一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针及其制备方法

1.本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针及其制备方法。


背景技术：

2.食源性疾病是一类通过摄取食物使致病因子进入体内而引起感染或中毒的常见人类疾病，其在全球范围内造成严重的公共卫生负担，对经济及社会发展均造成了不利影响。根据世界卫生组织2020年-2022年数据显示，全世界每年有约5.5亿人-6亿人因食用受污染的食物而患病，其中约23万人死亡、食源性致病菌是引起食源性疾病的一大原因，其中单增李斯特氏菌是常见致病菌，它广泛存在于环境、食品、人和动物宿主中，可以在极端条件下生存并引起食物污染，食用被该菌污染的食物会引起李斯特菌病，致死率高达20%-30%，对公共卫生安全危害较大。对于常见致病菌的检测，传统培养方法仍是公认且可靠的方法，但需要经过细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定等多个步骤，较为繁琐；常规聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，pcr）方法因检测时间较长而受限。而基于免疫学技术的elisa试剂盒，价格高昂，难以进行工业化大规模推广使用。因此，迫切需要开发简单、快速、高灵敏、精确的策略和分析方法，用于实时检测食品及环境中的单增李斯特菌。
3.新兴的荧光生物探针的检测方法因其成本低、操作简便、响应快、稳定性高等优点，被广泛应用于靶标物质的测定。其中，荧光共振能量转移（fret，f
ö
rster resonance energy transfer）作为一种非辐射能量跃迁，通过分子间的电偶极相互作用，将供体激发态能量转移到受体激发态，在荧光探针检测技术中被广泛应用。现阶段，作为检测探针的主要荧光标记物包括有机荧光染料、量子点。其中，传统有机荧光染料存在亮度低和严重的光漂白问题，阻碍了其实际应用。此外，量子点由于合成步骤繁琐，稳定性差，且与各种商用介质不相容等缺点，使其应用受到限制。相对来说，碳点（carbon dots，cds）又称为碳纳米点或碳量子点，是一类具有优异荧光性能的零维碳纳米材料，可作为半导体量子点的一种潜在无毒替代品。通常碳点一般是由sp2/sp3杂化碳、含氮/氧基团以及后修饰功能基团三部分构成，形貌呈球形、粒径在2nm-10nm左右，又可分为无定形和结晶型两类。此外，硅纳米颗粒（silicon-containing nanoparticles，snps）的相应研究较少，其常由含硅的偶联剂进行催化还原制备而得。基于荧光共振能量转移的方法大多通过缩短供体与受体之间的距离来实现，例如，利用偶联在微生物菌体表面上的比率型荧光探针位置上靠近来进行能量转移。比率型荧光探针因其具有高灵敏度、操作简单、对目标物的响应时间短等优势，在食品微生物的检测中备受关注。该法同时关注两个不同荧光团的信号变化，对两个信号进行归一化处理或者以它们的比值作为输出信号，相当于引入了一个内标，可以在一定程度上消除仪器噪音和检样样品环境的干扰，提高方法的准确度。当前，需要选择合适的可作为能量供体的第一荧光探针，并选择合适的可作为能量受体的第二荧光探针，来组成有效的fret型比率荧光探针，尤其是非淬灭型比率荧光探针，但由于微生物菌体结构特殊，不易形成fret效应，易受菌体表面快速的新陈代谢代谢活动或免疫反应影响而脱落。


技术实现要素：

4.针对现有的食品中单增李斯特菌的检测技术存在检测难度大、耗时长、灵敏度低的问题，本发明提供一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针及其制备方法。
5.一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针由作为能量供体的第一荧光探针和作为能量受体的第二荧光探针按体积比1：1混合均匀制成；所述第一荧光探针为万古霉素修饰的碳量子点；所述第二荧光探针为适配体修饰的硅纳米颗粒；所述万古霉素为万古霉素盐酸盐，cas编号为1404-93-9；所述适配体的dna序列如seq id no:1所示，所述适配体的5’端用氨基修饰；所述比率荧光探针用于检测单增李斯特菌的线性拟合系数为0.99332，检出限为2.06cfu/ml。
