具有吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制活性的喹啉衍生物的制作方法

具有吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制活性的喹啉衍生物
1.本技术是申请日为2019年9月25日，申请号为cn201910908030.5，发明名称为“具有吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制活性的喹啉衍生物”的中国发明专利申请的分案申请。
技术领域
2.本技术涉及医药领域，具体涉及具有吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase，ido)抑制活性的喹啉衍生物，或其药学上可接受的盐，其药物组合物，制备方法和在制备免疫调节及预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的药物中的用途。本技术还涉及所述喹啉衍生物与表观遗传调控剂的联合用药及其在制备抗肿瘤药物中的用途。


背景技术：

3.色氨酸(trp)是人体必需的一种氨基酸。从饮食中获得的色氨酸，一部分用来合成蛋白质、烟酸以及神经递质5-羟色胺，其余部分则主要通过犬尿氨酸途径(kynurenine pathway)进行代谢(leklem j.e.,am j clin nutr,1971,24(6):659-672)。ido是参与这种代谢途径的关键酶。
4.ido是一种细胞内含亚铁血红素的酶，于1967年首次在兔的肠道中被发现(yamaoto s.et al.,j biol chem,1967,242(22):5260-5266)，是肝脏以外唯一可催化色氨酸分子中吲哚环氧化裂解、沿犬尿酸途径进行分解代谢的限速酶(mackenzie,c.r.et al.current drug metabolism,2007,8:237-244)。
5.ido在细胞及组织的表达与各种炎性细胞因子有关，尤其是ifn-γ，其他如ifn-α，ifn-β，tnf-α及lps等在转录水平刺激诱导ido表达(king n.j.et al.,the int j biochem cell biol,2007 39(12):2167-2172)。此外，其他免疫活性分子如前列腺素、细胞表面蛋白细胞毒性t淋巴细胞相关抗原(ctla-4)、cd40、toll样受体等也可调节ido的表达。
6.有研究报道，ido有两种，ido-1和ido-2，具有免疫抑制功能的主要是ido-1，而ido-2在免疫抑制中的作用还不是很清楚。ido-1参与免疫抑制功能的机制有多个因素，其一是ido-1高表达造成局部l-色氨酸耗竭，从而被周围的t淋巴细胞通过gcn2等机制感受到，引起cd8
+
细胞毒性t细胞发生细胞周期停滞或凋亡。其二是ido-1高表达造成色氨酸代谢产物犬尿氨酸(kyn)的升高，犬尿氨酸形成后可离开细胞进入细胞外基质，然后进入附近的淋巴细胞通过结合内源性芳香烃受体(ahr)从而对cd8
+
t细胞和调节性treg细胞进行调节，如cd8
+
细胞毒性t细胞的活性被抑制，而调节性treg细胞诱导增殖并且被激活，从而导致免疫活化功能被抑制(friberg m.et al.,int j cancer,2002,101(2):151-155)。此外，抗原呈递细胞如巨噬细胞、树突状细胞(dc)上的ido-1均可通过抑制t细胞增殖来诱导t细胞对肿瘤抗原的免疫耐受(terness p.et al.,blood,2005,105(6):2480-2486)。
7.ido与多种疾病发病机制密切相关，并已被证实是癌症、阿尔茨海默病、抑郁症、白内障等重大疾病的靶标(cn101932325b，cn102579452b)。ido与神经系统疾病密切相关(roy e.j.et al.,neurosci lett,2005,387(2):95-99)。它还涉及与年龄相关的核性白内障的
发生(takikawa o.et al.exp.eye res.2001,72:271-277)。
8.目前已有三个ido抑制剂处于不同的临床研究阶段，包括：1)incyte公司的epacadostat，处于临床ii期，用于治疗骨髓增生异常综合症、黑色素瘤和女性生殖系统癌症；2)newlink公司的indoximod，处于临床ii期，用于治疗乳腺癌、前列腺癌、恶性脑瘤、胰腺癌和黑色素瘤；3)罗氏公司的gdc-0919，处于临床i期，用于治疗晚期实体瘤。
9.ido抑制剂作为药物在医药行业具有良好的应用前景，然而，迄今未有合适的ido抑制剂上市，为了达到更好的疾病治疗效果，更好的满足市场需求，开发出新一代的ido抑制剂具有重大的理论意义和应用价值。
10.表观遗传学是目前遗传学研究的热点，其主要包括dna甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化、磷酸化、泛素化以及参与结合组蛋白修饰位点的转录因子活性等，这些表观遗传学改变在基因转录调节中起着重要作用。组蛋白是人类染色体的基本组成单位，组蛋白的转录后修饰在基因表达中起决定性的作用。组蛋白赖氨酸或精氨酸位点的甲基化，尤其是乙酰化是其中重要的修饰方式。大量研究表明，癌细胞中的组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)过量表达造成的乙酰化失衡导致了肿瘤的发生，而通过抑制hdac可以很好地抑制肿瘤的生成。
11.然而目前尚未见到任何有关表观遗传调节剂与ido抑制剂联合用药在治疗肿瘤或与色氨酸代谢相关疾病中的相关研究与报道。
12.发明概述
13.在一个方面，本技术提供了通式(i)化合物或其药学上可接受的盐，
14.a-x-b-y-m
15.(i)
16.其中，
17.a代表含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的9-15元稠合杂芳环；任选地，所述稠合杂芳环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；
18.x代表共价单键、-c(r1r2)-、-o-、-o-c
1-6
亚烷基-、-nr
1-、-s-、-s(o)-或其中各r1和r2各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；
19.b代表含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-12元多环脂杂环；
20.y代表其中，d代表共价单键或c
1-6
亚烷基，任选地，所述c
1-6
亚烷基被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；e代表共价单键、c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基、-nr
3-或-c
1-6
亚烷基-nr
3-，其中，所述r3选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；
21.m代表6-10元芳环、3-7元脂肪族碳环、含有1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元单环或多环芳杂环、含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环脂杂环或6-12元多环脂杂环；任选地，所述芳环、碳环、芳杂环、脂杂环被一个或多个选自
下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
烷胺基、卤代c
1-6
烷氧基、羟基取代的c
1-6
烷氧基和c
1-6
烷氧基取代的c
2-6
烯基。
22.在另一个方面，本技术提供一种药物组合物，其含有本技术所公开的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
23.在另一个方面，本技术提供一种联合用药物，其含有第一活性成分和第二活性成分，以及任选地药学上可接受的载体或赋形剂；其中，所述第一活性成分选自本技术所公开的化合物或其药学上可接受的盐，及其它ido抑制剂；所述第二活性成分选自表观遗传调控剂。
24.在另一个方面，本技术提供所公开的化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物在制备免疫调节剂或预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的药物中的用途。
25.在另一个方面，本技术提供所公开的化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物，其用于调节个体免疫力或预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病。
26.在另一个方面，本技术提供一种调节免疫的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本技术所公开的化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物。
27.在另一个方面，本技术提供一种预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本技术所公开的化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物。
28.在另一个方面，本技术提供所公开的通式(i)化合物的制备方法，及所述制备方法中所涉及的各中间体用于制备通式(i)化合物的用途。
29.发明详述
30.化合物
31.在一个方面，本技术提供通式(i)化合物或其药学上可接受的盐，
32.a-x-b-y-m
33.(i)
34.其中，
35.a代表含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的9-15元稠合杂芳环；任选地，所述稠合杂芳环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；
36.x代表共价单键、-c(r1r2)-、-o-、-o-c
1-6
亚烷基-、-nr
1-、-s-、-s(o)-或其中各r1和r2各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；
37.b代表含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-12元多环脂杂环；
38.y代表其中，d代表共价单键或c
1-6
亚烷基，任选地，所述c
1-6
亚烷基被一
个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；e代表共价单键、c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基、-nr
3-或-c
1-6
亚烷基-nr
3-，其中，所述r3选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基和羟基取代的c
1-6
烷基；
39.m代表6-10元芳环、3-7元脂肪族碳环、含有1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元单环或多环芳杂环、含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环脂杂环或6-12元多环脂杂环；任选地，所述芳环、碳环、芳杂环、脂杂环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
烷胺基、卤代c
1-6
烷氧基、羟基取代的c
1-6
烷氧基和c
1-6
烷氧基取代的c
2-6
烯基。
40.在一些优选的实施方案中，a代表含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的9-10元稠合杂芳环；任选地，所述稠合杂芳环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基。在一些优选的实施方案中，a代表含有1-2个氮原子的9-10元稠合杂芳环；任选地，所述稠合杂芳环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-2
烷基、c
1-2
烷氧基、卤代c
1-2
烷基和羟基取代的c
1-2
烷基。在一些优选的实施方案中，a选自任选地被一个或多个卤素取代的下列基团：苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、喹喔啉基和萘啶基。在一些优选的实施方案中，a为6-氟喹啉基。
41.在一些优选的实施方案中，x代表共价单键、-c(r1r2)-、-o-、-o-c
1-4
亚烷基-、-nr
1-、-s-、-s(o)-或其中各r1和r2各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基。在一些优选的实施方案中，x代表共价单键、-o-、-o-c
1-2
亚烷基-或-nr
1-；其中各r1和r2各自独立地选自氢和c
1-2
烷基。在一些优选的实施方案中，x代表共价单键、-o-、-och
2-、-nh-或-n(ch3)-。在一些优选的实施方案中，x代表-o-、-nh-或-n(ch3)-。在一些优选的实施方案中，x代表-o-或-nh-。在一些优选的实施方案中，x代表-o-。在一些实施方案中，x代表共价单键。在一些实施方案中，x代表-n(ch3)-。
42.在一些优选的实施方案中，b代表含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-9元多环脂杂环；优选地，所述杂原子中至少一个为氮。在一些优选的实施方案中，b代表含有1-3个氮、氧和硫的杂原子的6-9元双环脂杂环。在一些优选的实施方案中，所述杂原子中至少一个为氮。在一些优选的实施方案中，b代表含有1-3个氮原子的6-9元螺杂环或6-9元并杂环。在一些优选的实施方案中，b通过其环上的氮原子与y相连。在一些优选的实施方案中，b选自在一些优选的实施方案中，b选自在一些实施方案中，b为在一些实施方案中，b为在一些实施方案中，b为
43.在一些优选的实施方案中，y代表其中，d代表共价单键或c
1-4
亚烷基，任选地，所述c
1-4
亚烷基被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基；e代表共价单键、c
1-4
亚烷基、c
2-4
亚烯基、-nr
3-或-c
1-4
亚烷基-nr
3-，其中，所述r3选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基。在一些优选的实施方案中，y代表其中，d代表共价单键或c
1-2
亚烷基，任选地，y代表其中，d代表共价单键或c
1-2
亚烷基，任选地，所述c
1-2
亚烷基被一个或多个羟基取代的c
1-2
烷基；e代表共价单键、亚乙烯基、-nh-或-c
1-2
亚烷基-nh-。在一些优选的实施方案中，y代表-c(o)-、在一些实施方案中，y代表-c(o)-、在一些实施方案中，y代表在一些实施方案中，y代表
44.在一些优选的实施方案中，m代表6-10元芳环、3-7元脂肪族碳环、含有1-4个选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环芳杂环或8-10元双环芳杂环、含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的3-6元单环脂杂环或7-10元双环脂杂环；任选地，所述芳环、碳环、芳杂环、脂杂环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
烷胺基、卤代c
1-4
烷氧基、羟基取代的c
1-4
烷氧基和c
1-4
烷氧基取代的c
2-4
烯基。在一些优选的实施方案中，m代表苯环、3-7元脂肪族碳环、含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环芳杂环或8-10元双环芳杂环、含有1-2个选自氮、氧和硫的杂原子的3-6元单环脂杂环；任选地，所述苯环、碳环、5-6元单环芳杂环、8-10元双环芳杂环、3-6元单环脂杂环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、羟基、氨基、c
1-2
烷基、乙烯基、c
1-2
烷氧基、c
1-2
烷胺基、卤代c
1-2
烷氧基、羟基取代的c
1-2
烷氧基和c
1-2
烷氧基取代的c
2-4
烯基。在一些优选的实施方案中，m代表苯环、3-7元脂肪族碳环、含有1-2个选自氮和氧的杂原子的5-6元单环芳杂环或8-10元双环芳杂环；任选地，所述苯环、碳环、5-6元单环芳杂环或8-10元双环芳杂环被一个或多个选自下述的取代基取代：卤素、c
1-2
烷氧基、和c
1-2
烷氧基取代的c
2-4
烯基。在一些优选的实施方案中，m代表苯环、环己烷环、吡啶环、2,3-二氢苯并呋喃环、苯并[1,3]二氧环戊烯环或2,3-二氢苯并[1,4]二噁烷环；任选地，所述苯环被一个或多个选自下述的取代基取代：氟、氯、甲氧基、二甲氨基和甲氧基取代的丙烯基。在一些实施方案中，m代表苯环、卤代苯环(例如氯代苯环、氟代苯环)或甲氧基取代的苯环。在一些实施方案中，m代表卤代苯环。在一些实施方案中，m代表4-氯苯环。
[0045]
在一些优选的实施方案中，b代表含有1-3个氮、氧和硫的杂原子的6-9元双环脂杂
环；
[0046]
y代表其中，d代表共价单键或c
1-4
亚烷基，任选地，所述c
1-4
亚烷基被一个或多个羟基取代的c
1-4
烷基；e代表共价单键、亚乙烯基、-nh-或-c
1-4
亚烷基-nh-；e代表共价单键、c
1-4
亚烷基、c
2-4
亚烯基、-nr
3-或-c
1-4
亚烷基-nr
3-，其中，所述r3选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基。
[0047]
在一些优选的实施方案中，b代表含有1-3个氮原子的6-9元螺杂环或6-9元并杂环；
[0048]
y代表其中，d代表共价单键或c
1-2
亚烷基，任选地，所述c
1-2
亚烷基被一个或多个羟基取代的c
1-2
烷基；e代表共价单键、亚乙烯基、-nh-或-c
1-2
亚烷基-nh-；并且，b通过其环上的氮原子与y相连。
[0049]
在一些优选的实施方案中，-b-y-选自选自选自在一些优选的实施方案中，-b-y-选自选自
[0050]
在一些优选的实施方案中，x代表共价单键、-c(r1r2)-、-o-、-o-c
1-4
亚烷基-、-nr
1-、-s-、-s(o)-或其中各r1和r2各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基；
[0051]
b代表含有1-3个氮、氧和硫的杂原子的6-9元双环脂杂环；
[0052]
y代表其中，d代表共价单键或c
1-4
亚烷基，任选地，所述c
1-4
亚烷基被一个或多个羟基取代的c
1-4
烷基；e代表共价单键、亚乙烯基、-nh-或-c
1-4
亚烷基-nh-；e代表共价单键、c
1-4
亚烷基、c
2-4
亚烯基、-nr
3-或-c
1-4
亚烷基-nr
3-，其中，所述r3选自氢、卤素、羟基、氨基、c
