具有Aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物及其应用的制作方法

具有aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物及其应用
技术领域
1.本发明涉及药物化学技术领域，特别涉及一种具有aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物及其应用。


背景技术：

2.aurora激酶是一类在细胞生长周期中具有重要调控作用的丝氨酸/苏氨酸激酶，参与调节纺锤体形成、中心体成熟、染色质分化和胞质分裂过程，对维持基因组的稳定性具有关键作用。研究发现，aurora激酶的过度表达易导致细胞有丝分裂异常，与肿瘤的形成密切相关。aurora激酶在许多癌细胞(如肺癌、乳腺癌、直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌)中过度表达，抑制aurora激酶的活性可以导致肿瘤细胞多倍体的聚集、促进细胞凋亡、阻断细胞增殖。以aurora激酶为靶点进行抗肿瘤药物的研究开发也越来越受到人们的重视。aurora激酶在有丝分裂中才被表达和激活，它们对于非增殖的细胞无效，而在人体中大多数正常细胞的增殖速度并不快。因此aurora激酶抑制剂属于靶向抗肿瘤药物，与其它非特异性细胞毒药物相比，将具有更大的优势。
3.根据氨基酸序列的不同，人类aurora激酶分为aurora a、aurora b和aurora c三种亚型。这三种亚型具有非常保守的c-端催化区和n-端可变区，即具有高度同源的atp(三磷酸腺苷)结合位点(c-端催化区)，但在n-末端的氨基酸长度和序列上有较大差异。
4.自1998年科学家证实肿瘤的发生与aurora激酶的过度表达有密切关系后，引发了学术界和制药工业界将aurora激酶作为抗肿瘤药物作用靶点的研究热潮。随着aurora激酶晶体结构研究的深入和计算机模拟技术的应用，人们发现大多数合成的aurora激酶抑制剂属于atp竞争性激酶抑制剂，竞争结合激酶的atp结合位点，切断激酶直接的能量来源，从而抑制其活性。研究发现，atp结构中的嘌呤环可结合于aurora激酶结构的疏水口袋，并与连接区的氨基酸残基形成氢键。atp结合口袋由以下几个区域组成：激酶铰链区、疏水口袋结合区、磷酸盐沟埋区、溶剂可及区以及核糖部分。aurora激酶家族atp结合位点具有很高的同源性，这使得激酶抑制剂的选择性成为一个很大的挑战。许多报道的aurora激酶抑制剂仍能体现出良好的选择性，其中一个重要原因是抑制剂除了通过atp结合位点与激酶相互作用外，还作用于atp结合口袋附近的区域，包括激酶后部的疏水口袋，所有这些作用区域氨基酸残基的不同共同决定了激酶抑制剂选择性的差异。已报道的激酶抑制剂的基本结构特点是：具有一个平面的杂环体系以竞争结合激酶的atp口袋并模拟腺嘌呤与激酶的相互作用；抑制剂与激酶铰链区之间还可通过氢键作用形成“供体-受体-供体”作用模式；抑制剂的官能团往往能够进入激酶磷酸盐结合区域或者选择性结合口袋。
5.从结构上看，目前合成的aurora激酶抑制剂主要为嘧啶环类、吡咯并吡唑类、吲哚类、喹唑啉类、嘧啶并苯并氮杂卓类以及其它结构类化合物。vertex公司与默克(merck)公司联合开发了第一个aurora激酶抑制剂vx-680(又名mk-0457)(wo2004000833a1)。
[0006][0007]
该分子结构呈y状，中心的嘧啶环位于激酶的疏水区，与激酶氨基酸残基之间有疏水作用；含氨基吡唑的胳膊伸入激酶的铰链区域，吡唑环的氮原子与铰链区氨基酸残基有氢键作用；含苯基的胳膊伸入激酶活性位点口袋中，苯基末端的环丙基与aurora a激酶的f275残基有疏水作用；哌嗪侧链则由酶的活性区域伸展到酶的溶剂可及区。研究发现，vx-680对auroraa、b、和c都具有很好的抑制作用，ic
50
值分别为0.6、18和4.6nm，能够抑制结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、颈部肿瘤、白血病等众多肿瘤细胞的增殖。2006年，vx-680进入了临床ii期研究，主要用于治疗顽固的慢性骨髓性白血病和急性淋巴性白血病。研究发现该药物可引起病人的qtc延长风险(qtc为心电图上校正的t波与q波之间的时间差，qtc延长容易导致心律失常)，2007年11月默克终止了vx-680的ii期临床试验(expert opin.investing drugs.2009,18,379)。
[0008]
虽然在现有技术中存在一些aurora激酶抑制剂，但进一步开发aurora激酶抑制剂，为制备与aurora激酶相关疾病的药物提供更多的选择依然是有必要的。


技术实现要素：

[0009]
本发明要解决的技术问题是提供一种具有aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物及其应用，通过在均三嗪母核的2,4,6-位引入不同的功能团，提供一种新合成的均三嗪类化合物，这种新合成的均三嗪类化合物对aurora激酶显示出较好的抑制活性。
[0010]
为解决上述技术问题，本发明提供的一种具有aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，所述均三嗪类化合物由以下通式(i)表示：
[0011][0012]
式(i)中：
