红曲霉菌种活化转接pda平板培养基，加无菌水，刮取菌丝，无菌棉花过滤，制备成浓度为1
×
106mg/ml的红曲霉孢子悬浮液。其中所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为cicc 5045，菌种购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
29.将红曲霉种子液按培养基体积的15％加入至培养基中，然后在30℃、150rpm的恒温摇床中避光发酵54h。所述红曲霉种子液与培养基的体积比为15:100；所述培养基包括：葡萄糖50g/l、蛋白胨8g/l、mgso
4 0.8g/l、酵母粉4g/l、kh2po
4 1.2g/l。
30.发酵完成后，进行高温灭菌结束发酵，高温灭菌时间为20min，温度为121℃，压力为0.25mpa。高温灭菌后收集菌丝体，60℃恒温烘干，粉碎过60目筛，保存备用。
31.粗多糖提取：
32.将烘干后的菌丝体与0.2m的naoh溶液按1:30的按料液比混合均匀，于95℃水浴锅放置3h，水浴结束后，混合液在4℃、8000rpm条件下离心10min，收集上清液；使用10k mwco的超滤管在20℃、8000r/min的条件下将上清液进行截留浓缩得到浓缩液；按1:4的体积比将浓缩液和sevag(氯仿：正丁醇＝4：1)试剂加入离心管中，混合均匀，4℃、8000rpm离心3min，取上清液；将上清液置于70℃水浴3h，加入4倍体积无水乙醇，混匀，于4℃放置12h；8000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀；超纯水溶解沉淀后，真空冷冻干燥，即得红曲霉粗多糖；
33.初步纯化：
34.对deae-52纤维素层析柱进行预处理：deae-52纤维素粉末以1：5(g：ml)于去离子水中浸泡3h，去除漂浮颗粒物，抽滤；将其浸泡在0.5m naoh2h，去离子水洗涤至中性，抽滤；将其浸泡在0.5m hcl中2h，用去离子水洗涤至中性，抽滤；再将其在0.5m的naoh溶液中浸泡2h，然后用去离子水洗涤至中性，抽滤，备用。
35.层析柱(1.6
×
30cm)竖直固定，加入1/3体积的去离子水，打开下出液口，向柱中匀速贴壁加入纤维素浆，浆液面沉积到层析柱2/3体积处，停止装柱。柱上端链接于恒流泵，打开下出液口，用流速1ml/min的去离子水冲洗12h，备用。
36.将红曲霉粗多糖配置成浓度为5mg/ml的多糖溶液，多糖溶液在deae-52纤维素层析柱上样后分别用0、0.1、0.3、0.5、0.7m nacl溶液以1ml/min流速梯度洗脱，每个梯度收集20管，每管收集10～12min，每管溶液用硫酸-苯酚法检测糖含量，根据在490nm处的吸光度选择最佳峰段收集样品，合并相同梯度峰段样品，冷冻干燥后配置成5mg/ml的多糖溶液。
37.二次纯化
38.sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱预处理：凝胶以1g：30ml的比例加入到去离子水中，溶胀24h以去除悬浮颗粒物。溶胀后的凝胶脱气搅匀，玻棒引流入柱内，在引流时注意避免产生气泡与断层，待凝胶沉降后用去离子水平衡24h，备用。
39.将经过deae-52纤维素层析柱初步纯化处理的5mg/ml的多糖溶液，沿sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱的柱壁加入，用少量去离子水洗涤柱壁，去离子水以0.5ml/min的流速洗脱，每管收集10min，共收集20管。每管溶液用硫酸-苯酚法检测糖含量，根据在490nm处的吸光度选择最佳峰段收集样品，合并相同梯度峰段的样品，冷冻干燥，得到红曲多糖产
品。经过检测，红曲多糖产品中的菌丝体多糖纯度为98.65％。
40.对照例1
41.所述的红曲霉多糖制备方法，包括：
42.菌丝体制备：
43.将红曲霉菌种活化转接pda平板培养基，加无菌水，刮取菌丝，无菌棉花过滤，制备成浓度为1
×
106mg/ml的红曲霉孢子悬浮液。其中所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为cicc 5045，菌种购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
44.将红曲霉种子液按体积的15％加入至培养基中，然后在30℃、150rpm的恒温摇床中避光发酵54h。所述红曲霉种子液与培养基的体积比为15:100；所述培养基包括：葡萄糖50g/l、蛋白胨8g/l、mgso
4 0.8g/l、酵母粉4g/l、kh2po
4 1.2g/l。