1-4
烷基、卤代c
1-4
烷基和羟基取代的c
1-4
烷基。
[0053]
在一些优选的实施方案中，x代表共价单键、-o-、-o-c
1-2
亚烷基-或-nr
1-；其中各r1和r2各自独立地选自氢和c
1-2
烷基；
[0054]
b代表含有1-3个氮原子的6-9元螺杂环或6-9元并杂环；
[0055]
y代表其中，d代表共价单键或c
1-2
亚烷基，任选地，所述c
1-2
亚烷基被一个或多个羟基取代的c
1-2
烷基；e代表共价单键、亚乙烯基、-nh-或-c
1-2
亚烷基-nh-；并且，b通过其环上的氮原子与y相连。
[0056]
在一些优选的实施方案中，x代表共价单键、-o-、-och
2-、-nh-或-n(ch3)-；
[0057]-b-y-选自选自
[0058]
在一些优选的实施方案中，本技术所述化合物选自：
[0059]
[0060][0061]
在本文中，对于通式(i)化合物中如“x”、“b”、“y”、“d”或“e”所定义的二价结构，其两端均可与相邻结构连接，优选按照撰写格式与相邻结构连接，即左侧端与左侧结构相连，右侧端与右侧结构相连。在一些实施方案中，当e为-c
1-6
亚烷基-nr
3-时，其可通过左侧的c
1-6
亚烷基与y中羰基相连，也可通过右侧-nr
3-与y中羰基相连。
[0062]
药物组合物
[0063]
当作为药物施用时，所述化合物可以药物组合物的形式进行给药。因此，在另一个方面，本技术提供含有所述化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
[0064]
所用术语“组合物”意指含有本技术中所公开的化合物或其药学上可接受的盐作为特定活性成分的产品，以及任意其它直接或间接与所述活性成分联合的产品。
[0065]
通常所述药物组合物中至少含有一种药学上可接受的载体或赋形剂。术语“药学上可接受的”意指所述载体或赋形剂与配方中其它成分兼容且对受试者无害。这里所述的载体是指用于提高药物在递送过程中的选择性、有效性和/或安全性的物质。所述载体主要用于控制药物释放，也可用于提高药物的药代动力学特性，特别是生物利用度。所述赋形剂是指在药物制剂中除活性成分外的其它物质，主要用于长期稳定性，填充固体制剂(因此，也常被用于特指“填充剂”)或增强产品疗效(例如促进吸收、降低粘度或提高溶解度等)。
[0066]
在一些实施方案中，所述药物组合物中还含有其它ido抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述ido抑制剂可为色氨酸类似物(例如indoximod)或ido1抑制剂(例如epacadostat、nlg919)。在一些优选的实施方案中，所述药物组合物中还含有表观遗传调控剂。在一些优选的实施方案中，所述表观遗传调控剂选自dna甲基化酶抑制剂(例如阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine))、组蛋白甲基化酶抑制剂(例如ezh2抑制剂)、组蛋白去
甲基化酶抑制剂(例如lsd抑制剂)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述hdac抑制剂选自苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。
[0067]
在一些优选的实施方案中，所述药物组合物中含有2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂；任选地，其还含有一种或多种其他治疗剂。在一些优选的实施方案中，所述其他治疗剂可以为其它ido抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述ido抑制剂可为色氨酸类似物(例如indoximod)或ido1抑制剂(例如epacadostat、nlg919)。在一些优选的实施方案中，所述其他治疗剂可以为表观遗传调控剂。在一些优选的实施方案中，所述表观遗传调控剂选自dna甲基化酶抑制剂(例如阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine))、组蛋白甲基化酶抑制剂(例如ezh2抑制剂)、组蛋白去甲基化酶抑制剂(例如lsd抑制剂)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述hdac抑制剂选自苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。在一些优选的实施方案中，所述药物组合物中含有2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐和西达本胺以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0068]
在一些优选的实施方案中，所述药物组合物中含有n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺、n-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺、2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺或2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂；任选地，其还含有一种或多种其他治疗剂。在一些优选的实施方案中，所述其他治疗剂可以为其它ido抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述ido抑制剂可为色氨酸类似物(例如indoximod)或ido1抑制剂(例如epacadostat、nlg919)。在一些优选的实施方案中，所述其他治疗剂可以为表观遗传调控剂。在一些优选的实施方案中，所述表观遗传调控剂选自dna甲基化酶抑制剂(例如阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine))、组蛋白甲基化酶抑制剂(例如ezh2抑制剂)、组蛋白去甲基化酶抑制剂(例如lsd抑制剂)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述hdac抑制剂选自苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。在一些优选的实施方案中，所述药物组合物中含有n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺、n-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺、2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺或2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮
或其药学上可接受的盐，以及西达本胺和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0069]
联合用药
[0070]
表观遗传学是目前遗传学研究的热点，其主要包括dna甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化、磷酸化、泛素化以及参与结合组蛋白修饰位点的转录因子活性等，这些表观遗传学改变在基因转录调节中起着重要作用。dna甲基化主要发生于基因组中的cpg二核苷酸位点上，由dna甲基转移酶催化产生。通常，dna甲基化与基因的表达呈负相关关系。研究表明，dna甲基化异常可通过影响染色质结构以及癌基因和抑癌基因的表达而参与肿瘤的形成。临床常用的dna甲基转移酶抑制剂有阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine)等。组蛋白是人类染色体的基本组成单位，组蛋白的转录后修饰在基因表达中起决定性的作用。组蛋白赖氨酸或精氨酸位点的甲基化，尤其是乙酰化是其中重要的修饰方式。大量研究表明，癌细胞中的hdac过量表达造成的乙酰化失衡导致了肿瘤的发生，而通过抑制hdac可以很好地抑制肿瘤的生成。而目前进入临床试验研究阶段的组蛋白甲基化酶抑制剂有ezh2抑制剂，组蛋白去甲基化酶抑制剂有lsd抑制剂等。hdac抑制剂有苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。此外，与组蛋白修饰化位点结合的转录因子如含溴结合域的bet蛋白家族成员，也参与细胞周期蛋白表达、染色质塑，甚至作为增强子直接促进癌基因如myc的异常表达而诱导肿瘤发生。目前已有一些bet抑制剂进入临床研究阶段。
[0071]
本发明人意外发现，在balb/c小鼠接种ct-26结肠癌细胞构建的肿瘤模型中，具有ido抑制活性的化合物与hdac抑制剂显示出优异的协同作用，其抗肿瘤活性显著优于单靶点ido抑制剂或hdac抑制剂。因此，本技术的另一方面提供一种联合用药物，其含有第一活性成分和第二活性成分，以及任选地药学上可接受的载体或赋形剂；其中，所述第一活性成分选自本技术所公开的化合物或其药学上可接受的盐，及其它ido抑制剂；所述第二活性成分选自表观遗传调控剂。
[0072]
在一些优选的实施方案中，所述ido抑制剂选自色氨酸类似物(例如indoximod)和ido1抑制剂(例如epacadostat、nlg919)。在一些优选的实施方案中，所述表观遗传调控剂选自dna甲基化酶抑制剂(例如阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine))、组蛋白甲基化酶抑制剂(例如ezh2抑制剂)、组蛋白去甲基化酶抑制剂(例如lsd抑制剂)和hdac抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述hdac抑制剂选自苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分和第二活性成分在同一制剂单元中。在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分和第二活性成分在不同的制剂单元中。在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分和第二活性成分同时、分别或依次给药。在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分为n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺、或其药学上可接受的盐，所述第二活性成分为西达本胺。
[0073]
在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分为2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐；所述第二活性成分选自表观遗传调控剂。在一些优选的实
施方案中，所述表观遗传调控剂选自dna甲基化酶抑制剂(例如阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine))、组蛋白甲基化酶抑制剂(例如ezh2抑制剂)、组蛋白去甲基化酶抑制剂(例如lsd抑制剂)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述hdac抑制剂选自苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分为2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐；所述第二活性成分为西达本胺。
[0074]
在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分选自n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺、n-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺、2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺和2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐；所述第二活性成分选自表观遗传调控剂。在一些优选的实施方案中，所述表观遗传调控剂选自dna甲基化酶抑制剂(例如阿扎胞苷(5-aza)、地西他滨(decitabine))、组蛋白甲基化酶抑制剂(例如ezh2抑制剂)、组蛋白去甲基化酶抑制剂(例如lsd抑制剂)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)抑制剂。在一些优选的实施方案中，所述hdac抑制剂选自苯甲酰胺类hdac抑制剂(例如西达本胺)、异羟肟酸类hdac抑制剂(例如vorinostat)、环肽类hdac抑制剂(例如romidepsin)及短链脂肪酸hdac抑制剂(如丙戊酸)。在一些优选的实施方案中，所述第一活性成分为2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮或其药学上可接受的盐；所述第二活性成分为西达本胺。
[0075]
用途
[0076]
如前文中所述，ido1具有免疫抑制功能，并且与多种疾病发病机制密切相关，例如其是癌症、阿尔茨海默病、抑郁症、白内障等重大疾病的靶标。此外，它还涉及与年龄相关的核性白内障的发生。在活性实验部分，本技术所公开的化合物对hido1显示出显著的抑制活性。
[0077]
因此，在另一个方面，本技术提供所述化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物在制备免疫调节剂或预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的药物中的用途。在一些优选的实施方案中，所述疾病选自肿瘤、自身免疫性疾病、白内障、阿尔兹海默症、抑郁障碍和焦虑障碍。
[0078]
本技术还提供所述化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物，其用于调节个体免疫力或预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病。在一些优选的实施方案中，所述疾病选自肿瘤、自身免疫性疾病、白内障、阿尔兹海默症、抑郁障碍和焦虑障碍。
[0079]
本技术还提供一种调节免疫的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本技术所公开的化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物或联合用药物。
[0080]
本技术还提供一种预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本技术所公开的化合物或其药学上可
接受的盐、药物组合物或联合用药物。在一些优选的实施方案中，所述疾病选自肿瘤、自身免疫性疾病、白内障、阿尔兹海默症、抑郁障碍和焦虑障碍。
[0081]
如本文所使用的，术语“受试者”或“个体”是指动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)，牛，猪，绵羊，山羊，马，狗，猫，兔，大鼠或小鼠。“个体”和“患者”在本文中可互换使用，例如，参考哺乳动物受试者，例如人受试者。在一些实施方案中，受试者是人。
[0082]
如本文所使用的，术语“治疗”意在包括缓解或消除病状、病症或疾病，或与病状、病症或疾病相关的一种或多种症状；或缓解或消除造成病状、病症或疾病本身的原因。
[0083]
如本文所使用的，术语“预防”意在包括缓解和/或排除病状、病症或疾病，和/或其伴随症状发作的方法；防止个体获得病状、病症或疾病；或降低个体罹患病状、病症或疾病的风险。
[0084]
术语“有效量”是指，足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量；治疗有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度，患者自己的免疫系统的总体状态，患者的一般情况例如年龄、体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
[0085]
制备方法
[0086]
在另一方面，本技术提供了所述通式(i)化合物的制备方法，其选自以下方法：
[0087]
方法1：
[0088]
当y为d为共价单键，e为-nr
3-时，所述通式(i)化合物可通过下述方法制得：在有机溶剂中，在碱的存在下，使式i-1化合物、式i-2化合物以及脲化试剂反应生成通式(i)化合物，
[0089][0090]
方法2：
[0091]
当y为d为共价单键，e为共价单键、c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基或-c
1-6
亚烷基-nr
3-时，所述通式(i)化合物可通过下述方法制得：式i-1化合物与式i-3化合物经偶联反应生成通式(i)化合物；
[0092][0093]
方法3：
[0094]
当y为d为取代或未取代的c
1-6
亚烷基，e为-nr
3-时，所述通式(i)化合物可通过下述方法制得：式i-4化合物和式i-2化合物经偶联反应生成通式(i)化合物，
[0095][0096]
其中，a、x、b、r3和m如前面所定义。
[0097]
在一些优选的实施方案中，所述通式(i)化合物中b代表含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-12元杂多环烷基，并且，所述杂原子中至少一个为氮，b通过其环上的氮原子与y相连。
[0098]
在一些优选的实施方案中，在方法1(1)中，所述有机溶剂可为二氯甲烷、thf、甲苯、乙酸乙酯或苯等。在一些优选的实施方案中，在方法1(1)中，所述碱为三乙胺、吡啶、dipea或naoh。在一些优选的实施方案中，在方法1(1)中，所述脲化试剂选自异氰酸酯、三光气、光气、双光气、氯甲酰胺、羰基二咪唑(cdi)和异氰酸钾。
[0099]
在一些优选的实施方案中，在方法2和/或方法3中，所述偶联反应以肽缩合剂为催化剂，例如1-羟基苯并三唑(hobt)、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺(edc)、n,n'-二环己基碳二亚胺(dcc)、n,n'-羰基二咪唑(cdi)、o-(7-氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)等。在一些优选的实施方案中，在方法2和/或方法3中，所述偶联反应温度为0～60℃。在一些优选的实施方案中，在方法2和/或方法3中，所述偶联反应时间为2～72小时。在一些优选的实施方案中，在方法2和/或方法3中，所述偶联反应所用溶剂选自苯、甲苯、四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷、氯仿和n,n'-二甲基甲酰胺等。在一些优选的实施方案中，在方法1(2)和/或方法2中，在必要时，所述偶联反应中也可以加入碱，如氢氧化钠、三乙胺、dmap或吡啶等。
