一种用于治疗骨关节炎的中药组合物及其制备方法与流程

1.本发明属于医药技术领域，具体为一种用于治疗骨关节炎的中药组合物及其制备方法。


背景技术：

2.骨关节炎(osteoarthritis，oa)是世界各地的地方性疾病。它是老年人残疾的主要原因，并导致疼痛、功能丧失和生活质量(qol)下降。膝骨关节炎(kneeosteoarthritis，koa)是以膝关节表面骨赘生成和软骨丢失为特征的慢性退行性疾病，临床以膝关节疼痛、僵硬、活动受限为主症，严重时可导致膝关节肿胀和畸形。koa归属中医“痹证”“骨痹”范畴。中医对于痹症的认识，早在《黄帝内经》已有记载:“病在骨，骨重不可举，骨髓酸痛，寒气至，名曰骨痹。”伴随着社会进展程度及人口老龄化的加速，我国50岁以上人口患骨关节炎的概率为5％左右，60岁以上人口发病率可达20％，其中koa患者所占比例最高可达78.5％。koa的发病率明显增加并呈年轻化趋势，由此寻找更加科学有效地治疗koa的方法势在必行。
3.koa发病机制研究较多且复杂，其基本原理就是导致关节软骨合成代谢和分解代谢功能之间平衡破坏的不利因素增多，其中mmp13被认为是软骨病理性破坏的关键酶，在骨骼发育和骨骼重建中起重要作用，是靶向软骨降解的主要酶，它不仅可以降解软骨中的ⅱ型胶原蛋白，还可以降解软骨中的蛋白多糖、ⅳ型胶原和
ⅸ
型胶原等。且其构成的分解代谢轴的激活起到了重要作用，主要是通过生长因子、激素、细胞因子和转录因子在转录水平上调节，有研究表明在血清中tnf-α、il-8和il-18的水平与mmp13呈正相关，另有研究表明il-1β可以诱导软骨细胞中mmp13的表达。这些结果都表明mmp13可能在oa的进展中扮演着重要的角色，随着对其研究的深入，越来越多相关的分子通路及靶点被发现，这为研究oa的发病机制打下了基础。
4.目前临床治疗方法多样，中医治疗主要有中药内服、针刺、推拿、以及中药外敷等，西医治疗有药物治疗、关节腔药物注射、关节置换以及康复疗法等。其中主要以口服抗炎镇痛药物治疗为主，但其副作用，尤其是肠道副作用很大，病人难以长期服用和耐受。保护软骨药物如氨基葡萄糖、透明质酸也只是暂时缓解病情，且作用单一，服用时间长，疗效不明确。而手术治疗主要用于重症患者，手术创伤大，远期疗效不明确，加之手术费用昂贵，患者难以接受。
5.而中医治疗膝骨关节炎较西医相比，副作用较小且价格低廉等优点，其中中药外敷在百年中经历历史验证，有着独特疗效。其优点在于使用方便灵活、随取随戴，纯天然中草药配制，安全无副作用，通过对经络穴位的皮肤渗透作用给药，不经过口服肠胃吸收，所以对肝、肾、脾、胃等内脏器官不产生毒副作用，适合长期使用。且不同于膏药紧密贴在皮肤上，每天花30-60分钟时间就有机会缓解病情，不过敏、不刺激皮肤，因而不受季节性限制，四季皆宜。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种用于治疗骨关节炎相关病症的中药组合物，充分发挥中药疗法的优势，为预防和/或治疗骨关节炎相关病症提供一种有效的方法。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
8.在第一方面，本发明提供一种用于治疗骨关节炎的中药组合物，按质量份包含如下成分：当归50份、桑白皮30份、土鳖虫16份、三七8份、白芷16份、血竭3份。
9.进一步，该中药组合物还包含医药学上可接受的载剂。
10.进一步，该中药组合物用于治疗或改善骨关节炎相关症状。
11.在上述方面，所述骨关节炎相关症状包括但不限于：慢性进行性多关节炎症、关节软骨损伤、骨质增生、炎性细胞关节浸润、滑膜炎。
12.更优选地，治疗或改善骨关节炎相关症状包括：减轻骨关节炎所致的疼痛，和/或减轻骨关节炎所致的炎症，和/或减少骨关节炎造成的软骨破坏。
13.在第二方面，本发明进一步提供了用于治疗骨关节炎的制剂，包含如上所述的中药组合物。
14.优选地，所述制剂包括敷贴、膏剂、凝胶、汤剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、合剂、糖浆或丸剂。
