新型长保质期甜瓜植物的制作方法

1.本发明涉及新型甜瓜植物，这些新型甜瓜植物产生表现出长保质期性状以及成熟指标性状的组合的果实。本发明还涉及所述植物的种子和部分，例如果实。本发明进一步涉及制造和使用这样的种子和植物的方法。本发明还涉及与成熟时转变外皮表型相关的新型基因序列，当与长保质期等位基因组合时，这些新型基因序列显著改变成熟甜瓜果实的特征，作为可靠的成熟指标同时保留适合的适销特征并且产生新型甜瓜植物类型。


背景技术：

2.美洲种植的哈密瓜(cantaloupe melon)有两种类型的果实成熟：跃变型和非跃变型。传统上，美洲种植的western shipper哈密瓜是跃变型。跃变型果实成熟的特征在于在成熟开始时呼吸爆发和乙烯的自催化合成，这触发了一系列乙烯依赖性途径或过程以及一些成熟指标表型的表达，如果皮从绿色变成淡黄色/黄色(叶绿素降解)以及果梗从藤上滑落(离层形成，滑落型甜瓜)等其他特征(综述参见pech等人,2008)。因此，果皮颜色从绿色变成黄色/淡黄色可以作为这种甜瓜类型成熟的指标，并且当外皮颜色改变并且果实从藤上滑落时，收获者可以从茎上摘下果实。
3.一方面，这些western shipper哈密瓜具有浓郁的香气和麝香味。因此，它们受到终端消费者的高度赞赏。然而，这种甜瓜类型的一个缺点是它们需要频繁收获(10-12次)，几乎每天收获持续两周，因此劳动强度大。事实上，如果没有在全滑落阶段采摘它们，随后的延迟会缩短果实的保质期。此外，由于乙烯产生增加，它们还表现出较差的收获后保质期以及由于运输或储存过程中收缩而导致的浪费。
4.因此，在最重要的种植区以及大多数商店中普遍存在的传统western shipper哈密瓜(跃变型)的存在在约10-12年前开始下降。它们逐渐被长保质期(lsl)哈密瓜(非跃变型)所取代，这些长保质期哈密瓜现在是大多数美洲市场上常见的地方甜瓜。lsl哈密瓜(也称为harper)为种植者和零售商带来了益处：种植者可以减少收获次数并获得灵活性，而零售商延长了保质期并减少因收缩而造成的损失。单显性基因(以下称为lsl10)有助于这些甜瓜中的大多数的长保质期。这些类型的包含lsl10等位基因的甜瓜表现出非跃变型果实成熟，乙烯的水平降低和/或对乙烯的敏感性降低，因此果实具有优异的田间和收获后保质期。果实只需要采摘两到三次，而不是10-12次。
5.然而，lsl哈密瓜不会从藤上滑落，并且它们的外皮颜色不会像传统的western shipper品种那样在成熟时从绿色变成黄色。因此，种植者很难确定理想的成熟收获点，因为他们缺乏可靠的“成熟指标”，如转变外皮表型，并且因此一些甜瓜在完全成熟之前收获，且缺乏香气和风味。
6.因此，虽然由于上述几种农艺学优势，十多年前lsl型哈密瓜的引入导致大多数商业种植者转变为lsl甜瓜，但终端消费者同时开始远离这样的表现出感官特性下降的甜瓜。换句话说，对一方面可以满足种植者和零售商并且另一方面可以满足消费者的新型甜瓜类型的需求仍未得到满足。


技术实现要素：

7.本发明解决了对将一方面有利于种植者和零售商两者并且另一方面有利于消费者的特征组合的新型和改善的甜瓜类型的需求。通过鉴定一种与非乙烯依赖性转变外皮表型相关的qtl，并将其相应的序列渗入lsl哈密瓜植物背景中，诸位发明人获得了表现出长保质期以及成熟指标性状的新型甜瓜植物类型，这使得种植者能够以最小的劳动力成本在适当的成熟时收获甜瓜果实，零售商将受益于保存的长保质期特征，并且消费者可以享受完全成熟的甜瓜果实。位于6号染色体上的转变外皮qtl及其潜在的渗入序列(也称为转变外皮qtl或qtl6)具有半显性性质，因此该序列的一个拷贝已在甜瓜背景(携带长保质期lsl10等位基因的至少一个拷贝)中提供了转变外皮、成熟指标表型。
8.总而言之，本发明披露的改善的甜瓜植物的特征向甜瓜种植者提供了新型解决方案，以在市场上部署哈密瓜品种时提高经济和商业效率。
9.在第一个实施例中，本发明提供了栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地粗皮甜瓜(cucumis melo var.cantalupensis)植物或网纹甜瓜(cucumis melo var.reticulatus)植物，其基因组中包含：
10.a)lsl10等位基因的至少一个拷贝，以及；
11.b)来自闻瓜(c.melo var.dudaim)的渗入序列的至少一个拷贝，该渗入序列与转变外皮表型相关，位于6号染色体上并且包含以下snp标记中的至少一个：
12.i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
13.ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
14.iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
15.iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
16.v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
17.vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
18.vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
19.viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
20.ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
21.x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
22.其中所述植物产生表现出长保质期表型的甜瓜果实，并且其中所述甜瓜果实在达到完全成熟时进一步表现出转变外皮表型。
23.在另外的实施例中，所述渗入序列包含seq id no:1、seq id no:6、seq id no:11、seq id no:16、seq id no:21、seq id no:26、seq id no:31、seq id no:36、seq id no:41和/或seq id no:46中的至少一个，或与所述序列中的一个或多个具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％、甚至更优选地至少95％同一性的序列。