[0100]
通式(i)化合物可以采用常见的分离方法进行纯化，如萃取、重结晶、柱层析等。
[0101]
式i-1化合物的制备
[0102]
此外，本技术进一步提供了所述式i-1化合物的制备方法，其包括步骤(a)-(b)：
[0103]
(a)在碱的作用下，化合物1与化合物2进行亲核取代反应得到化合物3：
[0104][0105]
(b)在酸的作用下，化合物3脱保护得到式i-1：
[0106][0107]
其中，a、x和b如前文所定义。
[0108]
在一些优选的实施方案中，步骤(a)中所述亲核取代反应以khmds、nah、naoh、na2co3或k2co3等碱为去酸剂。在一些优选的实施方案中，步骤(a)中反应温度为25～140℃。在一些优选的实施方案中，步骤(a)中反应时间为2～72小时。在一些优选的实施方案中，步骤(a)中所述亲核取代反应所用溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙腈、苯、二甲苯、丙酮、n,n'-二甲基甲酰胺和dmso等。
[0109]
在一些优选的实施方案中，步骤(b)中所述酸选自三氟醋酸和氯化氢溶液。在一些优选的实施方案中，步骤(b)中所述碱为naoh。在一些优选的实施方案中，步骤(b)中反应温
度为25～140℃。在一些优选的实施方案中，步骤(b)中反应时间为2～72小时。在一些优选的实施方案中，步骤(b)中所用溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙腈、苯、二甲苯、丙酮、n,n'-二甲基甲酰胺和dmso等。
[0110]
式i-4化合物的制备
[0111]
此外，本技术进一步提供了制备式i-4化合物的方法，其包括步骤(c)-(d)：
[0112]
(c)式i-1化合物与卤代羧酸酯4(例如氯甲酸酯、2-溴乙酸酯、2-溴丙酸酯、1-羟基-2-溴丙酸酯)在碱的作用下经亲核取代反应生成化合物5；
[0113][0114]
(d)化合物5在碱性条件下水解得到式i-4化合物；
[0115][0116]
其中，r4代表c
1-6
烷基，a、x、b和d如前文所定义。
[0117]
特别地，当步骤(c)中所述卤代羧酸酯为2-卤代丙酸酯时，式i-4化合物具有式f所示的结构：
[0118][0119]
因此，本技术进一步提供了制备上述式f化合物的方法，其包括步骤(e)-(f)：
[0120]
(e)在碱的作用下，式i-1化合物与2-卤代丙酸酯(例如2-溴代丙酸乙酯)进行亲核取代反应得到化合物6；
[0121][0122]
(f)化合物4在碱性条件下水解反应得到式f化合物；
[0123][0124]
在一些优选的实施方案中，步骤(c)和/或(e)中所述亲核取代反应以naoh、na2co3、k2co3等碱为去酸剂。在一些优选的实施方案中，步骤(c)和/或(e)中所述反应温度为25～140℃。在一些优选的实施方案中，步骤(c)和/或(e)中反应时间为2～72小时。在一些优选的实施方案中，步骤(c)和/或(e)中反应所用溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙腈、苯、二甲苯、丙酮、n,n'-二甲基甲酰胺和dmso等。
[0125]
在一些优选的实施方案中，步骤(d)和/或(f)中所述水解反应以naoh、lioh等为
碱。在一些优选的实施方案中，步骤(d)和/或(f)中所述反应温度为0～60℃。在一些优选的实施方案中，步骤(d)和/或(f)中所述反应时间为0.5～2小时。在一些优选的实施方案中，步骤(d)和/或(f)中所用溶剂选自水、甲醇、乙醇、四氢呋喃和n,n'-二甲基甲酰胺等。
[0126]
特别地，本技术还提供了上述制备方法中各中间体(例如式i-1化合物、式i-4化合物、式f化合物)用于制备本技术所述通式(i)化合物的用途。
[0127]
在本技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语的定义和解释。
[0128]
在本文中，术语“药学上可接受的盐”是指，(1)本技术所公开化合物中存在的酸性官能团(例如-cooh、-oh、-so3h等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，例如本技术所公开化合物与碱金属或碱土金属形成的盐、本技术所公开化合物的铵盐，和本技术所公开化合物与含氮有机碱形成的盐；以及(2)本技术所公开化合物中存在的碱性官能团(例如-nh2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，例如本技术所公开化合物与无机酸或有机羧酸形成的盐。
[0129]
在本文中，术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。
[0130]
在本文中，术语“烷基”表示直链或支链饱和烃基。包括例如“c
1-6
烷基”、“c
1-4
烷基”、“c
1-3
烷基”、“c
1-2
烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
[0131]
在本文中，术语“亚烷基”是指直链或支链烷烃中失去两个氢原子后得到的基团，例如c
1-6
亚烷基、c
1-4
亚烷基、c
1-2
亚烷基。具体实例包括但不限于亚甲基、1，2-亚乙基1，2-亚乙基、1，3-亚丙基，1，4-亚丁基等。
[0132]
在本文中，术语“烷氧基”是指烷基-o-结构的基团，其中烷基如上文所定义。包括例如“c
1-6
烷氧基”、“c
1-4
烷氧基”、“c
1-3
烷氧基”、“c
1-2
烷氧基”等。具体实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。
[0133]
在本文中，术语“卤代c
1-6
烷基”是指如前文所述的c
1-6
烷基中至少一个氢原子(例如1个、2个或3个)被卤素原子(例如氟或氯)取代后得到的基团。具体的实例包括但不限于氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基等。
[0134]
在本文中，术语“烯基”是指含有至少一个双键的直链或支链烯基，包括例如“c
2-6
烯基”、“c
2-4
烯基”等。具体实例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1,3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,4-己二烯基、环戊烯基、1,3-环戊二烯基、环己烯基、1,4-环己二烯基等。
[0135]
在本文中，术语“亚烯基”是指直链或支链烯烃中失去两个氢原子后得到的基团，例如c
2-6
亚烯基、c
2-4
亚烯基。具体实例包括但不限于亚乙烯基、1，3-亚丙烯基等。
[0136]
在本文中，术语“碳环”是指所有环成员均为碳原子的环状结构，包括脂肪族碳环和芳环。其中所述脂肪族碳环是指不具有芳香特征的饱和或部分不饱和的环状结构。例如，3-7元脂肪族碳环，3-6元脂肪族碳环、4-6元脂肪族碳环、5-6元脂肪族碳环等。具体实例包括但不限于：环丙烷环、环丁烷环、环戊烷环、环己烷环、环庚烷环、环辛烷环等。
[0137]
在本文中，术语“脂杂环”是指至少一个环原子为杂原子的不具有芳香特征的环状基团，其中，所述杂原子选自氮原子、氧原子和硫原子。所述脂杂环包括单环或多环脂杂环。其中，所述单环脂杂环可以为含有1-5个(例如1-2个)选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元(例如3-6元、5-6元、3、4、5、6或7元)饱和或部分不饱和的单环脂杂环。具体的实例包括但不限于环氧乙烷基、氧代环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、高哌嗪基等。
[0138]
所述多环脂杂环例如可以是含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的6-12元多环脂杂环，可以是含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-9元多环脂杂环，也可以是含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的6-12元双环脂杂环，含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的7-10元双环脂杂环，或者含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-9元双环脂杂环。所述双环脂杂环可以为螺杂环、桥杂环或并杂环。其中所述螺杂环是由两个环彼此共用一个碳原子所形成的，例如含有1-3个(例如1-2个)氮、氧和硫的杂原子的6-9元螺杂环。具体实例包括但不仅限于：仅限于：仅限于：等。
[0139]
所述桥杂环是由两个或两个以上环彼此共用两个非相邻的环原子所形成的，例如1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-9元桥杂环。具体实例包括但不仅限于：9元桥杂环。具体实例包括但不仅限于：9元桥杂环。具体实例包括但不仅限于：等。
[0140]
所述并杂环是由两个或两个以上环彼此共用两个相邻的原子所形成的，例如含有
1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的6-9元并杂环。具体的实例包括但不限于：9元并杂环。具体的实例包括但不限于：等。
[0141]
在本文中，术语“芳杂环”是指环原子中含有至少一个选自氮、氧和硫的杂原子的具有芳香性的环状基团，包括单环芳杂环和多环芳杂环(例如双环芳杂环)。例如含有1-5个选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳环，含有1-4个(例如1-2个)选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳环，含有1-4个(例如1-2个)选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳环，优选地，所述杂原子为氮。具体实例包括但不仅限呋喃环、噻吩环、吡咯环、噻唑环、异噻唑环、噻二唑环、噁唑环、异噁唑环、噁二唑环、咪唑环、吡唑环、1,2,3-三唑环、1,2,4-三唑环、1,2,3-噁二唑环、1,2,4-噁二唑环、1,2,5-噁二唑环、1,3,4-噁二唑环、吡啶环、嘧啶环、哒嗪环、吡嗪环、1,2,3-三嗪环、1,3,5-三嗪环、1,2,4,5-四嗪环、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、喹喔啉基和萘啶基等。
[0142]
在本文中，术语“芳基”是指具有芳香性的单环或多环烃基，例如6-10元芳基等。具体的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基等。
附图说明
[0143]
图1显示了西达本胺协同实施例3对hela细胞的ido酶活抑制。
[0144]
图2显示了西达本胺协同实施例20对hela细胞的ido酶活抑制。
[0145]
图3显示了西达本胺协同实施例72对hela细胞的ido酶活抑制。
[0146]
图4显示了西达本胺协同实施例87对hela细胞的ido酶活抑制。
[0147]
图5显示了西达本胺与实施例3联合用药对小鼠ct-26肿瘤生长的抑制曲线。
[0148]
图6显示了西达本胺与实施例3联合用药对小鼠ct-26肿瘤重量的抑制。
[0149]
图7显示了西达本胺与实施例20联合用药对小鼠ct-26肿瘤生长的抑制曲线。
[0150]
图8显示了西达本胺与实施例72联合用药对小鼠ct-26肿瘤生长的抑制曲线。
[0151]
图9显示了西达本胺与实施例87联合用药对小鼠ct-26肿瘤生长的抑制曲线。
具体实施方式
[0152]
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0153]
实施例中所使用的试剂缩写所代表的完整名称如下：
[0154]
khmds六甲基二硅基胺钾
[0155]
hatu2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯
[0156]
dipea二异丙基乙基胺
[0157]
hobt1-羟基苯并三唑
[0158]
edci.hcl1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐
[0159]
dmfn,n-二甲基甲酰胺
[0160]
thf四氢呋喃
[0161]
ea乙酸乙酯
[0162]
dcm二氯甲烷
[0163]
实施例16-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-羧酸叔丁酯的制备
[0164][0165]
6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(2.04g，9.6mmol)溶于二氧六环(16ml)中于室温搅拌，加入khmds(9.6ml，9.6mmol)，室温搅拌5分钟，然后加入4-氯-6-氟喹啉(1.46g,8.0mmol)的二氧六环(5ml)溶液。该反应液在60℃下搅拌30分钟，停止加热，降温至室温搅拌15小时。然后倒入水中，用nahco3水溶液调ph值至8-10。乙酸乙酯萃取，合并有机相干燥，过滤，减压蒸馏得到残留物，然后柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝3/2]，获得淡黄色粘稠油状物6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(1.3g，收率：45％)，lc-ms(m/z)359(m+1)。
[0166]
实施例24-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐的制备
[0167][0168]
6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(1.3g，3.6mmol)溶于20ml二氯甲烷，然后加入浓盐酸(1ml)。该反应液在室温下搅拌16小时后直接浓缩获得灰白色固体4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(1.0g，收率：94％)，lc-ms(m/z)259(m+1)。
[0169]
实施例3n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺的制备
[0170][0171]
对氯苯胺(50mg，0.39mmol)溶于超干四氢呋喃(5ml)中，冰浴下，加入三光气(116mg，0.39mmol)，然后慢慢滴加入三乙胺(0.2ml，1.6mmol)。该反应液在冰浴下搅拌25分钟，然后减压浓缩，加入超干n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，冰浴下，加入4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(115mg，0.43mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，然后再慢
慢滴加三乙胺(0.3ml，2.3mmol)。该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌40分钟，然后倒入水中，析出固体，过滤，水洗，干燥获得固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺(120mg，收率：70％)。
[0172]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.55(s,1h),8.02(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.79(dd,j＝9.7,3.0hz,1h),7.69
–
7.62(m,1h),7.56
–
7.50(m,2h),7.30
–
7.24(m,2h),6.92(d,j＝5.2hz,1h),4.97(p,j＝6.6hz,1h),4.06(s,2h),4.01(s,2h),2.95
–
2.84(m,2h),2.47-2.39(m,2h).
[0173]
lc-ms(m/z)412(m+1)。
[0174]
实施例4 n-(3-甲氧基苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0175][0176]
白色固体n-(3-甲氧基苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺(32mg，57％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(40mg，0.14mmol)和3-甲氧基苯胺(18mg，0.14mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0177]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.41(s,1h),8.02(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.79(dd,j＝9.7,2.9hz,1h),7.66(td,j＝8.8,3.0hz,1h),7.19(t,j＝2.2hz,1h),7.14
–
7.03(m,2h),6.92(d,j＝5.3hz,1h),6.49(ddd,j＝8.0,2.7,1.2hz,1h),4.97(p,j＝6.7hz,1h),4.05(s,2h),3.99(s,2h),3.69(s,3h),2.92
–
2.81(m,2h),2.49
–
2.36(m,2h).
[0178]
lc-ms(m/z)408(m+1)。
[0179]
实施例5 n-(4-甲氧基苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0180][0181]
白色固体n-(4-甲氧基苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺(26mg，47％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(40mg，0.14mmol)和4-甲氧基苯胺(18mg，0.14mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0182]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.25(s,1h),8.02(dd,j＝9.4,
5.3hz,1h),7.83
–
7.75(m,1h),7.66(t,j＝8.8hz,1h),7.37(d,j＝8.7hz,2h),6.92(d,j＝5.2hz,1h),6.81(d,j＝8.6hz,2h),5.02
–
4.92(m,1h),4.03(s,2h),3.97(s,2h),3.69(s,3h),3.32(s,5h),2.87(s,2h),2.44(d,j＝6.7hz,2h).