15.在第三方面，本发明还提供了如上所述的中药组合物用于制造治疗骨关节炎相关病症的药物的用途。
16.在第四方面，本发明还提供了制备如上所述的中药组合物的方法，包括将如下成分按比例混合，制成组合物：当归50份、桑白皮30份、土鳖虫16份、三七8份、白芷16份、血竭3份。
17.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了一种中药组合物，具有治疗骨关节炎的作用，有效缓解骨关节炎所致的关节疼痛，关节炎症，减少骨关节炎造成的软骨破坏。本发明充分发挥传统医学的优势，借鉴和开发传统医学，为研制以传统医学经方为原料的治疗骨关节炎的药物提供了科学依据，具有重大的应用价值。
附图说明
18.图1为不同分组给药一个月内的冷痛阈值变化趋势图，与aclt模型组相比，****p＜0.001(n＝10)；
19.图2为不同分组的膝关节番红固绿染色图；
20.图3为对不同分组的膝关节番红固绿染色的oarsi评分图，与aclt模型组相比，*p＜0.05(n＝3)；
21.图4为不同分组的膝关节mmp13免疫组化染色图。
具体实施方式
22.本发明公开了一种具有治疗骨关节炎功效的中药组合物及其应用，该中药复方由下列原料按比例制成：当归50g桑白皮30g土鳖虫16三七8g白芷16g血竭3g。本发明提供的具有治疗骨关节炎功效的中药组合物，是在家族祖传接骨药方基础上以百年临床疗效为依据组方而成。发明人根据中医理论和骨关节炎的发病机制选取原料配伍组方，各组分配比科
学合理。通过动物实验研究结果表明，本发明提供的中药外敷药具有治疗骨关节炎疾病尤其是膝骨关节炎的作用。
23.本发明提供了一种预防和/或治疗骨关节炎的产品，在一个例示性实施例中，其主要成分由下列重量份数的原料制成：当归50g、桑白皮30g、土鳖虫16g、三七8g、白芷16g、血竭3g。
24.上述具有预防和/或治疗骨关节炎功效的产品包括药物或中药组合物。
25.进一步，上述具有预防和/或治疗骨关节炎功效的产品还加入了药学上可接受的辅料制备成药学上可接受的制剂；所述药学上可接受的制剂包括敷贴、膏剂、凝胶、汤剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、合剂、糖浆或丸剂等。
26.上述产品用于预防和/或治疗骨关节炎相关病症，所述病症包括由骨关节炎引起的慢性进行性多关节炎症、关节软骨损伤、骨质增生、炎性细胞关节、滑膜炎等。
27.治疗效果表现为：
28.(1)减轻骨关节炎所致的疼痛；和/或
29.(2)减轻骨关节炎所致的炎症；和/或
30.(3)减少骨关节炎造成的软骨破坏。
31.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.在本发明的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“内”、“外”“前端”、“后端”、“两端”、“一端”、“另一端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
33.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
34.下述实施例中所使用的试剂、生物材料分别来源于：
35.动物健康清洁级雄性c57bl/6小鼠：江苏华创信诺医药科技有限公司；
36.塞来昔布：青岛白洋制药有限公司。
37.实施例1：
38.取c57bl/6雄鼠(20
±
2g)40只，随机分为4组，每组10只，分别为假手术对照组、模型组、阳性药对照组(塞来昔布)、本发明药物组，其中空白组、模型组、给药组分别对小鼠作如下处理：
39.对照组：随机10只假手术处理的c57bl/6雄鼠，给予双蒸水，灌胃体积为0.2ml。
40.模型组：随机取10只aclt模型小鼠，给予双蒸水，灌胃体积为0.2ml。
41.阳性药组：随机取10只aclt模型小鼠，塞来昔布按人的临床用药剂量换算成小鼠给药剂量(37mg/kg)，每日给药1次，灌胃体积为0.2ml。