24.在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述转变外皮表型的特征在于外皮颜色从未成熟时的绿色变成在达到完全成熟时的黄色。
25.在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡(royal horticultural society colour chart)的色标(colour patch)测量时，所述甜瓜果皮在完全成熟时的黄色的范围为15至20(a-d)。
26.在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在完全成熟时的黄色为19a或19b。
27.在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在未成熟时的绿色范围为135至143(a-d)。
28.在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在未成熟时的绿色为138c、138d或139a。
29.在另外的实施例中，如实例2a中所披露的评估转变外皮表型。
30.在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述lsl10等位基因包含以下snp标记：
31.a)在对应于seq id no:51中的位置107的位置处的snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。
32.在另外的实施例中，所述lsl10等位基因包含seq id no:51，或与所述序列具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％、甚至更优选地至少95％同一性的序列。
33.在本发明的另外的实施例中，所述植物的所述至少一个snp标记1至10是纯合的。在另外的实施例中，本发明提供了根据任一前述实施例所述的植物，其中所述植物的所述lsl10等位基因是纯合的。
34.在本发明的另外的实施例中，所述lsl10等位基因和所述渗入序列包含在甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先中。
35.在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述植物通过将甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先与不含所述渗入序列的甜瓜植物杂交获得。
36.在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述植物是近交、双单倍体或杂种植物。
37.另外的实施例提供了可从根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物中获得的植物部分、器官或组织，包括但不限于叶、茎、根、花或花部分、果实、芽、配子体、孢子体、花粉、花药、小孢子、卵细胞、受精卵、胚、分生区、愈伤组织、种子、插条、细胞或组织培养物、或仍表现出根据本发明的转变外皮表型的植物(特别地当生长为产生果实的植物)的任何其他部分或产品。
38.在另外的实施例中，本发明提供了产生根据前述实施例中任一项所述的植物的种子。
39.在另外的实施例中，本发明提供了用于产生栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中该方法包括以下步骤：
40.a)将根据前述实施例中任一项所述的植物与缺乏所述lsl10等位基因和所述渗入序列的栽培甜瓜植物杂交；
41.b)选择子代植物，该子代植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝以及位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，所述选择步骤包括检测以下snp标记中的至少一个：
42.i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
43.ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
44.iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
45.iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
46.v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
47.vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
48.vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
49.viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
50.ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
51.x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
52.从而产生植物，该植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。
53.在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括：
54.c)使所选择的子代自交或使所选择的子代与另一甜瓜植物杂交，以产生另外的子代。
55.在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中选择另外的子代，并且再自交/杂交2代至10代。
56.在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的方法，其中步骤a)的植物是甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先。