[0013]
所述的r1为甲基、乙基、丙基、正丁基、3-氨基丙基、炔丙基；
[0014]
所述的r2为甲基、乙基、丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、n-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基；
[0015]
所述的r3为n-[(3-氯苯基)甲基]-甲胺基，n-[(2-氯苯基)甲基]-甲胺基，n-羟基乙基苯胺基，4-胺甲基苄氨基，3-取代基r5-1h-吡唑-5-胺基且取代基r5为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基，5-氨基-3-取代基r6-1h-吡唑-1-基且取代基r6为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基；
[0016]
所述的r4为n-羟基乙基苯胺基，4-胺甲基苄氨基，3-取代基r5-1h-吡唑-5-胺基且
取代基r5为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基，5-氨基-3-取代基r6-1h-吡唑-1-基且取代基r6为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基。
[0017]
具体来说，所述均三嗪类化合物选自下列结构式中的任一种：
[0018][0019]
[0020]
[0021][0022]
本发明还提供一种药物组合物，包含具有通式(i)结构的化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式。
[0023]
具体来说，所述药物组合物为注射剂、口服剂或黏膜给药剂。
[0024]
本发明还提供一种具有通式(i)结构的化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，或者所述的药物组合物在制备抑制aurora激酶的药物中的应用。
[0025]
具体来说，所述aurora激酶为aurora a激酶。
[0026]
本发明还提供一种具有通式(i)结构的化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，或者所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0027]
具体来说，所述肿瘤为aurora a高表达的肿瘤或耐aurora a抑制剂型肿瘤。
[0028]
本发明提供一种具有aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物及其应用，通过在均三嗪母核的2,4,6-位引入不同的功能团，提供一种新合成的均三嗪类化合物，这种新合成的均三嗪类化合物对aurora激酶显示出较好的抑制活性，部分化合物与阳性对照vx-680的活性相当，可进一步优化，开发抑制aurora激酶活性的新化合物。
附图说明
[0029]
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面对本发明所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]
图1是利用荧光共振能量转移实验测定的本发明所述的均三嗪类化合物对aurora a激酶抑制活性结果。
具体实施方式
[0031]
下面将结合附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0032]
实施例一、2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n-甲基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺(化合物i-1)的合成
[0033][0034]
步骤1、4,6-二氯-n-(3-乙基-1h-吡唑-5-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物3)的合成
[0035]
称取2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪(化合物1,8.7g,47.2mmol,1.1eq)溶解到120ml四氢
呋喃(thf)中。在溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(diea,18.2g,140.8mmol,3.3eq)和3-乙基-1h-吡唑-5-胺(化合物2,4.7g,42.3mmol,1.0eq)，在-78℃下搅拌反应2小时。tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1,碘显色,rf＝0.26)监测反应完成。反应结束后，加入40ml乙酸乙酯，然后用水洗三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝100:0到97:3)纯化，得到白色固体化合物3，8.1g,产率为66.9％。
[0036]1h nmr:(400mhz,cd3od)δppm 6.43(s,1h),2.69(q,j＝7.6hz,2h),1.28(t,j＝7.6hz,3h)。
[0037]
