青藤碱在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途

1.本发明涉及青藤碱在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。


背景技术：

2.炎症性肠病(inflammatory bowel disease,ibd)是一种发生在胃肠道的慢性复发性炎症性疾病，包括克罗恩病(crohn’s disease,cd)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)。uc可导致直肠、结肠粘膜及粘膜下层的炎症，主要症状包括大便急迫、血性腹泻、腹痛、体重减轻和疲劳。由于uc难以治愈、易复发且癌变风险高，已被世界卫生组织列为难治性疾病。因此，寻找或开发具有调控巨噬细胞极化作用的潜在候选药物对uc的治疗具有重要意义。
3.青藤碱(sinomenine,sin)是一种具有抗风湿、抗氧化、抗炎、抗心律失常、神经保护和镇痛作用的生物碱，来源于青风藤。相关研究表明sin通过下调microrna-155和相关炎性因子(tnf-α、ifn-γ)的表达水平对三硝基苯磺酸诱导的结肠炎小鼠发挥抗炎疗效。然而，uc是一种慢性非特异性的结肠炎，主要和环境因素、遗传因素、肠道微生态及免疫失衡相关。由于sin对dss肠炎的保护作用及相关机制的研究仍存在很多空白，也不清楚sin对肠道微生态及免疫失衡是否具有调控作用，因此，目前还未有将青藤碱用于溃疡性结肠炎的报道。


技术实现要素：

4.为解决上述问题，本发明提供了青藤碱在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。
5.进一步地，所述药物是改善结肠组织中杯状细胞衰竭、粘液分泌减少和/或胶原沉积的药物。
6.进一步地，所述药物是改善巨噬细胞浸润的药物。
7.更进一步地，所述药物具有抑制结肠组织中巨噬细胞m1极化，并促进巨噬细胞m2极化的作用。
8.更进一步地，所述药物通过jak2/stat3通路调节巨噬细胞极化。
9.进一步地，所述药物是调节肠道菌群的药物。
10.更进一步地，所述药物具有增加道菌群多样性和丰度，改善菌群结构和/或调节肠道菌群稳态的作用。
11.进一步地，所述药物是调控白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平的药物。
12.本发明经体内和体外实验证明，sin对dss诱导的肠炎小鼠具有保护作用，能够缓解肠道炎症，并改善肠炎小鼠肠道杯状细胞的衰竭、粘液分泌的减少及胶原沉积。sin能够显著改善dss肠炎小鼠肠道中巨噬细胞的浸润，其对肠炎小鼠的保护作用可能依赖于巨噬细胞。sin能够抑制dss肠炎小鼠结肠组织中巨噬细胞m1极化，并促进巨噬细胞m2极化。sin对dss肠炎小鼠肠道菌群具有调控作用，可以增加肠炎小鼠肠道菌群多样性和丰度，改善菌
群结构，调节肠道菌群稳态。sin对lps刺激的raw 264.7细胞炎症模型具有抗炎作用，且对细胞上清液中白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平具有调控作用。sin能抑制lps刺激的raw 264.7巨噬细胞m1极化，促进m2极化；可能通过调控jak2/stat3通路调节巨噬细胞极化。本发明为了sin在uc治疗方面的药用价值及潜在机制，为临床应用sin治疗uc提供依据，将sin应用于治疗溃疡性结肠炎具备实际临床价值。
13.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
14.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围
附图说明
15.图1dss肠炎小鼠模型构建及给药示意图
16.图2巨噬细胞清除、dss肠炎模型构建及给药示意图
17.图3体内技术路线图
18.图4体外技术路线图
19.图5sin通过调节巨噬细胞极化抑制肠道炎症的机制图
具体实施方式
20.实验例1青藤碱通过调控巨噬细胞极化和肠道菌群改善葡聚糖硫酸钠小鼠肠道炎症研究
21.一、研究方法
22.1 体内实验
23.1.1 研究假说
24.sin对dss肠炎小鼠具有保护作用，且依赖于巨噬细胞，可通过调控m1/m2型巨噬细胞极化从而缓解dss诱导的小鼠结肠炎的肠道炎症。sin对dss肠炎小鼠的肠道菌群具有，从而发挥抗炎疗效。
