用于炎症性肠病治疗的CO气体靶向控释纳米复合物及制备方法

用于炎症性肠病治疗的co气体靶向控释纳米复合物及制备方法
技术领域
1.本发明属于纳米复合物及应用于炎症性肠病治疗的递送系统，涉及一种氧化应激响应型co气体控释纳米复合物、制备方法及应用于炎症性肠病治疗的co气体靶向纳米递送系统。


背景技术：

2.近年来，炎症性肠病(ibd)在我国的发病率越来越高，ibd的精准诊疗有着严重的困扰，患者病情多反复发作、逐渐加重，最终可导致胃肠道结构和功能丧失，甚至导致癌变，严重影响患者的生活质量，已成我国社会健康的难题和挑战。ibd目前的常用治疗药物有5-氨基水杨酸类制剂、糖皮质激素、免疫调节剂等，但ibd病程漫长，需长期用药，这些药物虽然在诱导和维持临床缓解、促进黏膜愈合方面有一定疗效，但由于全身给药和药物的非特异性分布，常不可避免的导致一系列毒副作用。
3.目前，一些针对炎症调控的新型生物制剂，如抗tnf-α单克隆抗体，为ibd治疗提供了新的策略和选择，然而，仍有相当一部分患者出现了原发性无应答或在治疗过程中继发性失应答，同时一些新的不良反应和生物制剂的经济成本也使得生物制剂的临床应用受到限制。一项为期10年的临床评估表明，30-50％的ibd患者对目前的抗炎治疗没有反应。因此，迫切需要探索更加安全、高效的新疗法。
4.近年来，气体治疗作为一种新兴且极具应用前景的治疗策略，已被开发应用于生物医学领域，如心血管疾病、癌症、细菌感染、神经系统疾病等重大疾病的治疗。生理条件下，体内微量存在的一氧化碳气体(co)发挥着重要的调节作用。此外，co作为一种优质的抗炎气体信号分子，病理状态下不易被消耗，对抑制炎症反应具有独特的优势。研究发现，co不仅能够抑制p38 mapk、tlr-2、nf-κb等炎症相关的信号通路，还通过诱导血红素氧合酶(ho-1)的激活来缓解氧化应激，从而有效抑制促炎因子的表达。因此，co气体治疗可作为ibd治疗的潜在策略。然而，由于co气体前药较差的水溶性及稳定性，co在病理微环境的精准递送和按需释放仍存在极大挑战。目前，可靶向控释治疗性气体的纳米递送策略是提高气体治疗效果的关键！
5.基于此，本发明拟提供一种基于介孔聚多巴胺纳米颗粒(mpda)和壳聚糖/海藻酸钠聚电解质多层膜的高效、特异、安全的病理微环境氧化应激响应型co气体控释纳米复合物(lbl-co@mpda)，有效解决治疗性co气体的口服递送障碍，它不仅能够靶向富集到ibd炎性微环境，还能够实现co治疗性气体靶向控释，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，恢复免疫稳态，为炎症性肠病的治疗提供新选择，解决目前ibd治疗疗效有限、复发率高、药物依赖、毒副作用大等临床难题，给ibd的治愈带来了新的希望。


技术实现要素：

6.要解决的技术问题
7.为了避免现有技术的不足之处，为探求一种用于炎症性肠病(ibd)治疗的新型纳米材料，针对病理微环境，本发明提出一种氧化应激响应型co气体控释纳米复合物、制备方法及应用。本发明以疏水性的金属羰基络合物fe3(co)
12
作为co气体前药，以疏水相互作用装载进介孔聚多巴胺纳米颗粒的(mpda)的介孔结构中，利用层层自组装技术(lbl)在纳米颗粒表面修饰壳聚糖/海藻酸钠(chi/alg)聚电解质多层膜，最终形成一种可口服的lbl-co@mpda纳米颗粒，构筑了一种用于ibd治疗的氧化应激响应型co气体靶向纳米递送系统(lbl-co@mpda)。
8.技术方案
9.一种氧化应激响应型co气体控释纳米复合物，其特征在于：以疏水性的金属羰基络合物fe3(co)
12
装载进介孔聚多巴胺纳米颗粒mpda的介孔结构中，利用层层自组装技术lbl在纳米颗粒表面修饰壳聚糖/海藻酸钠chi/alg聚电解质多层膜，形成lbl-co@mpda纳米颗粒。
10.一种权利要求1所述氧化应激响应型co气体控释纳米复合物的制备方法，其特征在于步骤如下：