步骤2、6-氯-n2-(3-氯苯甲基)-n4-(3-乙基-1h-吡唑-5-基)-n2-甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(化合物5)的合成
[0038]
称取4,6-二氯-n-(3-乙基-1h-吡唑-5-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物3,4.0g,15.4mmol,1.1eq)溶解在60ml四氢呋喃(thf)中。在溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(diea,6.0g,46.3mmol,8.1ml,3.3eq)和1-(3-氯苯基)-n-甲基甲胺(化合物4,2.2g,13.9mmol,2.0ml,1.0eq)，在0℃下搅拌反应2小时。lc-ms结果表明反应完成。反应结束后，加入40ml乙酸乙酯，然后用水洗三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝100:0到97:3)纯化，得到黄色固体化合物5，5.4g,产率为92.1％。
[0039]
lc-ms:m/z＝378.1(m+h)
+
，r
t
＝1.588min。
[0040]
步骤3、2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸甲酯(化合物6)的合成
[0041]
称取2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸(化合物6-1，900mg,4.4mmol,1.0eq)溶解在10ml甲醇中，在0℃下滴加二氯亚砜(2.6g,22.1mmol,1.6ml,5.0eq)，随后继续在75℃下搅拌反应10小时。tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1,rf＝0.12)监测反应完成。浓缩得到黄色固体化合物6，960mg,产率为99.8％。
[0042]1h nmr:(400mhz,cd3od)δppm 8.81(d,j＝7.6hz,1h),8.50(d,j＝6.0hz,1h),7.74(s,1h),7.68-7.63(m,1h),4.50(t,j＝6.4hz,1h),3.83(s,3h),3.61-3.56(m,1h),3.54-3.50(m,1h)。
[0043]
步骤4、2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酯甲酯(化合物7)的合成
[0044]
称取6-氯-n2-(3-氯苯甲基)-n4-(3-乙基-1h-吡唑-5-基)-n2-甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(化合物5,1.2g,3.3mmol,1.0eq)溶解到20ml二氧六环中。向溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(diea，2.4g,18.2mmol,3.2ml,5.5eq)和2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸甲酯(化合物6,800mg,3.6mmol,1.1eq)。在120℃下搅拌反应10小时，lc-ms结果表明反应完成。加入20ml乙酸乙酯，然后用水洗三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经柱层析(二氯甲烷:四氢呋喃＝100:0到0:100)纯化，得到黄色固体化合物7，802mg,产率为39.2％。
[0045]
lc-ms:m/z＝561.3(m+h)
+
，r
t
＝1.244min。
[0046]
步骤5、2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸(化合物8)的合成
[0047]
称取2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸甲酯(化合物7,700mg,1.2mmol,1.0eq)溶解在6ml四氢呋喃(thf)中。加入2ml甲醇，2ml水和一水合氢氧化锂
(157mg,3.7mmol,3.0eq)，在25℃下搅拌反应10小时。lc-ms结果表明反应完成。反应结束后，加入10ml二氯甲烷，用5ml饱和食盐水洗两次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到黄色固体化合物8，300mg,产率为44.0％。
[0048]
lc-ms:m/z＝547.2(m+h)
+
，r
t
＝1.161min。
[0049]
步骤6、2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n-甲基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺(化合物i-1)的合成
[0050]
称取2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸(化合物8,26mg,47.5mmol,1.0eq)，溶解到0.5ml n,n-二甲基甲酰胺(dmf)中，向溶液中加入甲胺盐酸盐(menh
2.