25.1.2dss肠炎小鼠模型构建、分组及给药
26.无特异性致病菌的雄性c57bl/6j小鼠(6-8周龄)在22℃-26℃、60％相对湿度的标准鼠笼中饲养，光照/暗周期为12小时。所有小鼠适应环境一周后，随机分为三组：control组(n＝6)、dss组(n＝6)和dss+sin组(n＝6)。在第1天至第7天，dss组和dss+sin组小鼠自由饮用2.3％(w/v)dss饮用水以诱导肠炎，对control组小鼠予以正常饮用水。在第1天至第10天，对dss+sin组小鼠进行sin(200mg/kg)灌胃处理，对control组和dss组小鼠予以生理盐水(normal saline,nacl)灌胃处理(图1)。
27.1.3巨噬细胞清除小鼠模型构建、分组及给药
28.参考1.2中方法构建dss肠炎小鼠模型，通过腹腔注射氯磷酸盐脂质体(clodronate liposomes,clod-lipo)耗竭小鼠体内巨噬细胞，以磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,pbs)作为对照。无特异性致病菌的雄性c57bl/6j小鼠(6-8周龄)在22℃-26℃、60％相对湿度的标准鼠笼中饲养，光照/暗周期为12小时。所有小鼠适应环境一周后，随
机分为四组：dss+pbs+nacl组(n＝8)、dss+pbs+sin组(n＝8)、dss+clod-lipo+nacl组(n＝8)和dss+clod-lipo+sin组(n＝8)。在第1天至第10天，对dss+pbs+sin组和dss+clod-lipo+sin组小鼠进行sin(200mg/kg)灌胃处理，对dss+pbs+nacl组和dss+clod-lipo+nacl组小鼠予以nacl灌胃处理。在第4天、第6天、第8天对dss+clod-lipo+nacl组和dss+clod-lipo+sin组小鼠腹腔注射clod-lipo，每只小鼠0.2ml，对dss+pbs+nacl组和dss+pbs+sin组小鼠腹腔注射pbs，每只小鼠0.2ml(图2)。
29.1.4小鼠肠炎dai评分及肠组织病理学评估
30.每天记录每只小鼠的体重、直肠出血/大便隐血情况及大便性状，评估小鼠肠炎疾病活动指数(disease activity index,dai)(表1)。小鼠肠组病理学评分标准见表2。
31.表1.小鼠肠炎dai评分标准
[0032][0033][0034]
表2.组织病理学评分标准
[0035][0036]
*组织学评分的总分为两个分项评分的汇总，即0分(无改变)至6分(严重的组织损伤和广泛炎性细胞浸润)。
[0037]
1.5样本的采集及处理
[0038]
将小鼠颈椎脱位安乐死后，立即采集小鼠结肠组织，测量结肠长度(直肠近端与回盲交界处之间)。用预冷的pbs彻底清洗结肠组织，然后用10％的福尔马林固定远端结肠组织，长度约0.5-1cm；剩余的结肠组织放置于组织液，-80℃冰箱保存，用于后续分析研究。立即采集小鼠脾脏组织，称取每个脾脏的重量，根据[脾脏指数＝100*脾脏质量(mg)/体重(g)]计算脾脏指数。
[0039]
1.6sin对dss肠炎小鼠的保护作用
[0040]
通过给予dss在小鼠中诱导uc，并进行sin灌胃给药处理。我们使用体重变化百分比、dai、结肠长度、脾脏指数和组织学变化评估sin对小鼠肠炎的保护作用。通过实时荧光定量pcr(quantitative real-time pcr,qrt-pcr)、免疫荧光法测定肠炎小鼠结肠组织中促炎细胞因子(il-6、tnf-α、il-1β、ifn-γ)、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,cox-2)的表达水平，明确sin在体内的抗炎作用。利用特殊染色法评估sin对肠炎小鼠肠道杯状细胞、粘蛋
白的分泌和胶原沉积的影响。
[0041]
1.7巨噬细胞在sin对dss肠炎小鼠发挥抗炎疗效中的作用
[0042]
通过腹腔注射氯膦酸盐脂质体构建巨噬细胞清除小鼠模型，观察当巨噬细胞清除后，sin对dss肠炎小鼠肠道炎症的抗炎疗效的变化，明确巨噬细胞在sin对dss肠炎小鼠发挥抗炎疗效中的重要作用。我们使用免疫组化、免疫荧光方法检测各组小鼠中肠道巨噬细胞标志物f4/80的表达情况，以探究各组小鼠中巨噬细胞的清除状况。使用体重变化百分比、dai、结肠长度、脾脏指数和组织学变化评估sin对小鼠肠炎的抗炎疗效。
