一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法与流程

1.本发明涉及中草药技术领域，尤其涉及一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法。


背景技术：

2.泽泻(rhizomaalismatis)为泽泻科植物泽泻alismaorien-talis(samuel)juzep.的干燥块茎。具有利尿，清热的功效。用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高血脂症，是一种临床应用非常广泛的中药。现代药理研究表明，泽泻有很好的利尿作用、降血脂作用、降血糖及抗动脉粥样硬化等作用，近来泽泻及复方制剂用于高血脂症等相关心血管系统疾病的治疗取得较好的效果，显示出开发治疗高血脂症药物的良好前景。
3.泽泻的系统化学分离得到的化学成分有近百种，以萜类成分为主，其中以三萜类成分为主要成分。其结构多为原萜烷型(protostane)四环三萜，其主要化学成分为泽泻醇a、b、c及乙酸酯和相关的转化产物。
4.目前尚未公开利用高效液相色谱法同时检测泽泻中多种活性成分的方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，以解决现有技术中泽泻活性成分含量测定方法复杂的问题。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
7.本发明提供了一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，利用高效液相色谱法检测泽泻样品；
8.所述高效液相色谱过程中采用正己烷-0.005～0.015％醋酸水溶液作为流动相；
9.所述正己烷为a组分，所述0.005～0.015％醋酸水溶液为b组分。
10.优选的，所述高效液相色谱过程中采用xbp silica作为分析柱。
11.优选的，所述高效液相色谱过程中采用的检测温度为53～58℃。
12.优选的，所述高效液相色谱过程中采用的检测器为uv210。
13.优选的，所述高效液相色谱过程中采用的梯度洗脱程序为：0～25min，20％a；25～50min，20％～45％a；50～75min，45％a；75～90min，45～70％a；90～100min，70％a。
14.优选的，所述高效液相色谱过程中采用的流速为0.8～1.2ml/min。
15.优选的，所述泽泻样品在检测之前经过预处理，所述预处理包括以下步骤：
16.将泽泻样品与无水乙醇混合，在200～300w条件下进行超声处理20～40min。
17.优选的，所述泽泻样品与无水乙醇的质量体积比为1g:40～60ml。
18.本发明的技术效果和优点：
19.本发明提供的方法能够同时测定泽泻醇a、泽泻醇b、泽泻醇c、23-乙酰泽泻醇b、泽泻醇a酸酯、泽泻醇b酸酯，检测灵敏、快速。有利于泽泻药材的相关检测，还可鉴定不同泽泻品种中活性成分的含量，应用前景较广。
具体实施方式
20.本发明提供了一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，利用高效液相色谱法检测泽泻样品；所述高效液相色谱过程中采用正己烷-0.005～0.015％醋酸水溶液作为流动相，所述流动相优选为正己烷-0.005～0.015％醋酸水溶液；所述正己烷为a组分，所述0.005～0.015％醋酸水溶液为b组分，所述醋酸水溶液的浓度进一步优选为0.008～0.012％。
21.所述高效液相色谱过程中优选采用xbp silica作为分析柱。
22.所述高效液相色谱过程中采用的检测温度优选为53～58℃，进一步优选为54～56℃。
23.所述高效液相色谱过程中采用的检测器优选为uv210。
24.所述高效液相色谱过程中采用的梯度洗脱程序优选为：0～25min，20％a；25～50min，20％～45％a；50～75min，45％a；75～90min，45～70％a；90～100min，70％a。
25.所述高效液相色谱过程中采用的流速优选为0.8～1.2ml/min，进一步优选为0.9～1.1ml/min。
26.所述泽泻样品在检测之前优选经过预处理，所述预处理包括以下步骤：将泽泻样品与无水乙醇混合，在200～300w条件下进行超声处理20～40min，所述泽泻样品与无水乙醇的质量体积比优选为1g:40～60ml，进一步优选为1g:45～55ml；所述超声处理的时间进一步优选为25～35min，所述超声处理的功率进一步优选为230～270w。
27.下面结合实施例对本发明提供的技术效果进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
28.实验所用试剂：泽泻醇a、泽泻醇b、泽泻醇c、23-乙酰泽泻醇b、泽泻醇a酸酯和泽泻醇b酸酯标准品均购自美国sigma公司。