hcl,9.82mg,142.6μmol,3.0eq)，1-羟基苯并三唑(hobt,10mg,70μmol,1.5eq)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edcl,14mg,70μmol,1.5eq)，在25℃下搅拌反应2小时。lc-ms结果表明反应完成。反应结束后，经prep-hplc(柱:c18-6 100*30mm*5μm；流动相:[水(三氟乙酸)-乙腈]；b％:30％-50％,11min)纯化得到白色固体化合物i-1，6mg，产率为22.3％。
[0051]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm 8.15(d,j＝4.4hz,1h),8.11-7.90(m,1h),7.36-7.15(m,5h),7.15-6.99(m,2h),4.81-4.72(m,2h),3.28-3.16(m,2h),3.12(s,3h),2.76-2.44(m,6h),1.07(t,j＝12.0hz,3h)。
[0052]
lc-ms:m/z＝560.3(m+h)
+
，r
t
＝0.582min。
[0053]
实施例二、n-(3-氨基丙基)-2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺(化合物i-45)的合成
[0054][0055]
步骤1、n-(3-boc-氨基丙基)-2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺(化合物10)的合成
[0056]
称取化合物8(200mg,366μmol,1.0eq)，溶解到4ml二氯甲烷(dcm)中，向溶液中加入1-羟基苯并三唑(hobt,74.1mg,548μmol,1.5eq)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edcl,105mg,548μmol,1.5eq)，n,n-二异丙基乙胺(diea,142mg,1.1mmol,191μl,3.0eq)和3-boc氨基丙胺(63.7mg,366μmol,63.8μl,1.0eq)，在25℃下搅拌反应2小时。lc-ms结果表明反应完成。反应结束后，加入5ml二氯甲烷，用4ml饱和盐水洗两次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到黄色固体化合物10，100mg,产率为38.9％。
[0057]
lc-ms:m/z＝703.2(m+h)
+
，r
t
＝1.268min。
[0058]
步骤2、n-(3-氨基丙基)-2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺(化合物i-45)的合成
[0059]
称取化合物10(100mg,142μmol)溶解到1ml二氯甲烷(dcm)中，在溶液中加入盐酸/
二氧六环溶液(4m,0.3ml)。在25℃下搅拌反应0.5小时。lc-ms结果表明反应完成，浓缩，经prep-hplc(柱:c18-6 100*30mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；b％:6％-46％,15min)纯化得到白色固体化合物i-45，55.5mg，产率为64.5％。
[0060]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm 8.43-8.61(m,1h),8.16(d,j＝4.0hz,1h),7.98-8.06(m,1h),7.28-7.32(m,2h),7.26(d,j＝8.0hz,2h),7.11-7.13(mz,1h),7.05-7.09(m,1h),6.00-6.18(m,1h),4.79(br s,2h),4.70(br s,1h),3.25-3.30(m,2h),3.20(br s,1h),3.06(br s,3h),2.69-2.77(m,2h),2.56-2.61(m,2h),1.63-1.71(m,2h),1.16-1.29(m,3h)。
[0061]
lc-ms:m/z＝603.2(m+h)
+
，r
t
＝1.007min。
[0062]
实施例三、2-((4-((3-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-乙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n-(丙-2-炔-1-基)-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺(化合物i-46)的合成
[0063][0064]
称取化合物8(100mg,183μmol,1.0eq)溶解到2ml二氯甲烷(dcm)中，向溶液中加入1-羟基苯并三唑(hobt,37.1mg,274μmol，1.5eq),1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edcl,52.6mg,274μmol,1.5eq),n,n-二异丙基乙胺(diea,70.9mg,548μmol,95.5μl,3.0eq)和丙-2-炔-1-胺(10.1mg,183μmol,11.7μl,1.0eq)，在25℃下搅拌反应10小时。lc-ms结果表明反应完成。反应结束后，加入5ml二氯甲烷，用5ml饱和食盐水洗两次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经prep-hplc(柱:c18-6 100*30mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；b％:18％-48％,15min)纯化得到白色固体化合物i-46，25.9mg，产率为23.9％。