57.在另外的实施例中，本发明涉及用于产生表现出转变外皮表型的f1甜瓜植物的方法，该方法包括将近交甜瓜植物(其是根据前述实施例中任一项所述的植物)与不同的近交甜瓜植物杂交，以产生f1杂种子代。
58.在另外的实施例中，本发明提供了用于鉴别栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中所述植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝以及位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，其中所述方法包括以下步骤：检测以下snp标记中的至少一个：
59.a)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
60.b)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
61.c)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
62.d)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
63.e)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
64.f)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
65.g)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
66.h)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
67.i)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
68.j)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
69.从而鉴别甜瓜植物，该甜瓜植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。
70.在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中该方法进一步包括检测以下snp标记的步骤：
71.a)在对应于seq id no:51中的位置107的位置处的snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。
72.在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括选择包含所述一个或多个snp标记的甜瓜植物，以及使所选择的甜瓜植物与第二甜瓜植物杂交，以产生包含所述snp标记中的至少一个并表现出本发明的转变外皮表型的子代甜瓜植物。
具体实施方式
73.定义
74.如果下文没有另外说明，在本技术范围内所使用的技术术语和表述一般被给予在植物育种和栽培相关领域中通常应用于其上的意义。
75.如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个/种(a/an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文中清楚地另外表明。因此，例如，提及“一种植物”包括一种或多种植物，并且提及“一种细胞”包括多种细胞、组织等的混合物。
[0076]“栽培甜瓜”或“良种甜瓜”植物在本发明的范围内被理解为是指不再是呈天然状态，而是已经通过人类的照料进行发育和驯化并且供农业使用和/或人类消费的植物。在本发明的上下文中，“栽培甜瓜”或“良种甜瓜”植物不包括野生甜瓜种质。作为实例，在实施例中，根据本发明的栽培或良种甜瓜植物能够生长白利糖度水平超过8、优选地超过10、甚至更优选地超过12的果实。可替代地，或另外地，栽培甜瓜植物是杂种植物。可替代地，或另外地，栽培甜瓜植物是哈密瓜植物。可替代地，或另外地，栽培哈密瓜植物是粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物(pitrat等人,2000)。在粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物与野生甜瓜种质、或不同的甜瓜变种(c.melo var.)(例如闻瓜种质)之间的种间杂交的上下文中，栽培甜瓜植物被定义为所述种间杂交的子代植物，其中所述子代植物已与粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物回交至少三次。
[0077]
在本发明的范围内“等位基因”被理解为是指与基因或任意类型的可鉴定遗传决定子(如qtl)的不同形式相同的或关联的不同遗传单位的可替代或变体形式，它们在遗传中是可替代的，因为它们处于同源染色体的同一基因座处。这样的可替代或变体形式可以是单核苷酸多态性、插入、倒置、易位或缺失的结果，或是基因调控(由例如化学或结构修饰引起的)、转录调控或翻译后修饰/调控的结果。在二倍体细胞或生物体中，给定基因或遗传元件的两个等位基因典型地占有同源染色体对上相应的基因座。
[0078]
本文中术语“转变外皮”或“转变外皮颜色”被理解为意指与缺乏位于6号染色体上的来自闻瓜植物的渗入序列的植物相比，包含所述渗入序列并包含snp标记1至10中的至少一个以及lsl10等位基因的至少一个拷贝的植物表现出转变外皮表型。特别地，根据本发明的甜瓜植物产生表现出外皮颜色从未成熟时的绿色转变成在达到完全成熟时的淡黄色或黄色的果实。相反，缺乏本发明的渗入序列的植物产生在未成熟阶段至完全成熟阶段之间不转变外皮颜色(即，保持绿色或灰绿色)的果实。
[0079]“未成熟果实”在本发明的范围内被理解为意指总可溶性固体小于10
°
白利糖度的甜瓜果实。
[0080]“完全成熟”或“完全成熟果实”在本发明的范围内被理解为意指总可溶性固体等于或大于10
°
白利糖度，优选地大于12
°
白利糖度的甜瓜果实。
[0081]
术语“长保质期”表型在本发明的范围内被理解是指在成熟时不会从藤上滑落(即不形成上离层)和/或在收获时在收获后14至20天内保留良好适销特征的果实。
[0082]“表型”在本发明的范围内应理解为是指在基因上控制的性状的一个或多个可区分的特征。