29.实验所用仪器：sil-20a自动进样器、lc-20at高效液相色谱仪、lc solution色谱工作站(日本岛津)。
30.实施例1
31.色谱条件如下：
32.分析柱：xbp silica(5μm，4.6
×
250mm)；
33.流动相：正己烷(a)、0.01％醋酸水溶液(b)；
34.填料：silica固相萃取硅胶填料；
35.检测器：uv210；
36.检测温度：55℃；
37.流速：1ml/min；
38.检测波长：210nm；
39.梯度洗脱程序：0～25min，20％a；25～50min，20％～45％a；50～75min，45％a；75～90min，45～70％a；90～100min，70％a；
40.采用无水乙醇作为样品处理溶剂，精密称取样品粉末1.0g，放入100ml具塞锥形瓶中，精密加入50ml无水乙醇，密塞250w条件下超声提取30min，冷却后再次精密称量，用无水乙醇补足，得到样品溶液。
41.采用无水乙醇配制标准品溶液，配制得到含有泽泻醇a、泽泻醇b、泽泻醇c、23-乙
酰泽泻醇b、泽泻醇a酸酯和泽泻醇b酸酯的质量浓度分别为0.20mg/l、0.10mg/l、0.10mg/l、0.40mg/l、0.05mg/l和0.05mg/l的混合标准品溶液。
42.分别取15个泽泻药材样品和混合标准品溶液，按照上述方法进行送样检测，结果如下表1所示：
43.表1多组数据检测结果
[0044][0045]
精密度和重复性检验：精确称取相同来源的泽泻样品6份，采用上述方法平行制备样品溶液，并分别进样测定，计算每种成分的含量，并分别计算出含量对应的rsd；采用上述制备得到的混合标准品溶液，连续进样6次，每次进样10μl，得到各成分的峰面积rsd，结果如下表2所示：
[0046]
表2精密度和重复性检验结果
[0047][0048][0049]
由表2可知，本发明提供的测定方法具有良好的重复性和较高的精密度。
[0050]
由以上实施例可知，本发明提供了一种能够同时测定泽泻醇a、泽泻醇b、泽泻醇c、
23-乙酰泽泻醇b、泽泻醇a酸酯、泽泻醇b酸酯含量的方法，能够用于检测不同泽泻药材中活性成分，且检测快速简便。
[0051]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，利用高效液相色谱法检测泽泻样品；所述高效液相色谱过程中采用正己烷-0.005～0.015％醋酸水溶液作为流动相；所述正己烷为a组分，所述0.005～0.015％醋酸水溶液为b组分。2.根据权利要求1所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱过程中采用xbp silica作为分析柱。3.根据权利要求2所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱过程中采用的检测温度为53～58℃。4.根据权利要求3所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱过程中采用的检测器为uv210。5.根据权利要求4所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱过程中采用的梯度洗脱程序为：0～25min，20％a；25～50min，20％～45％a；50～75min，45％a；75～90min，45～70％a；90～100min，70％a。6.根据权利要求5所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱过程中采用的流速为0.8～1.2ml/min。7.根据权利要求1～6任一项所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述泽泻样品在检测之前经过预处理，所述预处理包括以下步骤：将泽泻样品与无水乙醇混合，在200～300w条件下进行超声处理20～40min。8.根据权利要求7所述的同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，其特征在于，所述泽泻样品与无水乙醇的质量体积比为1g:40～60ml。

技术总结
本发明提供了一种同时检测六种泽泻活性成分含量的方法，属于中草药技术领域，本发明基于高效液相色谱法，通过特定参数的选择，克服了现有技术中泽泻活性成分含量测定方法复杂的问题。本发明提供的方法能够同时测定泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇A酸酯、泽泻醇B酸酯，检测灵敏、快速。有利于泽泻药材的相关检测，还可用于鉴定不同泽泻品种中活性成分的含量，为药材品质把控提供方法，具有较广的应用前景。具有较广的应用前景。


技术研发人员：杨路平 王晓琳 郑凤家 王林 邵立君 李蔚 焦燕妮
受保护的技术使用者：山东省疾病预防控制中心
技术研发日：2023.05.16
技术公布日：2023/8/13