一株具促生抗病解磷能力的木质素降解菌M15H2及其应用

一株具促生抗病解磷能力的木质素降解菌m15h2及其应用
技术领域
1.本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一株具促生抗病解磷能力的木质素降解菌m15h2及其应用。


背景技术：

2.秸秆作为一种可再生资源，如果利用合理既能在一定程度上缓解能源问题，又能保护环境和降低安全隐患。随着粮食产量的逐年增加，秸杆产量也逐年增加。由此可见，农作物秸秆的高效利用，已成为我国必须重视和解决的课题。目前，最广泛的秸秆还田方式仍然为直接还田，然而，秸秆直接还田过程中还存在许多问题，例如，秸秆在自然状态下腐解较慢，对后茬作物生长造成不利影响，例如影响作物种子的萌发和幼苗的生长，同时秸秆未经过高温腐熟处理，直接还田可能会增加土壤中病原菌的积累。
3.因此，筛选兼具促生及抑病能力的秸秆降解功能菌株，对实现秸秆资源利用、土壤培肥和作物增产具有积极的意义。


技术实现要素：

4.针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于提供一株植生拉乌尔菌(raoultellaplanticola)m15h2，所述菌株m15h2能够促进秸秆降解，同时具有植物促生和防治病害的功能。
5.本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
6.本发明提供了一株植生拉乌尔菌(raoultellaplanticola)m15h2，所述植生拉乌尔菌m15h2的保藏编号为cgmcc no.26627。
7.优选的，所述植生拉乌尔菌m15h2的16s rdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。
8.本发明提供了上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2的发酵菌液。
9.本发明提供了上述技术方案所述发酵菌液的制备方法，包括以下步骤：
10.将所述植生拉乌尔菌m15h2在培养基中进行培养，得到发酵菌液。
11.本发明提供了上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液在秸秆降解、植物促生和/或防治病害中的应用。
12.优选的，所述病害包括条斑病病害。
13.本发明提供了上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液在制备抑制水稻条斑病病菌制剂中的应用。
14.本发明提供了一种秸秆降解方法，包括以下步骤：
15.将粉碎的秸秆与水和硝酸钠混合，得到秸秆物料；
16.将上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液接种于秸秆物料中进行秸秆的降解。
17.本发明还提供了一种植物促生的方法，包括以下步骤：
18.将种子依次进行浸种、消毒和催芽后，得到预处理的种子；
19.将上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液对种子进行浸泡，得到菌剂处理的种子；
20.将菌剂处理的种子进行培养。
21.本发明还提供了一种植物防治病害的方法，包括以下步骤：
22.用上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液对种子进行浸种，得到菌剂处理的种子；
23.将菌剂处理的种子催芽后进行播种。
24.本发明的有益效果：
25.本发明提供了一株植生拉乌尔菌(raoultellaplanticola)m15h2，所述植生拉乌尔菌m15h2的保藏编号为cgmcc no.26627。本发明提供的植生拉乌尔菌m15h2可产生木质素酶，提高木质素降解率、促腐秸秆，即促进还田秸秆腐解，提升秸秆还田效率；所述菌株m15h2能产生促生激素iaa等，促进种子萌发和作物生长，实现农作物增产；另外所述菌株m15h2还能抑制水稻条斑病病菌的生长，能够有效解决条斑病等病害发生的问题，对保障水稻产业的可持续发展具有重要意义。
26.生物保藏说明
27.植生拉乌尔菌(raoultellaplanticola)m15h2，于2023年02月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为中国科学院微生物研究所，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院研究所，保藏编号为cgmcc no.26627。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
29.图1为菌株m15h2的菌落形态图；
30.图2为根据16s rdna序列构建的植生拉乌尔菌m15h2的菌株的系统发育树图；
31.图3为m15h2、m60h3与m120h2不同菌株的产木质素酶能力图；
32.图4为iaa的标准曲线图；
33.图5为菌株m15h2解磷圈图；
34.图6为菌株m15h2抑病圈图；
35.图7为菌株m15h2在lb培养基中的生长曲线图；
36.图8为不同碳源对菌株m15h2生长状况的影响图；
37.图9为不同氮源对菌株m15h2生长状况的影响图；
38.图10为不同ph对菌株m15h2生长状况的影响图；
39.图11不同温度对菌株m15h2生长状况的影响图。
具体实施方式
40.本发明提供了一株植生拉乌尔菌(raoultellaplanticola)m15h2，所述植生拉乌尔菌m15h2的保藏编号为cgmcc no.26627。
41.本发明所述植生拉乌尔菌m15h2分离自小麦秸秆。本发明所述植生拉乌尔菌m15h2于2023年2月21日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.26627。