11.步骤1、采用“模板法”制备mpda纳米颗粒：
12.步骤1a：将含0.1～0.5g聚氧乙烯聚氧丙烯f127和200～500μl均三甲苯tmb溶解并分散于水/乙醇混合液中；
13.步骤1b：添加50～100mg三羟甲基氨基甲烷tris至混合液溶解后，添加50～100mg盐酸多巴胺，室温下以磁力搅拌反应12～24小时；
14.步骤1c：离心收集反应液中的粗产物，将其分散在乙醇/丙酮混合液中去除有机模板；
15.步骤1d：离心收集沉淀得mpda纳米颗粒；
16.步骤2、通过疏水相互作用将fe3(co)
12
装载进mpda介孔结构中，得到co@mpda纳米颗粒：
17.步骤2a：将mpda纳米颗粒分散在三氯甲烷中，随后转移至schlenk反应瓶中，通过冷冻解冻泵循环法将反应液脱气，并充n2保护；
18.步骤2b：逐滴加入溶解有fe3(co)
12
的三氯甲烷溶液至步骤2a的mpda悬液中，避光在室温下以磁力搅拌反应12～48h；
19.步骤2c：将产物用乙醇清洗后，离心收集，所得产物即为负载fe3(co)
12
的mpda纳米颗粒，记为co@mpda纳米颗粒；
20.步骤3、通过层层自组装技术lbl在co@mpda纳米颗粒表面构建壳聚糖/海藻酸钠chi/alg聚电解质多层膜，得到lbl-co@mpda纳米颗粒：
21.步骤3a：将co@mpda纳米颗粒分散于ph为5～8的壳聚糖溶液中，室温下磁力搅拌反应10～60min，离心后用pbs清洗1～3遍，收集得到chi-co@mpda纳米颗粒；
22.步骤3b：将chi-co@mpda纳米颗粒悬浮于海藻酸钠溶液中，室温下磁力搅拌10～60min，离心后用pbs清洗1～3遍，收集得到chi/alg-co@mpda纳米颗粒；
23.重复步骤3a和步骤3b共2～5次，最终在co@mpda表面构建chi/alg聚电解质多层膜，最终得到lbl-co@mpda纳米颗粒。
24.所述步骤1a中水/乙醇混合液中是50～100ml去离子水和50～100ml乙醇。
25.所述步骤1b和步骤2b中磁力搅拌反应的转速为300转/分～500转/分。
26.所述步骤1c中乙醇/丙酮混合液中是15～30ml乙醇和5～20ml丙酮。
27.所述步骤1d、步骤2c和步骤3b中的离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟。
28.所述步骤3a、步骤3b的室温下磁力搅拌的转速300转/分～500转/分。
29.所述步骤3a的离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟。
30.所述步骤2b的fe3(co)
12
的浓度为5～30mg/ml。
31.一种所述氧化应激响应型co气体控释纳米复合物的应用，其特征在于：所述lbl-co@mpda纳米颗粒用于炎症性肠病(ibd)治疗的co气体靶向纳米递送系统，解决治疗性co气体的递送障碍，能够靶向富集到ibd炎性微环境，能够实现co治疗性气体靶向控释，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，恢复肠道免疫稳态。
32.有益效果
33.本发明提出的一种氧化应激响应型co气体控释纳米复合物、制备方法及应用，提供一种基于介孔聚多巴胺纳米颗粒(mpda)和壳聚糖/海藻酸钠聚电解质多层膜的高效、特异、安全的病理微环境氧化应激响应型co气体控释纳米复合物(lbl-co@mpda)，有效解决治疗性co气体的口服递送障碍，它不仅能够靶向富集到ibd炎性微环境，还能够实现co治疗性气体靶向控释，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，恢复免疫稳态，为炎症性肠病的治疗提供新选择，解决目前ibd治疗疗效有限、复发率高、药物依赖、毒副作用大等临床难题，给ibd的治愈带来了新的希望。