[0043]
1.8sin对肠炎小鼠肠道肠道菌群的调控作用
[0044]
利用免疫荧光、免疫组化法探究sin对dss肠炎小鼠肠道中巨噬细胞浸润的影响。利用western blot、qrt-pcr、免疫荧光方法检测m1/m2巨噬细胞标志物(inos,cd206,arg-1)，探究sin对dss肠炎小鼠肠道中m1/m2巨噬细胞极化表型的调控作用。
[0045]
1.9sin对肠炎小鼠肠道巨噬细胞的调控作用
[0046]
利用16sr rna测序结束探究sin对dss肠炎小鼠肠道菌群的调控作用。
[0047]
2 体外实验
[0048]
2.1 研究假说
[0049]
sin在体外可通过调控m1/m2型巨噬细胞极化而发挥抗炎疗效。
[0050]
2.2sin对raw 264.7细胞的细胞活性实验
[0051]
制备raw 264.7细胞悬液，计数，离心，重悬至2
×
105/ml，在96孔板中接种上述细胞悬液，每孔100μl(空白孔中不接种细胞)，于37℃，co2培养箱中培养1h。加入不同浓度的sin，37℃，co2培养箱中过夜培养。加入cck-8(10μl)，37℃，co2培养箱中继续培养2h。利用酶标仪测定450nm吸光度，按照以下公式计算细胞存活率，细胞存活率为50％的值即为半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,ic50)。
[0052]
细胞存活率(％)＝[(as-ab)/(ac-ab)]
×
100％
[0053]
as:实验孔(含有细胞的培养基、cck-8、sin)
[0054]
ac:对照孔(含有细胞的培养基、cck-8、没有sin))
[0055]
ab:空白孔(不含细胞和sin的培养基、cck-8)
[0056]
2.3脂多糖(lipopolysaccharide,lps)刺激raw 264.7细胞炎症模型的构建及给药
[0057]
制备raw 264.7细胞悬液，计数，离心，重悬至3
×
105/ml，6孔板每孔接种2ml上述细胞悬液。实验分组：control组、lps组、lps+sin低剂量(lps+sin-l)组、lps+sin高剂量(lps+sin-h)组。lps+sin-l组：sin(50μg/ml)处理2h后，lps(500ng/ml)刺激16h。lps+sin-h组：sin(100μg/ml)处理2h后，lps(500ng/ml)刺激16h。control组：在相同时间点予以等量nacl处理相同时间。lps组：先在相同时间点予以等量nacl处理，后用lps(500ng/ml)刺激16h。取细胞培养上清液，收集细胞，用于后续实验。
[0058]
2.4sin对lps刺激的raw 264.7细胞中细胞因子水平的影响
[0059]
通过qrt-pcr法测量raw 264.7细胞中促炎细胞因子(il-6、tnf-α、il-1β、ifn-γ)及抗炎细胞因子(il-10、tgf-β)的mrna相对表达水平，进一步评估sin的体外抗炎作用。
[0060]
2.5sin对lps刺激的raw 264.7细胞上清液中白细胞介素和趋化因子水平的影响
[0061]
利用luminex液相芯片分析技术分析sin-h对lps刺激的raw 264.7细胞上清液中
白介素水平及cc/cxc趋化因子亚族水平的影响。
[0062]
2.6sin对raw 264.7细胞炎症模型巨噬细胞极化表型的调控及潜在调控机制
[0063]
利用western blot、qrt-pcr测定了m1/m2巨噬细胞标志物(inos,cd206,arg-1)及jak2/stat3信号通路相关蛋白，在体外进一步探究sin对m1/m2巨噬细胞极化的调控及潜在调控机制。
[0064]
3、讨论
[0065]
3.1结果分析
[0066]
dss诱导的结肠炎小鼠模型是一种模拟uc的模型，其症状和组织学变化与人类uc相似，是研究uc最合适和广泛使用的模型。因此，使用了dss诱导的结肠炎小鼠模型来探究sin对uc的保护作用及潜在机制。
[0067]