42.在本发明中，所述植生拉乌尔菌m15h2的菌落形态如图1所示。所述植生拉乌尔菌m15h2在lb培养基上的菌落呈黄色，圆形，不透明，边缘整齐，表面湿润光滑，质地易挑取。本发明所述植生拉乌尔菌m15h2为革兰氏阴性菌；所述植生拉乌尔菌m15h2为好氧菌，能够产生过氧化氢酶(接触酶阳性)，能够水解淀粉，可以利用柠檬酸盐，甲基红试验阳性，不能产生明胶酶，v-p试验阴性，能产iaa，能产木质素酶，具有解磷能力。
43.本发明所述植生拉乌尔菌m15h2的16s rdna序列如seq id no.1所示。
44.seq id no.1：
45.acacacaaagcccccgttgacctttcactgatggtgctaggcaatatggtgactaacctgatcaatagtagcgtcgcgccggcgcagcgtcaggcgatcgcccgttcttttgcccaggctctgcagtcttcaatcaacgacgacccggcgcactaaggataaccaacaactgtatatggtgactcttcgtcagccctaccgagaaaaaatctcccagatggtcagctgggggcactggttcgccctgttcaacatgttgttggccatggtgctcggcagccgctatctttttgtcgccgactggcccacgactctgggcggacgtattttctcgtatgtcagcctcgtgggtcacttcagttttctggtgtttaccagctatgtcctgattctcttcccgctgacctttatcgtcatatcgcagcgattgatgcgcttcctgtcggtcattctggcgaccgcgggcatgacgcttctgctgatcgatagcgaagtctttacccgtttccacctgcatcttaacccgattgtctgggaactggtcatcaaccctgaccagaatgagatggcgcgcgactggcagctgatgtttatcagcgtgccgattatcttcctgctggaaatgctgtttgcgacctggagctggcagaagctgcgcagcctgacgcgtcgccgccactacgcccggcctgtcgcctggtttttctttctctcttttatcagcagccacctgatttatatctgggcggatgcgaatttctatcgcccgatcaccatgcaacgggcgaatctgccgctctcctatccgatgacggcccgccgtttccttgagaaacatggcctgctcgatgcccaggattaccagcgtcggctggtagaacagggggcgccggaagccgtctccgttgagtatccgctgagcaacctgcgctatcgcgatctgggggctggctacaacgttctgctcattaccgtcgataacctgaactattcacggtttgagaaaaatatgccggaactggcccgtttcgcacaagagaacgtcaactttacccagcatatgagctccggcaacactaccgatagcggtatgtttggcctgttctacgggatttcgccgggctatatggatggcgtgctgtcggcccgcattccggccgcgttgattacggcctttaaccagcagggatatcagctggggctgttctcctccgatggcttcagcagcccgctctatcgccaggcgctgctgtccgatttctcgctgccaaatgagaaaacgcaaagcgatgagcaaacggcggaccagtggattggctggctcaatcgctatgcgcaggatgaaaaccgctggttctcatggatttcgttaaacggcaccacgctggacaacagtcagcagcaaaacttcgcgcgtcgctacagtcgtgcggcgggagatgttgatagtcaaatcagccgggtactgagcgccctgagcgatgccggaaaactggataacaccgtggtgattatcaccgccgctcacggtatgccgttgaatccgcagcgcggtaagtttgactggtcccgggagcagctgcaggtgccgctggttattcactggccaggaattccggcgcagaacatcgcgacgctgaccagcaacaaagatgtgatgaccacgctgatgcagcgcctgctgcacgtctccacgcctgccaacgaatattcacagggtgaagacctgttcagccccgcgcgtcgccgggcctgggtgacggcagccaacggcgatacgctggcggtcacgtcgccagaggtgaccgtggtgctgaaccacaacggcacctacagcacctggaacagcgatggcaaaaagattgataaccgcaaacctcagctcagtctgctgctgcagatcctgactgacgaaaaacgctttatcgctaactgattgattaattatgaatcaatcagccgttcccc
ggcttgcattcggtcggggaacgggtaatattgtcctccatacgtcggcacgtagcgcagcctggtagcgcaccgtcatggggtgtcggggg。
46.获得所述菌株m15h2的16s rdna序列与genbank数据库中序列进行blast分析比对，构建的m15h2菌株的系统发育树，如图2所示。结合系统发育树分析、形态学分析及该菌株的生理生化结果特征，鉴定菌株m15h2为植生拉乌尔菌(raoultella planticola)。
47.本发明提供了上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2的发酵菌液。
48.本发明提供了上述技术方案所述发酵菌液的制备方法，包括以下步骤：
49.将所述植生拉乌尔菌m15h2在培养基中进行培养，得到发酵菌液。