6.用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针的制备操作步骤如下：（1）制备活化混合液按体积比1：1，将浓度10mm的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐与浓度5mm的n-羟基琥珀酰亚胺混合，得到活化混合液；（2）制备第一荧光探针按质量体积比12mg：2ml将盐酸胍与超纯水混合溶解，得到混合液；将混合液转移至反应釜中，反应温度200℃、反应时间8h，冷却至室温，得到反应液；在转速8000rpm、温度4℃条件下，将反应液离心20min，收集上清液；按照体积比2：1将上清液与步骤（1）中所述活化混合液混合，室温下孵育25min；加入浓度50um的万古霉素溶液，万古霉素溶液的加入量为所述上清液体积的0.006倍，在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第一荧光探针；（3）制备第二荧光探针按体积比1：1将摩尔浓度100mm的抗坏血酸钠溶液与3-氨丙基三甲氧基硅烷混合，并加入八倍体积的超纯水搅拌混匀，搅拌混匀80min；以500da透析袋透析18h，得到滞留液；按体积比2：1将滞留液与步骤（1）中所述活化混合液进行混合，室温下孵育30min；加入浓度100um的适配体溶液，适配体溶液的加入量为所述滞留液体积的0.03倍；在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第二荧光探针；（4）制备比率荧光探针按体积比1：1将所述第一荧光探针与所述第二荧光探针混合，制得比率荧光探针；当碳量子点的荧光发射波长从452nm偏移至458nm，表示比率荧光探针中万古霉素成功修饰到碳量子点上，当硅纳米颗粒的荧光发射波长从500nm偏移至488nm，表示比率荧光探针中适配体成功修饰到硅纳米颗粒上。
7.本发明的有益技术效果体现在以下方面：1.经验证，本发明制备的比率荧光探针具有较高的线性拟合程度（相关系数高达0.99332）与较低的检出限（低至2.06cfu/ml），当前现有技术的线性拟合程度普遍范围在0.90-0.99；同时，与传统技术（链置换反应法、pcr扩增法、elisa试剂盒法）相比，它们的检
出时间长达12h-3d不等，对部分常见模式菌株的特异性交叉，而本发明比率荧光探针具备较低的检出时间（仅需要25min）、较好的特异性（对常见模式菌株金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等），例如，传统的链置换反应是利用dna分子杂交的自由能差异，以一条单链dna置换出杂交dna双螺旋结构中的目标单链，由于单链dna上带负电荷的磷酸基团对双链dna具有分子内静电排斥作用，导致链置换反应效率相对较低。
8.2.经测试，本发明在标准环境下建立的线性回归方程可以直接应用到牛奶/lb肉汤样品的检测中，无需重新培养细菌来建立标准曲线，只需将已经建立好的线性回归方程直接应用即可，节约时间，适合应急环境下快速估算食品样品中单增李斯特菌的初步浓度。例如，在牛奶样品中，在牛奶中人工接种单增李斯特菌的环境下，比率荧光探针测得的单增李斯特菌的浓度为3.86*106cfu/ml，几乎与其真实的浓度（3.9*106cfu/ml）接近，可以看出，即使未建立牛奶样品环境下的相应标准曲线及线性回归方程，依旧可以根据纯pbs样品环境下建立的标准曲线及线性回归方程具有较好的通用性。又例如，在lb肉汤中人工接种单增李斯特菌的环境下，测得的单增李斯特菌的浓度为3.83*106cfu/ml，几乎与其真实的浓度（3.9*106cfu/ml）接近，可以看出，即使未建立lb肉汤样品环境下的相应标准曲线及线性回归方程，依旧可以根据已有的自来水环境下建立的标准曲线及线性回归方程具有较好的通用性，由此可见，本技术的方法具有较好的通用性，可以快速应用到不同的样品检测中。