42.本发明药物组：随机取10只aclt模型小鼠，将药物均匀涂抹在小鼠膝关节处，每天两次。
43.其中，aclt模型小鼠的建立方法如下所示：
44.取健康清洁级c57bl/6雄鼠40只，适应性喂养一周后腹腔注射5％的水合氯醛，每只0.2ml的剂量对小鼠进行麻醉，待小鼠四肢任意摆动无知觉，取小鼠右后肢，在膝关节周围1cm半径剃毛，皮肤完全裸露后，碘伏表面消毒，手术刀纵向划开膝关节表面的皮肤，暴露膝关节后，手术钳剥离膝关节表面结缔组织，划开膝关节韧带，暴露膝关节腔，清创，手术针挑拨分离前交叉韧带，在直视下用小型手术剪剪断前交叉韧带(假手术组打开关节腔，分离前交叉韧带，但不剪断，其他操作一致)，然后依次缝合小鼠的膝关节韧带及膝关节表面皮肤。手术结束后用碘伏于伤口表面消毒并将小鼠放回鼠笼，正常饲养一个月后开始给药。
45.实施例2：
46.本实施例中对给药期的小鼠进行了冷痛实验检测来考察本发明药物对小鼠疼痛敏感性的影响，冷痛实验检测过程如下所示：
47.采用冷板实验评估小鼠的冷痛阈值：将小鼠置于预设温度值为4℃的冷板上，当小鼠出现舔足、抬腿、后退、跳跃等行为时，记录所用时间，小鼠在冷板上停留时间最长不超过60s，如果时间超过60s，小鼠仍无反应，立即停止实验。每次冷板实验需要三次重复，每次重复之间时间间隔不小于10min，取三次重复实验所记录时间的平均值，作为小鼠的冷痛阈值。从给药前一天开始，每7天测量一次直至给药结束，检测结果如图1所示。
48.从图1中可以看出，从给药的第0天开始，已经进行造模处理的小鼠开始发病，此时冷痛的检测结果显示模型组和给药组小鼠冷痛阈值低于对照组(假手术组)小鼠，并随着关节炎炎症的发展，aclt模型组小鼠冷痛阈值逐渐下降，表明其疼痛敏感性快速升高，炎症疼痛加剧。而相比aclt小鼠对于疼痛的敏感性，给药组逐渐缓解小鼠四肢关节疼痛，小鼠冷痛阈值逐渐升高，且在第1、2周有明显提高，与模型对照组相比较有显著性差异(p《0.0001)。这说明了外敷本发明药物能明显减轻aclt模型小鼠的关节症状。
49.本实施例中还对上述给药35天后取小鼠后右肢，用福尔马林固定，对其进行番红固绿染色，具体方法如下所示：
50.(1)取材：将小鼠的踝关节保存于4％多聚甲醛溶液中；
51.(2)脱水：将组织放入脱水盒中，置于全自动脱水机中进行脱水，使用浓度梯度的乙醇脱水；
52.(3)包埋：组织脱水后，将其完全浸入融化的石蜡。将石蜡放入包埋机包埋，然后-20℃冷冻。修整石蜡块后，于4℃保存；
53.(4)切片与贴片：将蜡块切成5-8μm厚，然后贴到载玻片上；
54.(5)脱水：分别用二甲苯和不同浓度酒精进行脱水，然后用蒸馏水洗数次；
55.(6)脱蜡染色：用0.5％固绿对脱水的组织染色20min，并用1％醋酸稍洗3遍，流水冲洗3s；0.5％番红滴染至样本表面，37℃，5min；
56.(7)脱水封片：分别用二甲苯和不同浓度酒精进行脱水，然后将中性树脂置于在盖玻片上，封片后晾干；
57.(8)镜检拍照：显微镜下观察拍照。
58.番红固绿染色完成后的切片，由观察者按照表1oarsi评分的原则为各切片评分。
59.表1.oarsi评分项目
60.症状表现分值
软骨无磨损0软骨面有异常番红素缺失但无结构性改变0.5软骨面纤维性破坏有小裂但无软骨的丢失1软骨面纤维性破坏较1严重且有软骨丢失2软骨磨损低于四分之一且破坏至软骨下骨3软骨磨损低于二分之一且破坏至软骨下骨4软骨磨损超过一半且破坏至软骨下骨5
61.图2为不同分组中的膝关节番红固绿染色，由图可见，假手术组软骨基质染色均匀，潮线结构完整，各层次分布分明，而模型组软骨细胞排列混乱，有大量坏死的软骨细胞，软骨基质染色较浅，软骨面破坏较为严重，潮线结构破坏，并且可见部分纤维裂隙，说明造模成功。给予阳性药后，软骨表层未见明显变薄，各个层次较模型组分明，且潮线结构基本完整。给药本发明药物后，软骨基质染色较模型组均匀，潮线结构少量破坏，表明本发明药物能一定程度改善膝骨关节炎小鼠软骨损伤。
