一种茶树炭疽病的防治制剂及其制备方法

1.本发明涉及茶树炭疽病防治技术领域，尤其涉及一种茶树炭疽病的防治制剂及其制备使用方法。


背景技术：

2.近几十年来，我国的茶产业有了迅速发展，茶叶品质明显提升。但是由于栽培措施出现变革，生态条件不断变化，尤其是化学肥料和化学农药的大量使用，呈现茶树病虫害发生日趋严重，严重制约茶产业高质量发展。
3.茶炭疽病是茶园最主要病害。在其发病严重的时期，茶树会大量落叶，影响茶树生长势和茶叶产量。一般茶炭疽病在4～5月开始发生，待到6～9月多雨的时节为高发期。当今化学防治茶炭疽病的药剂主要是一些常规的广谱性杀菌剂，如多菌灵、甲基托布津、百菌清、苯醚甲环唑等。
4.有研究报道，一般茶园茶炭疽病发病率在5-8％，严重的茶园发病率达到20％，导致茶青减产30％以上。因此，在当前茶叶质量安全问题日益受关注的形势下，利用环境友好型药剂来防治茶树炭疽病手段在茶树病虫害防治体系中的作用越发重要。因此，筛选高效、安全、环境友好型的制剂防治茶炭疽病病至关重要。
5.目前国内外大量的研究表明，吲哚与麝香草酚有很好的抑菌效果，这些研究为茶树炭疽病防治中吲哚与麝香草酚的开发提供了良好的理论基础，而β-谷甾醇目前对于抑制肿瘤和修复组织效果明显，并可用于早期皮肤溃疡等，目前还未发现β-谷甾醇用于茶树炭疽病防治中的相关研究。本发明首次提出将吲哚、麝香草酚与β-谷甾醇配合制成环保型制剂，并发现可有效提高茶树对炭疽病的抗性，具有潜在的应用前景。


技术实现要素：

6.基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种茶树炭疽病的防治制剂及其制备方法。
7.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
8.s1、将麦芽糖加入水中搅拌均匀，向其中加入乳化剂、海藻酸钠搅拌20-40min，加入β-谷甾醇乳化5-15min，得到混合乳液；
9.s2、向混合乳液中加入ε-聚赖氨酸，40-50℃搅拌1-2h，加入吲哚、麝香草酚、助溶剂搅拌10-30min，搅拌温度为40-50℃，加入防冻剂继续搅拌1-2h，得到茶树炭疽病的防治制剂。
10.优选地，乳化剂为苯乙基酚聚氧乙烯醚、烷基萘磺酸钙、蓖麻油环氧乙烷缩合物、烷基酚聚氧乙烯醚、烷基酚甲醛树脂聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钙中一种或多种组合物。
11.优选地，s1中，麦芽糖、乳化剂、海藻酸钠、β-谷甾醇的质量比为(1-2)：(0.1-1)：(1-2)：(1-3)。
12.优选地，s1中，乳化速度为5000-12000r/min。
13.优选地，s2中，助溶剂为异辛醇、乙醇、苯甲酸钠、水杨酸钠、对氨基苯甲酸、烟酰胺、乙酰胺、乳酸钙中一种或多种组合物。
14.优选地，β-谷甾醇、ε-聚赖氨酸、吲哚、麝香草酚、助溶剂、防冻剂的质量比为(1-3)：(0.1-1)：(1-3)：(1-3)：(0.1-1)：(0.1-0.5)。
15.一种茶树炭疽病的防治制剂，采用上述述茶树炭疽病的防治制剂制备方法制得。
16.上述茶树炭疽病的防治制剂使用方法，包括如下步骤：将所述防治制剂与水混合均匀，喷施于茶树叶片与枝条表面，喷施过程在傍晚进行，然后每隔5-10天喷施一次，共喷施3-6次。
17.优选地，所述防治制剂与水的质量比为(5-15)：(50-150)。
18.优选地，开始喷施时间为7月中旬至8月中旬。
19.本发明的技术效果如下所示：