34.本发明创造的优点：
35.(1)co@mpda纳米颗粒能够实现疏水性co气体前药的有效装载，并能实现co气体在ibd氧化应激微环境的响应性递送，有效解决治疗性co气体的递送障碍；
36.(2)利用lbl技术，在co@mpda纳米颗粒表面构建的chi/alg聚电解质多层膜，是赋予纳米颗粒良好稳定性、主动靶向性、位点控释性的关键：一方面，chi/alg阻隔层不仅能够有效保护装载的药物不被胃肠道的理化因素破坏，使药物到达病变部位前保持稳定，另一方面能够通过静电相互作用靶向富集到ibd炎症微环境，刺激chi/alg“纳米阀”降解，激活co气体释放，从而延长作用时间；
37.(3)本发明制备方法不需要特殊设备，操作简单、可控性强，为ibd的治疗提供新的纳米递送策略。
附图说明
38.图1：不同纳米颗粒的透射电镜图
39.图2：lbl过程中颗粒表面zeta电位变化图
40.图3：模拟胃液和模拟肠液(添加100μm的h2o2)中纳米颗粒的尺寸变化
41.图4：不同浓度h2o2处理后，co@mpda纳米颗粒的co释放情况
42.图5：不同处理后，巨噬细胞内ros水平的代表性荧光图像
43.图6：不同处理后巨噬细胞所分泌的促炎和抗炎因子含量
具体实施方式
44.现结合实施例、附图对本发明作进一步描述：
45.本发明研发了一种氧化应激响应型co气体控释纳米复合物以及制备方法，同时及应用纳米复合物用于ibd治疗的活性氧响应型co气体释放型纳米递送系统(lbl-co@mpda)，其特征在于，包括以下步骤。
46.步骤一：mpda纳米颗粒的制备
47.通过“模板法”制备mpda纳米颗粒：(1)将含0.1～0.5g聚氧乙烯聚氧丙烯(f127)和200～500μl均三甲苯(tmb)溶解并分散于水/乙醇(50～100ml去离子水，50～100ml乙醇)混合液中；(2)然后，添加50～100mg三羟甲基氨基甲烷到上述的混合液中；(3)待完全溶解后，添加50～100mg盐酸多巴胺，室温下以转速300转/分～500转/分磁力搅拌反应12～24小时；(4)离心收集反应液中的粗产物，将其分散在乙醇/丙酮混合液中(15～30ml乙醇，5～20ml丙酮)去除有机模板；(5)离心收集沉淀，离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟，所得产物即为mpda纳米颗粒。
48.步骤二：co@mpda纳米颗粒的制备
49.通过疏水相互作用将fe3(co)
12
装载进mpda介孔结构中：(1)将步骤一得到的mpda纳米颗粒分散在5～30ml三氯甲烷中，随后转移至schlenk反应瓶中，通过冷冻解冻泵循环法将反应液脱气，并充n2保护；(2)然后，逐滴加入溶解有fe3(co)
12
的三氯甲烷溶液(5～30mg/ml)至上述mpda悬液中，避光在室温下以转速300转/分～500转/分磁力搅拌反应12～48h；(3)随后，将产物离心收集，乙醇清洗后，离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟，所得产物即为负载fe3(co)
12
的mpda纳米颗粒，简记为co@mpda纳米颗粒。
50.步骤三：lbl-co@mpda纳米颗粒的制备
51.通过层层自组装技术(lbl)在co@mpda纳米颗粒表面构建壳聚糖/海藻酸钠(chi/alg)聚电解质多层膜：(1)将步骤二得到的co@mpda纳米颗粒分散于ph为5～8的1～4mg/ml壳聚糖溶液中，室温下以转速300转/分～500转/分磁力搅拌反应10～60min，离心后用pbs清洗1～3遍，离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟，收集得到chi-co@mpda纳米颗粒；(2)将得到的纳米颗粒悬浮于1～4mg/ml海藻酸钠溶液中，室温下以转速300转/分～500转/分磁力搅拌10～60min，离心后用pbs清洗1～3遍，离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟，收集得到chi/alg-co@mpda纳米颗粒；(3)重复过程(1)和(2)共2～5次，最终在co@mpda表面构建chi/alg聚电解质多层膜，最终得到lbl-co@mpda纳米颗粒。