[0065]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm 8.14(d,j＝4.4hz,1h),8.06-7.98(m,1h),7.3-7.27(m,2h),7.24(d,j＝6.4hz,2h),7.13-7.11(m,1h),7.06(br s,1h),6.35-5.85(m,1h),4.79(br s,2h),4.73(br s,1h),3.95-3.77(m,2h),3.28-3.11(m,2h),3.04-3.02(m,3h),2.60-2.56(m,2h),2.47(s,1h),1.25-1.10(m,3h)。
[0066]
lc-ms:m/z＝584.2(m+h)
+
，r
t
＝1.148min。
[0067]
实施例四、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n,3,3-三甲基丁酰胺(化合物i-13)的合成
[0068][0069]
步骤1、4,6-二氯-n-(3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物13)的合成
[0070]
称取2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪(化合物1，6.9g,37.4mmol,1.0eq)溶解在100ml四氢
呋喃(thf)中，加入n,n-二异丙基乙胺(diea,14.5g,112.2mmol,19.5ml,3.0eq)和3-环丙基-1h-吡唑-5-胺(4.6g,37.5mmol,1.0eq)。在-78℃下搅拌反应4小时。tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1,rf＝0.20)监测反应完成。反应混合物用40ml乙酸乙酯萃取，50ml水洗三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到黄色固体化合物13，8.1g，产率为79.5％。
[0071]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm 6.29(s,1h),1.94-1.88(m,1h),1.02-0.98(m,2h),0.76-0.72(m,2h)。
[0072]
步骤2、6-氯-n2-(2-氯苯甲基)-n4-(3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-n2-甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(化合物15)的合成
[0073]
称取4,6-二氯-n-(3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物13，4.0g,14.8mmol,1.1eq)溶解在60ml四氢呋喃(thf)中。加入n,n-二异丙基乙胺(diea,5.7g,44.3mmol,7.7ml,3.3eq)和1-(2-氯苯基)-n-甲基甲胺(2.1g,13.3mmol,1.9ml,1.0eq)。在0℃下搅拌反应1小时。lc-ms和tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1,碘显色)结果显示反应完全。用40ml乙酸乙酯萃取，30ml饱和食盐水洗三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到黄色固体化合物15粗品，5.67g。
[0074]
lc-ms:m/z＝390.1(m+h)
+
，r
t
＝1.608min。
[0075]
步骤3、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n,3,3-三甲基丁酰胺(化合物i-13)的合成
[0076]
称取(s)-2-氨基-n,3,3-三甲基丁酰胺(化合物16,0.1g,0.7mmol,1.0eq)溶解到1ml二甲亚砜(dmso)中，加入6-氯-n2-(2-氯苯甲基)-n4-(3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-n2-甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(化合物15，0.28g,0.7mmol,3.0eq)和n,n-二异丙基乙胺(diea,0.28g,2.2mmol,0.4ml,3.0eq)。在100℃下搅拌反应4小时。lc-ms检测显示反应完成。过滤，经prep-hplc(流动相:[水(0.05％氨水)-乙腈]；b％:40％-70％,15min)纯化得到白色固体化合物i-13，100mg，产率为27.3％。
[0077]1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 10.65(br s,1h),10.48-10.12(m,1h),9.58(br s,1h),7.42(t,j＝8.0hz,1h),7.25-7.18(m,3h),6.46(br s,1h),6.02(m,1h),5.04(m,1h),4.58(m,1h),4.18(d,j＝9.2hz,1h),3.29(m,3h),2.70(m,3h),1.94-1.78(m,1h),1.12-0.68(m,13h)。
[0078]
lc-ms:m/z＝498.2(m+h)
+
，r
t
＝0.653min。
[0079]
实施例五、(s)-n-(3-氨基丙基)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基丁酰胺(化合物i-47)的合成
[0080][0081]
步骤1、(s)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸甲酯(化合物17)的合成
[0082]
称取(s)-2-boc氨基-3,3-二甲基丁酸(化合物17-1,2.0g,8.6mmol)溶解在盐酸/甲醇(4m,2.2ml)中，在80℃下搅拌反应10小时。tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1,rf＝0.24)监测反应完成。反应结束后，浓缩得到白色固体化合物17，1.2g，产率为99.6％。