20.(1)本发明采用麦芽糖与海藻酸钠在乳化剂作用下，与β-谷甾醇形成混合乳液，经ε-聚赖氨酸交联并对β-谷甾醇包覆，不仅可兼顾ε-聚赖氨酸与β-谷甾醇生物活性，实现协同抑菌稳定性，而且可有效对包覆的β-谷甾醇进行缓释，进一步与吲哚、麝香草酚复配形成防治制剂，可有效缓解茶树炭疽病的发生，与不施用本发明制剂的茶树相比，施用本发明制剂的茶树炭疽病发病率降低35％以上；
21.(2)本发明通过将吲哚、麝香草酚与β-谷甾醇复配，对于疽病病害具有高效抗病活性，可有效地抑制炭疽病菌菌丝生长和分生孢子的萌发，而且通过组分间协同作用，抑菌周期长。吲哚、麝香草酚快速起到抑菌杀菌效果，抑菌后期吲哚、麝香草酚浓度降低，进一步与β-谷甾醇复配，并在ε-聚赖氨酸协同作用下，在抑菌周期为10天时对炭疽病抑制率依旧可维持在95％以上；
22.(3)本发明首次提出将吲哚、麝香草酚与β-谷甾醇复配用于防治茶树炭疽病的制剂，可有效提高茶树对茶炭疽病的抗性。到目前为止，申请人尚未有任何报道该类型生物制剂可以提高茶树炭疽病抗性。
23.本发明不仅使用方便，成本低，无毒副作用，可替代目前使用的化学、化工合成农药，同时该制剂使用后可有效防治茶树炭疽病，可广泛应用于茶园生产，极具成本效益、资源利用和环境保护等优势，可满足对茶树杀菌、除害的需求。
附图说明
24.图1为实施例5和对比例1-2所得茶树炭疽病的防治制剂的菌丝生长抑制率对比图。
25.图2为实施例5和对比例1-2所得茶树炭疽病的防治制剂的孢子萌发抑制率对比图。
26.图3为实施例5和对比例1-2所得茶树炭疽病的防治制剂的保护效果和资料效果对比图。
具体实施方式
27.下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
28.实施例1
29.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
30.s1、将1kg麦芽糖加入20kg水中搅拌均匀，向其中加入0.1kg苯乙基酚聚氧乙烯醚、1kg海藻酸钠，以50r/min的速度搅拌20min，加入1kgβ-谷甾醇，以5000r/min的速度乳化5min，得到混合乳液；
31.s2、向混合乳液中加入0.1kgε-聚赖氨酸，在温度40℃搅拌1h，搅拌速度为50r/min，加入1kg吲哚、1kg麝香草酚、0.1kg水杨酸钠，以500r/min的速度搅拌10min，搅拌温度为40℃，加入0.1kg防冻剂继续搅拌1h，得到茶树炭疽病的防治制剂。
32.实施例2
33.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
34.s1、将2kg麦芽糖加入40kg水中搅拌均匀，向其中加入1kg十二烷基苯磺酸钙、2kg海藻酸钠，以150r/min的速度搅拌40min，加入3kgβ-谷甾醇，以12000r/min的速度乳化15min，得到混合乳液；
35.s2、向混合乳液中加入1kgε-聚赖氨酸，在温度50℃搅拌2h，搅拌速度为150r/min，加入3kg吲哚、3kg麝香草酚、1kg乳酸钙，以1500r/min的速度搅拌30min，搅拌温度为50℃，加入0.5kg防冻剂继续搅拌2h，得到茶树炭疽病的防治制剂。
36.实施例3
37.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
38.s1、将1.3kg麦芽糖加入35kg水中搅拌均匀，向其中加入0.3kg烷基酚聚氧乙烯醚、1.8kg海藻酸钠，以80r/min的速度搅拌35min，加入1.5kgβ-谷甾醇，以11000r/min的速度乳化8min，得到混合乳液；