通过构建dss诱导的小鼠肠炎模型并进行sin灌胃给药处理，发现sin对dss肠炎小鼠具有保护作用，sin抑制了dss诱发的结肠炎症状，表现为能显著改善肠炎小鼠体重的下降、dai评分的增加、结肠长度的缩短、脾指数的增加、组织病理损伤。细胞因子在肠道稳态和炎症相关病理过程中起着重要作用，其异常表达是uc的典型表现，可能是引发uc免疫紊乱和结肠损伤的重要因素。结肠炎通常伴有促炎细胞因子的异常分泌，ibd患者中促炎因子不受控制的表达会促进疾病进展，其中tnf-α可以募集更多的炎症因子浸润至肠组织，导致肠组织病变和炎症反应。因此，维持细胞因子的平衡可能在uc的治疗中发挥重要作用。实验结果显示sin能够显著抑制dss肠炎小鼠结肠组织中促炎细胞因子(il-6、tnf-α、il-1β、ifn-γ)的mrna相对表达水平，表明sin能够缓解肠道炎症，具有较好的体内抗炎作用。研究表明uc在很大程度是由于慢性炎症、免疫细胞的大量浸润以及包括nf-κb、tnf-α和cox-2等促炎介质的产生增强。在炎症反应中，tnf-α、il-1β和il-6促炎细胞因子可以上调cox-2的表达。我们通过qrt-pcr、免疫荧光法测定了sin对肠炎小鼠结肠组织中cox-2的表达水平的影响，结果表明sin能够显著下调dss肠炎小鼠结肠组织中cox-2的表达水平。
[0068]
肠上皮细胞中的杯状细胞产生粘液，主要由粘液糖蛋白或粘蛋白组成。肠粘液层同时充到润滑剂及物理屏障，可保护肠上皮层免受管腔中有害刺激物的侵害，是上皮保护的重要组成成分。杯状细胞丢失导致粘液分泌减少，是uc的特征，炎症增加会导致粘液合成减少。我们的研究发现dss诱导的结肠炎小鼠隐窝中杯状细胞耗竭及粘液分泌减少，sin治疗后可使杯状细胞的数量及杯状细胞内粘液的分泌增加，表明sin对肠炎中发生的结肠上皮损伤具有保护作用。
[0069]
巨噬细胞是自然免疫的重要组成部分，构成肠粘膜第一道防线，在uc的启动中发挥着重要作用。现在普遍认为ibd患者和动物模型的炎症反应主要是由巨噬细胞驱动的，在肠道炎症发生时，单核细胞被募集并分化成固有层内的巨噬细胞。因此，探究sin对dss诱导的肠炎小鼠结肠组织中巨噬细胞浸润的影响具有重要意义。免疫荧光及免疫组化结果揭示sin能够抑制dss诱导的肠炎小鼠结肠组织中巨噬细胞的浸润，表明巨噬细胞可能在sin发挥治疗小鼠肠炎作用的过程中起着重要作用。随后，我们通过腹腔注射氯膦酸盐脂质体构建巨噬细胞清除的小鼠模型，进一步明确巨噬细胞在sin对dss肠炎小鼠的保护过程中的作用，结果显示在巨噬细胞被清除后，sin未能发挥改善dss肠炎小鼠体重的下降、dai评分的增加、结肠长度的缩短、脾指数的增加、组织病理损伤的作用。因此，我们推测sin对肠炎小鼠的保护作用依赖于巨噬细胞，可能是通过调控巨噬细胞功能而发挥体内抗炎作用。巨噬
细胞极化对炎症和炎症消退至关重要。巨噬细胞可根据不同微环境极化为m1巨噬细胞或m2巨噬细胞，并执行不同的功能。因此，实验继续探究了sin对dss肠炎小鼠肠道中m1/m2巨噬细胞极化表型的调控作用，结果揭示sin能够抑制dss肠炎小鼠结肠组织中巨噬细胞m1极化，并促进巨噬细胞m2极化。以上结果表明sin可能是通过调控结肠组织中巨噬细胞极化而发挥对dss肠炎小鼠的抗炎作用。
[0070]
raw 264.7细胞已被用作合适的巨噬细胞模型，是一种源自balb/c小鼠的巨噬细胞样细胞系。lps刺激的raw 264.7巨噬细胞建立的体外炎症模型是一种广泛用于筛选抗炎药物的细胞模型，同时，该模型可以模拟巨噬细胞在体外的激活过程。在lps诱导后，巨噬细胞的细胞增殖和吞噬作用增加，且释放高水平的炎症细胞因子和炎症介质，如no、tnf-α、il-1β和il-6。因此，我们构建lps刺激的raw 264.7巨噬细胞模型，在体外进一步探究sin的抗炎作用及对巨噬细胞极化的调控作用及潜在机制。
[0071]
巨噬细胞在炎症和免疫调节中起着重要作用。巨噬细胞通过趋化因子和细胞因子实现细胞间相互作用或液相调节，从而调节适应性免疫功能。在慢性炎症期间，活化的巨噬细胞产生过多的促炎介质(如no、pge2和ros)及促炎细胞因子(如tnf-α、il-1β和il-6)，通过与其他炎症介质的协同作用促进和加剧炎症。趋化因子是由细胞分泌的一系列小细胞因子(信号蛋白)组成，其主要作用是作为趋化剂引导细胞迁移[64]。我们的结果表明sin能够显著下调lps刺激的raw 264.7巨噬细胞中促炎细胞因子(il-6、tnf-α、il-1β)及cox-2的表达水平。