[0183]
lc-ms(m/z)408(m+1)。
[0184]
实施例6(4-氯苯基)(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)甲酮的制备
[0185][0186]
4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(60mg，0.2mmol)，溶于10ml dmf中，再加入对氯苯甲酸(38.2mg，0.24mmol)，edci(77.8mg，0.4mmol)，hobt(55mg，0.4mmol)，dipea 1ml，室温搅拌反应16小时，反应液倒入40ml冰水，用乙酸乙酯(20ml)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水(40ml)洗有机相，无水硫酸钠干燥，旋干有机相，然后柱层析分离[二氯甲烷/甲醇＝20/1],获得白色固体(20mg，25％yield)。
[0187]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.68(d,j＝5.1hz,1h),8.01(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.76(t,j＝7.4hz,1h),7.70
–
7.59(m,3h),7.51(t,j＝9.2hz,2h),6.87(dd,j＝17.2,5.2hz,1h),4.93(p,j＝6.6hz,1h),3.54
–
3.40(m,4h),2.88(t,j＝9.9hz,2h),2.43(d,j＝8.5hz,2h).
[0188]
lc-ms(m/z)397(m+1)。
[0189]
实施例7(e)-3-(4-氯苯基)-1-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮的制备
[0190][0191]
白色固体(e)-3-(4-氯苯基)-1-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮(18mg，21％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(40mg，0.14mmol)和4-氯肉桂酸(18mg，0.14mmol)按照实施例6中的类似步骤制备而成。
[0192]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.71(d,j＝5.1hz,1h),8.03(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.92(td,j＝6.4,3.7hz,1h),7.80(dd,j＝9.7,2.9hz,1h),7.75(dd,j＝15.6,1.7hz,1h),7.66(td,j＝8.8,3.0hz,1h),7.57
–
7.49(m,1h),7.47
–
7.35(m,2h),6.92(t,j＝4.9hz,1h),6.77(dd,j＝15.6,8.5hz,1h),4.99(p,j＝6.6hz,1h),4.40(d,j＝27.1hz,2h),4.07(d,j＝27.4hz,2h),2.92(ddd,j＝13.1,6.2,2.6hz,2h),2.46(ddt,j＝9.7,6.2,3.2hz,2h).
[0193]
lc-ms(m/z)423(m+1)。
[0194]
实施例8对硝基肉桂醇甲醚的制备
[0195][0196]
将对硝基肉桂醇(200mg，1.1mmol)溶于20ml干燥四氢呋喃中，氮气保护下，搅拌至全溶，加入氢化钠(178mg，4.4mmol)，搅拌反应20分钟，再加入碘甲烷(174mg，1.2mmol)，室温反应16小时，反应液倒入20ml冰水中，用乙酸乙酯(20ml)萃取两次，无水硫酸钠干燥，旋干有机相，固体柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝1/2]，获得淡黄色固体(60mg，28％yield)。
[0197]
实施例9对胺基肉桂醇甲醚的制备
[0198][0199]
将对硝基肉桂醇甲醚(60mg，0.31mmol)溶于10ml的乙醇中，加入铁粉(52mg，0.93mmol)搅拌10分钟，加热回流2小时，倒入冰水(20ml)，用碳酸氢钠调ph＝8，乙酸乙酯(20ml)萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏得到残留物，然后柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝3/2]，获得褐色固体(20mg，39％yield)，lc-ms(m/z)164(m+1)。
[0200]
实施例10(e)-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-n-(4-(3-甲氧基丙-1-烯-1-基)苯基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0201][0202]
白色固体(e)-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-n-(4-(3-甲氧基丙-1-烯-1-基)苯基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺(6mg，11％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(36mg，0.12mmol)和对胺基肉桂醇甲醚(20mg，0.12mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0203]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.71(d,j＝5.1hz,1h),8.48(s,1h),8.03(dd,j＝9.3,5.4hz,1h),7.80(dd,j＝9.7,3.0hz,1h),7.66(ddd,j＝9.3,8.4,3.0hz,1h),7.48(d,j＝8.7hz,2h),7.32(d,j＝8.6hz,2h),6.93(d,j＝5.2hz,1h),6.51(d,j＝16.2hz,1h),6.20(dt,j＝16.0,6.0hz,1h),5.76(s,2h),5.07
–
4.89(m,1h),4.07(s,2h),4.04
–
3.94(m,2h),3.27(s,3h),2.95
–
2.76(m,2h),2.48
–
2.34(m,2h).
[0204]
lc-ms(m/z)448(m+1)。
[0205]
实施例11 1-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂环[3.3]庚-2-基)-2-(苯胺基)乙基-1-酮的制备
[0206][0207]
白色固体1-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂环[3.3]庚-2-基)-2-(苯胺基)乙基-1-酮(35mg，52％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(50mg，0.17mmol)和2-(苯胺基)乙酸(30.8mg，0.2mmol)按照实施例6中的类似步骤制备而成。
[0208]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.69(d,j＝5.1hz,1h),8.02(dd,j＝9.4,5.4hz,1h),7.77(t,j＝6.9hz,1h),7.64(t,j＝8.6hz,1h),7.08(q,j＝7.5hz,2h),6.92
–
6.86(m,1h),6.62
–
6.52(m,2h),5.75(s,2h),5.00
–
4.89(m,1h),4.02(s,2h),3.94(s,2h),3.67(d,j＝10.4hz,2h),2.94
–
2.80(m,2h),2.45
–
2.40(m,2h).
[0209]
lc-ms(m/z)492(m+1)。
[0210]
实施例12 6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-3-氮杂环[3.1.0]己-3-羧酸叔丁酯的制备
[0211][0212]
将6-羟基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(603mg，3.03mmol)溶于30ml dmf中，冰浴下加入氢化钠(550mg，13.7mmol)搅拌30分钟，再加入6-氟-4-氯喹啉(500mg，2.75mmol)，升温75度反应2小时，倒入冰水(20ml)中，乙酸乙酯(20ml)萃取2次，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1：1)得白色固体(230mg，24％yield)，lc-ms(m/z)345(m+1)。
[0213]
实施例13 4-((3-氮杂环[3.1.0]己-4-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐的制备
[0214][0215]
6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-3-氮杂环[3.1.0]己-3-羧酸叔丁酯(50mg，0.145mmol)溶于20ml二氯甲烷，然后加入浓盐酸(0.5ml)。在室温下搅拌3小时后直接浓缩获得白色固体(38.8m g，95％yield)，lc-ms(m/z)245(m+1)。
[0216]
实施例14 1-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂环[3.1.0]庚-3-基)-2-(苯胺基)乙基-1-酮的制备
[0217][0218]
白色固体1-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂环[3.1.0]庚-3-基)-2-(苯胺基)乙基-1-酮(60mg，89％yield)是由4-((3-氮杂环[3.1.0]己-4-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(50mg，0.18mmol)和2-(苯胺基)乙酸(33.7mg，0.21mmol)按照实施例6中的类似步骤制备而成。
[0219]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.47(d,j＝5.2hz,1h),8.01(dd,j＝11.0,2.8hz,1h),7.86(dd,j＝9.2,5.8hz,1h),7.52(ddd,j＝9.3,8.1,2.7hz,1h),7.43(s,1h),7.09(dd,j＝8.4,7.1hz,2h),6.74(d,j＝5.2hz,1h),6.68
–
6.61(m,2h),6.56(tt,j＝7.2,1.1hz,1h),5.53(t,j＝5.1hz,1h),3.99(d,j＝10.4hz,1h),3.91
–
3.86(m,2h),3.78
–
3.69(m,2h),3.53
–
3.47(m,2h),2.32(d,j＝2.4hz,2h).
[0220]
lc-ms(m/z)377(m+1)。
[0221]
实施例15 n-(4-氯苄基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0222][0223]
白色固体n-(4-氯苄基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺(20mg，14％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(100mg，0.36mmol)和4-氯苄胺(40mg，0.36mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0224]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.72(d,j＝5.1hz,1h),8.04(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.80(dd,j＝9.7,3.0hz,1h),7.67(td,j＝8.8,3.0hz,1h),7.42
–
7.35(m,2h),7.29(d,j＝8.4hz,2h),6.94(dd,j＝7.7,5.5hz,2h),4.97(p,j＝6.7hz,1h),4.20(d,j＝6.1hz,2h),3.96(s,2h),3.89(s,2h),2.91
–
2.80(m,2h),2.46
–
2.34(m,2h).
[0225]
lc-ms(m/z)426(m+1)。
[0226]
实施例16 n-(4-氟苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0227]
[0228]
白色固体n-(4-氟苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺(20mg，14％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(100mg，0.36mmol)和4-氟苯胺(40mg，0.36mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0229]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.47(s,1h),8.03(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.79(dd,j＝9.7,3.0hz,1h),7.66(m,1h),7.49(m,2h),7.05(m,2h),6.92(d,j＝5.1hz,1h),4.97(t,j＝6.7hz,1h),4.05(s,2h),4.00(s,2h),2.91
–
2.86(m,2h),2.46
–
2.41(m,2h).
[0230]
lc-ms(m/z)396(m+1)。
[0231]
实施例17 6-((6-氟喹啉-4-基)胺基)-2-氮杂螺[3.4]辛-2-羧酸叔丁酯的制备
[0232][0233]
4-氯-6-氟喹啉(181mg，1.0mmol)、叔丁基-6-氨基-2-偶氮杂唑[3.4]辛酸-2-羧酸酯(226mg，1.0mmol)和碳酸铯(980mg，3.0mmol)溶于二氧六环(5ml)中，然后加入2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(48mg，0.1mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(46mg，0.05mmol)，氮气保护。该反应液加热123℃搅拌7小时，然后倒入水中，乙酸乙酯萃取，水洗，有机相减压浓缩得到残留物，柱层析分离，获得淡黄色油状物6-((6-氟喹啉-4-基)胺基)-2-氮杂螺[3.4]辛-2-羧酸叔丁酯(100mg，27％yield)，lc-ms(m/z)372(m+1)
[0234]
实施例18 4-(2-氮杂螺[3.4]辛-6-基)胺基-6-氟喹啉盐酸盐的制备
[0235][0236]
6-((6-氟喹啉-4-基)胺基)-2-氮杂螺[3.4]辛-2-羧酸叔丁酯(100mg，0.27mmol)溶于5ml二氯甲烷，然后加入浓盐酸(1ml)。该反应液在室温下搅拌16小时后直接浓缩获得灰白色固体4-(2-氮杂螺[3.4]辛-6-基)胺基-6-氟喹啉盐酸盐(80mg，94％yield)，lc-ms(m/z)272(m+1)。
[0237]
实施例19 n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺基)-2-氮杂螺[3.4]辛-2-甲酰胺的制备
[0238][0239]
对氯苯胺(30mg，0.24mmol)溶于超干四氢呋喃(5ml)中，冰浴下，加入三光气(70mg，0.24mmol)，然后慢慢滴加入三乙胺(0.2ml，1.6mmol)。该反应液在冰浴下搅拌25分
钟，然后减压浓缩，加入超干n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，冰浴下，加入4-(2-氮杂螺[3.4]辛-6-基)胺基-6-氟喹啉盐酸盐(65mg，0.21mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，然后再慢慢滴加三乙胺(0.3ml，2.3mmol)。该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌40分钟，然后倒入水中，析出固体，过滤，水洗，干燥获得固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺基)-2-氮杂螺[3.4]辛-2-甲酰胺(68mg，70％yield)。
[0240]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.53(s,1h),8.41(d,j＝5.3hz,1h),8.18(dd,j＝11.2,2.9hz,1h),7.85(dd,j＝9.2,5.8hz,1h),7.54(d,j＝9.0hz,2h),7.28(d,j＝8.9hz,2h),6.81(d,j＝6.0hz,1h),6.51(d,j＝5.4hz,1h),3.98
–
3.81(m,3h),2.43
–
2.33(m,1h),2.21
–
2.11(m,2h),2.10
–
1.96(m,2h),1.96
–
1.84(m,2h),1.83
–
1.73(m,2h).
[0241]
lc-ms(m/z)425(m+1)。
[0242]
实施例20 n-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0243][0244]
白色固体n-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备(45mg，45％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(65mg，0.22mmol)和3,4-亚甲二氧基苯胺(33mg，0.242mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0245]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.31(s,1h),8.02(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.79(dd,j＝9.7,3.0hz,1h),7.66(td,j＝8.8,3.0hz,1h),7.18(d,j＝2.0hz,1h),6.92(d,j＝5.2hz,1h),6.85(dd,j＝8.4,2.1hz,1h),6.77(d,j＝8.4hz,1h),5.93(s,2h),4.97(p,j＝6.6hz,1h),4.03(s,2h),3.97(s,2h),2.94
–
2.79(m,2h),2.47
–
2.38(m,2h).
[0246]
lc-ms(m/z)422(m+1)。
[0247]
实施例21 6-((喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.4]庚-2-羧酸叔丁酯的制备
[0248][0249]
6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(0.717g，3.3mmol)溶于二氧六环(20ml)中于室温搅拌，加入khmds(3.6ml，3.6mmol)，室温搅拌30分钟，然后加入4-氯喹啉(0.5g,3.0mmol)的二氧六环(5ml)溶液。该反应液在75℃下搅拌60分钟，停止加热，降温至
室温搅拌15小时。然后倒入20ml水中，。乙酸乙酯(20ml)萃取2次，合并有机相干燥，过滤，减压蒸馏得到残留物，然后柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝3/2],获得淡黄色油状物(0.35g，33％yield)，lc-ms(m/z)341.16(m+1)。
[0250]
实施例22 4-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基喹啉盐酸盐的制备
[0251][0252]
6-((喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.4]庚-2-羧酸叔丁酯(0.35g，1.028mmol)溶于20ml二氯甲烷，然后加入浓盐酸(0.5ml)。在室温下搅拌3小时后直接浓缩获得灰白色固体(0.235g，95％yield)，lc-ms(m/z)241.2(m+1)。
[0253]
实施例23 n-(4-氯苯基)-6-(喹啉-4-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0254][0255]
对氯苯胺(25.3mg，0.198mmol)溶于超干二氯甲烷(10ml)中，氮气保护，冰浴下，加入三光气(21.4mg，0.072mmol)，然后加入三乙胺(0.5ml，3.6mmol)。在冰浴下搅拌25分钟，冰浴下，加入4-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基喹啉盐酸盐(50mg，0.18mmol)的二氯甲烷(5ml)和三乙胺(0.5ml)的溶液，该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌120分钟，加入5ml甲醇，搅拌5分钟，旋干，固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体(38mg，53.6％yield)。
[0256]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.71(d,j＝5.1hz,1h),8.57(s,1h),8.17
–
8.10(m,1h),7.95(d,j＝8.4hz,1h),7.74(ddd,j＝8.6,6.8,1.5hz,1h),7.62
–
7.48(m,3h),7.30
–
7.24(m,2h),6.88(d,j＝5.2hz,1h),4.97(t,j＝6.6hz,1h),4.07(s,2h),4.01(s,2h),2.96
–
2.84(m,2h),2.48
–
2.37(m,2h).