[0083]“对照甜瓜植物”在本发明范围内意指具有与本发明的栽培甜瓜植物相同的遗传背景的甜瓜植物，其中该对照植物不具有与转变外皮表型连锁的渗入序列。特别地，对照甜
瓜植物是属于同一植物品种的甜瓜植物，并且不包含本发明的渗入序列。特别地，对照甜瓜植物可以是包含lsl10等位基因但不包含位于6号染色体上的渗入序列的甜瓜植物。使对照甜瓜植物在与本发明的栽培甜瓜植物相同的条件下生长相同的时间长度。本文根据upov的定义理解植物品种。因此，对照甜瓜植物可以是近等基因株系、近交株系或杂种，条件是它们具有与本发明的甜瓜植物相同的遗传背景，除了该对照植物不具有与转变外皮表型连锁的本发明的渗入序列。
[0084]
术语“性状”是指特征或表型。在本发明的上下文中，性状是转变外皮性状。性状可以是以显性或隐性方式或是以部分或不完全显性方式遗传的。在本发明的上下文中，位于6号染色体上的转变外皮渗入序列是半显性的。因此，本发明的甜瓜植物的性状可以是纯合的或杂合的。此外，性状可以是单基因的或多基因的，或者可以是由一种或多种基因与环境相互作用而产生的。在本发明的上下文中，位于6号染色体上的转变外皮渗入序列当与长保质期lsl10等位基因相关时赋予转变外皮性状。
[0085]
术语“杂种”、“杂种植物”以及“杂种子代”是指由在基因上不同的亲本产生的个体(例如，在基因上是杂合的或主要是杂合的个体)。
[0086]
术语“近交株系”是指在基因上是纯合的或近乎纯合的群体。例如，近交株系可以通过几个循环的兄弟/姐妹育种或自交或双单倍体产生来获得。
[0087]
术语“双单倍体株系”是指由花药培养得出的稳定的近交株系。在特定培养基和环境中培养的一些花粉粒(单倍体)可以发育成含有n个染色体的小植物。然后使这些小植物“加倍”并且包含2n个染色体。这些小植物的子代称为“双单倍体”并且基本上不再分离(稳定的)。
[0088]
术语“遗传上固定的”是指已经稳定掺入植物基因组中的遗传序列，该植物基因组通常不含所述遗传序列。当遗传上固定时，遗传序列可以通过有性杂交以容易和可预测的方式传播给其他植物。
[0089]
术语“砧木”是指用作接穗植物托的植物。典型地，砧木植物和接穗植物具有不同的基因型。在实施例中，根据本发明的植物用作砧木植物。
[0090]
下文中的术语“植物”或“植物部分”是指可从根据本发明的甜瓜植物获得的植物部分、器官或组织，包括但不限于叶、茎、根、花或花部分、果实、芽、配子体、孢子体、花粉、花药、小孢子、卵细胞、受精卵、胚、分生区、愈伤组织、种子、插条、细胞或组织培养物、或仍表现出根据本发明的转变外皮性状的植物(特别地当生长为产生果实的植物)的任何其他部分或产品。
[0091]“植物”是在发育的任何阶段的任何植物。
[0092]
甜瓜植物种子是生长成为根据实施例中任一项所述的甜瓜植物的种子。
[0093]“植物细胞”是植物(包含原生质体和细胞壁)的结构和生理单位。植物细胞可以呈分离的单一细胞或经培养的细胞的形式，或作为高等组织化单元(如例如，植物组织、植物器官或全株植物)的一部分。
[0094]“植物细胞培养物”意指植物单元(如例如，原生质体、细胞培养物细胞、植物组织中的细胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、受精卵、以及处于不同发育阶段的胚)的培养物。
[0095]“植物器官”是植物的独特而明显的已结构化并且分化的部分，如根、茎、叶、花芽或胚。
[0096]
如本文所用，“植物组织”意指组织化成结构和功能单元的一组植物细胞。包括植物中或培养物中的任何植物组织。该术语包括但不限于全株植物、植物器官、植物种子、组织培养物以及被组织化成结构和/或功能单元的任何植物细胞群组。该术语与如以上列出的或由该定义以其他方式涵盖的任何特定类型的植物组织的联合应用或单独应用并不旨在排除任何其他类型的植物组织。
[0097]
如本文所用，术语“育种”及其语法变体是指产生子代个体的任何过程。育种可以是有性的或无性的，或其任意组合。示例性非限制性育种类型包括杂交、自交、双单倍体衍生物生成及其组合。
[0098]
如本文所用，短语“建立的育种群体”是指由育种计划(例如，商业育种计划)中的亲本产生和/或用作亲本的潜在育种伙伴的集合。建立的育种群体的成员典型地在基因和/或表型方面得到充分表征。例如，可能已经评估感兴趣的几个表型性状，例如在不同的环境条件下、在多个位置和/或在不同的时间。可替代地，或另外地，可能已经鉴别一个或多个与表型性状的表达相关的遗传基因座，并且可能已经就该一个或多个遗传基因座方面以及就与该一个或多个遗传基因座相关的一个或多个基因标记方面对育种群体的一个或多个成员进行基因分型。
[0099]
如本文所用，短语“二倍体个体”是指具有两组染色体的个体，典型地，一组来自它的两个亲本中的每一个。然而，应理解，在一些实施例中，二倍体个体可以从相同的单一生物体接收它的“母本”和“父本”组的染色体，如当植物自体授粉以产生植物的继代时。
[0100]“纯合的”在本发明的范围内应理解为是指在同源染色体上的一个或多个相应的基因座处的相同的等位基因。在本发明的上下文中，在特定基因座处包含特定渗入序列(例如，位于6号染色体上的渗入序列)的两个相同拷贝的甜瓜植物在相应的基因座上是纯合的。
[0101]“杂合的”在本发明的范围内应理解为是指在同源染色体上的一个或多个相应的基因座处的不同的等位基因。在本发明的上下文中，在特定基因座处包含特定渗入序列(例如，位于6号染色体上的渗入序列)的一个拷贝的甜瓜植物在相应的基因座上是杂合的。
[0102]“显性”等位基因在本发明的范围内应理解为是指当以杂合或纯合状态存在时决定表型的等位基因。
[0103]“半显性”等位基因在本发明的范围内应理解为是指当以杂合或纯合状态存在时决定表型的等位基因。然而，等位基因以纯合状态存在时表型强度总体上较高。
[0104]“隐性”等位基因是指当仅以纯合状态存在时决定表型的等位基因。
[0105]“回交”在本发明的范围内应理解为是指使杂种子代与亲本之一重复往回杂交的方法。不同的轮回亲本可以被用在随后的回交中。
[0106]“基因座”在本发明的范围内应理解为是指染色体上包含对性状有贡献的基因、qtl或其相应的基因序列的区域。
[0107]
如本文所用，“标记基因座”是指染色体上包含存在于个体基因组中并且与一个或多个感兴趣的基因座相关的核苷酸或多核苷酸序列的区域，该区域可能包含对性状有贡献的基因或任何其他遗传决定子或因子。“标记基因座”还指染色体上包含与基因组序列互补的多核苷酸序列(如用作探针的核酸的序列)的区域。
