一种治疗非酒精性脂肪肝的药物组合物

1.本发明涉及牛磺猪去氧胆酸在治疗非酒精性脂肪肝的应用。


背景技术：

2.非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，nafld)是一种无过量饮酒而肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床综合征。它是目前最常见的慢性肝病。nafld与肥胖、高血脂、2型糖尿病等糖脂代谢异常疾病密切相关。其基本病程包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化，最终可能发展成脂肪性肝硬化及脂肪性肝癌，可能导致过早死亡。全球约有20～40％的nafld患者，且数量在不断上升。
3.干预饮食和运动能有效控制nafld，生活方式干预是非酒精性脂肪肝治疗最重要的方式。但实施有困难，往往无法达到预期的效果。目前临床上对非酒精性脂肪肝的治疗主要采取降血脂、降血糖、抗氧化、保肝药物治疗。但因这些药物或存在副作用，或加剧肝脏负担，或药效欠佳，使用受到限制。目前尚未有批准的治疗nafld药物。
4.因此，一种高效干预与治疗非酒精性脂肪肝的药物，是目前临床上所急需的解决的实际问题。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗非酒精性脂肪肝的药物组合物，将牛磺猪去氧胆酸应用于治疗非酒精性脂肪肝。
6.技术方案
7.一种具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，所述组合物中含有有效量的下述化合物i或其可药用盐：
[0008][0009]
进一步，上述具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物中，化合物i的有效在体浓度为10～1000mg/kg。
[0010]
进一步，上述具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物中，化合物i的有效在体浓度
为50～300mg/kg。
[0011]
进一步，通过将上述化合物i或其药学上可接受的盐与至少一种选自稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂和稳定剂中的赋形剂混合来制备混合物，用于制备固形药物。
[0012]
进一步，如权利要求1所述的非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，所含化合物i中部分氢原子被氘取代。
[0013]
进一步，所述化合物i或其可药用的盐或所述药物组合物用在制备预防和/或治疗哺乳动物非酒精性脂肪肝的药物中的用途。
[0014]
进一步，所述的药物组合物在制备预防和/或治疗哺乳动物非酒精性脂肪肝的药物，可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂多种形式。
[0015]
进一步，所述的药物组合物在制备预防和/或治疗哺乳动物非酒精性脂肪肝的药物，包含药学上可接受的辅料，包括但不限于稀释剂、黏合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、包合材料、吸附材料等，用以制剂方法制备成口服制剂，包括但不限于颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液、汤剂、滴丸剂。
[0016]
有益效果
[0017]
本发明进一步发掘了牛磺猪去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝的药用价值，与模型组比较，给予牛磺猪去氧胆酸5周后，实验动物脂滴形成明显减少，肝脏中脂质含量显著降低，证实了牛磺猪去氧胆酸可以减少高脂饮食导致的小鼠肝脏中的脂质沉积；进一步发掘了牛磺猪去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝的药用价值，本发明为临床应用牛磺猪去氧胆酸防治nafld提供了坚实的基础，有助于推动牛磺猪去氧胆酸的临床应用。
附图说明
[0018]
图1是实验例1中各组小鼠给药5周后肝脏切片的he染色图，其中a为对照组；b为模型组；c给药组；
[0019]
图2是实验例1中各组小鼠给药5周后肝脏切片的油红o染色图，其中a为对照组；b为模型组；c给药组。
具体实施方式
[0020]
下面结合具体实施例和附图1～2，进一步阐述本发明。
[0021]
在本发明的实施例中，nd(normal diet,正常饮食),hfd(high fat diet，高脂饮食)；dmso(二甲基亚砜)；tg(甘油三酯)；tc(总胆固醇)。
[0022]
实施例1，牛磺猪去氧胆酸在治疗非酒精性脂肪肝的应用，采用动物实验对上述药物的效果进行验证，具体过程如下。
[0023]
(一)实验动物及试剂
[0024]
8周健康c57bl/6雄性小鼠(spf级)，体质量(20
±
2)g，由山东第一医科大学动物实验中心提供；
[0025]
高脂饲料((基础饲料66％，猪油20％，蔗糖12％，胆固醇2％，)购于南通特洛菲科技有限公司，普通饲料由科澳协力(天津)饲料有限公司提供；
[0026]
主要试剂：牛磺猪去氧胆酸(纯度≥98％)购自上海源叶生物科技有限公司；tg检
测试剂盒、tc检测试剂盒购自南京建成生物科技有限公司；
[0027]
(二)实验方法
[0028]
1.实验动物分组：将24只8周龄健康c57bl/6雌性小鼠在光照12h、恒温26℃环境中适应性喂养1周，随机将其分为对照组，模型组，给药组，每组各8只。
[0029]
2.动物模型的建立及取材：对照组(造模期间0.2％ dmso-水溶液灌胃)、模型组(造模期间0.2％ dmso-水溶液灌胃)、100mg/kg thdca给药组(造模期牛磺猪去氧胆酸灌胃)、给药前记录各个老鼠的体重。每天以0.1ml/10g/d的灌胃体积灌入上述对应剂量的药物或是溶液，灌胃后，对照组给予nd喂养，模型组和给药组给予hfd喂养，5周末，禁食不禁饮12h后，颈椎脱臼法处死老鼠，迅速摘除眼球取血分离血清后，放于-80℃保存。打开小鼠腹腔，快速解剖取出肝脏，取0.7cm
×
0.7cm
×
0.2cm大小用4％的多聚甲醛固定，用于石蜡切片制作，剩余的新鲜肝脏组织继续在-80℃保存，用于tc、tg指标检测。