50.本发明将所述植生拉乌尔菌m15h2在培养基中进行培养，得到发酵菌液。本发明对培养基的种类没有特殊限定，能够使菌株m15h2正常生长即可。在本发明中，所述培养基优选为tsb培养基、lb培养基、液体发酵培养基、苯胺蓝培养基、解磷发酵培养基或木质素富集培养基，更优选为lb培养基。在本发明中，所述培养基的ph值优选为4～10，进一步优选为5～9，更优选为5。在本发明中，若所述培养基为lb培养基时，培养基中优选还包括重量百分含量为0.1％的碳源和重量百分含量为1％的氮源。在本发明中，所述碳源优选包括葡萄糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、木糖和乳糖中的一种或多种，更优选为蔗糖；所述氮源优选包括硝酸钾、硝酸铵、酵母粉、谷氨酸、尿素和蛋白胨的一种或多种，更优选为酵母粉。本发明所述培养的温度优选为20℃～40℃，进一步优选为24℃～36℃，更进一步优选为28℃～32℃，更优选为28℃；所述培养的时间培养的时间优选为0～24h，进一步优选为0h～18h，更优选为18h。在本发明中，所述培养优选在摇床中进行，所述摇床的转速优选为140～180rpm，更优选为180rpm。在本发明中，所述发酵菌液的浓度优选为1
×
106～1
×
108cfu/ml，进一步优选为1
×
107～1
×
108cfu/ml，更优选为1
×
108cfu/ml。在本发明中，培养得到的菌液的浓度优选高于所述发酵菌液的浓度。本发明优选通过加水稀释使其菌液浓度达到发酵菌液所需的浓度。
51.本发明提供了一种上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液在制备抑制水稻条斑病病菌制剂中的应用。在本发明中，所述植生拉乌尔菌m15h2能够高效抑制水稻条斑病病菌的生长。
52.本发明提供了一种上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液在秸秆降解、植物促生和/或防治病害中的应用。
53.本发明提供了所述植生拉乌尔菌m15h2及其发酵菌液在秸秆降解中的应用。
54.本发明提供的植生拉乌尔菌m15h2能够产生木质素酶，高效促进秸秆的降解，进而提升秸秆还田效率。在本发明中，所述秸秆优选为小麦秸秆。使用本发明提供的植生拉乌尔菌m15h2对小麦秸秆进行降解能够高效促进小麦秸秆的降解效率。本发明采用植生拉乌尔菌m15h2对小麦秸秆进行降解相对于对照组在降解30天时小麦秸秆的降解率提高了34.32％，在降解55天时小麦秸秆的降解率相对于对照组提高了32.59％。
55.本发明提供了所述植生拉乌尔菌m15h2及其发酵菌液在植物促生中的应用。
56.本发明提供的植生拉乌尔菌m15h2能够产生iaa、具有解磷能力，使用所述植生拉乌尔菌m15h2对植物进行处理，能够高效促进植株的生长。本发明提供的植生拉乌尔菌
m15h2对水稻进行处理能够高效促进水稻生长。使用本发明所述植生拉乌尔菌m15h2对水稻种子进行处理，能够高效提高水稻种子的发芽率，促进水稻芽和根的生长。本发明采用植生拉乌尔菌m15h2对水稻种子进行浸泡处理，相对于对照组显著提高种子的发芽率，同时促进了水稻种子的芽长和根长的伸长。本发明采用植生拉乌尔菌m15h2对种子进行浸泡处理后，水稻种子的发芽率相对于对照组提高了5.67％，芽长相对于对照组提高了31％，根长相对于对照组提高了40％。
57.本发明提供了所述植生拉乌尔菌m15h2及其发酵菌液在防治病害中的应用。
58.本发明所述植生拉乌尔菌m15h2能够防治病害。在本发明中，所述病害优选包括条斑病病害。本发明用植生拉乌尔菌m15h2对水稻种子进行处理，能够高效防治水稻条斑病的发生，提高水稻对条斑病的防治效果。本发明采用植生拉乌尔菌m15h2对水稻种子进行浸泡处理，相对于对照组显著提高了水稻对水稻条斑病的防治效果。本发明采用植生拉乌尔菌m15h2对种子进行浸泡处理后，水稻条斑病的防治效果高达15.70％。
59.本发明提供了一种秸秆降解方法，包括以下步骤：
60.将粉碎的秸秆与水和硝酸钠混合，得到秸秆物料；
61.将上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液接种于秸秆物料中进行秸秆的降解。
62.本发明将粉碎的秸秆与水和硝酸钠混合，得到秸秆物料。
63.在本发明中，所述秸秆优选为小麦秸秆。本发明对秸秆进行降解前优选对秸秆进行粉碎，得到粉碎的秸秆。本发明对秸秆粉碎的方式没有特殊限定，采用本领域常规粉碎方法均可。本发明将秸秆粉碎后，优选进行过筛，取筛下物得到粉碎的秸秆。本发明所述过筛的孔径优选为20目。得到粉碎的秸秆后，本发明将粉碎的秸秆与水和硝酸钠混合，得到秸秆物料。在本发明中，所述粉碎的秸秆与水的质量体积比优选为(5～20)g：(10～30)ml，更优选为5g：30ml。在本发明中，所述粉碎的秸秆与硝酸钠的质量比优选为(5～20)：(2～5)，更优选为5:2。本发明对粉碎的秸秆与水和硝酸钠的混合方式没有特殊限定，采用本领域常规混合方法均可。本发明在粉碎的秸秆中添加硝酸钠的目的是为微生物提供氮源，加速腐解。
64.得到秸秆物料后，本发明将上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液接种于秸秆物料中进行秸秆的降解。
65.本发明使用植生拉乌尔菌m15h2对秸秆物料进行降解时，所述发酵菌液的菌活优选为1
×
106～1
×
108cfu/ml，更优选为1
×
108cfu/ml。本发明进行接种时，植生拉乌尔菌m15h2发酵菌液的接种量与秸秆的质量体积比优选为(5～10)ml：(5～20)g，更优选为10ml:5g。本发明进行秸秆降解的温度优选为28～36℃，更优选为28℃。本发明进行秸秆降解时优选伴随震荡，所述震荡的转速优选为140～180r/min，更优选为180r/min。本发明对秸秆降解的时间没有特殊限定，能够使秸秆降解完全即可。本发明所述秸秆降解的时间优选≥55d。
66.本发明提供的秸秆降解方法能够高效提高秸秆的降解率。使用本发明提供的秸秆降解方法对小麦秸秆进行降解，经过30天的降解，小麦秸秆的降解率达到14.95％，相对于对照组提高了34.32％；经过55天的降解，小麦秸秆的降解率达到15.50％，相对于对照组提高了32.59％。