52.结合lbl-co@mpda纳米颗粒的设计思路，我们认为：
53.首先，炎症性肠病患者口服lbl-co@mpda纳米颗粒，纳米颗粒进入胃部，其表面修饰的lbl阻隔层能够隔绝所包载分子与胃肠道内胃酸和消化酶的接触，有效地保护co@mpda纳米颗粒不被胃肠道严苛的生理环境破坏，使药物口服后在胃、十二指肠、空肠、回肠前端不释放药物，实现纳米颗粒在胃肠道中的高稳定性。
54.然后，由于肠道炎症组织中存在着高浓度带正电荷的蛋白质(嗜酸性粒细胞阳离子蛋白和转铁蛋白)，使得炎症部位的肠黏膜上皮细胞表面带正电荷，而我们所发明的lbl-co@mpda纳米颗粒表面带强负电荷，当纳米颗粒运行到肠道炎症部位时，静电相互作用使得纳米颗粒靶向粘附于炎症组织，在病变局部富集。
55.最后，在肠道炎症部位，存在局部高浓度氧化应激信号，刺激chi/alg“纳米阀”降
解，激活co气体的靶向控释，充分发挥其气体治疗作用，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，恢复免疫稳态，最终促进肠粘膜修复。
56.具体实施例为氧化应激响应型co气体控释纳米复合物的制备，包括对mpda合成过程中f127和tmb的量、搅拌反应的转速、乙醇/丙酮混合液的比例、fe3(co)
12
的浓度、反应时间、壳聚糖和海藻酸钠的浓度、层层自组装重复次数的选择：
57.实施例1：
58.步骤一：mpda纳米颗粒的制备
59.通过“模板法”制备mpda纳米颗粒：(1)将含0.36g聚氧乙烯聚氧丙烯(f127)和450μl均三甲苯(tmb)溶解并分散于水/乙醇(65ml去离子水，60ml乙醇)混合液中；(2)然后，添加90mg三羟甲基氨基甲烷到上述的混合液中；(3)待完全溶解后，添加60mg盐酸多巴胺，室温下以转速300转/分磁力搅拌反应24小时；(4)离心收集反应液中的粗产物，将其分散在乙醇/丙酮混合液中(20ml乙醇，10ml丙酮)去除有机模板；(5)离心收集沉淀，离心参数为11000rpm，4℃，15分钟，所得产物即为mpda纳米颗粒。
60.步骤二：co@mpda纳米颗粒的制备
61.通过疏水相互作用将fe3(co)12装载进mpda介孔结构中：(1)将得到的mpda纳米颗粒分散在10ml三氯甲烷中，随后转移至schlenk反应瓶中，通过冷冻解冻泵循环法将反应液脱气，并充n2保护；(2)然后，逐滴加入溶解有fe3(co)12的三氯甲烷溶液(10mg/ml)至上述mpda悬液中，避光在室温下以转速500转/分磁力搅拌反应48h；(3)随后，将产物离心收集，乙醇清洗后，离心参数为11000rpm，4℃，15分钟，所得产物即为负载fe3(co)12的mpda纳米颗粒，简记为co@mpda纳米颗粒。
62.步骤三：lbl-co@mpda纳米颗粒的制备
63.通过层层自组装技术(lbl)在co@mpda纳米颗粒表面构建壳聚糖/海藻酸钠(chi/alg)聚电解质多层膜：(1)将co@mpda纳米颗粒分散于ph为6的2mg/ml壳聚糖溶液中，室温下以转速500转/分磁力搅拌反应30min，离心后用pbs清洗3遍，离心参数为11000rpm，4℃，15分钟，收集得到chi-co@mpda纳米颗粒；(2)将得到的纳米颗粒悬浮于2mg/ml海藻酸钠溶液中，室温下以转速500转/分磁力搅拌反应30min，离心后用pbs清洗3遍，离心参数为11000rpm，4℃，15分钟，收集得到chi/alg-co@mpda纳米颗粒；(3)重复过程(1)和(2)共该过程3次，最终在co@mpda表面构建chi/alg聚电解质多层膜，最终得到lbl-co@mpda纳米颗粒。