39.s2、向混合乳液中加入0.7kgε-聚赖氨酸，在温度43℃搅拌100min，搅拌速度为80r/min，加入2.5kg吲哚、1.5kg麝香草酚、0.7kg乙酰胺，以800r/min的速度搅拌25min，搅拌温度为43℃，加入0.4kg防冻剂继续搅拌80min，得到茶树炭疽病的防治制剂。
40.实施例4
41.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
42.s1、将1.7kg麦芽糖加入25kg水中搅拌均匀，向其中加入0.7kg烷基酚聚氧乙烯醚、1.4kg海藻酸钠，以120r/min的速度搅拌25min，加入2.5kgβ-谷甾醇，以8000r/min的速度乳化12min，得到混合乳液；
43.s2、向混合乳液中加入0.3kgε-聚赖氨酸，在温度47℃搅拌80min，搅拌速度为120r/min，加入1.5kg吲哚、2.5kg麝香草酚、0.3kg乙酰胺，以1200r/min的速度搅拌15min，搅拌温度为47℃，加入0.2kg防冻剂继续搅拌100min，得到茶树炭疽病的防治制剂。
44.实施例5
45.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
46.s1、将1.5kg麦芽糖加入30kg水中搅拌均匀，向其中加入0.5kg烷基酚聚氧乙烯醚、1.6kg海藻酸钠，以100r/min的速度搅拌30min，加入2kgβ-谷甾醇，以10000r/min的速度乳化10min，得到混合乳液；
47.s2、向混合乳液中加入0.5kgε-聚赖氨酸，在温度45℃搅拌90min，搅拌速度为100r/min，加入2kg吲哚、2kg麝香草酚、0.5kg乙酰胺，以1000r/min的速度搅拌20min，搅拌温度为45℃，加入0.3kg防冻剂继续搅拌90min，得到茶树炭疽病的防治制剂。
48.对比例1
49.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
50.s1、将0.5kg烷基酚聚氧乙烯醚、1.6kg海藻酸钠加入30kg水中，以100r/min的速度搅拌30min，加入2kgβ-谷甾醇，以10000r/min的速度乳化10min，得到混合乳液；
51.s2、向混合乳液中加入0.5kgε-聚赖氨酸，在温度45℃搅拌90min，搅拌速度为100r/min，加入2kg吲哚、2kg麝香草酚、0.5kg乙酰胺，以1000r/min的速度搅拌20min，搅拌温度为45℃，加入0.3kg防冻剂继续搅拌90min，得到茶树炭疽病的防治制剂。
52.对比例2
53.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：
54.向30kg水中加入0.5kgε-聚赖氨酸，在温度45℃搅拌90min，搅拌速度为100r/min，加入2kg吲哚、2kg麝香草酚、0.5kg乙酰胺，以1000r/min的速度搅拌20min，搅拌温度为45℃，加入0.3kg防冻剂继续搅拌90min，得到茶树炭疽病的防治制剂。
55.采用实施例5和对比例1-2所得制剂进行对比试验，将各组制剂与水按质量比为1：100混合均匀，具体试验如下：
56.i、采用菌丝生长速率法测定各组的抑菌活性。
57.在无菌条件下，向50ml已灭过菌的小烧杯中加入3ml各组试样，再加入27ml融化了的冷却至50℃左右的pda培养基，充分摇匀后倒入平板中，每板10ml，3次重复。以等量培养基作空白对照，以市售75％百菌清可湿性粉剂(有效终浓度为15μg/ml)作为阳性对照。用6mm打孔器在正常生长的菌株菌落边缘打取长势一致的菌饼，接入含药平板中，每板一枚，菌丝一面朝下。于25℃培养箱中培养。定时观察菌丝生长状况，分别在48h、72h、96h和120h用十字交叉法测菌落直径，计算菌丝生长抑制率。