67.本发明还提供了一种植物促生的方法，包括以下步骤：
68.将种子依次进行浸种、消毒和催芽后，得到预处理的种子；
69.将预处理的种子用上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液进行浸泡，得到菌剂处理的种子；
70.将菌剂处理的种子进行培养。
71.本发明将种子依次进行浸种、消毒和催芽后，得到预处理的种子。
72.在本发明中，所述种子优选为大小均匀、成熟饱满、无霉变的种子。选取得到种子后，本发明对种子进行浸种。本发明对所述浸种的方法没有特殊限定，采用本领域常规浸种方法即可。本发明所述浸种的方式优选为将种子与水混合进行浸种。本发明对水的用量没有特殊限定，所述水的用量没过种子即可。本发明所述浸种的时间优选为30～45min，更优选为30min。浸种完成后，本发明优选将种子进行消毒。本发明所述消毒的方法没有特殊限定，采用本领域常规消毒方法即可。本发明所述消毒的方法优选依次包括先使用乙醇水溶液进行消毒，再使用次氯酸钠水溶液进行消毒。在本发明中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量优选为70％～75％，更优选为75％；所述次氯酸钠水溶液中次氯酸钠的体积百分含量优选为0.5％～1％，更优选为1％。本发明使用乙醇水溶液进行消毒的时间优选为5～10min，更优选为5min。本发明使用次氯酸钠水溶液消毒的时间优选为5～10min，更优选为5min。消毒完成后，本发明优选将消毒后的种子用无菌水进行清洗。本发明所述清洗优选进行3～5次，更优选为5次。清洗完成后，本发明优选对种子进行催芽，得到预处理的种子。本发明所述催芽的方法没有特殊限定，采用本领域常规催芽方法即可。本发明所述催芽的方法优选为将清洗好的种子浸泡在一个装有无菌水的小烧杯中进行培养。本发明所述培养的温度优选为28℃～32℃，更优选为28℃；所述培养的时间优选为18～24h，更优选为24h。
73.得到预处理种子后，本发明将预处理的种子用上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液进行浸泡，得到菌剂处理的种子。
74.本发明使用植生拉乌尔菌m15h2对种子进行浸泡时，所述发酵菌液的菌活优选为1
×
106～1
×
108cfu/ml，进一步优选为1
×
107～1
×
108cfu/ml，更优选为1
×
108cfu/ml。本发明所述浸泡的时间优选为25～30min，更优选为30min；所述浸泡的温度优选为28～32℃，更优选为28℃。
75.得到菌剂处理的种子后，本发明将菌剂处理的种子进行培养。
76.本发明对培养的方法没有特殊限定，采用本领域常规培养方法均可。在本发明中，所述培养的方法优选为在培养皿中进行培养；所述培养皿中优选铺有无菌滤纸。本发明所述培养的温度优选为25～28℃，更优选为28℃；所述培养的光照时间与黑暗时间比优选为(12～16)：(12～8)，更优选为16:8；所述培养的湿度优选为60％～70％，更优选为70％。本发明的培养湿度优选通过在滤纸中补水实现。本发明所述培养过程中优选每隔2小时查看滤纸是否变干，及时补水。
77.本发明提供的植物促生方法能显著改善植物种子的发芽率，促进芽和根的生长。本发明采用上述技术方案所述植物促生方法对水稻种子进行处理，显著提高了水稻种子的发芽率，提高了水稻的芽长和根长，其中，对水稻种子培养5d时，水稻种子的发芽率、水稻芽
长和水稻根长值较对照处理分别增长5.67％、31％和40％。
78.本发明还提供了一种植物防治病害的方法，包括以下步骤：
79.用上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液对种子进行浸种，得到菌剂处理的种子；
80.将菌剂处理的种子催芽后进行播种。
81.本发明用上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液对种子进行浸种，得到菌剂处理的种子。
82.在本发明中，所述种子优选为大小均匀、成熟饱满、无霉变的种子。选种完成后，本发明优选将种子进行消毒。本发明所述消毒的方法没有特殊限定，采用本领域常规消毒方法即可。本发明所述消毒的方法优选依次包括先使用乙醇水溶液进行消毒，再使用次氯酸钠水溶液进行消毒。在本发明中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量优选为70％～75％，更优选为75％；所述次氯酸钠水溶液中次氯酸钠的体积百分含量优选为0.5％～1％，更优选为1％。本发明使用乙醇水溶液进行消毒的时间优选为5～10min，更优选为5min。本发明使用次氯酸钠水溶液消毒的时间优选为5～10min，更优选为5min。消毒完成后，本发明优选将消毒后的种子用无菌水进行清洗。本发明所述清洗优选进行3～5次，更优选为5次。清洗完成后，本发明用上述技术方案所述植生拉乌尔菌m15h2、上述技术方案所述发酵菌液或者上述技术方案所述制备方法制备得到的发酵菌液对种子进行浸种。本发明进行浸种时使用植生拉乌尔菌m15h2发酵菌液的菌活优选为1
×
106～1
×
108cfu/ml，进一步优选为1
×
107～1
×
108cfu/ml，更优选为1
×
108cfu/ml。本发明所述浸种的时间优选为24～48h，更优选为48h；所述浸种的温度优选为28℃～30℃，更优选为28℃。
83.得到菌剂处理的种子后，本发明将菌剂处理的种子催芽后进行播种。
84.本发明所述催芽的方法没有特殊限定，采用本领域常规催芽方法即可。本发明所述催芽的方法优选为将清洗好的种子浸泡在一个装有无菌水的小烧杯中进行培养。本发明所述培养的温度优选为28℃～32℃，更优选为28℃；所述培养的时间优选为18～24h，更优选为24h。得到催芽种子后，本发明将种子进行播种。本发明对播种的方法没有特殊限定，采用本领域常规播种方法均可。在本发明中，所述播种优选为温室盆栽播种。将种子播种后，本发明对植物的培养方法没有特殊限定，采用本领域常规管理方法均可。