62.图3为对不同分组中的膝关节番红固绿染色进行的oarsi评分，结果发现对照组与模型组相比有显著差异(p《0.01)，说明造模成功。本发明药物与模型组相比有显著差异(p《0.05)，说明降低了膝骨关节炎指数。
63.本实施例中还对上述给药35天后取小鼠后右肢，用福尔马林固定，对其进行免疫组化染色，具体方法如下所示：
64.(1)脱蜡：用二甲苯ⅰ、二甲苯ⅱ、二甲苯ⅲ、100％酒精ⅰ、100％酒精ⅱ、95％酒精、85％酒精对切片脱蜡，然后用蒸馏水洗数次；
65.(2)抗原修复：加入3％双氧水。蒸馏水洗数次后，加入抗原修复液，再次用蒸馏水洗数次；封闭：加入5％的血清，封闭30min；
66.(3)加一抗：加相应的一抗，4℃过夜；
67.(4)加二抗：pbs洗数次，加相应的二抗，室温孵育2h；加显色剂：pbs洗数次，加显色剂；
68.(5)复染：用蒸馏水洗数次后，用苏木素染色，然后分化和返蓝，最后流水冲洗；
69.(6)脱水封片：分别用二甲苯和不同浓度酒精进行脱水，然后将中性树脂置于在盖玻片上，封片后晾干；
70.(7)镜检拍照：显微镜下观察拍照，用imagej分析。
71.图4为不同分组中的膝关节免疫组化染色，由图可见，与假手术组相比，模型组小鼠软骨组织中mmp-13的阳性表达率有所增高，主要集中在软骨表层退变较为严重的区域，染色为深棕色。分布不均匀。阳性药处理后可见少量的mmp-13阳性颗粒，可见于表层和浅层，染色较模型组浅。给予本发明药物后，mmp-13阳性颗粒基本分布均匀，染色较模型组浅。上述结果说明，本发明药物可降低膝骨关节炎软骨细胞mmp13的表达。
72.本发明未详述之处，均为本领域技术人员的公知技术。
73.最后所要说明的是：以上具体实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改和等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

技术特征：
1.一种用于治疗骨关节炎的中药组合物，其特征在于，按质量份包含如下成分：当归50份、桑白皮30份、土鳖虫16份、三七8份、白芷16份、血竭3份。2.如权利要求1所述的用于治疗骨关节炎的中药组合物，其特征在于，还包含医药学上可接受的载剂。3.如权利要求1所述的用于治疗骨关节炎的中药组合物，其特征在于，用于治疗或改善骨关节炎相关症状。4.如权利要求3所述的用于治疗骨关节炎的中药组合物，其特征在于，所述症状包括但不限于：慢性进行性多关节炎症、关节软骨损伤、骨质增生、炎性细胞关节浸润、滑膜炎。5.如权利要求3所述的用于治疗骨关节炎的中药组合物，其特征在于，治疗或改善骨关节炎相关症状包括：减轻骨关节炎所致的疼痛，和/或减轻骨关节炎所致的炎症，和/或减少骨关节炎造成的软骨破坏。6.一种用于治疗骨关节炎的制剂，其特征在于，包含如权利要求1至5中任一项所述的中药组合物。7.如权利要求6所述的用于治疗骨关节炎的制剂，其特征在于，所述制剂包括敷贴、膏剂、凝胶、汤剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、合剂、糖浆或丸剂。8.如权利要求1至5中任一项所述的中药组合物的用途，用于制造治疗骨关节炎相关病症的药物。9.如权利要求1至5中任一项所述的中药组合物的制备方法，包括将如下成分按比例混合，制成组合物：当归50份、桑白皮30份、土鳖虫16份、三七8份、白芷16份、血竭3份。

技术总结
本发明提供了一种用于治疗骨关节炎的中药组合物及其制备方法，本发明的中药组合物按质量份包含如下成分：当归50份、桑白皮30份、土鳖虫16份、三七8份、白芷16份、血竭3份，本发明的组合物是根据中医理论和骨关节炎的发病机制选取原料配伍组方，各组分配比科学合理。通过动物实验研究结果表明，本发明提供的中药组合物具有治疗骨关节炎疾病的作用。合物具有治疗骨关节炎疾病的作用。合物具有治疗骨关节炎疾病的作用。


技术研发人员：王宁 曹鹏 王培华 胡春萍 孙晓艳 庞中华 蒋义家
受保护的技术使用者：王宁
技术研发日：2023.05.30
技术公布日：2023/8/9