58.菌丝生长抑制率＝(空白对照菌落直径-处理菌落直径)
÷
(空白对照菌落直径-菌饼直径)
×
100％
59.如图1所示，实施例5组与对比例1组在前期抑制率区别不大，随着时间延长，实施例5组通过持续缓释使菌丝生长抑制率一直大于95％，而对比例1组则不断下降。对比例2组由于仅采用吲哚、麝香草酚进行联合作用，其菌丝生长抑制率优于现有的百菌清，但远远劣于实施例5组与对比例1组。
60.ii、采用水琼脂培养法测定提取物对孢子萌发的抑制作用。
61.选取培养了7天菌株的pda平板，在平板中加入适量无菌水，晃动，过滤，即获得孢子悬浮液。将孢子悬浮液配成1
×
105个孢子/ml的浓度。按上述操作程序再次制作平板。将孢子悬浮液滴入各组琼脂平板中，并在培养皿背面画圈标记滴入点位置以便观察，每板3点，每点20μl，即3次重复。将各处理置于25℃培养箱中培养6h后观察。观察前先将各处理放入4℃冰箱中，以阻止孢子继续萌发。用显微镜观察孢子萌发情况，以每视野下能观察到的80-100个孢子为记录对象。
62.孢子萌发率＝孢子萌发数
÷
观察孢子数
×
100％
63.孢子萌发抑制率＝(空白对照孢子萌发率-处理孢子萌发率)
÷
空白对照孢子萌发率
×
100％
64.如图2所示，对比例1组和实施例5组的孢子萌发抑制率均优于对比例2组，证实吲哚、麝香草酚与β-谷甾醇的协同效应。而实施例5组的孢子萌发抑制率略劣于对比例1组，这
可能是由于实施例5组对β-谷甾醇进行缓释，从而使前期抑制率较低。
65.iii、取同一叶位(第三叶)的厚薄一致的健康舒茶早叶片，洗净晾干。用喉头喷雾器定量喷雾各组试样，晾干。用接种针在叶片背面叶脉一侧近叶尖叶缘部制造一个伤口，打孔器打取菌落边缘生长旺盛的菌饼，将菌饼移至叶片背面针刺创口处，菌丝一面向下。脱脂棉包叶柄基部并滴加适量无菌水，放入培养皿中，加盖。在每日光照14h，黑暗10h条件下，27℃培养，24h去除菌饼，7d调查每片叶子的病斑大小。以无菌水为空白对照。10片叶子为1次重复，各重复3次。用十字交叉法测量病斑直径。
66.菌丝生长抑制率＝(空白对照病斑直径-处理病斑直径)
÷
空白对照病斑直径
×
100％
67.iv、取同一叶位(第三叶)的厚薄一致的具柄健康舒茶早叶片，洗净晾干。用接种针在叶片背面叶脉一侧近叶尖叶缘部制造一个伤口，打孔器打取菌落边缘生长旺盛的菌饼，将菌饼移至叶片背面针刺创口处，菌丝一面向下。脱脂棉包叶柄基部并滴加适量无菌水，放入培养皿中，加盖。在每日光照14h，黑暗10h条件下，25℃培养，24h去除菌饼并用喉头喷雾器定量喷雾各组试样，7d调查每片叶子的病斑大小。以无菌水为空白对照。10片叶子为1次重复，各重复3次。用十字交叉法测量病斑直径。
68.菌丝生长抑制率＝(空白对照病斑直径-处理病斑直径)
÷
空白对照病斑直径
×
100％
69.如图3所示，实施例5组的治疗效果优于保护效果，而且两者均高于对比例组。同时实施例5组和对比例1组的效果要远优于对比例2组，再次证实吲哚、麝香草酚与β-谷甾醇的协同效应。
70.iv、将各组试剂在傍晚喷施于茶树叶片与枝条表面，试验地点为安徽省皖南地区某茶园，茶叶品种为舒茶早，试验时间为5月15日至6月15日，每隔5-10天喷施一次，共喷施3-6次。空白对照采用无菌水喷施。