45.发酵完成后，进行高温灭菌结束发酵，高温灭菌时间为20min，温度为121℃，压力为0.25mpa。高温灭菌后收集菌丝体，60℃恒温烘干，粉碎过60目筛，保存备用。
46.粗多糖提取：
47.将烘干后的菌丝体与0.2m的naoh溶液1:30的按料液比混合均匀，于95℃水浴锅放置3h，水浴结束后，混合液在4℃、8000rpm条件下离心10min，收集上清液；使用截留分子量为10k mwco超滤管在10℃、2000r/min的条件下将上清液进行截留浓缩得到浓缩液；按1:4的体积比将浓缩液和sevag(氯仿：正丁醇＝4：1)试剂加入离心管中，混合均匀，4℃、8000rpm离心3min，取上清液；将上清液置于70℃水浴3h，加入4倍体积无水乙醇，混匀，于4℃放置12h；8000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀；超纯水溶解沉淀后，真空冷冻干燥，即得红曲霉粗多糖；
48.初步纯化：
49.对deae-52纤维素层析柱进行预处理：deae-52纤维素粉末以1：5(g：ml)于去离子水中浸泡3h，去除漂浮颗粒物，抽滤；将其浸泡在0.5m naoh2h，去离子水洗涤至中性，抽滤；将其浸泡在0.5m hcl中2h，用去离子水洗涤至中性，抽滤；再将其在0.5m的naoh溶液中浸泡2h，然后用去离子水洗涤至中性，抽滤，备用。
50.层析柱(1.6
×
30cm)竖直固定，加入1/3体积的去离子水，打开下出液口，向柱中匀速贴壁加入纤维素浆，浆液面沉积到层析柱2/3体积处，停止装柱。柱上端链接于恒流泵，打开下出液口，用流速1ml/min的去离子水冲洗12h，备用。
51.将红曲霉粗多糖配置成浓度为5.0mg/ml的多糖溶液，多糖溶液在deae-52纤维素层析柱上样后分别用0、0.1、0.3、0.5、0.7m nacl溶液以1ml/min流速梯度洗脱，每个梯度收集20管，每管收集10～12min，每管溶液用硫酸-苯酚法检测糖含量，根据在490nm处的吸光度选择最佳峰段收集样品，合并相同梯度峰段样品，冷冻干燥后配置成5mg/ml的多糖溶液。
52.二次纯化：
53.sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱预处理：凝胶以1g：30ml的比例加入到去离子水中，溶胀24h以去除悬浮颗粒物。溶胀后的凝胶脱气搅匀，玻棒引流入柱内，在引流时注意避免产生气泡与断层，待凝胶沉降后用去离子水平衡24h，备用。
54.将经过deae-52纤维素层析柱初步纯化处理的5mg/ml的多糖溶液，沿sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱的柱壁加入，用少量去离子水洗涤柱壁，去离子水以0.5ml/min的流速洗脱，每管收集10min，共收集20管。每管溶液用硫酸-苯酚法检测糖含量，根据在490nm处
的吸光度选择最佳峰段收集样品，合并相同梯度峰段的样品，冷冻干燥，得到红曲多糖产品。本对照例中，未在参数范围内使用超滤浓缩去杂质，经过检测，红曲多糖产品中红曲多糖的纯度为红曲多糖产品中的菌丝体多糖纯度为67.75％。
55.对照例2
56.所述的红曲霉多糖制备方法，包括：
57.将红曲霉菌种活化转接pda平板培养基，加无菌水，刮取菌丝，无菌棉花过滤，制备成浓度为1
×
106mg/ml的红曲霉孢子悬浮液。其中所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为cicc 5045，菌种购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
58.将红曲霉种子液按体积的15％加入至培养基中，然后在30℃、150rpm的恒温摇床中避光发酵54h。所述红曲霉种子液与培养基的体积比为15:100；所述培养基包括：葡萄糖50g/l、蛋白胨8g/l、mgso
4 0.8g/l、酵母粉4g/l、kh2po
4 1.2g/l。
59.发酵完成后，进行高温灭菌结束发酵，高温灭菌时间为20min，温度为121℃，压力为0.25mpa。高温灭菌后收集菌丝体，60℃恒温烘干，粉碎过60目筛，保存备用。
60.粗多糖提取：
61.将烘干后的菌丝体与0.2m的naoh溶液1:30的按料液比混合均匀，于95℃水浴锅放置3h，水浴结束后，混合液在4℃、8000rpm条件下离心10min，收集上清液；按1:4的体积比将上清液和sevag(氯仿：正丁醇＝4：1)试剂加入离心管中，混合均匀，4℃、8000rpm离心3min，取上清液；将上清液置于70℃水浴3h，加入4倍体积无水乙醇，混匀，于4℃放置12h；8000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀；超纯水溶解沉淀后，真空冷冻干燥，即得红曲霉粗多糖；