64.采用以上制备方法得到的产品即为，用于ibd治疗的活性氧响应型co气体释放型纳米递送系统。在构建过程中，诸多因素会影响mpda、co@mpda、lbl-co@mpda纳米颗粒的合成及响应性co气体的释放，例如mpda合成过程中f127和tmb的量、搅拌反应的转速、乙醇/丙酮混合液的比例、fe3(co)12的浓度、反应时间、壳聚糖和海藻酸钠的浓度、层层自组装重复次数等，不同的控制条件将直接影响功能纳米颗粒的构建。
65.实施例2：改变合成mpda合成过程中f127和tmb的量、搅拌反应的转速、乙醇/丙酮混合液的比例、fe3(co)
12
的浓度、反应时间、壳聚糖和海藻酸钠的浓度、层层自组装重复次数为：用0.36g f127和450μl tmb作为有机模板，搅拌反应的转速为300转/分、用乙醇/丙酮混合液中(20ml乙醇，10ml丙酮)去除有机模板，即可得到形貌均匀的具有良好介孔结构的mpda纳米颗粒；
66.实施例3：改变合成mpda合成过程中f127和tmb的量、搅拌反应的转速、乙醇/丙酮
混合液的比例、fe3(co)
12
的浓度、反应时间、壳聚糖和海藻酸钠的浓度、层层自组装重复次数为：用10mg/ml的fe3(co)
12
与得到的mpda避光反应48h，可有效实现疏水co气体前药的装载；当壳聚糖和海藻酸钠的浓度均为2mg/ml时，lbl重复3次时，得到的lbl-co@mpda纳米颗粒表面带强负电荷，能够有效抵御胃液的破坏，并实现氧化应激微环境介导的co气体响应性递送。
67.由上述实施例得到附图可见：
68.图1为mpda、co@mpda、lbl-co@mpda纳米颗粒的透射电镜图，图1表明，得到的mpda纳米颗粒直径在200nm左右，具有良好的介孔结构，有利于fe3(co)
12
的装载；得到的co@mpda纳米颗粒介孔结构消失，同时在co@mpda纳米颗粒的eds光谱图像中观察到fe元素的均匀分布，表明fe3(co)
12
的成功装载；得到的lbl-co@mpda纳米颗粒直径分布在300nm左右，表面清晰可见多层膜结构，且chi/alg多层膜的厚度在50nm左右；
69.图2为lbl-co@mpda纳米颗粒构建过程中表面zeta电位变化，图2表明，聚阳离子chi涂覆后，co@mpda的zeta电位从-38.2mv变化到chi-co@mpda的4.4mv，随后聚阴离子alg涂覆后，zeta电位又下降到chi/alg-co@mpda的-34.3mv；在进一步chi/alg涂覆处理中，也观察到类似的电位变化；chi/alg涂覆3个循环后，lbl-co@mpda的zeta电位最终维持在-45.6mv；因此，得到的lbl-co@mpda纳米颗粒表面带强负电荷，这将有利于通过静电相互作用富集到带正电荷的炎症性肠黏膜部位；
70.图3为lbl-co@mpda纳米颗粒在模拟胃液和模拟肠液(添加100μm的h2o2)中处理不同时间后，颗粒的尺寸变化，图3表明，在模拟胃液中孵育4h后，纳米颗粒的尺寸没有减小，表明lbl壳层保持相对完整；而在模拟肠液(添加100μm的h2o2)中，纳米颗粒的尺寸从313.4nm下降到279.7nm，说明chi/alg涂层被降解；因此，得到的lbl-co@mpda纳米颗粒表面的chi/alg多层膜能够有效抵御胃液的破坏，并实现炎症性肠病部位的co@mpda纳米颗粒的递送；
71.图4为co@mpda纳米颗粒在体外氧化应激条件下(不同浓度h2o2)，co气体的释放情况，图4表明，孵育60min后，co的释放呈现h2o2浓度依赖性，当浓度为5、50和100μm时，co的释放量分别达到0.84、2.92和3.59μm；因此，得到的co@mpda纳米颗粒能够实现氧化应激微环境介导的co气体响应性递送。