[0071] 实施例5组对比例1组对比例2组空白对照组施药前平均发病率，％17.3316.9517.4117.28施药后平均发病率，％11.3912.0415.5217.66防治效果，％35.5031.8212.12/
[0072]
通过上表可知：实施例5和对比例1采用β-谷甾醇与吲哚、麝香草酚复配产生协同增效作用，可有效缓解茶树炭疽病的发生。与空白对照组相比，采用本发明制剂施用茶树的炭疽病发病率降低35％以上。
[0073]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种茶树炭疽病的防治制剂制备方法，其特征在于，包括如下步骤：s1、将麦芽糖加入水中搅拌均匀，向其中加入乳化剂、海藻酸钠搅拌20-40min，加入β-谷甾醇乳化5-15min，得到混合乳液；s2、向混合乳液中加入ε-聚赖氨酸，40-50℃搅拌1-2h，加入吲哚、麝香草酚、助溶剂搅拌10-30min，搅拌温度为40-50℃，加入防冻剂继续搅拌1-2h，得到茶树炭疽病的防治制剂。2.根据权利要求1所述茶树炭疽病的防治制剂制备方法，其特征在于，s1中，乳化剂为苯乙基酚聚氧乙烯醚、烷基萘磺酸钙、蓖麻油环氧乙烷缩合物、烷基酚聚氧乙烯醚、烷基酚甲醛树脂聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸钙中一种或多种组合物。3.根据权利要求1所述茶树炭疽病的防治制剂制备方法，其特征在于，s1中，麦芽糖、水、乳化剂、海藻酸钠、β-谷甾醇的质量比为(1-2)：(20-40)：(0.1-1)：(1-2)：(1-3)。4.根据权利要求1所述茶树炭疽病的防治制剂制备方法，其特征在于，s2中，助溶剂为异辛醇、乙醇、苯甲酸钠、水杨酸钠、对氨基苯甲酸、烟酰胺、乙酰胺、乳酸钙中一种或多种组合物。5.根据权利要求1所述茶树炭疽病的防治制剂制备方法，其特征在于，β-谷甾醇、ε-聚赖氨酸、吲哚、麝香草酚、助溶剂、防冻剂的质量比为(1-3)：(0.1-1)：(1-3)：(1-3)：(0.1-1)：(0.1-0.5)。6.一种茶树炭疽病的防治制剂，其特征在于，采用权利要求1-5任一项所述茶树炭疽病的防治制剂制备方法制得。7.一种如权利要求6所述茶树炭疽病的防治制剂使用方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述防治制剂与水混合均匀，喷施于茶树叶片与枝条表面，喷施过程在傍晚进行，然后每隔5-10天喷施一次，共喷施3-6次。8.根据权利要求7所述茶树炭疽病的防治制剂使用方法，其特征在于，所述防治制剂与水的质量比为(5-15)：(50-150)。9.根据权利要求7所述茶树炭疽病的防治制剂使用方法，其特征在于，开始喷施时间为7月中旬至8月中旬。

技术总结
本发明公开了一种茶树炭疽病的防治制剂。本发明公开了上述茶树炭疽病的防治制剂制备方法，包括如下步骤：将麦芽糖加入水中搅拌均匀，向其中加入乳化剂、海藻酸钠搅拌20-40min，加入β-谷甾醇乳化5-15min，得到混合乳液；向混合乳液中加入ε-聚赖氨酸，40-50℃搅拌1-2h，加入吲哚、麝香草酚、助溶剂搅拌10-30min，搅拌温度为40-50℃，加入防冻剂继续搅拌1-2h，得到茶树炭疽病的防治制剂。本发明公开了上述茶树炭疽病的防治制剂使用方法，包括如下步骤：将所述防治制剂与水混合均匀，喷施于茶树叶片与枝条表面，喷施过程在傍晚进行，然后每隔5-10天喷施一次，共喷施3-6次。6次。6次。


技术研发人员：叶涛 牛婷婷 蒋东 张家侠 孙钦玉 陈伟立 单文书 夏先江 张弦
受保护的技术使用者：安徽省农业科学院茶叶研究所
技术研发日：2023.05.24
技术公布日：2023/8/13