[0108]“遗传连锁”在本发明的范围内应理解为是指由于基因在同一染色体上的位置邻
近而引起的遗传特征关联性，通过基因座之间的重组百分比来测量(厘摩，cm)。
[0109]
出于本发明的目的，术语“共分离”是指以下事实：针对性状的等位基因和针对一个或多个标记的一个或多个等位基因倾向于一起传递，这是因为它们在同一染色体上物理地紧靠在一起(它们之间的重组由于它们物理的邻近而减少)，导致它们的等位基因由于它们在同一染色体上的邻近而非随机关联。术语“与
……
相关”可以以相同的含义使用。
[0110]
如本文所用，短语“有性杂交的”和“有性生殖”在本发明披露的主题的上下文中是指配子融合以产生子代(例如，通过受精，如在植物中通过授粉产生种子)。在一些实施例中，“有性杂交”或“异体受精”是一个个体被另一个体受精(例如，植物中的异花授粉)。在一些实施例中，术语“自体受精”是指通过自体受精或自花授粉来产生种子；即，花粉和胚珠是来自同一植物。
[0111]
如本文所用，短语“基因标记”或“dna标记”是指个体的基因组中与一个或多个感兴趣的基因座相关联的特征(例如，存在于个体的基因组中的核苷酸或多核苷酸序列)。在一些实施例中，基因标记在感兴趣的群体中是多态性的，或基因座被多态性占据，这取决于上下文。基因标记包括例如单核苷酸多态性(snp)、插入缺失(indel)(即，插入/缺失)、简单序列重复(ssr)、限制片段长度多态性(rflp)、随机扩增多态性dna(rapd)、切割扩增多态性序列(caps)标记、多样性阵列技术(dart)标记以及扩增片段长度多态性(aflp)以及许多其他实例。基因标记可以例如用于对染色体上包含对表型性状的可变性有贡献的等位基因的遗传基因座进行定位。短语“基因标记”还可以指与基因组序列互补的多核苷酸序列，如用作探针的核酸的序列。
[0112]
如本文所用，术语“基因型”是指细胞或生物体的基因组成。个体的“一组基因标记的基因型”包括个体的单倍型中存在的一个或多个基因标记基因座的特定等位基因。
[0113]
如本文所用，术语“子代”是指特定杂交的一个或多个后代。典型地，子代由两个个体的育种产生，但一些物种(特别地一些植物和雌雄同体的动物)可以自交(即，同一株植物充当雄性和雌性配子两者的供体)。该一个或多个后代可以是例如f1、f2或任何继代。
[0114]
如本文所用，术语“数量性状基因座”(qtl)是指基因标记与影响感兴趣的性状表型的染色体区域和/或基因和/或渗入序列之间的关联。典型地，这是统计学确定的，例如，基于文献中公开的一种或多种方法。qtl可以是具有差异地影响表型性状的至少两个等位基因的染色体区域和/或遗传基因座。
[0115]
术语“受体甜瓜植物”在本文中用于指示将接受从供体甜瓜植物获得的dna的甜瓜植物，该dna包含用于转变外皮性状的渗入序列。在本发明的上下文中，受体植物可以已经包含lsl10等位基因的至少一个拷贝，在这样的情况下，渗入qtl6的至少一个拷贝对于转变外皮表型的表达是必要的。在本发明的上下文中，受体植物还可以是缺乏qtl6和lsl10等位基因两者的植物，因此渗入每个等位基因的至少一个拷贝对于转变外皮表型的表达是必要的。
[0116]
术语“天然遗传背景”在本文中用于指示基因序列的原始遗传背景。例如，这样的背景可以是野生甜瓜种质的基因组。例如，在闻瓜植物的6号染色体上的特定位置发现了本发明的基因序列。相反，涉及将包含该基因序列的dna经由例如育种从闻瓜植物的6号染色体转移到另一甜瓜物种(优选地栽培甜瓜植物或栽培哈密瓜植物，甚至更优选地粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物)的6号染色体上的相同位置的方法将导致该基因序列不在其天然遗
传背景中。当本发明的基因序列从闻瓜背景转移到另一甜瓜物种，优选地栽培甜瓜植物，甚至更优选地粗皮甜瓜或网纹甜瓜植物时，它们被称为“渗入序列”或“渗入基因序列”。
[0117]“供体甜瓜植物”在本发明的范围内被理解为意指至少提供用于转变外皮的渗入序列的甜瓜植物。在本发明的上下文中，如果受体植物缺少lsl10等位基因的至少一个拷贝，则供体植物也可以包含这样的lsl10等位基因的至少一个拷贝。
[0118]“基于标记的选择”在本发明的范围内应理解为是指例如使用基因标记从植物中检测一种或多种核酸(其中该核酸与期望的性状相关联)，以鉴别出携带期望的(或不期望的)性状的等位基因的植物，使得在选择性育种计划中可以使用(或避免)那些植物。
[0119]
单核苷酸多态性(snp)是dna中单个位点的变异，是基因组中最常见的变异类型。单核苷酸多态性(snp)是当基因组(或其他共有序列)中的单个核苷酸—a、t、c或g—在生物物种的成员或个体的成对染色体之间不同时发生的dna序列变异。例如，来自不同个体的两个测序的dna片段，aagccta至aagctta，含有单个核苷酸的差异。在这种情况下，存在两个等位基因：c和t。snp阵列的基本原理与dna微阵列相同。这些是dna杂交、荧光显微镜法和dna捕获的融合。snp阵列的三个组分是含有核酸序列(即，扩增的序列或靶标)的阵列，一个或多个标记的等位基因特异性寡核苷酸探针，以及记录并解释杂交信号的检测系统。期望的snp标记等位基因的存在或不存在可以通过使用双链dna染料的实时pcr或荧光报告探针法来确定。
[0120]“pcr(聚合酶链反应)”在本发明的范围内应理解为是指产生相对较大量的基因组的dna或一个或多个子集的特定区域，从而进行基于那些区域的可能的不同分析的方法。“pcr引物”在本发明的范围内应理解为是指dna的特定区域的pcr扩增中所使用的相对较短的单链dna片段。
[0121]
如本文所用，“探针”是指能够识别并且结合于特定目标分子或细胞结构并且因而允许目标分子或结构的检测的一组原子或分子。特别地，“探针”是指可以用于通过分子杂交来检测互补序列的存在并且对其定量的经过标记的dna或rna序列。