同时，luminex分析结果提示sin对lps刺激的raw 264.7细胞上清液中白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平具有调控作用，如sin能够显著增加ccl2、ccl7的表达水平，降低il-2、il-4、il-16、ccl5、ccl17、cxcl11的表达水平。il-4可通过多种潜在机制促进肠道炎症，据报道，il-4可降低单层肠上皮细胞的跨上皮阻力[65]。il-16缺失可减少卵清蛋白诱导的小鼠过敏性炎症。ccl2是一种可将单核细胞募集到炎症部位的趋化因子，在调节炎症过程中巨噬细胞的募集和极化中发挥作用。骨髓来源的间充质干细胞可分泌ccl2及cxcl12，形成异源二聚体后，可促进巨噬细胞的m2极化，以发挥抑制结肠炎的作用。ccl7是中性粒细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞的化学引诱剂，其表达可以迅速控制和引发炎症。ccl5、ccl17和cxcl11是改善结肠炎的新治疗靶点，用于在动物模型中改善结肠炎病理生理学，在之后可能用于缓解人类ibd，通过肽、抗体或小分子抑制ccl17在动物结肠炎模型中是一种令人兴奋的新治疗方法。在肠粘膜中已鉴定出表达ccl17的树突状细胞，在小鼠结肠炎模型中驱动炎症。以上结果表明sin对lps刺激的raw 264.7细胞炎症模型仍具有抗炎作用。
[0072]
多种炎症相关通路与巨噬细胞极化相关。nf-κb、akt和jak/stat通路是调节巨噬细胞极化的三个经典通路。jak2/stat3在巨噬细胞极化和炎症反应中具有重要作用。stat3是一种介导包括il-6在内的多种细胞因子表达的蛋白质，以促进炎症。jak2/stat3信号通路可被一系列细胞因子激活，包括tnf-α、il-1β和il-6。uc患者总stat3和p-stat3(stat3的一种激活形式)表达水平持续升高，与炎症程度呈正相关。既往研究表明lps不影响raw 264.7细胞中stat3、p-stat3的水平；sin会增加raw 264.7细胞中p-stat3的水平。然而，sin是否通过jak2/stat3信号通路调控巨噬细胞极化尚不清楚。因此，在lps刺激的raw 264.7细胞中，我们利用western blot、qrt-pcr测定了m1/m2巨噬细胞标志物及jak2/stat3通路相关蛋白，我们发现sin能抑制lps刺激的raw 264.7巨噬细胞m1极化，促进m2极化。lps、sin对raw 264.7细胞中jak2、stat3蛋白相对表达水平没有影响；lps会增加raw 264.7细胞中
p-stat3、p-jak2、p-stat3/stat3、p-jak2/jak2的水平，sin-h会降低lps刺激的raw 264.7细胞中p-stat3、p-jak2、p-stat3/stat3、p-jak2/jak2的水平。以上结果表明sin可能通过调控jak2/stat3通路调节巨噬细胞极化，从而缓解炎症。
[0073]
uc的发病机制涉及肠道菌群失调和肠道免疫异常，菌群失调导致结肠粘液层受损，促进细菌易位并激活巨噬细胞及其他抗原呈递细胞，增强趋化/促炎细胞因子分泌，以促进免疫细胞浸润。肠道炎症会加重肠道微生物组成失调。在炎症期间，肠杆菌科细菌数量会增加，这些病原体的生长反过来会加剧肠道炎症、上皮细胞损伤。uc患者的肠道菌群发生改变，通常称为生态失调，以alpha多样性降低、变形杆菌门增加和厚壁菌门减少为特征dss诱导的肠炎模型作为使用广泛的uc实验性模型，存在肠道菌群改变，dss会降低肠道菌群的多样性和丰度。实验的16s rrna测序结果揭示sin可以恢复dss肠炎小鼠肠道菌群多样性和丰度，改善菌群结构。在uc患者和实验性结肠炎小鼠模型中，变形杆菌门被认为是有害细菌。sin可显著增加dss小鼠中厚壁菌门和脱铁杆菌门丰度，显著降低变形杆菌门丰度。以上结果表明sin可能通过恢复肠道菌群失调而发挥缓解dss诱导的结肠炎小鼠肠道炎症的作用。
[0074]