85.本发明提供的防治病害的方法能够显著提高植物的病害防治效果。使用本发明提供的防治病害的方法对水稻种子进行处理，能够显著提高水稻对条斑病的防治效果，防治效果高达15.70％。
86.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
87.培养基组成和配制说明
88.lb培养基：lb肉汤粉25g、蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min(固体培养基在此配方上加琼脂20g)。
89.液体发酵培养基：硝酸钠2.5g、磷酸二氢钾1.0g、七水硫酸镁1.0g、氯化钠1.0g、氯化钙0.5g、微量元素溶液70ml、秸秆20g、蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。
90.液体发酵培养基中的微量元素溶液：六水氯化铁：0.16g、七水硫酸锌：1.5g、六水
氯化钴：0.16g、五水硫酸铜：0.15g、一水硫酸锰：1.5g、硼酸：0.3g、钼酸钠晶体：0.1g、蒸馏水1000ml。
91.木质素富集培养基：木质素磺酸钠3g、硫酸铵2g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.2g、无水氯化钙0.1g、硫酸锰0.02g、磷酸二氢钾1g、硫酸亚铁0.05g、蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。
92.苯胺蓝筛选培养基：酵母粉10g、葡萄糖10g、苯胺蓝0.1g、琼脂18g、蒸馏水至1000ml，121℃灭菌20min。
93.解磷发酵培养基：葡萄糖10g、磷酸三钙5g、硫酸铵0.5g、氯化钠0.3g、氯化钾0.3g、七水硫酸镁0.3g、七水硫酸亚铁0.03g、一水硫酸锰0.03g、蒸馏水至1000ml，121℃灭菌20min(固体培养基在此配方上加琼脂20g)。
94.na培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min(固体培养基在此配方上加琼脂20g)。
95.实施例1
96.1.菌株筛选
97.(1)地点位于安徽省合肥市庐江县郭河镇安徽农业大学皖中综合试验站内，从安徽省合肥市庐江县郭河镇安徽农业大学皖中综合试验站内采取的小麦秸秆进行菌种筛选。
98.具体操作为：截取长度为10cm左右的小麦秸秆，撒施于水稻田，翻耕混匀；同步将秸杆烘干后截成约为3cm的长度，用200目、15
×
20cm2的尼龙网袋装20g秸秆，将尼龙网袋竖直放置在水稻田约为15cm深度的土壤中。于试验第7d、15d、60d、120d取出尼龙网袋。将装有小麦秸秆的尼龙网袋带回实验室，无菌称取小麦秸秆鲜样0.5g加于100ml木质素富集培养基中，置于条件为28℃，180rpm的恒温震荡培养箱中培养3d，得到菌悬液。
99.在无菌操作台中，取1ml制备菌悬液，加入9ml无菌水，制成浓度为10-1
的原液。采用稀释涂布平板法和平板画线法分离纯化菌株，纯培养的菌株置于4℃冰箱中保存。
100.再将分离、纯化获得的菌株分别接种在苯胺蓝筛选培养基上，筛选出具有降解木质素能力的菌株。将筛选出的木质素菌株置于条件为28℃、180r/min的lb培养液中进行过夜摇瓶培养，然后将培养好的菌液点接到苯胺蓝固体培养基上于28℃培养3d，根据苯胺蓝平板的褪色情况判断菌株降解木质素能力的强弱。
101.筛选出的菌株的褪色情况如表1所示。
102.表1筛选出的菌株在苯胺蓝培养基上的褪色情况
103.细菌编号是否褪色m7h1否m7h2否m7h3否m15h1否m15h2是m60h2否m60h3是m120h2是m120h3否
104.由表1可得，根据褪色情况结果表明，m15h2、m60h3与m120h2菌株具有降解木质素能力。
105.(2)m15h2、m60h3与m120h2菌株木质素酶活测定
106.将m15h2、m60h3与m120h2菌株分别单独接种于液体发酵培养基中置于条件为28℃，180rmp的恒温震荡培养箱中震荡培养48h，制成菌悬液，将菌悬液置于10ml离心管中，置于条件为10000r/min，10min，4℃的冷冻干燥离心机中进行离心，然后收集菌株沉淀，将样品送至苏州科铭生物技术有限公司测定木质素酶活。
107.酶活测定结果如图3所示。
108.由图3可得，筛选出的3株菌中m15h2的降解木质素能力较强，木质素过氧化物酶活可达129.49u
·
ml-1
，锰过氧化物酶可达23.91u
·
ml-1
，漆酶酶活可达8.91u
·
ml-1
。
109.2.菌株m15h2性能测定
110.(1)分泌iaa能力的测定
111.iaa标准曲线绘制
112.在万分之一天平上称取50mg iaa，以三级水溶于500ml容量瓶中，加水定容至刻度线，混匀，溶液的iaa的浓度为100mg/l。然后分别吸取iaa标准溶液0.00ml、0.15ml、0.30ml、0.45ml、0.60ml、0.75ml、0.90ml、1.05ml、1.25ml、1.35ml、1.50ml于干净试管中，加入蒸馏水补足2ml，然后加入4ml salkawski's反应液，混匀，即得终浓度为0.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml、12.5μg/ml、15.0μg/ml、17.5μg/ml、20.0μg/ml、22.5μg/ml、25.0μg/ml iaa标准系列溶液，室温避光反应30min，测量530nm处的光吸收值。以测得的吸光度为纵坐标，iaa浓度(mg/l)为横坐标，绘制成iaa标准曲线。标准曲线相关数据如表2所示，绘制得到的标准曲线如图4所示。
113.表2 iaa标准曲线相关数据
114.浓度(mg/l)0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.0od
530
0.0000.1300.2780.4530.6220.8700.9681.2571.4651.6591.822
115.根据表2与图4可得，iaa的标准曲线方程为y＝0.0754x-0.077，r2＝0.9945。