9.3.综合来说，本技术选择万古霉素修饰的碳量子点与适配体修饰的硅纳米颗粒组成比率型荧光探针，这是两种不同类型的探针首次进行组合使用，从数以万计的类似量子点或纳米颗粒选择合适的配对荧光探针需要付出很大的创造性劳动，同时现有技术中并未公开碳量子点/硅纳米颗粒应用到食源性单增李斯特菌的检测，由于原有的碳量子点用于小分子α-葡萄糖苷酶的检测，且碳纳米颗粒也用于小分子α-葡萄糖苷酶的检测，能否应用到细菌的检测中无法得知，不仅需要考虑到碳量子点/硅纳米颗粒之间是否发生络合反应或者与单增李斯特菌的外表面发生螯合，而且将上述碳量子点/硅纳米颗粒组合成比率荧光探针还需要考虑能否发生有效的fret效应，需要考虑到碳量子点与硅纳米颗粒之间荧光发射-紫外吸收的重叠交叉程度；此外，碳量子点与万古霉素之间共价偶联，硅纳米颗粒与适配体之间共价偶联，以及两种探针之间的使用浓度与体积比例等等多种复杂因素的考虑，这是现有技术中并未公开，也是本领域相应公知常识无法得到技术启示。
附图说明
10.图1为本发明中用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针的应用原理图。
11.图2为本发明中第一荧光探针与万古霉素共价偶联前后的荧光光谱图。
12.图3为本发明中第二荧光探针与核酸适配体共价偶联前后的荧光光谱图。
13.图4为本发明中不同浓度单增李斯特菌的荧光光谱图。
14.图5为本发明中单增李斯特菌的标准曲线图。
15.图6为本发明中单增李斯特菌的特异性检测图。
具体实施方式
16.下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
17.除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人
员普遍理解的相同含义。
18.以下实施例中所用的原材料如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，如无特殊说明，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。
19.以下实施例中，使用的适配体采购自生工生物工程（上海）股份有限公司；使用的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、n-羟基琥珀酰亚胺、盐酸胍、万古霉素、抗坏血酸钠及3-氨丙基三甲氧基硅烷采购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；使用的500da透析袋采购自上海源叶生物科技有限公司；如无特别说明，使用的其他原料均采购自国药集团化学试剂有限公司。
20.本技术使用的pbs缓冲液为0.1m、ph值7.4的无菌pbs缓冲液。
21.本技术使用的所有的菌种均采购自美国模式培养物集存库（atcc），其中单增李斯特菌的编号为atcc 43251，其中金黄色葡萄球菌的编号为atcc 29213，其中沙门氏菌的编号为atcc 14028，其中大肠杆菌的编号为atcc 25922，其中阪崎克罗诺杆菌的编号为atcc29544，其中铜绿假单胞菌的编号为atcc 15442。此外，上述菌株通过合肥希玥生物科技有限公司进行境外代理采购。
22.本技术所使用的仪器设备、原料试剂或方法步骤，均确保在无菌条件下进行处理。
23.本技术未提及的仪器设备、原料试剂或方法步骤，对于本领域技术人员来说属于常规或公知的技术方法，在本技术中不在赘述，可以参考如下的论文资料（yuwei ren, lulu cao, xiyan zhang, rui jiao, dexin ou, yang wang, danfeng zhang,yizhong shen, na ling, yingwang ye,a novel fluorescence resonance energy transfer (fret)-based paper sensor with smartphone for quantitative detectionof vibrio parahaemolyticus,food control,volume 145,2023,109412,issn 0956-7135,https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2022.109412.）。