[0122]“序列同一性”。在两个或更多个核酸或蛋白序列的背景下，术语“同一的”或“同一性”是指如使用以下序列比较算法之一或通过目测进行测量，当比较和比对最大相应性时，两个或更多个序列或子序列是相同的或具有指定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸。如果彼此进行比较的两个序列长度不同，则序列同一性优选地涉及与较长序列的核苷酸残基具有同一性的较短序列的核苷酸残基的百分比。如本文所用，这两个序列之间的百分比同一性/同源性是这些序列共享的相同位置的数目的函数(即，％同一性＝相同位置的数目/位置的总数目x 100)，考虑了空位的数目以及每个空位的长度(需要在这两个序列的优化比对中引入它们)。序列的比较和两个序列之间的百分比同一性的确定可以使用数学算法来完成，如下文所述的。例如，常规地可以通过使用计算机程序如bestfit程序(威斯康星序列分析包(wisconsin sequence analysis package)，针对unix的版本8，遗传学计算机集团公司(genetics computer group)，大学研究园区(university research park)，威斯康星州麦迪逊市科学先驱路575号(575science drive madison,wi)53711)来确定序列同一性。bestfit使用smith和waterman,advances in applied mathematics[应用数学进展]2(1981),482-489的局部同源性算法以便找到两个序列之间具有最大序列同一性的区段。当使用bestfit或另一序列比对程序来确定一个特定的序列是否与本发明的一个参考序列具
有例如95％的同一性时，优选地对参数进行调整从而在参考序列的整个长度上计算同一性的百分比并且允许参考序列中同源性空位占核苷酸总数的高达5％。当使用bestfit时，优选地将所谓的任选的参数保留在它们预设(“默认”)值。在给定的序列和上述本发明的序列之间的比较中出现的偏差可能是由例如添加、缺失、取代、插入或重组引起的。优选地还可以使用程序“fasta20u66”(版本2.0u66，1998年9月，由william r.pearson和弗吉尼亚大学编写；还参见w.r.pearson(1990),methods in enzymology[酶学方法]183,63-98所附的实例以及http://workbench.sdsc.edu/)进行这样的序列比较。出于这个目的，可以使用“默认”参数设定。
[0123]
实施例
[0124]
植物、种子、果实。
[0125]
在第一个实施例中，本发明提供了栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物，其基因组中包含：
[0126]
a)lsl10等位基因的至少一个拷贝，以及；
[0127]
b)来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，该渗入序列与转变外皮表型相关，位于6号染色体上并且包含以下snp标记中的至少一个：
[0128]
i)seq id no:1中snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0129]
ii)seq id no:6中snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0130]
iii)seq id no:11中snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0131]
iv)seq id no:16中snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0132]
v)seq id no:21中snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0133]
vi)seq id no:26中snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0134]
vii)seq id no:31中snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0135]
viii)seq id no:36中snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0136]
ix)seq id no:41中snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0137]
x)seq id no:46中snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
[0138]
其中所述植物产生表现出长保质期表型的甜瓜果实，并且其中所述甜瓜果实在达到完全成熟时进一步表现出转变外皮表型。
[0139]
在另外的实施例中，本发明提供了栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物，其基因组中包含：
[0140]
a)lsl10等位基因的至少一个拷贝，以及；
[0141]
b)来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，该渗入序列与转变外皮表型相关，位于6号染色体上并且包含以下snp标记中的至少一个：
[0142]
i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0143]
ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0144]
iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0145]
iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的
g基因型；
[0146]
v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0147]
vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0148]
vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0149]
viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0150]
ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0151]
x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