116.菌株m15h2产iaa测定
117.将菌株m15h2接种在含5.0mmol l-1
l-色氨酸的tsb培养基中在条件为28℃，180rmp的摇床中培养48h，菌悬液离心去除菌体，取1.0ml无菌滤液，再加入2.0ml salkawski's显色剂(50ml 35％hclo4，1ml 0.5mol
·
l-1
fecl3，遮光保存)，遮光放置30min后对其进行观察。
118.遮光放置30min后对其进行观察，测量530nm处的吸光值。同时以空白培养基作为对照。通过iaa标准曲线，计算iaa分泌量。
119.将测得的od530值为0.218，带入iaa标准曲线方程中可得，菌株m15h2的iaa分泌量为3.90mg/l。
120.(2)解磷能力的测定
121.用接种环挑取纯化的菌株m15h2接种于lb培养基中，28℃，180r/min的条件下震荡培养24h，作为试验的种子液。
122.定性检测:使用接种环沾取种子液，将种子液接种到解磷发酵固体平板的中央位置，待干后将平板倒置于28℃的恒温培养箱中培养，经过5～7d时间的培养后观察解磷发酵
固体平板，对平板上的解磷圈进行测量。菌株设置三个重复，通过测定平板上解磷圈直径的大小来初步比较菌株解磷能力的强弱。
123.定性检测结果如图5所示。
124.定量检测：取体积分数为1％的种子液，将其接种到100ml的解磷发酵培养基中，使用250ml容量瓶，以条件为28℃，180r/min的恒温震荡培养箱中培养5d，以灭活菌株为对照，用钼锑抗比色法测定上清液中可溶磷的含量，每组设置3个重复。
125.实验组和对照组解磷能力定量检测结果如表3所示。
126.表3实验组和对照组解磷能力定量检测结果
[0127][0128]
由图5可得，通过菌株解磷能力定性测定，发现菌株m15h2能够产生解p圈，且透明圈直径与菌落直径比值为1.08
±
0.02。由表3可得，通过对菌株m15h2解p能力的动态监测发现，第5天时，m15h2的解无机磷能力最强，高达4.97mg
·
l-1
。
[0129]
(3)拮抗病原菌能力检测
[0130]
将水稻条斑病病菌接种到na培养液中，28℃，180r/min的条件下震荡培养制为病菌发酵液，48h后取出，取1ml制备好的病菌发酵液，加入9ml无菌水，制成梯度为10-1
的原液，如此重复稀释到10-3
。将菌株m15h2接种于lb培养液中，28℃，180r/min的条件下震荡培养制为拮抗菌液，24h后取出。取0.1ml梯度为10-3
的病菌发酵液均匀涂布于na固体培养基上，静置冷却后，吸取1.0μl拮抗菌液滴加到含病菌发酵液的平板上，以无菌水作为对照，空气干燥10min，将其培养在28℃培养箱中48h，记录抑菌圈半径，每组设置3个重复。观察培养基上是否出现抑菌圈，并采用十字交叉法记录抑菌圈的大小。
[0131]
通过菌株抑病能力测定，发现菌株m15h2能够产生抑菌圈(图6)，并记录到抑菌圈直径与菌落直径的比值为1.20
±
0.01。抑菌圈直径与菌圈直径比值大于1，具有一定的抑病效果。
[0132]
3.菌株鉴定
[0133]
(1)菌落形态观察
[0134]
将菌株m15h2划线接种在lb固体培养基上，28℃，培养48h，观察记录单菌落形态，如图1所示。
[0135]
由图1可得，菌株m15h2菌落呈黄色，圆形，不透明，边缘整齐，表面湿润光滑，质地易挑取。
[0136]
(2)革兰氏染色
[0137]
菌株m15h2由革兰氏染色法染色后置于油镜下观察，菌株为革兰氏阴性菌。
[0138]
(3)生理生化特性
[0139]
测定菌株m15h2的生理生化特性。检测结果如表4所示。
[0140]
表4 m15h2生理生化特征
[0141]
项目结果项目结果淀粉水解+柠檬酸盐利用试验+v-p试验-明胶液化试验-甲基红试验+革兰氏染色-接触酶试验+好氧性试验+
[0142]
注：+表示阳性反应，-表示阴性反应
[0143]
由表4可得，所述菌株m15h2为好氧菌，能够产生过氧化氢酶(接触酶阳性)，能够水解淀粉，可以利用柠檬酸盐，甲基红试验阳性，不能产生明胶酶，v-p试验阴性。
[0144]
(4)分子鉴定
[0145]
将菌株m15h2提取dna，进行pcr后，经上海美吉生物医药科技有限公司进行测序，根据所获得的16s rdna序列结果，在genbank数据库中进行比对，blast搜索同源序列，使用mega-x软件，用neighbour-joining法构建系统发育树，如图2所示。
[0146]
结合形态学分析及该菌株的生理生化结果特征，鉴定为植生拉乌尔菌(raoultella planticola)。植生拉乌尔菌(raoultella planticola)m15h2已于2023年2月21日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为cgmcc no.26627。保藏中心地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院研究所。
[0147]
实施例2
[0148]
1.菌株m15h2在lb培养基中生长曲线的测定
[0149]
将菌株m15h2接种到含lb液体培养基中28℃，180r/min过夜培养成种子液，取100μl种子液接种于10ml lb培养液中，置于条件为28℃，180r/min的震荡箱中进行摇床培养，然后分别于0h、3h、6h、9h、12h
……
27h取出3ml菌液放置在冰箱中，空白培养液做参比对照，使用紫外分光光度计测量od
600
数值，绘制生长曲线。
[0150]
绘制的生长曲线如图7所示。
[0151]
结果如图7所示：菌株的生长速度较快，在接种后0～18h是对数生长期，对数生长期第18h od
600
值达到最大，菌株的生长量达到最高。
[0152]
2.不同碳源对菌株生长影响
[0153]
以硝酸铵为最适氮源，研究麦芽糖、蔗糖、乳糖、木糖、葡萄糖、甘露醇作为不同碳源对菌株m15h2生长的影响。
[0154]
将菌株m15h2接种到lb液体培养基中28℃，180r/min培养18h，制为种子液。
[0155]