24.实施例1用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针的制备操作步骤如下：（1）制备活化混合液按体积比1：1，将浓度10mm的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐与浓度5mm的n-羟基琥珀酰亚胺混合，在涡旋机中涡旋混合处理，制得到活化混合液，保存至4℃的冰箱中备用；（2）制备第一荧光探针参见图1中的a，将盐酸胍与超纯水以质量体积比12mg：2ml进行混合溶解，采用涡旋机进行充分震荡，得到混合液；将混合液转移至带有聚四氟乙烯内衬的水热合成反应釜中进行反应，利用烘箱升温至200℃进行反应，控制反应时间8h，得到反应液，结束后冷却反应液至室温；将反应液以8000rpm、4℃条件下离心20min，收集上清液；按照体积比2：1分别取500ul上清液与250ul活化混合液进行混合，利用摇床在室温下以180rpm转速、孵育25min；加入3.2ul浓度50um的万古霉素溶液，其中万古霉素溶液的体积为所述上清液体积的0.006倍，以180rpm、室温条件下摇床孵育2.5h，制得第一荧光探针；（3）制备第二荧光探针参见图1中的b，按体积比1：1将摩尔浓度100mm的抗坏血酸钠溶液与3-氨丙基三甲
氧基硅烷混合，并加入八倍体积的超纯水搅拌混匀，搅拌混匀80min；以500da透析袋透析18h，得到滞留液并稀释十五倍；按体积比2：1将500ul滞留液与250ul活化混合液进行混合，室温下孵育30min；加入16ul浓度100um的适配体溶液，适配体溶液的加入量为所述滞留液体积的0.03倍；在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第二荧光探针；（4）制备比率荧光探针按体积比1：1取50ul第一荧光探针和50ul第二荧光探针混合，制得比率荧光探针；比率荧光探针中万古霉素成功修饰到碳量子点上，适配体成功修饰到硅纳米颗粒上。
25.参见图2，图2中的a曲线表示共价偶联前的荧光光谱曲线，图2中的b曲线表示共价偶联后的荧光光谱曲线；具体来说，图2中的a曲线为未进行万古霉素修饰的碳量子点荧光发射波长图，图2中的b曲线为万古霉素修饰的碳量子点荧光发射波长图，当碳量子点的荧光发射波长从452nm偏移至458nm，表示比率荧光探针中万古霉素成功修饰到碳量子点上。
26.参见图3，图3中的a曲线表示共价偶联前的荧光光谱曲线，图3中的b曲线表示共价偶联后的荧光光谱曲线；具体来说，图3中的a曲线为适配体修饰的硅纳米颗粒荧光发射波长图，图3中的b曲线为未进行适配体修饰的硅纳米颗粒荧光发射波长图，当硅纳米颗粒的荧光发射波长从500nm偏移至488nm，表示比率荧光探针中适配体成功修饰到硅纳米颗粒上。
27.实施例2参见图1中的c，实施例1制备的比率荧光探针用于单增李斯特菌的检测操作步骤如下：（1）线性回归方程建立：首先，制备不含菌的待测样品的待测溶液，设置为空白对照待测溶液，并对多个空白对照待测溶液进行人工污染单增李斯特菌，设置多个呈线性梯度稀释的含菌待测溶液，接着，将制备的比率荧光探针与含菌待测溶液或空白对照待测溶液以体积比1：1混合，孵育25min，得到孵育液，接着，在激发波长285nm下分别测定孵育液在458nm与488nm两个发射波长下荧光强度，最后，以荧光强度比值f
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作为纵坐标，并以多个含菌待测溶液的菌浓度的对数值作为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程，得到相关系数与检出限；（2）待测样品中单增李斯特菌的检测：首先，制备待测样品的待测溶液，将制备的比率荧光探针与待测溶液以体积比1：1混合，孵育25min，得到孵育液，接着，在激发波长285nm下分别测定孵育液在458nm与488nm两个发射波长下荧光强度，最后，根据得到的荧光强度比值f
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，代入步骤（1）得到的线性回归方程，得到待测样品中单增李斯特菌的浓度。