72.从图1-图4中可知，本发明所制备的lbl-co@mpda纳米颗粒具有良好的可口服性，具有实现炎症性肠病部位活性氧响应co气体按需递送的潜力。
73.本发明所制备的lbl-co@mpda纳米颗粒用于炎症性肠病治疗的co气体靶向纳米递送系统。表达所构建的co@mpda纳米颗粒在体外评价其抗炎效应的实施例为：
74.本实施例以正常巨噬细胞(raw264.7，5
×
104cells/cm2)为模型细胞，用h2o2溶液(100μm)预处理12h，然后激活的巨噬细胞与mpda和co@mpda纳米颗粒(100μg/ml)共孵育，探究co@mpda纳米颗粒的ros清除能力及抗炎效应，实验设置空白对照组(normal)、h2o2处理组(h2o2)、h2o2+mpda及h2o2+co@mpda，具体实验包括：
75.实验1：
76.共培养24h和48h后，将500μl的ros荧光探针2’,7
’–
二氯荧光黄双乙酸盐(dcfh-da，10μm)添加到各组中；
77.37℃孵育30分钟后，用pbs缓冲液轻轻润洗3次；
78.使用倒置荧光显微镜观察细胞内部的ros水平。
79.实验2：
80.共培养48h后，收集各组的培养基，使用elisa试剂盒分别检测不同纳米颗粒调控巨噬细胞的促炎性因子(tnf-α、il-6)和抗炎性因子(il-10)的分泌水平。
81.在本实施例中：
82.图5为不同处理后巨噬细胞内ros水平的代表性荧光图像，绿色荧光越强表示ros水平越高，图5表明，h2o2刺激下的巨噬细胞呈现明显的绿色荧光，而经mpda处理后，巨噬细胞内的绿色荧光明显减弱，相比之下，co@mpda处理组的绿色荧光最弱，进一步降低了氧化应激水平；因此，co@mpda纳米颗粒有效降低了h2o2对巨噬细胞产生的氧化应激损伤；
83.图6为不同处理后巨噬细胞所分泌的促炎和抗炎因子含量，图6表明，h2o2刺激加剧巨噬细胞促炎因子(tnf-α和il-6)的分泌，mpda处理后，细胞分泌tnf-α的含量明显降低，与mpda相比，co@mpda处理显著抑制促炎因子tnf-α和il-6分泌的同时，显著促进抗炎因子il-10的分泌；因此，co@mpda具有良好的抗炎活性。
84.综上所述，本发明中的制备方法不需要特殊设备，操作简单、可控性强，成功构建了一种可用于炎症性肠病治疗的活性氧响应型co气体靶向纳米递送系统，有效解决治疗性co气体的递送障碍，它不仅能够靶向富集到ibd炎性微环境，还能够实现co治疗性气体靶向控释，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，为炎症性肠病的治疗提供新的策略，一定程度上解决目前临床上ibd治疗疗效有限、复发率高、药物依赖、毒副作用大等难题。

技术特征：
1.一种氧化应激响应型co气体控释纳米复合物，其特征在于：以疏水性的金属羰基络合物fe3(co)
12
装载进介孔聚多巴胺纳米颗粒mpda的介孔结构中，利用层层自组装技术lbl在纳米颗粒表面修饰壳聚糖/海藻酸钠chi/alg聚电解质多层膜，形成lbl-co@mpda纳米颗粒。2.一种权利要求1所述氧化应激响应型co气体控释纳米复合物的制备方法，其特征在于步骤如下：步骤1、采用“模板法”制备mpda纳米颗粒：步骤1a：将含0.1～0.5g聚氧乙烯聚氧丙烯f127和200～500μl均三甲苯tmb溶解并分散于水/乙醇混合液中；步骤1b：添加50～100mg三羟甲基氨基甲烷tris至混合液溶解后，添加50～100mg盐酸多巴胺，室温下以磁力搅拌反应12～24小时；步骤1c：离心收集反应液中的粗产物，将其分散在乙醇/丙酮混合液中去除有机模板；步骤1d：离心收集沉淀得mpda纳米颗粒；步骤2、通过疏水相互作用将fe3(co)
12