另配制lb培养液，在lb培养液中加入不同的重量分数为0.1％的碳源，并接入0.5ml种子液，于28℃，180r/min培养48h，不接菌的lb培养液做参比，每个处理设置3个重复。取发酵液在od
600
nm波长下测定紫外吸光度，od
600
值越大表明菌浓度越高，生长状态越好。
[0156]
检测得出不同碳源条件下培养48h的菌株生长情况如图8所示。
[0157]
结果如图8所示：以蔗糖为碳源时，菌株m15h2的吸光度达到最大，od
600
为1.08。
[0158]
3.不同氮源对菌株生长影响
[0159]
以蔗糖为最适的碳源，研究硫酸铵、硝酸钾、蛋白胨、酵母粉、尿素、谷氨酸作为不同氮源对菌株m15h2生长的影响。
[0160]
将菌株m15h2接种到lb液体培养基中28℃，180r/min培养18h，制为种子液。
[0161]
另配制lb培养液，在lb培养液中加入不同的重量百分数为1％的氮源，并接入0.5ml种子液，于28℃，180r/min培养48h，不接菌的lb培养液做参比，每个处理设置3个重复。取发酵液在od
600
nm波长下测定紫外吸光度。
[0162]
检测得出不同碳源条件下培养48h的菌株生长情况如图9所示。
[0163]
结果如图9所示：以酵母粉为氮源时，菌株m15h2的吸光度达到最大，od
600
为3.95。
[0164]
4.不同ph对菌株生长影响
[0165]
以蔗糖为最适的碳源，酵母粉为最适的氮源，研究不同ph值(4、5、6、7、8、9、10)对菌株m15h2生长的影响。
[0166]
将菌株m15h2接种到lb液体培养基中28℃，180r/min培养18h，制为种子液。
[0167]
另配制lb培养液，以蔗糖为最适碳源，酵母粉为最适氮源，将lb培养液的ph值调整为4、5、6、7、8、9、10，并接入0.5ml种子液，于28℃，180r/min摇床中，培养48h，以不接菌的lb培养液做参比，每个处理设置3个重复。测量菌液od
600
值。
[0168]
结果如图10所示：以ph值为5时，菌株m15h2的吸光度达到最大，od
600
为5.04。
[0169]
5.不同温度对菌株生长影响
[0170]
以蔗糖为最适的碳源，酵母粉为最适的氮源，ph＝5为最适ph，研究不同温度(20℃、24℃、28℃、32℃、36℃、40℃)对菌株m15h2生长的影响。
[0171]
将菌株m15h2接种到lb液体培养基中28℃，180r/min培养18h，制为种子液。
[0172]
另配制lb培养液，以蔗糖为最适碳源，酵母粉为最适氮源，将lb培养液的ph值调整为5，接入0.5ml种子液，分别于20℃、24℃、28℃、32℃、36℃、40℃，180r/min摇床中，培养48h，不接菌的lb培养液做参比，每个处理设置3个重复。测量菌液od
600
值。
[0173]
结果如图11所示：以温度为28℃～32℃时，菌株m15h2的吸光度达到最大，od
600
为8.57。
[0174]
实施例3
[0175]
1.菌株m15h2作为菌剂的秸秆促腐动态监测试验
[0176]
m15h2菌液制备：将m15h2接种于lb培养液中，置于条件为28℃，180r/min的恒温震荡培养箱中培养18h，取出已经震荡培养好的菌液，加入无菌水，将其稀释到菌液浓度为1
×
108cfu
·
ml-1
。
[0177]
试验过程：称取粉碎后过20目筛的小麦秸秆粉5g于250ml三角瓶中，加水30ml，硝酸钠2g，加入10ml浓度为108cfu
·
ml-1
左右的菌液，置于条件为28℃，160r/min的恒温震荡培养箱中培养，并于培养第30d、55d取出三角瓶，将三角瓶中的秸秆放在三层纱布的漏斗中进行过滤，弃滤液，取纱布上的秸秆。将纱布上过滤好的秸秆置于80℃烘箱中烘干至恒重，另设无菌水替代菌液，其它步骤一致，作为对照处理，每个处理三个重复。
[0178]
秸秆腐解率公式用失重率法，公式如下。
[0179]
秸秆降解率公式
[0180]
[0181]
式中：w0表示接种前液体培养基中的小麦秸秆干重，w1表示培养结束后小麦秸秆干重。
[0182]
菌株m15h2作为菌剂对小麦秸秆降解动态检测结果如表5所示。
[0183]
表5 菌株m15h2降解秸秆动态检测结果
[0184]
处理摇菌30d摇菌55dm15h214.95
±
2.78*15.50
±
0.47*无菌水11.13
±
2.9811.69
±
2.24
[0185]
注:表中*为差异显著，p《0.05。
[0186]
由表5可得，经过30天的降解，加入菌剂的处理小麦秸秆的降解率达到14.95％，加入菌剂对小麦秸秆的降解率相对于对照组提高了34.32％；经过55天的降解，加入菌剂的处理小麦秸秆的降解率达到15.50％，加入菌剂对小麦秸秆的降解率相对于对照组提高了32.59％。
[0187]
2.菌株m15h2作为菌剂对水稻的促生试验
[0188]
试验土壤：取自安徽省合肥市庐江县郭河镇
[0189]
试验所用种子：品种为临旱1号
[0190]
m15h2菌液制备：将m15h2接种于lb培养液中，置于条件为28℃，180r/min的恒温震荡培养箱中培养18h，取出已经震荡培养好的菌液，加入无菌水，将其稀释到菌液浓度为1
×
108cfu/ml。
[0191]
选择大小均匀、成熟饱满、无霉变的水稻种子后，进行浸种。
[0192]
浸种：将适量水稻种子倒入小烧杯中，在小烧杯中加入纯水(水量没过种子)，浸泡30min，剔除浮在上边的种子。
[0193]
消毒：体积分数为75％的酒精表面消毒5min，体积分数为1％次氯酸钠水溶液浸泡5min，然后用无菌水清洗5次。
[0194]
催芽：将清洗好的种子浸泡在一个装有无菌水的小烧杯中，于28℃培养箱中培养24h。
[0195]
菌液浸泡：将催芽后的种子用菌活为1
×
108cfu/ml的菌液在28℃条件下浸泡30min。
[0196]
将水稻种子经过浸种/消毒/催芽/菌液浸泡等步骤后均匀的铺在无菌滤纸的培养皿中，以无菌水浸泡作为对照，每组设置3个重复。每个培养皿中放55粒种子，将培养皿放置在条件为温度：28℃，光照与黑暗比为16:8，湿度为70％的光照培养箱中培养，培养时注意每隔2小时查看滤纸是否变干，及时补水，培养5d后观察其发芽率、芽长和根长。