[0257]
lc-ms(m/z)394(m+1)。
[0258]
实施例24 6-((喹啉-3-基)氧基)-2-氮杂螺[3.4]庚-2-羧酸叔丁酯的制备
[0259]
[0260]
将6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(98.7mg，0.458mmol)溶于10ml的dmf中，加入氢化钠(61.1mg，1.5mmol)搅拌30分钟，再加入3-氯喹啉(50mg，0.3mmol)，升温75度反应1小时，倒入冰水(20ml)，用乙酸乙酯(20ml)萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏得到残留物，然后柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝3/2],获得白色固体(30mg，49％yield)，lc-ms(m/z)341(m+1)。
[0261]
实施例25 3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基喹啉盐酸盐的制备
[0262][0263]
6-((喹啉-3-基)氧基)-2-氮杂螺[3.4]庚-2-羧酸叔丁酯(30mg，0.088mmol)溶于20ml二氯甲烷，然后加入浓盐酸(0.5ml)。在室温下搅拌3小时后直接浓缩获得白色固体(23.1m g，95％yield)，lc-ms(m/z)241(m+1)。
[0264]
实施例26 n-(4-氯苯基)-6-(喹啉-3-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0265][0266]
对氯苯胺(13.5mg，0.1mmol)溶于超干二氯甲烷(10ml)中，氮气保护，冰浴下，加入三光气(13mg，0.043mmol)，然后加入三乙胺(0.5ml，3.6mmol)。在冰浴下搅拌25分钟，冰浴下，加入3-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基喹啉盐酸盐(23.1mg，0.08mmol)的二氯甲烷(5ml)和三乙胺(0.5ml)的溶液，该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌120分钟，加入5ml甲醇，搅拌5分钟，旋干，固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体(25mg，79％yield)。
[0267]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(d,j＝2.8hz,2h),7.95
–
7.88(m,2h),7.63
–
7.52(m,5h),7.27(d,j＝8.9hz,2h),4.86
–
4.82(m,1h),4.06(s,2h),3.99(s,2h),2.89
–
2.84(m,2h),2.37
–
2.32(m,2h).
[0268]
lc-ms(m/z)394.2(m+1)。
[0269]
实施例27 6-(喹唑啉-4-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-羧酸叔丁酯的制备
[0270][0271]
将6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(155.5mg，0.729mmol)溶于20ml的dmf中，冰浴下加入氢化钠(120mg，3mmol)搅拌30分钟，再加入3-氯喹啉(100mg，0.6mmol)，室温反应0.5小时，倒入冰水(30ml)，用乙酸乙酯(20ml)萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干得褐色液体(120mg，58％yield)。lc-ms(m/z)342(m+1)。
[0272]
实施例28 4-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基喹唑啉三氟乙酸盐的制备
[0273][0274]
6-(喹唑啉-4-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-羧酸叔丁酯(70mg，0.2mmol)溶于20ml二氯甲烷，然后加入三氟乙酸(0.5ml)。在室温下搅拌3小时后直接浓缩获得灰色液体(58.7m g，95％yield)。lc-ms(m/z)241(m+1)。
[0275]
实施例29 n-(4-氯苯基)-6-(喹唑啉-4-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0276][0277]
对氯苯胺(31.3mg，0.24mmol)溶于超干二氯甲烷(10ml)中，氮气保护，冰浴下，加入三光气(24mg，0.08mmol)，然后加入三乙胺(0.5ml，3.6mmol)。在冰浴下搅拌25分钟，冰浴下，加入4-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基喹唑啉三氟乙酸盐(58.7mg，0.195mmol)的二氯甲烷(5ml)和三乙胺(0.5ml)的溶液，该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌120分钟，加入5ml甲醇，搅拌5分钟，旋干，固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体(30mg，39％yield)。
[0278]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.78(s,1h),8.56(s,1h),8.21
–
8.13(m,1h),8.01
–
7.86(m,2h),7.70(ddd,j＝8.2,6.6,1.5hz,1h),7.57
–
7.49(m,2h),7.31
–
7.20(m,2h),5.40(p,j＝6.9hz,1h),5.00(d,j＝6.2hz,4h),2.90
–
2.80(m,2h),2.49
–
2.42(m,2h).
[0279]
lc-ms(m/z)395(m+1)。
[0280]
实施例30 n-(4-氟苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-3-氮杂环[3.1.0]己-3-甲
酰胺的制备
[0281][0282]
对氟苯胺(19.3mg，0.174mmol)溶于超干二氯甲烷(10ml)中，氮气保护，冰浴下，加入三光气(17.2mg，0.058mmol)，然后加入三乙胺(0.5ml，3.6mmol)。在冰浴下搅拌25分钟，冰浴下，加入4-((3-氮杂环[3.1.0]己-4-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(38.8mg，0.138mmol)的二氯甲烷(5ml)和三乙胺(0.5ml)的溶液，该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌120分钟，加入5ml甲醇，搅拌5分钟，旋干，固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体(18mg，34％yield)。
[0283]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(d,j＝5.1hz,1h),8.23(s,1h),8.04(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.73(dd,j＝9.7,2.9hz,1h),7.70
–
7.62(m,1h),7.56
–
7.47(m,2h),7.30(d,j＝5.1hz,1h),7.11
–
7.02(m,2h),3.97(d,j＝1.5hz,1h),3.92(d,j＝10.5hz,2h),3.56(dt,j＝10.3,2.3hz,2h),2.17(dt,j＝3.0,1.5hz,2h).
[0284]
lc-ms(m/z)382(m+1)。
[0285]
实施例31 n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-3-氮杂环[3.1.0]己-3-甲酰胺的制备
[0286][0287]
对氯苯胺(22.3mg，0.174mmol)溶于超干二氯甲烷(10ml)中，氮气保护，冰浴下，加入三光气(17.2mg，0.058mmol)，然后加入三乙胺(0.5ml，3.6mmol)。在冰浴下搅拌25分钟，冰浴下，加入4-((3-氮杂环[3.1.0]己-4-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(38.8mg，0.138mmol)的二氯甲烷(5ml)和三乙胺(0.5ml)的溶液，该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌120分钟，加入5ml甲醇，搅拌5分钟，旋干，固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/20]，获得白色固体n-(4-氯苯基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-3-氮杂环[3.1.0]己-3-甲酰胺(25mg，44.9％yield)。
[0288]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(d,j＝5.1hz,1h),8.32(s,1h),8.04(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.72(dd,j＝9.7,2.9hz,1h),7.70
–
7.62(m,1h),7.61
–
7.54(m,2h),7.32
–
7.25(m,3h),3.97(t,j＝1.5hz,1h),3.93(d,j＝10.5hz,2h),3.57(dt,j＝10.5,2.2hz,2h),2.16(dt,j＝3.0,1.5hz,2h).
[0289]
lc-ms(m/z)398(m+1)。
[0290]
实施例32 n-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0291][0292]
白色固体n-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备(55mg，85％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(45mg，0.15mmol)和2,3-二氢苯并呋喃-5-胺(24.9mg，0.18mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0293]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.18(s,1h),8.02(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.79(dd,j＝9.7,3.0hz,1h),7.69
–
7.60(m,1h),7.35(d,j＝2.2hz,1h),7.09(dd,j＝8.6,2.3hz,1h),6.92(d,j＝5.2hz,1h),6.62(d,j＝8.5hz,1h),4.97(p,j＝6.6hz,1h),4.46(t,j＝8.7hz,2h),4.02(s,2h),3.96(s,2h),3.12(t,j＝8.6hz,2h),2.92
–
2.83(m,2h),2.47
–
2.37(m,2h).
[0294]
lc-ms(m/z)420(m+1)。
[0295]
实施例33 n-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0296][0297]
白色固体n-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)-6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备(35mg，52％yield)是由4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(45mg，0.15mmol)和2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-胺(27.8mg，0.18mmol)按照实施例3中的类似步骤制备而成。
[0298]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,j＝5.1hz,1h),8.21(s,1h),8.02(dd,j＝9.2,5.4hz,1h),7.79(dd,j＝9.7,2.9hz,1h),7.65(td,j＝8.8,2.9hz,1h),7.09(d,j＝2.5hz,1h),6.97
–
6.85(m,2h),6.70(d,j＝8.7hz,1h),4.97(p,j＝6.6hz,1h),4.25
–
4.13(m,4h),4.02(s,2h),3.96(s,2h),2.96
–
2.80(m,2h),2.48
–
2.37(m,2h).
[0299]
lc-ms(m/z)436(m+1)。
[0300]
实施例34 6-(异喹啉-1-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-羧酸叔丁酯的制备
[0301][0302]
6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(106mg，0.5mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，加入氢化钠(92mg，60％in mineral，2.5mmol)，该反应液在室温搅拌5分钟，然后加入1-氯异喹啉(82mg，0.5mmol).该反应液在室温搅拌15小时，加水淬灭，加水析出固体，过滤，水洗，得到淡黄色固体6-(异喹啉-1-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-羧酸叔丁酯(80mg，47％yield)，lc-ms(m/z)341(m+1)。
[0303]
实施例35 1-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基异喹啉盐酸盐的制备
[0304][0305]
6-(异喹啉-1-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-羧酸叔丁酯(80mg，0.23mmol)溶于5ml二氯甲烷，然后加入浓盐酸(1ml)。该反应液在室温下搅拌16小时后直接浓缩获得灰白色固体1-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基异喹啉盐酸盐(100mg，95％yield)，lc-ms(m/z)241(m+1)。
[0306]
实施例36 n-(4-氯苯基)-6-(异喹啉-1-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺的制备
[0307][0308]
对氯苯胺(30mg，0.24mmol)溶于超干四氢呋喃(5ml)中，冰浴下，加入三光气(70mg，0.24mmol)，然后慢慢滴加入三乙胺(0.2ml，1.6mmol)。该反应液在冰浴下搅拌25分钟，然后减压浓缩，加入超干n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，冰浴下，加入1-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基异喹啉盐酸盐(60mg，0.21mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，然后再慢慢滴加三乙胺(0.3ml，2.3mmol)。该反应液在冰浴下搅拌10分钟后，撤去冰浴，该反应液在室温搅拌40分钟，然后倒入水中，析出固体，过滤，水洗，干燥获得固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/25]，获得白色固体n-(4-氯苯基)-6-(异喹啉-1-基氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-甲酰胺(68mg，70％yield)。
[0309]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.56(s,1h),8.18(d,j＝8.3hz,1h),7.98(d,j＝5.8hz,1h),7.89(d,j＝8.2hz,1h),7.80
–
7.72(m,1h),7.63(t,j＝7.6hz,1h),7.56
–
7.51(m,2h),7.38(d,j＝5.9hz,1h),7.30
–
7.24(m,2h),5.32(p,j＝6.9hz,1h),4.07(s,2h),4.00(s,
2h),2.88
–
2.76(m,2h),2.45
–
2.36(m,2h).
[0310]
lc-ms(m/z)394(m+1)。
[0311]
实施例37 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸乙酯的制备
[0312][0313]
4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(600mg，2.0mmol)、2-溴丙酸乙酯(841mg，4.0mmol)和碳酸钾(962mg，6.0mmol)溶于乙腈(30ml)中。该反应液在室温下搅拌16小时，然后倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相干燥，过滤，减压蒸馏得到残留物，然后柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/25]，获得无色油状物2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸乙酯(450mg，61％yield)，lc-ms(m/z)259(m+1)。
[0314]
实施例38 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸的制备
[0315][0316]
2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸乙酯(380mg，1.0mmol)溶于乙醇(8ml)和水(0.5ml)中，然后加入氢氧化钠(85mg，2.0mmol)。该反应液在室温下搅拌5小时，然后加入浓盐酸调ph3～4，直接浓缩获得粗品灰白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸(460mg，粗品)，直接用于下一步。lc-ms(m/z)331(m+1)。
[0317]
实施例39 n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺的制备
[0318][0319]
2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸(350mg，1.1mmol)、对氯苯胺(270mg，2.2mmol)和n，n-二异丙基乙胺(0.66ml，3.6mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(15ml)中，然后加入1-羟基苯并三唑(223mg，1.6mmol)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰
二亚胺盐酸盐(420mg，2.2mmol)。该反应液在室温下搅拌15小时，然后倒入水中，碳酸氢钠水溶液调ph8-10，析出固体，过滤，水洗，干燥获得带黄色固体柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/25],获得白色固体n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂-螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺(130mg，28％yield)，lc-ms(m/z)440(m+1)。
[0320]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.72(s,1h),8.68(d,j＝5.2hz,1h),8.01(dd,j＝9.6,5.2hz,1h),7.77(dd,j＝9.6,2.8hz,1h),7.72
–
7.62(m,3h),7.38
–
7.34(m,2h),6.90(d,j＝5.2hz,1h),4.96
–
4.90(m,1h),3.37
–
3.25(m,4h),2.97(dd,j＝13.2,6.8hz,1h),2.84
–
2.77(m,2h),2.34(dd,j＝13.2,6.8hz,2h),1.11(d,j＝6.8hz,3h).
[0321]
实施例40 n-环己基-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺的制备
[0322][0323]
白色固体n-环己基-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺(56mg，37％yield)是由2-(6
–
((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸(120mg,0.36mmol)和环己基胺(30mg,0.36mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)412(m+1)。
[0324]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.71(d,j＝5.2hz,1h),8.03(dd,j＝9.6,5.2hz,1h),7.78(dd,j＝9.6,2.8hz,1h),7.69
–
7.64(m,1h),7.28(d,j＝8.4hz,1h),6.92(d,j＝5.2hz,1h),4.98
–
4.92(m,1h),3.56
–
3.53(m,1h),3.32
–
3.23(m,2h),3.21
–
3.19(m,2h),2.84
–
2.70(m,3h),2.33(dd,j＝12.0,6.8hz,2h),1.71
–
1.67(m,4h),1.57(d,j＝12.0hz,1h),1.30
–
1.12(m,6h),0.99(d,j＝6.8hz,3h).