[0083]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm(s,3h),3.81(s,1h),1.11(s,9h)。
[0084]
步骤2、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(化合物18)的合成
[0085]
称取化合物15(3.4g,8.6mmol,1.0eq)溶解在40ml二氧六环中，加入n,n-二异丙基乙胺(diea,3.3g,25.8mmol,4.5ml,3.0eq)和(s)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸甲酯(化合物17，1.2g,8.6mmol,1.0eq)。在120℃下搅拌反应10小时。lc-ms和tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1,rf＝0.18)结果显示反应完全。反应结束后，用40ml乙酸乙酯萃取，30ml饱和食盐水洗两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经柱层析(二氯甲烷:乙酸乙酯＝100:0到0:100)纯化，得到黄色固体化合物18，1.3g，产率为27.6％。
[0086]
lc-ms:m/z＝499.3(m+h)
+
，r
t
＝1.516min。
[0087]
步骤3、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(化合物19)的合成
[0088]
称取化合物18(1.0g,2.0mmol)溶解在2ml水中，加入6ml甲醇、6ml四氢呋喃(thf)和一水合氢氧化锂(255mg,6.1mmol)。在25℃下搅拌反应10小时。lc-ms和tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1,rf＝0.40)结果显示反应完全。反应结束后，用10ml二氯甲烷萃取，8ml饱和食盐水洗两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝100:0到95:5)纯化，得到黄色固体化合物19，547mg，产率为55.8％。
[0089]
lc-ms:m/z＝485.3(m+h)
+
，r
t
＝1.323min。
[0090]
步骤4、(s)-n-(3-boc氨基丙基)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基丁酰胺(化合物21)的合成
[0091]
称取(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(化合物19，200mg,412μmol,1.0eq)溶解在4ml二氯甲烷中，加入1-羟基苯并三唑(hobt,83.6mg,619μmol,1.5eq)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edcl,118.6mg,619μmol,1.5eq)和n,n-二异丙基乙胺(diea,160mg,1.2mmol,215μl,3.0eq)，然后加入3-boc氨基丙胺(化合物20，71.9mg,412μmol,72.0μl,1.0eq)。在25℃下搅拌反应10小时。lc-ms和tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1,rf＝0.36)结果
显示反应完全。反应结束后，用3ml二氯甲烷萃取，2ml饱和食盐水洗两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝100:0到95:5)纯化，得到黄色固体化合物21，150mg，产率为56.7％。
[0092]
lc-ms:m/z＝641.3(m+h)
+
，r
t
＝1.520min。
[0093]
步骤5、(s)-n-(3-氨基丙基)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基丁酰胺(化合物i-47)的合成
[0094]
称取化合物21(130mg,203μmol)溶解在1.5ml二氯甲烷中，加入盐酸/二氧六环(4m,0.5ml)。在25℃搅拌反应0.5小时，lc-ms结果显示反应完全。反应结束后，浓缩，经prep-hplc(柱:c18-6 100*30mm*5um；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；b％:15％-45％,15min)纯化得到白色固体化合物i-47，31.9mg，产率为29.1％。
[0095]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm 7.45-7.07(m,4h),6.30-5.60(m,1h),4.80-4.50(m,2h),4.31-4.18(m,1h),3.33-3.31(m,1h),3.30(s,1h),3.16-3.07(m,3h),2.93-2.87(m,2h),1.90-1.70(m,3h),1.11-0.99(m,9h),0.95-0.88(m,2h),0.72-0.68(m,1h),0.55-0.51(m,1h)。
[0096]
lc-ms:m/z＝541.3(m+h)
+
，r
t
＝1.163min。
[0097]
实施例6、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-环丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3,3-二甲基-n-(丙-2-炔-1-基)丁酰胺(化合物i-48)的合成
[0098][0099]