28.实验时，具体的操作如下，选择pbs缓冲液作为空白对照待测溶液，同时，将单增李斯特菌的菌液离心后使用pbs缓冲液清洗三次，然后使用pbs缓冲液进行重悬及梯度稀释，制作浓度分别为3.9*101cfu/ml、3.9*102cfu/ml、3.9*103cfu/ml、3.9*104cfu/ml、3.9*105cfu/ml、3.9*106cfu/ml、3.9*107cfu/ml含菌待测溶液。先将实施例1制备的比率荧光探针取100ul，分别与100ul空白对照待测溶液、上述七个梯度稀释的100ul含菌待测溶液孵育25min，得到孵育液，接着，在激发波长285nm下分别测定孵育液在458nm与488nm两个发射波
长下荧光强度，最后，以荧光强度比值f
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作为纵坐标，并以多个含菌待测溶液的菌浓度的对数值作为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程，得到相关系数与检出限。
29.本发明制备的比率荧光探针，其中第一荧光探针在458nm具有一明显荧光发射峰，其中第二荧光探针在488nm具有一明显荧光发射峰，同时，位于458nm处的荧光强度值与位于488nm处的荧光强度值之间的比值与单增李斯特菌的菌浓度的对数值呈线性关系。
30.同时，参见图4，从上至下分别为：图4中1号曲线表示菌浓度为0cfu/ml的荧光光谱曲线（空白对照待测溶液）、图4中2号曲线表示菌浓度为3.9*101cfu/ml的荧光光谱曲线、图4中3号曲线表示菌浓度为3.9*102cfu/ml的荧光光谱曲线、图4中4号曲线表示菌浓度为3.9*103cfu/ml的荧光光谱曲线、图4中5号曲线表示菌浓度为3.9*104cfu/ml的荧光光谱曲线、图4中6号曲线表示菌浓度为3.9*105cfu/ml的荧光光谱曲线、图4中7号曲线表示菌浓度为3.9*106cfu/ml的荧光光谱曲线、图4中8号曲线表示菌浓度为3.9*107cfu/ml的荧光光谱曲线；同时，结合图5来看，取上述图4中每条荧光光谱曲线上458nm的荧光强度值与488nm的荧光强度值之间的商比值作为纵坐标，取上述每条荧光光谱曲线对应的菌浓度的对数值作为横坐标，其线性回归方程为y=-0.03708x+0.64827，其相关系数（r2）为0.99332，其检出限为2.06cfu/ml。
31.实施例3实施例1制备的比率荧光探针对真实食品样品的检测，选择牛奶样品进行测试：本实施例3为了验证按照实施例2的标准曲线是否可以有效应用于干扰环境（牛奶）下的测定，故分别进行人工定量染菌及牛奶样品中探针检测的菌数量之间的差异，以获知即使在真实食品样品中，本技术所建立的比率荧光探针可有效在有高蛋白高脂肪的影响下进行检测。
32.本实施例3涉及的牛奶样品采购自校内超市，采购时牛奶贮存在4℃的冰箱内，其为“蒙牛纯牛奶”，其类型为全脂灭菌乳，其配料为生牛乳，每100g牛奶中蛋白质的含量为3.2g，脂肪的含量为4.0g。
33.实验时，在1ml的牛奶中人工接种单增李斯特菌，其中接种后单增李斯特菌的终浓度为3.9*106cfu/ml，在5000
×
g条件下离心5min，弃去上清液，用1ml的pbs缓冲液重悬沉淀，作为待测溶液，接着取500ul待测溶液与500ul制备的比率荧光探针进行混合，孵育25min，得到孵育液，接着，在激发波长285nm下分别测定孵育液在458nm与488nm两个发射波长下荧光强度，最后，根据得到的荧光强度比值f
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，代入实施例2中步骤（1）得到的线性回归方程，得到待测样品中单增李斯特菌的浓度。
34.试验结果表明，经计算，在牛奶中人工接种单增李斯特菌的环境下，比率荧光探针测得的单增李斯特菌的浓度为3.86*106cfu/ml，几乎与其真实的浓度（3.9*106cfu/ml）接近，能看出，即使未建立牛奶样品环境下的相应标准曲线及线性回归方程，依旧可以根据纯pbs样品环境下建立的标准曲线及线性回归方程具有较好的通用性，由此可见，本发明制备的比率荧光探针具有较好的通用性，实现快速应用到不同的样品检测中。
35.实施例4基本上同实施例2，不同之处在于：将单增李斯特菌分别更换成金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、阪崎克罗诺杆菌、铜绿假单胞菌；并分别制作浓度为3.9*106cfu/ml含菌待测溶液。