[0325]
实施例41 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-n-(吡啶-3-基)丙酰胺的制备
[0326][0327]
白色固体n-环己基-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺(15mg,10％yield)是由2-(6
–
((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸(120mg,0.36mmol)和3-氨基吡啶(30mg,0.31mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成，lc-ms(m/z)407(m+1)。
[0328]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.81(s,1h),8.82(d,j＝2.4hz,1h),8.68(d,j＝5.2hz,
1h),8.26(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.10
–
8.07(m,1h),8.01(dd,j＝9.6,5.4hz,1h),7.77(dd,j＝9.6,2.8hz,1h),7.67
–
7.62(m,1h),7.33(dd,j＝8.4,4.8hz,1h),6.90(d,j＝5.2hz,1h),4.97
–
4.905(m,1h),3.380
–
3.27(m,4h),3.00(q,j＝6.8hz,1h),2.87
–
2.76(m,2h),2.34(dd,j＝12.0,6.8hz,2h),1.13(d,j＝6.8hz,3h).
[0329]
实施例42 6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯的制备
[0330][0331]
白色固体6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(50mg,9％yield)是由6-(羟甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(388mg,1.82mmol)和4-氯-6-氟喹啉(270mg,1.5mmol)按照实施例1中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)359(m+1)。
[0332]
实施例43 4-((3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)甲氧基)-6-氟喹啉盐酸盐的制备
[0333][0334]
白色固体4-((3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)甲氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(50mg,90％yield)是由6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(50mg,0.14mmol)按照实施例2中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)259(m+1)。
[0335]
实施44 2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯的制备
[0336][0337]
白色固体2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯(30mg,60％yield)是由4-((3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)甲氧基)-6-氟喹啉盐酸盐(50mg,0.19mmol)和2-溴丙酸乙酯(63mg,0.38mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)359(m+1)。
[0338]
实施45 2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸的制备
[0339]
[0340]
白色固体2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(25mg,92％yield)是由2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯(30mg,0.08mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)331(m+1)。
[0341]
实施46 n-(4-氯苯基)-2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酰胺(12659)的制备
[0342][0343]
淡黄色固体n-(4-氯苯基)-2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酰胺(8mg,24％yield)是由2-(6-(((6-氟喹啉-4-基)氧代)甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(25mg,0.08mmol)和4-氯丙酰胺(20mg,0.16mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成，lc-ms(m/z)440(m+1)。
[0344]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.76(s,1h),8.70(d,j＝5.2hz,1h),8.02(dd,j＝9.2,5.2hz,1h),7.78(dd,j＝9.2,3.0hz,1h),7.70
–
7.61(m,3h),7.37
–
7.31(m,2h),7.04(d,j＝5.2hz,1h),4.25
–
4.07(m,2h),3.19(q,j＝6.8hz,1h),3.01(dd,j＝14.4,8.4hz,2h),2.65(td,j＝9.6,8.4,2.8hz,1h),2.58
–
2.53(m,1h),1.85(dt,j＝7.2,4.4hz,1h),1.59(tq,j＝7.2,4.4,3.6hz,2h),1.22(d,j＝6.8hz,3h).
[0345]
实施例47 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯的制备
[0346][0347]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯(90mg,90％yield)是由4-((3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)氧代)-6-付喹啉盐酸盐(80mg,0.29mmol)和2-溴丙酸乙酯(103mg,0.58mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)345(m+1)。
[0348]
实施例48 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸的制备
[0349][0350]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(100mg,73％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯(90mg,0.26mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)317(m+1)。
[0351]
实施例49 n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酰胺的制备
[0352][0353]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(45mg,36％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(100mg,0.32mmol)和4-氯苯胺(37mg,0.29mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)426(m+1)。
[0354]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.77(s,1h),8.78(d,j＝5.2hz,1h),8.03(dd,j＝9.2,5.2hz,1h),7.74
–
7.61(m,4h),7.41
–
7.31(m,2h),7.25(d,j＝5.2hz,1h),4.39(s,1h),3.24
–
3.21(m,3h)，2.78
–
2.68(m,2h),1.93(s,1h),1.26(d,j＝6.8hz,3h).
[0355]
实施例50 6
–
((6-氟喹啉-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的制备
[0356][0357]
4-氯-6-氟喹啉(271mg,1.5mmol)、6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(318mg，1.5mmol)和碳酸铯(1.5g，4.5mmol)溶于二氧六环(5ml)中，然后加入2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(71mg，0.15mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(70mg，0.075mmol)，氮气保护。该反应液加热123度搅拌7小时，然后倒入水中，乙酸乙酯萃取，水洗，有机相减压浓缩得到残留物，柱层析分离[ea]，获得白色固体6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(280mg，52％yield)，lc-ms(m/z)358(m+1)
[0358]
实施例51 6-氟-n-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)喹啉-4-胺盐酸盐的制备
[0359][0360]
白色固体6-氟-n-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)喹啉-4-胺盐酸盐(128mg，94％yield)是由6
–
((6-氟喹啉-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(180mg，0.51mmol)按照实施例2中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)258(m+1)。lc-ms(m/z)258(m+1)。
[0361]
实施例52 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸乙酯的制备
[0362][0363]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸乙酯(150mg，83％yield)是由6-氟-n-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)喹啉-4-胺盐酸盐(128mg，0.5mmol)和2-溴丙酸乙酯(100mg，0.55mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)358(m+1)。
[0364]
实施例53 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧代)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸的制备
[0365][0366]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(100mg，72％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸乙酯(150mg，0.42mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)330(m+1)。
[0367]
实施例54 n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺的制备
[0368][0369]
白色固体n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺(5mg，4％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)胺)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(100mg，0.3mmol)和4-氯苯胺按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)439(m+1)。
[0370]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.15(s,1h),8.44(d,j＝5.6hz,1h),8.23(dd,j＝10.8,2.8hz,1h),7.89(dd,j＝10.2,5.6hz,1h),7.72
–
7.60(m,3h),7.38(d,j＝8.4hz,2h),6.46(d,j＝5.6hz,1h),4.05(dd,j＝14.0,6.8hz,1h),3.72
–
3.51(m,5h),2.74(d,j＝10.0hz,2h),2.33
–
2.28(m,2h),2.06
–
1.92(m,1h),1.24(d,j＝4.8hz,3h).
[0371]
实施例55 6
–
((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的制备
[0372][0373]6–
((6-氟喹啉-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(150mg，0.42mmol)溶于超干四氢呋喃(5ml)中，加入钠氢(84mg，2.1mmol)，氮气保护。该反应液室温搅拌5分钟，然后再加入碘甲烷(89mg，0.63mmol)，氮气保护。该反应液加热60度搅拌7小时，然后加水淬灭，减压蒸馏去掉四氢呋喃，乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，减压浓缩得到残留物，柱层析分离[ea]，获得无色油状物6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(50mg，32％yield),lc-ms(m/z)372(m+1)。
[0374]
实施例56 6-氟-n-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)喹啉-4-胺盐酸盐的制备
[0375][0376]
白色固体6-氟-n-甲基-n-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)喹啉-4-胺盐酸盐(50mg,57％yield)是由6
–
((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(50mg,0.13mmol)按照实施例2中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)272(m+1)。
[0377]
实施例57 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸乙酯的制备
[0378][0379]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸乙酯(50mg,83％yield)是由6-氟-n-甲基-n-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)喹啉-4-胺盐酸盐(50mg,0.16mmol)和2-溴丙酸乙酯(60mg,0.32mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)372(m+1)。
[0380]
实施例58 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸的制备
[0381][0382]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(40mg,82％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸乙酯(50mg,0.13mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)344(m+1)。
[0383]
实施例59 n-(4-氯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺的制备
[0384][0385]
白色固体n-(4-氯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰胺(6mg,11％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(40mg,0.12mmol)和4-氯苯胺按照实施例39中的类似步骤制备而成(20mg,0.16mmol)。lc-ms(m/z)453(m+1)。
[0386]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.74(s,1h),8.62(d,j＝5.2hz,1h),8.01(dd,j＝9.2,5.2hz,1h),7.75
–
7.65(m,3h),7.63
–
7.58(m,1h),7.40
–
7.32(m,2h),6.86(d,j＝5.2hz,
1h),3.90
–
3.83(m,1h),3.23(s,2h),3.01(s,1h),2.84(s,3h),2.16
–
2.06(m,2h),1.31
–
1.25(m,4h),1.12(d,j＝6.8hz,3h).
[0387]
实施例60 2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯的制备
[0388][0389]
白色固体2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(400mg，60％yield)是由八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(457mg，1.7mmol)和4-氯-6-氟喹啉(350mg，1.9mmol)按照实施例50中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)372(m+1)
[0390]
实施例61 6-氟-4-(八氢-2h-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基)喹啉盐酸盐的制备
[0391][0392]
白色固体6-氟-4-(八氢-2h-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基)喹啉盐酸盐(380mg，93％yield)是由2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(400mg，1.0mmol)按照实施例2中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)272(m+1)。
[0393]
实施例62 2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸乙酯的制备
[0394][0395]
淡黄色油状物2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸乙酯(380mg，73％yield)是由6-氟-4-(八氢-2h-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基)喹啉盐酸盐(380mg，1.2mmol)和2-溴丙酸乙酯(362mg，2.4mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)372(m+1)。
[0396]
实施例63 2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸的制
备
[0397][0398]
白色固体2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸(300mg，85％yield)是由2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸乙酯(380mg，1.0mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)344(m+1)。
[0399]
实施例64 n-(4-氯苯基)-2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酰胺的制备
[0400][0401]
白色固体n-(4-氯苯基)-2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酰胺(20mg，15％yield)是由2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸(100mg，0.29mmol)和4-氯苯胺(74mg，0.58mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成(。lc-ms(m/z)453(m+1)。
[0402]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.98(s,0.5h),9.91(s,0.5h),8.38(dd,j＝5.6,1.6hz,1h),8.11
–
8.06(m,1h),7.87(dd,j＝9.2,6.0hz,1h),7.80
–
7.73(m,2h),7.58
–
7.53(m,1h),7.38
–
7.35(m,2h),6.54(dd,j＝5.6,3.2hz,1h),4.11
–
4.05(m,1h),3.77
–
3.72(m,1h),3.68
–
3.60(m,1h),3.50
–
3.40(m,2h),3.26
–
3.21(m,1h),2.80
–
2.67(m,1h),2.62
–
2.51(m,2h),2.32
–
2.28(m,2h),1.76
–
1.61(m,2h),1.23
–
1.16(m,3h).
[0403]
实施例65 2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)-n-(3-甲氧基苯基)丙酰胺的制备
[0404][0405]
白色固体2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)-n-(3-甲氧基苯基)丙酰胺(15mg，12％yield)是由2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸(100mg，0.29mmol)和3-甲氧基苯胺(80mg，0.60mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)449(m+1)。
[0406]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.81(s,0.5h),9.76(s,0.5h),8.37(d,j＝5.6hz,1h),8.10
–
8.00(m,1h),7.87(dd,j＝9.2,6.0hz,1h),7.56
–
7.38(m,2h),7.23
–
7.20(m,2h),6.66
–
6.62(m,1h),6.55
–
6.53(m,1h),4.03
–
3.96(m,1h),3.78
–
3.73(m,3h),3.66
–
3.60(m,1h),3.52
–
3.48(m,1h),3.28
–
3.23(m,1h),2.78
–
2.54(m,3h),2.33
–
2.28(m,2h),2.03
–
1.97(m,1h),1.74
–
1.41(m,3h),1.23
–
1.16(m,3h).
[0407]
实施例66 2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺的制备
[0408][0409]
白色固体2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)-n-(3-甲氧基苯基)丙酰胺(12mg，11％yield)是由2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸(85mg，0.24mmol)和4-甲氧基苯胺(65mg，0.48mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)449(m+1)。
[0410]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.70(s,0.5h),δ9.64(s,0.5h),8.38(d,j＝5.6hz,1h),8.11
–
8.06(m,1h),7.89
–
7.85(m,1h),7.63
–
7.53(m,3h),6.92
–
6.87(m,2h),6.55
–
6.53(m,1h),4.08
–
4.04(m,1h),3.78
–
3.72(m,4h),3.68
–
3.62(m,1h),3.50
–
3.46(m,1h),3.23
–
3.18(m,1h),2.79
–
2.67(m,1h),2.615
–
2.55(m,2h),2.33
–
2.296(m,2h),1.78
–
1.61(m,3h),1.23
–
1.16(m,3h).
[0411]
实施例67 2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)-n-苯基-丙酰胺的制备
[0412][0413]
白色固体2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)-n-(3-甲氧基苯基)丙酰胺(10mg，10％yield)是由2-(2-(6-氟喹啉-4-基)八氢-5h-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基)丙酸(80mg，0.23mmol)和苯胺(45mg，0.46mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)419(m+1)。
[0414]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.87(s,0.5h),δ9.79(s,0.5h),8.42(d,j＝6.0hz,1h),8.20
–
8.15(m,1h),7.93
–
7.90(m,1h),7.74
–
7.63(m,3h),7.35
–
7.29(m,2h),7.09
–
7.04(m,1h),6.62
–
6.60(m,1h),4.16
–
4.12(m,1h),3.87
–
3.72(m,2h),3.61
–
3.57(m,1h),3.43
–
3.268(m,3h),2.82
–
2.58(m,3h),2.34
–
2.29(m,2h),1.76
–
1.61(m,2h),1.26
–
1.15(m,3h).