[0152]
其中所述植物产生表现出长保质期表型的甜瓜果实，并且其中所述甜瓜果实在达到完全成熟时进一步表现出转变外皮表型。
[0153]
另外，根据前述实施例中任一项所述的植物，其中：
[0154]
a)snp标记1的a基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:2和反向引物seq id no:5，以及探针seq id no:3扩增核酸片段来鉴定；
[0155]
b)snp标记2的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:7和反向引物seq id no:10，以及探针seq id no:8扩增核酸片段来鉴定；
[0156]
c)snp标记3的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:12和反向引物seq id no:15，以及探针seq id no:13扩增核酸片段来鉴定；
[0157]
d)snp标记4的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:17和反向引物seq id no:20，以及探针seq id no:18扩增核酸片段来鉴定；
[0158]
e)snp标记5的c基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:22和反向引物seq id no:25，以及探针seq id no:23扩增核酸片段来鉴定；
[0159]
f)snp标记6的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:27和反向引物seq id no:30，以及探针seq id no:28扩增核酸片段来鉴定；
[0160]
g)snp标记7的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:32和反向引物seq id no:35，以及探针seq id no:33扩增核酸片段来鉴定；
[0161]
h)snp标记8的a基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:37和反向引物seq id no:40，以及探针seq id no:38扩增核酸片段来鉴定；
[0162]
i)snp标记9的a基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:42和反向引物seq id no:45，以及探针seq id no:43扩增核酸片段来鉴定；和/或
[0163]
j)snp标记10的c基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:47和反向引物seq id no:50，以及探针seq id no:48扩增核酸片段来鉴定。
[0164]
在本发明的另外的实施例中，所述转变外皮渗入序列包含seq id no:1、seq id no:6、seq id no:11、seq id no:16、seq id no:21、seq id no:26、seq id no:31、seq id no:36、seq id no:41和/或seq id no:46中的至少一个，或与所述序列具有至少80％、优选
地至少85％、更优选地至少90％、甚至更优选地至少95％同一性同时保留相应snp标记1至10的序列。
[0165]
在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述转变外皮表型的特征在于外皮颜色从未成熟时的绿色变成在达到完全成熟时的黄色。
[0166]
在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在完全成熟时的黄色的范围为15至20(a-d)。
[0167]
在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在完全成熟时的黄色为19a或19b。
[0168]
在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在未成熟时的绿色范围为135至143(a-d)。
[0169]
在另外的实施例中，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在未成熟时的绿色为138c、138d或139a。
[0170]
在另外的实施例中，如实例2a中所披露的评估转变外皮表型。
[0171]
在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述lsl10等位基因包含以下snp标记：
[0172]
a)seq id no:51中snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。
[0173]
在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述lsl10等位基因包含以下snp标记：
[0174]
a)在对应于seq id no:51中的位置107的位置处的snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。
[0175]
另外，根据前述实施例所述的植物，其中：
[0176]
a)snp标记11的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:52和反向引物seq id no:55，以及探针seq id no:53扩增核酸片段来鉴定。
[0177]
在另外的实施例中，所述lsl10等位基因包含seq id no:51，或与所述等位基因具有至少80％、优选地至少85％、更优选地至少90％、甚至更优选地至少95％同一性同时保留相应snp标记11的序列。
[0178]
在本发明的另外的实施例中，所述植物的所述至少一个snp标记1至10是纯合的。在另外的实施例中，本发明提供了根据任一前述实施例所述的植物，其中所述植物的所述lsl10等位基因是纯合的。
[0179]
在本发明的另外的实施例中，所述lsl10等位基因和所述渗入序列包含在甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先中。