装载进mpda介孔结构中，得到co@mpda纳米颗粒：步骤2a：将mpda纳米颗粒分散在三氯甲烷中，随后转移至schlenk反应瓶中，通过冷冻解冻泵循环法将反应液脱气，并充n2保护；步骤2b：逐滴加入溶解有fe3(co)
12
的三氯甲烷溶液至步骤2a的mpda悬液中，避光在室温下以磁力搅拌反应12～48h；步骤2c：将产物用乙醇清洗后，离心收集，所得产物即为负载fe3(co)
12
的mpda纳米颗粒，记为co@mpda纳米颗粒；步骤3、通过层层自组装技术lbl在co@mpda纳米颗粒表面构建壳聚糖/海藻酸钠chi/alg聚电解质多层膜，得到lbl-co@mpda纳米颗粒：步骤3a：将co@mpda纳米颗粒分散于ph为5～8的壳聚糖溶液中，室温下磁力搅拌反应10～60min，离心后用pbs清洗1～3遍，收集得到chi-co@mpda纳米颗粒；步骤3b：将chi-co@mpda纳米颗粒悬浮于海藻酸钠溶液中，室温下磁力搅拌10～60min，离心后用pbs清洗1～3遍，收集得到chi/alg-co@mpda纳米颗粒；重复步骤3a和步骤3b共2～5次，最终在co@mpda表面构建chi/alg聚电解质多层膜，最终得到lbl-co@mpda纳米颗粒。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1a中水/乙醇混合液中是50～100ml去离子水和50～100ml乙醇。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1b和步骤2b中磁力搅拌反应的转速为300转/分～500转/分。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1c中乙醇/丙酮混合液中是15～30ml乙醇和5～20ml丙酮。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1d、步骤2c和步骤3b中的离心参数为5000～11000rpm，4～25℃，5～30分钟。7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤3a、步骤3b的室温下磁力搅拌的转速300转/分～500转/分。8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤3a的离心参数为5000～
11000rpm，4～25℃，5～30分钟。9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2b的fe3(co)
12
的浓度为5～30mg/ml。10.一种权利要求1所述氧化应激响应型co气体控释纳米复合物的应用，其特征在于：所述lbl-co@mpda纳米颗粒用于炎症性肠病(ibd)治疗的co气体靶向纳米递送系统，解决治疗性co气体的递送障碍，能够靶向富集到ibd炎性微环境，能够实现co治疗性气体靶向控释，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，恢复肠道免疫稳态。

技术总结
本发明涉及一种氧化应激响应型CO气体控释纳米复合物、制备方法及应用，提供一种基于介孔聚多巴胺纳米颗粒(MPDA)和壳聚糖/海藻酸钠聚电解质多层膜的高效、特异、安全的病理微环境氧化应激响应型CO气体控释纳米复合物(LBL-CO@MPDA)，有效解决治疗性CO气体的口服递送障碍，它不仅能够靶向富集到IBD炎性微环境，还能够实现CO治疗性气体靶向控释，从而有效缓解氧化应激，减轻炎症反应，恢复免疫稳态，为炎症性肠病的治疗提供新选择，解决目前IBD治疗疗效有限、复发率高、药物依赖、毒副作用大等临床难题，给IBD的治愈带来了新的希望。给IBD的治愈带来了新的希望。给IBD的治愈带来了新的希望。


技术研发人员：袁璋 张旭 吴建双
受保护的技术使用者：西北工业大学
技术研发日：2023.04.21
技术公布日：2023/8/9