[0415]
实施例68 6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯的制备
[0416][0417]
白色固体6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(390mg，57％yield)是由6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(440mg，2.2mmol)和4-氯-6-氟喹啉(365mg，2.0mmol)按照实施例50中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)344(m+1)。
[0418]
实施例69 n-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-6-氟喹啉-4-胺盐酸盐的制备
[0419][0420]
白色固体n-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-6-氟喹啉-4-胺盐酸盐(300mg，95％yield)是由6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(390mg，1.1mmol)按照实施例2中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)244(m+1)。
[0421]
实施例70 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯的制备
[0422][0423]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯(350mg，90％yield)是由6-氟-4-(八氢-2h-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基)喹啉盐酸盐(300mg，1.1mmol)和2-溴丙酸乙酯(402mg，2.2mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)344(m+1)。
[0424]
实施例71 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸的制备
[0425][0426]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(320mg，95％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸乙酯(350mg，1.0mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)316(m+1)。
[0427]
实施例72 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺的制备
[0428][0429]
白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺7mg，7％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(80mg，0.25mmol)和4-氯苯胺(64mg，0.5mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)421(m+1)。
[0430]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.77(s,1h),8.44(d,j＝5.2hz,1h),7.99(dd,j＝11.2,2.8hz,1h),7.83(dd,j＝9.2,5.2hz,1h),7.68
–
7.65(m,2h),7.53
–
7.48(m,1h),7.39(s,1h),7.36
–
7.32(m,2h),6.69(d,j＝5.2hz,1h),3.24
–
3.12(m,3h),2.91(s,1h),2.73(d,j＝8.4hz,1h),2.65(d,j＝8.4hz,1h),1.68(s,2h),1.24(d,j＝6.8hz,3h).
[0431]
实施例73 2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-n-(4-甲氧基苯基)丙酰胺的制备
甲氧基苯基)丙酰胺(20mg，19％yield)是由2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)丙酸(80mg，0.25mmol)和3-甲氧基苯胺(65mg，0.5mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)421(m+1)。
[0442]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),8.46(d,j＝5.2hz,1h),8.03(d,j＝8.4hz,1h),7.86(dd,j＝9.2,5.6hz,1h),7.54(t,1h),7.45(s,1h),7.37(s,1h),7.21
–
7.19(m,2h),6.72
–
6.53(m,2h),3.72(s,3h),3.22
–
3.19(m,3h),2.91(s,1h),2.77(d,j＝8.4hz,1h),2.67(d,j＝8.4hz,1h),1.70(s,2h),1.25(d,j＝6.8hz,3h).
[0443]
实施例76 2-溴-3-羟基丙酸的制备
[0444][0445]
l-丝氨酸(500mg,4.8mmol)和溴化钠溶于2.5m硫酸水溶液(10ml)中，冰盐浴下慢慢加入亚硝酸钠(460mg,6.7mmol).该反应液慢慢升温至室温反应15小时，然后加水和乙酸乙酯萃取，分别盐水、水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏获得淡黄色油状物2-溴-3-羟基丙酸(400mg,30％yield).lc-ms(m/z)169(m+1)
[0446]
实施例77 2-溴-n-(4-氯苯基)-3-羟基丙酰胺的制备
[0447][0448]
2-溴-3-羟基丙酸(200mg，1.2mmol)、对氯苯胺(100mg，0.78mmol)和n，n-二异丙基乙胺(0.6ml，3.1mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，然后加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(600mg，1.6mmol)。该反应液在室温下搅拌5小时，然后倒入水中，碳酸氢钠水溶液调ph8-10，乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，减压浓缩获得残留物柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝1/2],获得浅棕色固体2-溴-n-(4-氯苯基)-3-羟基丙酰胺(100mg，46％yield)，lc-ms(m/z)279(m+1)。
[0449]
实施例78 n-(4-氯苯基)-2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-羟基丙酰胺的制备
[0450][0451]
2-溴-n-(4-氯苯基)-3-羟基丙酰胺(65mg，0.23mmol)、n-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基)-6-氟喹啉-4-胺盐酸盐(40mg，0.16mmol)和碳酸钾(68mg，48mmol)溶于乙腈(5ml)中。该反应液在80度下搅拌8小时，然后倒入水中，析出固体，过滤，残留物柱层析分离[甲醇/二氯甲烷＝1/25]，获得白色固体2-(6-((6-氟喹啉-4-基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丙酸乙酯(13mg，18％yield)，lc-ms(m/z)441(m+1)。
[0452]
实施例79 5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-甲酸叔丁酯的制备
[0453][0454]
白色固体5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-甲酸叔丁酯(200mg，65％yield)是由5-氨基六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-甲酸叔丁酯(210mg，0.9mmol)和4-氯-6-氟喹啉(150mg，0.82mmol)按照实施例50中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)372(m+1)。
[0455]
实施例80 6-氟-n-(八氢环戊烷并[c]吡咯-5-基)喹啉-4-胺盐酸盐的制备
[0456][0457]
白色固体6-氟-n-(八氢环戊烷并[c]吡咯-5-基)喹啉-4-胺盐酸盐(150mg，91％yield)是由5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-甲酸叔丁酯(200mg，0.54mmol)按照实施例2中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)272(m+1)。
[0458]
实施例81 2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酸乙酯的制备
[0459][0460]
白色固体2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酸乙酯(100mg，55％yield)是由6-氟-n-(八氢环戊烷并[c]吡咯-5-基)喹啉-4-胺盐酸盐(150mg，0.49mmol)和2-溴丙酸乙酯(177mg，0.98mmol)按照实施例37中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)372(m+1)。
[0461]
实施例82 2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酸的制备
[0462][0463]
白色固体2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酸(80mg，87％yield)是由2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酸乙酯(100mg，0.27mmol)按照实施例38中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)344(m+1)。
[0464]
实施例83 n-(4-氯苯基)-2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酰胺的制备
[0465][0466]
淡黄色固体n-(4-氯苯基)-2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酰胺(15mg，14％yield)是由2-(5-((6-氟喹啉-4-基)氨基)六氢环戊烷并[c]吡咯-2(1h)-基)丙酸(80mg，0.23mmol)和4-氯苯胺(60mg，0.46mmol)按照实施例39中的类似步骤制备而成。lc-ms(m/z)453(m+1)。
[0467]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.84(s,1h),8.37(d,j＝5.6hz,1h),8.20(dd,j＝11.2,2.8hz,1h),7.84(dd,j＝9.2,5.6hz,1h),7.70(d,j＝8.8hz,2h),7.57
–
7.52(m,1h),7.37(d,j＝8.8hz,2h),6.93(d,j＝6.4hz,1h),6.56(d,j＝5.6hz,1h),4.24
–
4.17(m,1h),3.10
–
3.05(m,1h),2.69
–
2.66(m,4h),2.44
–
2.37(m,1h),2.03
–
1.83(m,5h),1.29(d,j＝6.8hz,3h).
[0468]
实施例84苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基甘氨酸甲酯的制备
[0469][0470]
3,4-亚甲二氧基苯胺(160mg，1.16mmol)溶于20mldmf中,加入碳酸钾(480mg,3.48mmol)和溴乙酸乙酯(213mg,1.4mmol)，室温反应16小时，反应液倒入40ml水中，用20ml乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，滤过，旋干有机相，柱层析分离[乙酸乙酯/石油醚＝1/6]，获得褐色油状物苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基甘氨酸甲酯(175mg,72％yield),lc-ms(m/z)210(m+h)。
[0471]
实施例85苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基甘氨酸的制备
[0472]
[0473]
苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基甘氨酸甲酯(175mg，3.42mmol)溶于20ml甲醇，加入氢氧化钠(164mg，4.1mmol)，室温反应16小时，倒入20ml水中，用盐酸调ph＝4，然后用乙酸乙酯20ml萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，滤过，旋干有机相，获得褐色固体苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基甘氨酸(160mg，98％yield)，lc-ms(m/z)196(m+h)。
[0474]
实施例86 2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)乙酰基)哌啶-1-基)乙基-1-酮的制备
[0475][0476]
1-boc-4-[2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)乙酰基]哌啶(100mg，0.25mmol)溶于二氯甲烷20ml中，再加入0.5ml盐酸，室温反应2小时，旋干，加入10mldmf搅拌至全溶,再加入苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基甘氨酸(58.5mg，0.3mmol)以及1-羟基苯并三唑(67.7mg，0.5mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(95.6mg,0.5mmol)，n,n-二异丙基乙胺1ml，室温反应16小时，倒入40ml水中，用乙酸乙酯30ml萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，滤过，旋干有机相，柱层析分离[二氯甲烷/甲醇＝100/3],获白色固体2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)乙酰基)哌啶-1-基)乙基-1-酮(50mg，42％yield)，lc-ms(m/z)477(m+h)。
[0477]
实施例87 2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮的制备
[0478][0479]
2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)乙酰基)哌啶-1-基)乙基-1-酮(50mg，0.1mmol)溶于10ml甲醇中，氮气保护下，用冰浴降温到0度，再加入硼氢化钠(11.3mg,0.1mmol),室温反应2小时，加入饱和氯化铵水溶液1ml，搅拌5分钟，倒入20ml水中，用乙酸乙酯20ml萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋干有机相，柱层析分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1)，获得淡褐色固体2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烷-5-基氨基)-1-(4-(2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)-1-羟基乙基)哌啶-1-基)乙基-1-酮(15mg，30％yield)。
[0480]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.00(s,0.7h),7.97(s,0.3h),7.47-7.42(m,2h),7.22(s,0.3h),7.20(s,0.7h),7.14-7.07(m,1h),6.65(d,j＝8.4hz,1h),6.42(d,j＝2.0hz,1h),6.07(dd,j＝8.4,2.0hz,1h),5.83(s,2h),5.72-5.67(m,0.3h),5.64-5.57(m,0.7h),5.19-5.11(m,0.3h),4.73(t,j＝4.8hz,0.8h),4.42(t,j＝12.5hz,1h),3.94(s,br,1h),3.80(s,2h),3.43(s,br,1h),3.00-2.82(m,1h),2.41-2.23(m,1h),2.04-1.86(m,0.7h),
1.87-1.76(m,0.3h),1.74-1.42(m,3h),1.37-0.97(m,4h).
[0481]
lc-ms(m/z)479(m+h)。
[0482]
体外生物学评价
[0483]
本检测的目的在于综合评价不同化合物对人吲哚胺2,3-双加氧酶1(hido1)的体外酶学抑制活性和对细胞模型的酶学抑制活性。
[0484]
实施例88细胞水平抑制活性检测
[0485]
ido1酶除了在免疫细胞如髓源性抑制细胞(mdsc)中组成性表达外，许多肿瘤细胞也会上调表达ido1，或经细胞因子如ifn-γ诱导表达。在本技术中，本发明人利用ifn-γ诱导hela细胞表达ido1酶为模型，检测化合物在细胞水平的ido1酶学抑制活性。
[0486]
主要实验原理
[0487]
