AWRK6多肽在制备治疗银屑病药物中的用途的制作方法

awrk6多肽在制备治疗银屑病药物中的用途
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及awrk6多肽在制备治疗银屑病药物中的用途。


背景技术：

2.银屑病(psoriasis)是一种以皮肤代谢障碍而产生的慢性以鳞屑性皮损为主要特征的皮肤疾病，好发于四肢、头皮及背部。其临床特点表现为：红色的丘疹或斑块，局限的皮损表面覆盖银白色鳞屑，轻轻抓搔鳞屑即可脱落，脱落的鳞屑较厚且为白色，故称为银屑病。
3.既往研究表明角质形成细胞在银屑病的发生发展中发挥重要作用，银屑病的病理变化为角质形成细胞高度异常增殖、角化不全、棘皮增厚、伴有炎症细胞浸润和血管增生。因此，通过抑制角质细胞分化增殖、减少炎症浸润有望成为治疗银屑病的新途径。
4.awrk6多肽由18个氨基酸构成，是由东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-2cdya(savgrhgrrfglrkhrkh)优化改造合成的具有α-螺旋结构的抗菌肽，其序列为swvgkhgkkfglkkhkkh。研究表明，awrk6多肽具有抑菌、抑制炎症反应、促进胶原蛋白合成的作用，但未见awrk6多肽治疗银屑病的相关研究。