62.初步纯化：
63.对deae-52纤维素层析柱进行预处理：deae-52纤维素粉末以1：5(g：ml)于去离子水中浸泡3h，去除漂浮颗粒物，抽滤；将其浸泡在0.5m naoh2h，去离子水洗涤至中性，抽滤；将其浸泡在0.5m hcl中2h，用去离子水洗涤至中性，抽滤；再将其在0.5m的naoh溶液中浸泡2h，然后用去离子水洗涤至中性，抽滤，备用。
64.层析柱(1.6
×
30cm)竖直固定，加入1/3体积的去离子水，打开下出液口，向柱中匀速贴壁加入纤维素浆，浆液面沉积到层析柱2/3体积处，停止装柱。柱上端链接于恒流泵，打开下出液口，用流速1ml/min的去离子水冲洗12h，备用。
65.将红曲霉粗多糖配置成浓度为5mg/ml的多糖溶液，多糖溶液在deae-52纤维素层析柱上样后分别用0、0.1、0.3、0.5、0.7m nacl溶液以1ml/min流速梯度洗脱，每个梯度收集20管，每管收集10～12min，每管溶液用硫酸-苯酚法检测糖含量，根据在490nm处的吸光度选择最佳峰段收集样品，合并相同梯度峰段样品，冷冻干燥后配置成5mg/ml的多糖溶液。
66.二次纯化：
67.sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱预处理：凝胶以1g：30ml的比例加入到去离子水中，溶胀24h以去除悬浮颗粒物。溶胀后的凝胶脱气搅匀，玻棒引流入柱内，在引流时注意避免产生气泡与断层，待凝胶沉降后用去离子水平衡24h，备用。
68.将经过deae-52纤维素层析柱初步纯化处理的5mg/ml的多糖溶液，沿sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱的柱壁加入，用少量去离子水洗涤柱壁，去离子水以0.5ml/min的流速洗脱，每管收集10min，共收集20管。每管溶液用硫酸-苯酚法检测糖含量，根据在490nm处的吸光度选择最佳峰段收集样品，合并相同梯度峰段的样品，冷冻干燥，得到红曲多糖产
品。本对照例中，不采用超滤浓缩去杂质，经过检测，红曲多糖产品中红曲多糖的纯度为45.43％。
69.对照例3
70.所述的红曲霉多糖制备方法，包括：
71.菌丝体制备：
72.将红曲霉菌种活化转接pda平板培养基，加无菌水，刮取菌丝，无菌棉花过滤，制备成浓度为1
×
106mg/ml的红曲霉孢子悬浮液。其中所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为cicc 5045，菌种购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
73.将红曲霉种子液按体积的15％加入至培养基中，然后在30℃、150rpm的恒温摇床中避光发酵54h。所述红曲霉种子液与培养基的体积比为15:100；所述培养基包括：葡萄糖50g/l、蛋白胨8g/l、mgso
4 0.8g/l、酵母粉4g/l、kh2po
4 1.2g/l。
74.发酵完成后，进行高温灭菌结束发酵，高温灭菌时间为20min，温度为121℃，压力为0.25mpa。高温灭菌后收集菌丝体，60℃恒温烘干，粉碎过60目筛，保存备用。
75.粗多糖提取：
76.将烘干后的菌丝体与0.2m的naoh溶液1:30的按料液比混合均匀，于95℃水浴锅放置3h，水浴结束后，混合液在4℃、8000rpm条件下离心10min，收集上清液；按1:4的体积比将上清液和sevag(氯仿：正丁醇＝4：1)试剂加入离心管中，混合均匀，4℃、8000rpm离心3min，取上清液；将上清液置于70℃水浴3h，加入4倍体积无水乙醇，混匀，于4℃放置12h；8000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀；超纯水溶解沉淀后，真空冷冻干燥，即得红曲霉粗多糖；本对照例中，不采用超滤浓缩及二次纯化技术，经过检测，红曲多糖产品中红曲多糖的纯度为36.86％。
77.对照例4
78.本对照例采用生物保藏编号为cgmcc 8167的丛毛红曲菌(monascus pilosus zheng yz101)，采用cn106929428a中提到的液态发酵技术制取得到红曲多糖产品，经过检测，得到的红曲多糖产品中红曲多糖的纯度为5～6％。说明cn106929428a所采用的技术并不适用于其它红曲霉的红曲多糖生产。
79.以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

技术特征：