hela细胞为人宫颈癌细胞系，在人ifn-γ诱导下可上调表达内源性ido1酶。通过在细胞培养液中添加底物l-色氨酸，可以对细胞上清进行酶催化产物犬尿氨酸的检测。实验采用培养的hela细胞，在人ifn-γ刺激下，与不同浓度的测试化合物共孵育指定时间后，利用酶产物与对二甲氨基苯甲醛的颜色反应方法，检测测试化合物处理对细胞ido酶活性的影响。
[0488]
实验材料与试剂
[0489]
重组人ifn-γ细胞因子购自生工生物公司，细胞培养用无酚红dmem购自gibco公司。检测试剂如l-色氨酸(生工，a601911-0050)、犬尿氨酸(sigma，k8625-100mg)、三氯乙酸(生工，a600968-0250)、对二甲氨基苯甲醛(天津市大茂化学试剂厂)、细胞培养用96孔平底板(corning,costar 3599)。
[0490]
实验方法
[0491]
按常规细胞培养实验操作流程，在96孔平底板中进行。
[0492]
(1)hela细胞按照适当的浓度(约20000个/每孔)接种到96孔培养板中，经过夜贴壁后，换用含200μm l-色氨酸的无酚红dmem培养基，同时加入细胞因子人ifn-γ50ng/ml和不同浓度梯度的测试化合物(最高终浓度25μm)以及nlg919，同时设置溶剂对照(dmso)以及无细胞因子和l-色氨酸的阴性对照孔，按照3次重复孔设置。细胞继续培养48小时后进行检测。
[0493]
(2)吸出培养孔中的上清200μl，加入40μl预先配制的30％(w/v)三氯乙酸溶液，65℃反应20min。随后12000rpm离心15min。
[0494]
(3)吸取100μl离心后的上清液加入96孔平底板中，再加入等体积2％对二甲氨基苯甲醛的冰乙酸溶液混匀，室温放置10min。
[0495]
(4)使用酶标仪(elx800nb)检测每孔的吸光度值，检测波长为492nm。
[0496]
(5)测试化合物的细胞水平酶学抑制率计算公式：
[0497]
酶活抑制率(％)＝(od
溶剂对照-od
化合物检测孔
)/(od
溶剂对照-od
阴性对照
)*100％。
[0498]
另外，不同浓度梯度的测试化合物分别计算出细胞酶活抑制率后利用ec50计算器计算细胞酶活半抑制浓度(ec
50
)。
[0499]
根据上述实验方法，将本技术所述化合物进行细胞学水平ido1酶学评价(测试化合物浓度均为100nm)。数据小结见表1。
[0500]
表1本技术代表性化合物hido1细胞水平抑制率数据
[0501][0502][0503]
根据上述实验方法，将本技术所述化合物进行hido1细胞水平ec
50
测定。数据小结见表2。
[0504]
表2本技术代表性化合物hido1细胞水平ec
50
(nm)
[0505][0506][0507]
实施例89西达本胺与实施例3化合物联合抑制hela细胞的ido酶活实验
[0508]
实验材料
[0509]
人宫颈癌细胞株hela购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，于37℃，5％co2条件下常规培养；培养液为含10％胎牛血清(fetal bovine serum,fbs；gibco)和1％penicillin-streptomycin(hyclone)的dmem(gibco)。胰蛋白酶(trypsin)购自于gibco。重组人ifn-γ细胞因子购自生工生物公司。细胞培养用无酚红dmem购自gibco公司。检测试剂包括l-色氨酸(生工，a601911-0050)、犬尿氨酸(sigma，k8625-100mg)、三氯乙酸(生工，a600968-0250)、对二甲氨基苯甲醛(天津市大茂化学试剂厂)。细胞培养用96孔平底板(corning,costar 3599)。
[0510]
实验方法
[0511]
将hela细胞通过trypsin消化收集并计数后，按每孔2
×
104个接种于96孔细胞培养板中，5％co2、37℃培养。细胞接种过夜后，换用含200μm l-色氨酸的无酚红dmem培养基，同时加入细胞因子人ifn-γ50ng/ml和不同浓度的药物(按图1所示的分组和终浓度剂量给药)，同时设置溶剂对照(dmso)以及无细胞因子和l-色氨酸的阴性对照孔，按照3次重复孔设置。药物处理48小时后，吸出培养孔中的上清200μl，加入40μl预先配制的30％(w/v)三氯乙酸溶液，65℃反应20min。随后12000rpm离心15min。吸取100μl离心后的上清液加入96孔平底板中，再加入等体积2％对二甲氨基苯甲醛的冰乙酸溶液混匀，室温放置10min。通过酶标仪(elx800nb)读取每孔492nm波长处的吸光度值。各孔读数减去作为空白对照的无细胞的培养基od492-blk后获得扣除检测背景的各给药孔od492-t及无药的阳性对照孔od490-t0。
[0512]
各给药孔细胞的相对ido酶活抑制率按以下公式计算：
[0513]
ido酶活抑制率＝(od
492-t0-od
492-t
)/od
492-t0
×
100％
[0514]
实验结果
[0515]
如图1和表3所示，与溶剂对照相比，西达本胺和实施例3化合物单药均显现出一定的ido酶活抑制作用；而两药联合应用呈现显著的协同或叠加抑制效应。考虑到hdac抑制剂并不直接结合并抑制ido蛋白酶的催化活性，而是通过下调ido mrna来降低其蛋白表达从而间接抑制ido活性(he y.w.,et al.life sci,2013,93(15):509-515)，因此，表观遗传抑制剂和ido抑制剂两药联合利用不同机制发挥协同ido酶活抑制效应。
[0516]
表3西达本胺与实施例3化合物单药及联合的ido酶活抑制率
[0517] 溶剂对照西达本胺实施例3两药联合平均抑制率(％)0.5243149
[0518]
实施例90西达本胺与实施例20联合抑制hela细胞的ido酶活实验
[0519]
使用与实施例89类似的方法。得到的实验结果如图2和表4所示。
[0520]
表4西达本胺与实施例20化合物单药及联合的ido酶活抑制率
[0521] 溶剂对照西达本胺实施例20两药联合平均抑制率(％)0.5221635
[0522]
实施例91西达本胺与实施例72联合抑制hela细胞的ido酶活实验
[0523]
使用与实施例89类似的方法。得到的实验结果如图3和表5所示。
[0524]
表5西达本胺与实施例72化合物单药及联合的ido酶活抑制率
[0525] 溶剂对照西达本胺实施例72两药联合平均抑制率(％)0.5233658
[0526]
实施例92西达本胺与实施例87联合抑制hela细胞的ido酶活实验
[0527]
使用与实施例89类似的方法。得到的实验结果如图4和表6所示。
[0528]
表6西达本胺与实施例87化合物单药及联合的ido酶活抑制率
[0529] 溶剂对照西达本胺实施例87两药联合平均抑制率(％)0.5232047
[0530]
实施例93西达本胺与实施例3联合用于balb/c小鼠ct-26肿瘤模型的药效实验
[0531]
实验材料
[0532]
小鼠结肠癌细胞株ct-26购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，于37℃，5％co2条件下常规培养，培养液为含10％胎牛血清(fetal bovine serum,fbs；gibco)和1％penicillin-streptomycin(hyclone)的dmem(gibco)；胰蛋白酶(trypsin)购自于gibco。正常balb/c小鼠购自于广东省医学实验动物中心。
[0533]
实验方法
[0534]
大量扩增培养ct-26细胞并使细胞保持在对数生长状态。待细胞数量达到所需后，胰蛋白酶消化收集，大量pbs充分清洗2次以去除胰蛋白酶和血清成分，室温、800rpm离心10min，弃上清。用不含fbs的dmem培养液重悬细胞，调整细胞浓度至3
×
107/ml。
[0535]
在无菌条件下，按100μl/针将细胞悬液注射至裸鼠背部皮下，每只balb/c小鼠注射一针。注射时使用1ml一次性医用注射器，保证每只小鼠进针部位和方向基本一致。
[0536]
接种细胞8天后，肿瘤生长至平均体积在大约100mm3左右，将荷瘤小鼠随机分成四组(每组9只小鼠)，即溶剂对照组、西达本胺组(25mg/kg，灌胃，一天一次)、实施例3化合物
组(20mg/kg，灌胃，一天一次)和西达本胺与实施例3化合物联合用药组，标记后分笼饲养，每天按分组给药并观察成瘤情况。每只小鼠给药前测量体重，按每千克体重计算给药剂量，即溶剂对照组按每克体重10μl的cmc-na溶液、西达本胺组(25mg/kg)按每克体重10μl的2.5mg/ml西达本胺-cmc-na悬浊液、实施例3组(20mg/kg)按每克体重10μl的2mg/ml实施例3化合物-cmc-na悬浊液、联合用药组按每克体重10μl的每毫升含2.5mg西达本胺和2mg实施例3化合物的cmc-na悬浊液进行灌胃给药。每2天用游标卡尺测量肿瘤最长径(length)及与之垂直的最宽径(width)，通过公式ts＝length
×
(width)2/2计算肿瘤体积并记录。每只小鼠每天定时灌胃给药1次，第17天最后一次给药后，处死小鼠并剥离荷瘤小鼠的肿瘤，用计量仪称重。
[0537]
各给药组的相对肿瘤抑制率按以下公式计算：
[0538]
相对肿瘤抑制率＝(溶剂对照组平均肿瘤体积
–
给药组平均肿瘤体积)/溶剂对照组平均肿瘤体积
×
100％
[0539]
实验结果
[0540]
如图5和表7所示，与溶剂对照组相比，西达本胺(25mg/kg)和实施例3化合物(20mg/kg)两个单独给药组对小鼠荷瘤体积有一定抑制，抑瘤率分别为33％和20％；而联合用药组的最终相对抑瘤率(为80％)显著高于两个单药组的抑瘤率之和。如图6所示，与溶剂组平均肿瘤重量2.7g相比，西达本胺和实施例3化合物单药组的平均肿瘤重量分别为1.6g和2.3g，显示出一定的抑制，而联合用药组的平均肿瘤重量仅有0.35g，显著小于两个单药组。上述这些结果表明，西达本胺与ido抑制剂在荷瘤小鼠体内具有良好的协同抗肿瘤活性。
[0541]
表7西达本胺与实施例3化合物单药及联合的相对抑瘤率
[0542] 西达本胺实施例3两药联合组相对抑瘤率(％)33.620.180.8
[0543]
实施例94西达本胺与实施例20联合用于balb/c小鼠ct-26肿瘤模型的药效实验
[0544]
使用与实施例93类似的方法。得到的实验结果如图7和表8所示。
[0545]
表8西达本胺与实施例3化合物单药及联合的相对抑瘤率
[0546] 西达本胺实施例20两药联合组相对抑瘤率(％)308.387.7
[0547]
实施例95西达本胺与实施例72联合用于balb/c小鼠ct-26肿瘤模型的药效实验
[0548]
使用与实施例93类似的方法。得到的实验结果如图8和表9所示。
[0549]
表9西达本胺与实施例72化合物单药及联合的相对抑瘤率
[0550] 西达本胺实施例72两药联合组相对抑瘤率(％)25.47.686.9
[0551]
实施例96西达本胺与实施例87联合用于balb/c小鼠ct-26肿瘤模型的药效实验
[0552]
使用与实施例93类似的方法。得到的实验结果如图9和表10所示。
[0553]
表10西达本胺与实施例87化合物单药及联合的相对抑瘤率
[0554] 西达本胺实施例87两药联合组相对抑瘤率(％)554589.8
[0555]
实施例97 herg抑制活性检测(膜片钳法)
[0556]
非心脏类药物有可能通过抑制herg(ikr)通道引起心肌动作电位时程的延长，增加威胁生命的尖端扭转性(tdp)室性心律失常发生的可能性。本实验采用无内源性ikr电流的hek293细胞系为宿主细胞(该细胞系被广泛应用于herg的检测)，评价专利cn108203438a中实施例85和本技术中实施例87的心脏毒性。
[0557]
1、细胞培养
[0558]
(1)herg钾通道稳定表达的hek293细胞系在含有10％胎牛血清及0.8mg/ml g418的dmem培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。
[0559]
(2)细胞传代：除去旧培养基并用pbs洗一次，然后加入1ml trypletmexpress溶液，37℃孵育0.5min。当细胞从皿底脱离，加入5ml 37℃预热的完全培养基。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中，1000rpm离心5min收集细胞。扩增或维持培养，将细胞接种于6厘米细胞培养皿，每个细胞培养皿，接种细胞量为2.5*105cells(最终体积：5ml)。
[0560]
(3)为维持细胞的电生理活性，细胞密度必须不能超过80％。
[0561]
(4)膜片钳检测，实验之前细胞用tryple
tm express分离，将3*103细胞铺到盖玻片上，在24孔板中培养(最终体积：500μl)，18个小时后，进行实验检测。
[0562]
2、液体配置
[0563]
全细胞膜片钳实验所用细胞外液的成分为(mm)：nacl 140；mgcl
2 1；kcl 3.5；glucose 10；hepes 10；nah2po
4 1.25以及cacl
2 2，用naoh将ph值调至7.4，用sucrose将渗透压值调至300mosm。
[0564]
细胞内液成分为(mm)：kcl 20；k-aspartic 115；mgcl
2 1；egta 5；hepes 10；以及na2atp 2，用koh将ph值调至7.2，用sucrose将渗透压值调至290mosm。
[0565]
3、膜片钳检测
[0566]
全细胞膜片钳记录全细胞herg钾电流的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于-80mv。钳制电压由-80mv除极至-50mv维持0.5s(作为漏电流检测)，然后阶跃至30mv维持2.5s，再迅速恢复至-50mv维持4s可以激发出herg通道的尾电流。每隔10s重复采集数据，观察药物对herg尾电流的作用。以0.5s的-50mv刺激，为漏电流检测。实验数据由epc-10放大器(heka)进行采集并储存于patchmaster(heka)软件中。
[0567]
用微电极拉制仪将毛细玻璃管拉制成记录电极。在倒置显微镜下操纵微电极操纵仪，将记录电极接触到细胞上，给予负压抽吸，形成gω封接。形成gω封接后进行快速电容补偿，然后继续给予负压，吸破细胞膜，形成全细胞记录模式。然后进行慢速电容的补偿并记录膜电容及串联电阻。不给予漏电补偿。
[0568]
当全细胞记录的herg电流稳定后开始给药，每个药物浓度作用至5分钟(或者电流至稳定)后检测下一个浓度，每一个供试品检测多个浓度。将铺有细胞的盖玻片置于倒置显微镜中的记录小室中，供试品工作液以及不含化合物的外液利用重力灌流的方法从低浓度到高浓度依次流经记录小室从而作用于细胞，在记录中利用真空泵进行液体交换。每一个细胞在不含化合物的外液中检测到的电流作为自己的对照组。独立重复检测多个细胞。所有电生理实验在室温下进行。
[0569]
药物浓度选择为0.3、1、3、10以及30μm。
[0570]
4、数据分析
[0571]
首先将每一个浓度作用后的电流和空白对照电流标准化然后计算每一个浓度对应的抑制率对每一个浓度计算平均数和标准误，并用以下的方程计算每种化合物的半抑制浓度：
[0572][0573]
用以上方程对剂量依赖效应进行非线性拟合，其中c代表供试品浓度，ic50为半抑制浓度，h代表希尔系数。曲线拟合以及ic50的计算利用igor软件完成。
[0574]
根据上述实验方法，对专利cn108203438a中实施例85进行herg抑制ec50值测定。ec50值为1.9um。本专利实施例87的herg抑制ec50值为4.6um。
[0575]
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，根据已经公开的所有教导，本领域技术人员可以对本发明技术方案的细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

技术特征：
1.以下化合物及其药学上可接受的盐：2.药物组合物，其含有权利要求1所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。3.权利要求2的药物组合物，其还含有一种或多种其它的吲哚胺-2,3-双加氧酶(ido)抑制剂，和/或一种或多种组蛋白去乙酰化酶(hdac)抑制剂。4.权利要求3所述的药物组合物，所述ido抑制剂选自吲哚莫德(indoximod)、艾卡哚司他(epacadostat)、nlg919；所述hdac抑制剂选自西达本胺、伏立诺他(vorinostat)、罗米地辛(romidepsin)及丙戊酸；优选地，所述药物组合物中进一步含有西达本胺。5.一种联合用药物，其含有第一活性成分和第二活性成分，以及任选地药学上可接受的载体或赋形剂；其中，所述第一活性成分选自权利要求1化合物或其药学上可接受的盐，及其它ido抑制剂；所述第二活性成分选自组蛋白去乙酰化酶(hdac)抑制剂。6.权利要求5所述的联合用药物，所述ido抑制剂选自吲哚莫德(indoximod)、艾卡哚司他(epacadostat)、nlg919；所述hdac抑制剂选自西达本胺、伏立诺他(vorinostat)、罗米地辛(romidepsin)及丙戊酸；优选地，所述第二活性成分为西达本胺。7.权利要求5或6所述的联合用药物，所述第一活性成分和第二活性成分在同一制剂单元中。8.权利要求5或6所述的联合用药物，所述第一活性成分和第二活性成分在不同的制剂单元中。9.权利要求5或6所述的联合用药物，所述第一活性成分和第二活性成分同时、分别或依次给药。10.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、权利要求2-4任一项的药物组合物或权利要求5-9任一项所述的联合用药物在制备免疫调节剂或预防和/或治疗与ido表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的药物中的用途；优选地，所述疾病选自肿瘤、自身免疫性疾病、白内障、阿尔兹海默症、抑郁障碍和焦虑障碍。

技术总结
本申请提供具有吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制活性的喹啉衍生物，具体地，本申请提供通式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其药物组合物，制备方法和在制备免疫调节及预防和/或治疗与IDO表达异常和/或色氨酸代谢异常有关的疾病的药物中的用途。本申请还涉及所述喹啉衍生物与HDAC抑制剂的联合用药及其在制备抗肿瘤药物中的用途。物中的用途。物中的用途。


技术研发人员：余金迪 辛利军 山松 朱江飞 杨林 付超 李志斌 鲁先平
受保护的技术使用者：深圳微芯生物科技股份有限公司
技术研发日：2019.09.25
技术公布日：2023/8/13