技术实现要素：

5.发明人前期研究已发现在设定浓度范围内的awrk6多肽对角质形成细胞的增殖表现出抑制的作用，从而得出本发明。
6.本发明上述目的通过以下技术方案实现：本发明其中一个发明目的在于提供awrk6多肽在制备治疗银屑病药物中的用途，所述awrk6多肽氨基酸序列为：swvgkhgkkfglkkhkkh。
7.发明人使用不同浓度的awrk6多肽体外干预培养角质形成细胞，以分析其对角质形成细胞增殖的影响，研究发现，在1
×
10-1
μmol/l～
×
103μmol/l的浓度范围内，随着awrk6多肽浓度的逐渐增加，awrk6多肽对角质形成细胞的增殖呈现出明显的促进的作用，与空白对照组相比存在显著的差异，这种作用表现为先增强后逐渐减弱。而在浓度1
×
104μmol/l～1
×
106μmol/l的范围内，随着浓度的增加，awrk6多肽对角质形成细胞的增殖抑制作用越强，且与阳性对照组存在显著的差异，而分析两次实验的结果可知，awrk6多肽对角质形成细胞的生长影响走向是一致的。
8.因此，优选地，所述药物中，awrk6多肽的终浓度为1
×
104μmol/l～1
×
106μmol/l，例如1
×
104μmol/l、1
×
105μmol/l或1
×
106μmol/l；其中，awrk6多肽最佳的终浓度为1
×
105μmol/l。
9.值得说明的是，当awrk6多肽被应用于治疗银屑病时，在所述药物中，awrk6多肽可作为唯一或者主要的有效成分。
10.本发明另一目的在于提供awrk6多肽联合下式ⅰ化合物在制备治疗银屑病药物中
的用途。
[0011][0012]
进一步地，所述药物中awrk6多肽的终浓度为1
×
104μmol/l～1
×
106μmol/l，例如1
×
104μmol/l、1
×
105μmol/l或1
×
106μmol/l；其中，awrk6多肽最佳的终浓度为1
×
105μmol/l。
[0013]
进一步地，所述药物中式ⅰ化合物的质量为0.5～1.5mg/l，例如0.5mg/l、1mg/l、1.5mg/l。
[0014]
本发明另一目的在于提供一种治疗银屑病的药物，包含1
×
104μmol/l～1
×
106μmol/l的awrk6多肽和0.5～1.5mg/l的下式ⅰ化合物，
[0015][0016]
进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体，所述药物可被制成药学上可接受的制剂形式，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、混悬液、透皮贴剂等。
[0017]
本发明具有以下有益效果：
[0018]
本发明首先发现了特定浓度的awrk6多肽对角质形成细胞存在一定的抑制作用，继而进一步发现awrk6多肽与化合物ⅰ联合应用对角质形成细胞的抑制作用更加明显，且存在协同效应，试验结果显示，awrk6多肽与化合物ⅰ联合应用可以明显缓解imq诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症。
具体实施方式
[0019]
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0020]
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0021]
实施例一、awrk6多肽对银屑病角质形成细胞的影响
[0022]
采用cck-8法进行试验，实验设药物组、阳性药物对照组和空白组，使用96孔板培养细胞，每组设12个孔，前3孔为参照孔，内含培养液和药物，后9孔为实验孔，内含培养液、药物和细胞。
[0023]
试验步骤：取银屑病患者前臂内侧皮损处皮肤，消化获得角质形成细胞，采用含有
10％血清、100g/ml链霉素和100u/ml青霉素的dmem培养基培养48h，更换新鲜培养基，待培养基底部细胞覆盖约80％，收集角质形成细胞。采用dmem培养基调整至密度为5
×
104cell/ml，按每孔200μl接种于96孔板中，置于co2培养箱中培养24h；待细胞开始贴壁后，轻轻吸出100μl上清，各孔加入含有相应浓度药物的dmem培养液100μl，空白组加入100μldmem培养液，作用24h。各孔加入cck-8试剂10μl，混匀，置于37℃恒温箱30min,采用酶标仪测定450nm处的吸光值，通过检测细胞活力判断细胞增殖能力，所有试验均重复一次，试验数据均以均数
±
标准差的形式表示，spss统计软件进行统计学处理，结果如下表1所示。
[0024]
各药物组浓度od值＝各组实验孔平均od值-对应参照孔od值
[0025]
表1：awrk6多肽对体外干预培养角质形成细胞增殖的影响(x
±
s)
[0026][0027][0028]
注：与空白对照相比
*
p＜0.05，
**
p＜0.01；与地塞米松组相比，
△
p＜0.05；
△△
p＜0.01。
[0029]
经统计处理：在1
×
10-1
μmol/l～
×
103μmol/l的浓度范围内，随着awrk6多肽浓度的逐渐增加，awrk6多肽对角质形成细胞的增殖呈现出明显的促进的作用，与空白对照组相比存在显著的差异，这种作用表现为先增强后逐渐减弱。而在浓度1
×
104μmol/l～1
×
106μmol/l的范围内，随着浓度的增加，awrk6多肽对角质形成细胞的增殖抑制作用越强，且与阳性药物对照组存在显著的差异，而分析两次实验的结果可知，awrk6多肽对角质形成细胞的生长影响走向是一致的。
[0030]
化合物ⅰ和或awrk6多肽联合对体外干预培养角质形成细胞生长的影响
[0031]
研究化合物ⅰ单独干预培养以及与awrk6多肽联合干预培养对体外干预培养角质形成细胞的影响，结果如下表2所示。
[0032]
表2：
[0033][0034][0035]
注：与空白对照相比
*
p＜0.05，
**
p＜0.01；与地塞米松+同等浓度化合物ⅰ组相比，
△
p＜0.05；
△△
p＜0.01。
[0036]
经统计处理：0.5mg/l和1mg/l的化合物ⅰ对角质形成细胞的增殖无明显的抑制作用，与空白对照组相比无显著差异，然而0.1mol/l～1mol/l的awrk6多肽与0.5mg/l和1mg/l化合物ⅰ联合应用对角质形成细胞的增殖表现出明显的抑制作用，但是地塞米松与化合物ⅰ的联合并未表现出明显的协同效应。
[0037]
实验例二、对小鼠银屑病模型的影响研究
[0038]
1.试验方法：采用imq法诱导小鼠银屑病样皮肤炎症模型，选取40只8周龄的balb/c小鼠，背部剃毛后随机将小鼠分为awrk6多肽组、化合物ⅰ组、联合组、模型组以及空白对照组，每组8只。除空白对照组外各组小鼠采用5％的咪喹莫特乳膏按50mg/天的量涂抹小鼠背部皮肤，连续涂抹6天，空白对照组小鼠背部涂抹同等剂量的凡士林，造模成功后，awrk6多肽组给予终浓度为0.1mol/l的awrk6多肽生理盐水溶液；化合物ⅰ组给予终浓度为0.5mg/l的化合物ⅰ生理盐水溶液；联合组给予终浓度0.1mol/l的awrk6多肽+终浓度为0.5mg/l的化合物ⅰ生理盐水溶液；其余两组给予生理盐水湿润皮肤，每日涂抹3次，连续涂抹7天，并根据pais临床评分从皮肤增厚、鳞屑、红斑三个方面对各组小鼠进行银屑病症状评级：0～4分进行：0：无症状；1：轻度；2：中度；3：重度；4：极重度。将各组小鼠3方面的平均积分相加得到总积分，如下表3所示。
[0039]
表3：
[0040][0041][0042]
与第0天相比，
△
p＜0.05；
△△
p＜0.01。
[0043]
如表3所示，pasi临床评分显示，除化合物ⅰ组外，各给药组在第7天总评分与第0天相比均明显下降，其中，联合组总评分下降最快且最明显，银屑病严重程度在第7天时明显减轻，提示，awrk6多肽与化合物ⅰ联合应用可以明显缓解imq诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症。
[0044]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.awrk6多肽在制备治疗银屑病药物中的用途，其特征在于，所述awrk6多肽的序列为：swvgkhgkkfglkkhkkh。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物中，awrk6多肽的终浓度为0.01mol/l～1mol/l。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药物中，awrk6多肽的终浓度为0.1mol/l～1mol/l。4.awrk6多肽联合下式ⅰ化合物在制备治疗银屑病药物中的用途，5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物中awrk6多肽的终浓度为0.01mol/l～1mol/l。6.根据权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述药物中式ⅰ化合物的质量为0.5～1.5mg/l。7.一种治疗银屑病的药物，其特征在于，包含0.01mol/l～1mol/l的awrk6多肽和0.5～1.5mg/l的下式ⅰ化合物，8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及AWRK6多肽在制备治疗银屑病药物中的用途，所述AWRK6多肽氨基酸序列为：SWVGKHGKKFGLKKHKK H。本发明首先发现了特定浓度的AWRK6多肽对角质形成细胞存在一定的抑制作用，继而进一步发现AWRK6多肽与化合物Ⅰ联合应用对角质形成细胞的抑制作用更加明显，且存在协同效应，试验结果显示，AWRK6多肽与化合物Ⅰ联合应用可以明显缓解IMQ诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症。显缓解IMQ诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症。


技术研发人员：朱翔宇
受保护的技术使用者：广州雄韬生物医药科技有限公司
技术研发日：2023.05.24
技术公布日：2023/8/9