[0197]
菌剂m15h2对水稻发芽率、芽长和根长的影响如表6所示。
[0198]
表6 菌剂m15h2对水稻发芽率、芽长和根长的影响
[0199]
菌株发芽率(％)芽长(cm)根长(cm)m15h267.88
±
4.200.38
±
0.070.70
±
0.03无菌水64.24
±
8.200.29
±
0.030.50
±
0.17
[0200]
结果如表6所示，m15h2菌株有促进植株生长的作用，在本试验中，经过接菌处理后，水稻植株发芽率、芽长与根长均有所改善。其中发芽率、芽长、根长值较对照处理分别增长5.67％、31％和40％。菌株m15h2能够促进植株生长。
[0201]
3.菌株对水稻条斑病菌防治试验
[0202]
试验土壤：取自安徽省合肥市庐江县郭河镇
[0203]
试验所用种子：品种为临旱1号
[0204]
m15h2菌液制备：将m15h2接种于lb培养液中，置于条件为28℃，180r/min的恒温震荡培养箱中培养18h，取出已经震荡培养好的菌液，加入无菌水，将其稀释到菌液浓度为1
×
108cfu/ml。
[0205]
条斑病病菌菌悬液制备：将条斑病菌接种于na培养液中，置于条件为28℃，180r/min的恒温震荡培养箱中培养48h，取出已经震荡培养好的菌液，加入无菌水，将其稀释到菌液浓度为1
×
108cfu/ml。
[0206]
选择大小均匀、成熟饱满、无霉变的水稻种子后，对种子进行消毒，消毒的方式为：体积分数为75％的酒精表面消毒5min，体积分数为1％次氯酸钠水溶液浸泡5min，然后用无菌水清洗5次。
[0207]
清洗完成后，将水稻种子放入m15h2菌悬液中在28℃条件下浸种48h。浸种完成后，对种子进行催芽，催芽的方法为将用菌液浸泡好的种子在装有无菌水的小烧杯中，于28℃培养箱中培养24h后置于温室盆栽播种。以清水浸种作对照，每组3个重复。待水稻幼苗生长至1心2叶期时，喷雾接种浓度约为1.0
×
108cfu/ml的条斑病病原菌菌悬液约10ml，薄膜覆盖保湿24h。喷施病原菌菌菌液14d后测量每组条斑病病斑大小，并根据防治效果公式计算防治效果。
[0208]
病菌防治效果公式如下：
[0209][0210]
菌剂m15h2对水稻条斑病的防治效果如表7所示。
[0211]
表7 菌剂m15h2对水稻条斑病的防治效果
[0212]
浸种处理病斑(cm)防效(％)清水6.74
±
0.810.00m15h25.68
±
0.6115.7
[0213]
据试验结果可得，清水浸种后对条斑病防效为0.00％，菌悬液m15h2对条斑病防效为15.70％，显著高于清水浸种后的防治效果。因此：菌株m15h2对水稻条斑病有抑制功能。
[0214]
综上，本发明提供的植生拉乌尔菌m15h2可促进还田秸秆腐解，提升秸秆还田效率，能促进种子萌发和作物生长，实现农作物增产，还能抑制水稻条斑病菌的生长，能够有效解决条斑病等病害发生的问题。
[0215]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

技术特征：
1.一株植生拉乌尔菌(raoultellaplanticola)m15h2，其特征在于，所述植生拉乌尔菌m15h2的保藏编号为cgmccno.26627。2.根据权利要求1所述植生拉乌尔菌m15h2，其特征在于，所述植生拉乌尔菌m15h2的16srdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。3.权利要求1或2所述植生拉乌尔菌m15h2的发酵菌液。4.权利要求3所述发酵菌液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述植生拉乌尔菌m15h2在培养基中进行培养，得到发酵菌液。5.权利要求1或2所述植生拉乌尔菌m15h2、权利要求3所述发酵菌液或者权利要求4所述制备方法制备得到的发酵菌液在秸秆降解、植物促生和/或防治病害中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述病害包括条斑病病害。7.权利要求1或2所述植生拉乌尔菌m15h2、权利要求3所述发酵菌液或者权利要求4所述制备方法制备得到的发酵菌液在制备抑制水稻条斑病病菌制剂中的应用。8.一种秸秆降解方法，其特征在于，包括以下步骤：将粉碎的秸秆与水和硝酸钠混合，得到秸秆物料；将权利要求1或2所述植生拉乌尔菌m15h2、权利要求3所述发酵菌液或者权利要求4所述制备方法制备得到的发酵菌液接种于秸秆物料中进行秸秆的降解。9.一种植物促生的方法，其特征在于，包括以下步骤：将种子依次进行浸种、消毒和催芽后，得到预处理的种子；将预处理的种子用权利要求1或2所述植生拉乌尔菌m15h2、权利要求3所述发酵菌液或者权利要求4所述制备方法制备得到的发酵菌液进行浸泡，得到菌剂处理的种子；将菌剂处理的种子进行培养。10.一种植物防治病害的方法，其特征在于，包括以下步骤：用权利要求1或2所述植生拉乌尔菌m15h2、权利要求3所述发酵菌液或者权利要求4所述制备方法制备得到的发酵菌液对种子进行浸种，得到菌剂处理的种子；将菌剂处理的种子催芽后进行播种。

技术总结
本发明提供了一株具促生抗病解磷能力的木质素降解菌M15H2及其应用，属于农业微生物技术领域。本发明提供了一株植生拉乌尔菌(Raoultella planticola)M15H2，所述植生拉乌尔菌M15H2的保藏编号为CGMCCNO.26627。本发明提供的植生拉乌尔菌M15H2可提高木质素降解率、促腐秸秆，即促进还田秸秆腐解，提升秸秆还田效率；所述植生拉乌尔菌M15H2能产生促生激素，促进种子萌发和作物生长，实现农作物增产；所述植生拉乌尔菌M15H2还能抑制水稻条斑病病菌的生长，能够有效解决条斑病等土传病害发生的问题，对保障水稻产业的可持续发展具有重要意义。意义。意义。


技术研发人员：马超 胡占琴 张默晗 丁可欣 叶苏梅 母跃 庄睿花 宫志锋 胡宏祥 叶新新
受保护的技术使用者：安徽农业大学
技术研发日：2023.05.16
技术公布日：2023/8/13