称取化合物19(347mg,715μmol,1.0eq)溶解在4ml二氯甲烷中，加入1-羟基苯并三唑(hobt,145mg,1.1mmol,1.5eq)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edcl,206mg,1.1mmol,1.5eq)和n,n-二异丙基乙胺(diea,277mg,2.2mmol,374μl,3.0eq)，然后加入丙-2-炔-1-胺(化合物22,39.4mg,715μmol,45.8ul,1.0eq)。在25℃下搅拌反应10小时。lc-ms结果表明反应完成。反应结束后，加入5ml二氯甲烷萃取，用4ml饱和食盐水洗两次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。经prep-hplc(柱:c18-6 100*30mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；b％:35％-65％,15min)纯化得到白色固体化合物i-48，124mg，产率为32.2％。
[0100]1h nmr(400mhz,cd3od)δppm 7.41-7.09(m,4h),6.60-5.25(m,1h),5.06-4.97(m,1h),4.60(br s,1h),4.31-4.14(m,1h),4.05-3.48(m,2h),3.16-3.05(m,3h),2.55-2.50(m,1h),1.87-1.77(m,1h),1.16-0.99(m,9h),0.94-0.82(m,2h),0.77-0.62(m,1h),0.58-0.41(m,1h)。
[0101]
lc-ms:m/z＝522.3(m+h)
+
，rt＝2.337min。
[0102]
实施例7、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-异丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n,3,3-三甲基丁酰胺(化合物i-16)的合成
[0103][0104]
步骤1、4,6-二氯-n-(3-异丙基-1h-吡唑-5-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物24)的合成称取2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪(化合物1，0.7mg,3.6mmol,1.0eq)溶解到5ml四氢呋喃溶(thf)液中，然后加入n,n-二异丙基乙胺(diea,1.4g,10.8mmol,1.9ml,3.0eq)。在-60℃下加入3-异丙基-1h-吡唑-5-胺(化合物23，0.4g,3.6mmol,1.0eq)。继续在-60℃下搅拌反应两小时。lc-ms检测显示反应完成。加入50ml水和乙酸乙酯(体积比1:1)，水相用30ml乙酸乙酯萃取四次。合并有机相，用30ml饱和食盐水洗涤两次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩，得到黄色固体化合物24，粗品1.4g。
[0105]
lc-ms:m/z＝273.0(m+h)
+
，rt＝0.498min。
[0106]
步骤2、6-氯-n2-(2-氯苯甲基)-n4-(3-异丙基-1h-吡唑-5-基)-n2-甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(化合物25)的合成
[0107]
称取4,6-二氯-n-(3-异丙基-1h-吡唑-5-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物24,0.2g,0.7mmol,1.0eq)溶解到5ml四氢呋喃(thf)中，加入n,n-二异丙基乙胺(diea,0.3g,2.2mmol,0.4ml,3.0eq)和1-(2-氯苯基)-n-甲基甲胺(化合物14,0.1g,0.7mmol,0.1ml,1.0eq)。在25℃下搅拌反应2小时。lc-ms检测显示反应完成。加入50ml水和乙酸乙酯(体积比1:1)，水相用30ml乙酸乙酯萃取四次。合并有机相，用15ml饱和食盐水洗涤两次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩，得到黄色油状物化合物25，粗品0.365g。
[0108]
lc-ms:m/z＝392.1(m+h)
+
，rt＝0.596min。
[0109]
步骤3、(s)-2-((4-((2-氯苯甲基)(甲基)氨基)-6-((3-异丙基-1h-吡唑-5-基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-n,3,3-三甲基丁酰胺(化合物i-16)的合成
[0110]
称取6-氯-n2-(2-氯苯甲基)-n4-(3-异丙基-1h-吡唑-5-基)-n2-甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(化合物25,0.3g,0.8mmol,1.0eq)溶解到3ml二甲亚砜(dmso)中，加入n,n-二异丙基乙胺(diea,0.3g,2.4mmol,0.4ml,3.0eq)和(s)-2-氨基-n,3,3-三甲基丁酰胺(化合物16，0.1g,0.8mmol,1.0eq)。在100℃下搅拌反应12小时。lc-ms检测显示反应完成。过滤，经prep-hplc(柱:c18-6 100*30mm*5μm；流动相:[水(三氟乙酸)-乙腈]；b％:30％-50％,15min)纯化得到白色固体化合物i-16，152mg，产率为37.9％。
[0111]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 10.58-10.23(m,1h),8.19-7.65(m,1h),7.52-7.43(m,1h),7.37-7.27(m,2h),7.20(s,1h),6.09-5.76(m,1h),4.96-4.82(m,2h),4.37(s,1h),3.25-3.03(d,j＝1.6hz,3h),2.99-2.83(m,1h),2.61(s,3h),1.20(m,6h),0.97(s,9h)。