36.参见图6，加入金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、阪崎克罗诺杆菌、铜绿假单胞菌后的含菌待测溶液，其荧光强度比值f
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之间比值分别为0.70866、0.71062、0.70962、0.70676、0.71123，同时，同等条件下加入单增李斯特菌后的含菌待测溶液，其荧光强度比值f
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之间比值为0.40643，此外，同等条件下空白对照待测溶液，其荧光强度比值f
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之间比值为0.70760，由此可以说明本发明制备的比率荧光探针对单增李斯特菌具有良好的特异性。
37.本领域的技术人员容易理解，以上实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针，其特征在于：由作为能量供体的第一荧光探针和作为能量受体的第二荧光探针按体积比1：1混合均匀制成；所述第一荧光探针为万古霉素修饰的碳量子点；所述第二荧光探针为适配体修饰的硅纳米颗粒；所述万古霉素为万古霉素盐酸盐，cas编号为1404-93-9；所述适配体的dna序列如seq id no:1所示，所述适配体的5’端用氨基修饰；所述比率荧光探针用于检测单增李斯特菌的线性拟合系数为0.99332，检出限为2.06cfu/ml。2.根据权利要求1所述用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针的制备方法，其特征在于操作步骤如下：（1）制备活化混合液按体积比1：1，将浓度10mm的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐与浓度5mm的n-羟基琥珀酰亚胺混合，得到活化混合液；（2）制备第一荧光探针按质量体积比12mg：2ml将盐酸胍与超纯水混合溶解，得到混合液；将混合液转移至反应釜中，反应温度200℃、反应时间8h，冷却至室温，得到反应液；在转速8000rpm、温度4℃条件下，将反应液离心20min，收集上清液；按照体积比2：1将上清液与步骤（1）中所述活化混合液混合，室温下孵育25min；加入浓度50um的万古霉素溶液，万古霉素溶液的加入量为所述上清液体积的0.006倍，在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第一荧光探针；（3）制备第二荧光探针按体积比1：1将摩尔浓度100mm的抗坏血酸钠溶液与3-氨丙基三甲氧基硅烷混合，并加入八倍体积的超纯水搅拌混匀，搅拌混匀80min；以500da透析袋透析18h，得到滞留液；按体积比2：1将滞留液与步骤（1）中所述活化混合液进行混合，室温下孵育30min；加入浓度100um的适配体溶液，适配体溶液的加入量为所述滞留液体积的0.03倍；在转速180rpm、室温条件下，摇床孵育2.5h，制得第二荧光探针；（4）制备比率荧光探针按体积比1：1将所述第一荧光探针与所述第二荧光探针混合，制得比率荧光探针；当碳量子点的荧光发射波长从452nm偏移至458nm，表示比率荧光探针中万古霉素成功修饰到碳量子点上，当硅纳米颗粒的荧光发射波长从500nm偏移至488nm，表示比率荧光探针中适配体成功修饰到硅纳米颗粒上。

技术总结
本发明公开了一种用于检测单增李斯特菌的比率荧光探针及其制备方法，属于食品安全技术领域。由作为能量供体的第一荧光探针与作为能量受体的第二荧光探针混合均匀制成；第一荧光探针为万古霉素修饰的碳量子点；第二荧光探针为适配体修饰的硅纳米颗粒；适配体用于特异性识别单增李斯特菌。经验证，本发明比率荧光探针用于检测单增李斯特菌的线性拟合系数为0.99332，检出限为2.06CFU/mL。与传统方法相比，还具备较低的检出时间、较好的特异性；此外，在牛奶样品的干扰下，建立的线性回归方程，仍展示出优异的适用性。仍展示出优异的适用性。仍展示出优异的适用性。


技术研发人员：叶应旺 李辉 凌娜 任玉伟 赵文华 陈韩芳 张丹凤 沈益忠
受保护的技术使用者：合肥工业大学
技术研发日：2023.04.18
技术公布日：2023/8/9