1.一种红曲霉多糖制备方法，其特征在于，包括：菌丝体制备：将红曲霉菌种活化后接种得到红曲霉种子液，将红曲霉种子液进一步发酵后收集菌丝体，烘干备用；所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为cicc 5045；粗多糖提取：将烘干后的菌丝体与碱液混合后浸提得到浸提液，将浸提液超滤浓缩得到浓缩液，超滤浓缩的温度为20～30℃，超滤时的转子转速为7500～8500r/min，将浓缩液用sevag试剂脱蛋白后，得到红曲霉粗多糖；初步纯化：用deae-52纤维素层析柱对红曲霉粗多糖进行初步分离纯化，得到多糖溶液；二次纯化：用sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱对所述多糖溶液进一步分离纯化，得到红曲多糖产品。2.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，菌丝体制备步骤中，红曲霉种子液为浓度为1
×
105～1
×
107mg/ml的红曲霉孢子悬浮液，将红曲霉种子液加入培养基，然后在28～32℃、120～180rpm的恒温摇床中避光发酵48～72h。3.根据权利要求3所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，所述红曲霉种子液与培养基的体积比为10～20:100；所述培养基包括：葡萄糖40～60g/l、蛋白胨5～10g/l、mgso
4 0.5～1g/l、酵母粉3～5g/l、kh2po
4 1.0～1.5g/l。4.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，粗多糖提取步骤中，所述碱液为naoh溶液，naoh溶液的浓度为0.15～0.25m，烘干的菌丝体与naoh溶液的料液比为1:25～35；浸提温度为90～95℃，浸提时间为2～3h。5.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，粗多糖提取步骤中，超滤浓缩时采用的超滤膜的截留分子量为10k mwco。6.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，粗多糖提取步骤中，sevag试剂脱蛋白的方法为：将浓缩液与sevag试剂按1：3～5的体积比混合，离心后取上清液，将上清液于65～75℃的条件下恒温加热2.5～3.5h，然后加入上清液4～5倍体积的无水乙醇，混匀后，在3～5℃的条件下静置10～14h，离心后取沉淀，经纯水溶解、冻干得到红曲霉粗多糖。7.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，初步提纯步骤中，将红曲霉粗多糖配置成浓度为4.5～5.5mg/ml的多糖溶液，多糖溶液上样后分别用0、0.1、0.3、0.5、0.7m nacl溶液以1ml/min流速梯度洗脱，检测并收集得到多糖溶液。8.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，二次纯化过程中，将经过deae-52纤维素层析柱初步纯化而得到的多糖溶液配置成浓度为4.5～5.5mg/ml的溶液，在sephadex g-100葡聚糖凝胶层析柱上样后，用去离子水以0.4～0.6ml/min的流速洗脱，检测并收集得到红曲多糖产品。9.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，所述红曲多糖产品中红曲多糖的纯度为95.23
±
3.66％。10.根据权利要求1所述的红曲霉多糖制备方法，其特征在于，菌丝体制备步骤中，发酵完成后，高温灭菌时间为15～25min，温度为121℃，压力为0～0.25mpa。

技术总结
本发明所述的一种红曲霉多糖制备方法，包括：菌丝体制备：将红曲霉菌种活化后接种得到红曲霉种子液，将红曲霉种子液进一步发酵后收集菌丝体，烘干备用；所述红曲霉菌种为丛毛红曲菌(monascus pilosus)，菌种编号为CICC 5045；粗多糖提取：将烘干后的菌丝体与碱液混合后浸提得到浸提液，将浸提液超滤浓缩得到浓缩液，将浓缩液用sevag试剂脱蛋白后，得到红曲霉粗多糖；初步纯化：用DEAE-52纤维素层析柱对红曲霉粗多糖进行初步分离纯化，得到多糖溶液；二次纯化：用Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析柱对所述多糖溶液进一步分离纯化，得到红曲多糖产品。本发明制备得到的产品中红曲多糖的纯度可达95.23


技术研发人员：刘俊 叶帆宇 孙术国 林亲录 梁盈
受保护的技术使用者：中南林业科技大学
技术研发日：2023.06.26
技术公布日：2023/8/9