[0030]
3.小鼠肝脏脂质抽提tc、tg含量测定
[0031]
取不同小鼠同一部位剪取50mg肝组织放入含0.1ml生理盐水的塑料离心管中，冰水浴条件下机械匀浆，向匀浆液中加入0.4ml的氯仿-甲醇(2:1)提取液，充分混匀，静置18h后，3000/rpm离心10min，可见离心管内分为清晰的上、中、下三层，上相为水相，中部为破碎的组织团块，下相为脂质层；小心抽取下相脂质，4℃冰冻保存，用试剂盒测总胆固醇(tc)、总甘油三脂(tg)含量。
[0032]
4.苏木素-伊红染色法(h&e)检测小鼠肝脏的结构变化
[0033]
常规石蜡包埋、切片、he染色和中性树胶封片，he染色用于观察组织形态是否发生病变，染色步骤如下：分别取对照组、模型组、给药组的造模后的小鼠肝脏组织浸泡在组织固定液中，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。将脱水的组织进行石蜡包埋、切片。染色前，二甲苯脱去切片中的石蜡，再用苏木精(hematoxylin，h)和伊红(eosin，e)染色2-5min，用无水乙醇分色与脱水，二甲苯透明，风干后中性树胶封片，最后用显微镜观察并拍照。
[0034]
5.油红染色(oil red o)检测小鼠肝脏中的脂滴积累
[0035]
分别取对照组、模型组、给药组的造模后的小鼠肝脏组织浸泡在组织固定液中，用梯度蔗糖溶液脱水，进行冷冻切片。将小鼠肝脏的冰冻切片放置于室温，再pbs冲洗3遍。用油红染色液滴于该切片染色10min。倾掉油红染色液，同时以60％异丙醇冲洗3遍，再蒸馏水轻洗3次。最后，使用明胶固定。在显微镜下观察并拍照。
[0036]
(三)实验结果
[0037]
表1.牛磺猪去氧胆酸降低小鼠非酒精性脂肪肝模型肝脏脂质含量的作用(mean
±
sem，n＝8)
[0038][0039]
与对照组相比#p《0.05##p《0.01；与模型组相比*p《0.05**p《0.01
[0040]
1.tc、tg含量变化
[0041]
分析表1发现，与对照组相比，模型组小鼠肝脏中tc、tg水平均明显增高；与模型组相比，给药组的小鼠肝脏tc、tg水平均显著降低。牛磺猪去氧胆酸能显著降低nafld小鼠肝脏中tc、tg水平。
[0042]
2.he染色观察分析
[0043]
如图2所示，肝脏he染色结果显示，对照组肝细胞形态正常，未见明显的变性、坏死，汇管区未见明显的炎性细胞或纤维组织增生；模型组肝组织几乎被脂肪空泡取代，肝细胞气球样变性，汇管区内有炎性细胞浸润，未见纤维组织增生；给药组肝组织内脂肪空泡散状分布，未见明显的炎症炎性细胞或纤维组织增生。由此得出，牛磺猪去氧胆酸能较好地改善nafld小鼠肝脏脂肪变性程度。
[0044]
3.肝脏冰冻切片油红o染色结果
[0045]
对照组未见脂滴形成，模型组小鼠肝细胞内出现大量红色脂滴，脂质含量显著高于对照组。与模型组比较，给予牛磺猪去氧胆酸5周后，脂滴形成明显减少，脂质含量显著降低。牛磺猪去氧胆酸可以减少高脂饮食导致的小鼠肝脏中的脂质沉积。
[0046]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，所述组合物中含有有效量的下述化合物i或其可药用盐：2.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，上述具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物中，化合物i的有效在体浓度为10～1000mg/kg。3.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，上述具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物中，化合物i的有效在体浓度为50～300mg/kg。4.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，通过将化合物i或其药学上可接受的盐与至少一种选自稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂和稳定剂中的赋形剂混合来制备混合物，用于制备固形药物。5.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，化合物i中部分或全部氢原子被氘取代。6.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，所述组合物用在制备预防和/或治疗哺乳动物非酒精性脂肪肝的药物中的用途。7.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，所述的组合物在制备预防和/或治疗哺乳动物非酒精性脂肪肝的药物，可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂多种形式。8.如权利要求1所述的具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，其特征在于，还包含药学上可接受的辅料，包括但不限于稀释剂、黏合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、包合材料、吸附材料等，用以制剂方法制备成口服制剂，包括但不限于颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液、汤剂、滴丸剂。

技术总结
本发明涉及治疗非酒精性脂肪肝的药物，属于化学药物领域。本发明提供一种具有非酒精性脂肪肝治疗活性的组合物，与模型组相比较，给予牛磺猪去氧胆酸5周后，实验动物脂滴形成明显减少，脂质含量显著降低，证实了牛磺猪去氧胆酸可以减少高脂饮食导致的小鼠肝脏中的脂质沉积；该技术方案进一步发掘了牛磺猪去氧胆酸治疗非酒精性脂肪肝的药用价值，为临床应用牛磺猪去氧胆酸防治NAFLD提供了坚实的基础，有助于推动牛磺猪去氧胆酸的临床应用。有助于推动牛磺猪去氧胆酸的临床应用。有助于推动牛磺猪去氧胆酸的临床应用。


技术研发人员：王松松 韩利文 刘晓丽 赵焕新 李太平 刘慧茹 马怡涵 肖奕昕
受保护的技术使用者：山东第一医科大学（山东省医学科学院）
技术研发日：2023.05.06
技术公布日：2023/8/13