综上，实验证实了sin对dss诱导的溃疡性结肠炎小鼠具有保护作用且依赖于巨噬细胞，sin可能通过调控巨噬细胞极化而发挥体内抗炎作用。同时，sin可使肠道中分泌粘蛋白的杯状细胞数量增加，从而促进粘液屏障修复，对肠炎中发生的结肠上皮损伤具有保护作用。sin可增加dss肠炎小鼠肠道菌群多样性和丰度，改善菌群结构，可能通过恢复肠道菌群失调而发挥缓解dss小鼠肠道炎症的作用。通过lps刺激的raw 264.7巨噬细胞炎症模型，在体外进一步证实了sin的抗炎作用及sin对细胞上清液中白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平具有调控作用；同时，结果表明sin可能通过调控jak2/stat3通路调节巨噬细胞极化，从而缓解炎症。
[0075]
3.2主要内容及创新性分析
[0076]
本发明采用体内(图3)和体外实验(图4)证实了sin对dss诱导的肠炎小鼠具有保护作用且依赖于巨噬细胞，sin可能通过调控巨噬细胞极化而发挥体内抗炎作用。同时，sin可使肠道中分泌粘蛋白的杯状细胞数量增加，从而促进粘液屏障修复，对肠炎中发生的结肠上皮损伤具有保护作用。sin可增加dss肠炎小鼠肠道菌群多样性和丰度，改善菌群结构，可能通过恢复肠道菌群失调而发挥缓解dss小鼠肠道炎症的作用。通过lps刺激的raw 264.7巨噬细胞炎症模型，在体外进一步证实了sin的抗炎作用及sin对细胞上清液中白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平具有调控作用；同时，结果表明sin可能通过调控jak2/stat3通路调节巨噬细胞极化，从而缓解炎症。该研究多角度探究了sin的抗炎作用，首次提出了sin可能通过调控巨噬细胞极化和肠道菌群而缓解dss小鼠肠炎的观点，同时，首次验证了巨噬细胞在sin对dss肠炎小鼠发挥保护作用中的重要作用。利用体外巨噬细胞炎症模型，首次系统地探究了sin对lps刺激的raw 264.7巨噬细胞上清液中白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平的调控作用，并初步探索了sin对巨噬细胞极化调控的潜在机制。该研究为靶向调控巨噬细胞极化和减缓肠道菌群失调治疗uc提供了理论基础，补充了sin在uc治疗方面的药用价值及潜在机制(图5)，为临床应用sin治疗uc提供理论依据。

技术特征：
1.青藤碱在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是改善结肠组织中杯状细胞衰竭、粘液分泌减少和/或胶原沉积的药物。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是改善巨噬细胞浸润的药物。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述药物具有抑制结肠组织中巨噬细胞m1极化，并促进巨噬细胞m2极化的作用。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物通过jak2/stat3通路调节巨噬细胞极化。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是调节肠道菌群的药物。7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物具有增加道菌群多样性和丰度，改善菌群结构和/或调节肠道菌群稳态的作用。8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是调控白细胞介素及cc/cxc趋化因子亚族水平的药物。

技术总结
本发明提供了青藤碱在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。本发明经体内和体外实验证明，SIN对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠具有保护作用，能够缓解肠道炎症，并改善肠炎小鼠肠道杯状细胞的衰竭、粘液分泌的减少及胶原沉积，且显著改善DSS肠炎小鼠肠道中巨噬细胞的浸润，调节巨噬细胞极化同时调控肠道菌群，增加肠炎小鼠肠道菌群多样性和丰度，改善菌群结构，调节肠道菌群稳态。本发明为临床应用SIN治疗溃疡性结肠炎提供依据，将SIN应用于治疗溃疡性结肠炎具备实际临床价值。疡性结肠炎具备实际临床价值。疡性结肠炎具备实际临床价值。


技术研发人员：张虎 胡珂菡 雷甜甜
受保护的技术使用者：四川大学华西医院
技术研发日：2023.05.25
技术公布日：2023/8/9