[0112]
lc-ms:m/z＝500.4(m+h)
+
，rt＝0.498min。
[0113]
在本发明中同时还制备了其它化合物，这些化合物的合成方法参照上述实施例中的方法。部分化合物的表征数据，包括核磁数据和质谱数据，如表1所示。
[0114]
表1化合物表征数据
[0115]
[0116]
[0117]
[0118][0119]
实施例八、化合物对靶点蛋白aurora a激酶的体外抑制活性测试研究
[0120]
测试方法：利用荧光共振能量转移实验对所述均三嗪类化合物的激酶抑制活性进行测定。采用4μm丝氨酸/苏氨酸作为底物肽以及3nm aurora a激酶，在含有50mm hepes(ph 7.0)、10mm mgcl2、1mm egta、0.01％ brij-35的缓冲液中，测定溶于0.05％dmso中的不同浓度化合物的激酶抑制活性。样品在384孔板(perkin elmer 6007279)中孵育60分钟，使用perkinelmer envision 2104平板阅读器测量发射信号，激发和发射分别为405/460nm和535nm的第二个发射滤波器。图形和ic
50
值使用graphpad prism中的四参数剂量响应函数生成。所述均三嗪类化合物对aurora a激酶抑制活性的结果如图1所示，ic
50
如下表2所示：
[0121]
表2化合物在荧光共振能量转移实验中的aurora a激酶抑制活性
[0122]
[0123][0124]
****代表ic
50
≤0.5μm；***代表0.5μm《ic
50
≤1μm；**代表1μm《ic
50
≤10
[0125]
μm；*代表ic
50
》10μm。
[0126]
从以上实验结果可以看出，本发明所述的均三嗪类化合物对aurora激酶有较好的抑制作用，部分化合物与阳性对照vx-680的活性相当，可进一步优化，开发抑制aurora激酶活性的新化合物。此外，化合物i-45、i-46、i-47和i-48可作为bret探针，开发在活细胞中具有aurora激酶抑制活性的新化合物。
[0127]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。

技术特征：
1.一种具有aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，其特征在于，所述均三嗪类化合物由以下通式(i)表示：式(i)中：所述的r1为甲基、乙基、丙基、正丁基、3-氨基丙基、炔丙基；所述的r2为甲基、乙基、丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、n-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基；所述的r3为n-[(3-氯苯基)甲基]-甲胺基，n-[(2-氯苯基)甲基]-甲胺基，n-羟基乙基苯胺基，4-胺甲基苄氨基，3-取代基r
5-1h-吡唑-5-胺基且取代基r5为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基，5-氨基-3-取代基r
6-1h-吡唑-1-基且取代基r6为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基；所述的r4为n-羟基乙基苯胺基，4-胺甲基苄氨基，3-取代基r
5-1h-吡唑-5-胺基且取代基r5为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基，5-氨基-3-取代基r
6-1h-吡唑-1-基且取代基r6为甲基、乙基、异丙基、丙基、环丙基、丁基、正丁基、异丙基。2.根据权利要求1所述的均三嗪类化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，其特征在于，所述均三嗪类化合物选自下列结构式中的任一种：
3.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1所述的具有通式(i)结构的化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物组合物为注射剂、口服剂或黏膜给药剂。5.一种如权利要求1所述的具有通式(i)结构的化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，或者权利要求3所述的药物组合物在制备抑制aurora激酶的药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述aurora激酶为aurora a激酶。7.一种如权利要求1所述的具有通式(i)结构的化合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，或者权利要求3所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为aurora a高表达的肿瘤或耐aurora a抑制剂型肿瘤。

技术总结
本发明公开了一种具有Aurora激酶抑制活性的均三嗪类化合物及其应用。均三嗪类化合物或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体、前药、同位素衍生物或其混合物形式，均三嗪类化合物由以下通式(I)表示：本发明通过在均三嗪母核的2,4,6-位引入不同的功能团，提供一种新合成的均三嗪类化合物，这种新合成的均三嗪类化合物对Aurora激酶显示出较好的抑制活性。化合物对Aurora激酶显示出较好的抑制活性。化合物对Aurora激酶显示出较好的抑制活性。


技术研发人员：方慧 张在红 吴阿亮 张琦 温菁 苏文姬 蒯乐天
受保护的技术使用者：上海药明康德新药开发有限公司
技术研发日：2023.04.25
技术公布日：2023/8/9