[0180]
在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述植物通过将甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先与不含所述渗入序列的甜瓜植物杂交获得。
[0181]
在另外的实施例中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的植物，其中所述植物是近交、双单倍体或杂种植物。
[0182]
在另一实施例中，根据本发明的植物是雄性不育的。在另一实施例中，根据本发明的植物是细胞质雄性不育的。
[0183]
在另一实施例中，根据本发明的植物生长成熟的甜瓜果实，其中所述成熟果实的
内部果肉是橙色的。
[0184]
在另外的实施例中，本发明的甜瓜植物是根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物，其中所述位于6号染色体上的转变外皮渗入序列可以使用下文表4中披露的snp标记1至10中的任一个来鉴定。
[0185]
在另外的实施例中，本发明的甜瓜植物是根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物，其中甜瓜株系19mna106815或其子代或祖先是所述转变外皮渗入序列和lsl10等位基因的来源，并且其中株系19mna106815的代表性种子已保藏在atcc登录号pta-126875下。
[0186]
另外的实施例提供了可从根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物中获得的植物部分、器官或组织，包括但不限于叶、茎、根、花或花部分、果实、芽、配子体、孢子体、花粉、花药、小孢子、卵细胞、受精卵、胚、分生区、愈伤组织、种子、插条、细胞或组织培养物、或仍表现出根据本发明的转变外皮表型的植物(特别地当生长为产生果实的植物)的任何其他部分或产品。
[0187]
在另外的实施例中，本发明提供了产生根据前述实施例中任一项所述的植物的种子。
[0188]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物作为甜瓜根茎的用途。在另外的实施例中，本发明涉及甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先作为甜瓜根茎的用途。
[0189]
在另一实施例中，设想了根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物、植物部分或种子用于产生并收获甜瓜果实的用途。
[0190]
在另一实施例中，本发明涉及根据任何实施例所述的甜瓜植物、植物部分或种子的用途，其中该甜瓜植物、植物部分或种子是甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先。
[0191]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物、植物部分或种子用于播种田地、温室或塑料大棚的用途。
[0192]
在一个实施例中，本发明提供了由根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物产生的甜瓜果实。
[0193]
本发明进一步涉及根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物将转变外皮性状渗入缺乏所述转变外皮性状的甜瓜植物中的用途。
[0194]
基因序列、标记。
[0195]
本发明进一步涉及与包含lsl10等位基因的受体甜瓜植物中的转变外皮性状连锁的渗入基因序列。在另外的实施例中，本发明的渗入基因序列位于6号染色体上。在本发明的另外的实施例中，基因序列包含在以下中、获得自或可获得自以下：甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先的供体植物，并且包含所述渗入基因序列。
[0196]
在另一实施例中，本发明的渗入基因序列位于6号染色体上并且其特征在于以下snp标记中的至少一个：
[0197]
a)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0198]
b)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g
基因型；
[0199]
c)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0200]
d)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0201]
e)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0202]
f)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0203]
g)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0204]
h)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0205]
i)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0206]
j)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型。
[0207]
本发明披露了用于检测甜瓜植物(特别地栽培甜瓜植物)中的转变外皮性状的试剂盒，其中所述试剂盒包含选自以下的至少一种pcr寡核苷酸引物对和探针：
[0208]
a)对于snp标记1，正向引物seq id no:2和反向引物seq id no:5，以及探针seq id no:3；
[0209]
b)对于snp标记2，正向引物seq id no:7和反向引物seq id no:10，以及探针seq id no:8；
[0210]
c)对于snp标记3，正向引物seq id no:12和反向引物seq id no:15，以及探针seq id no:13；
[0211]
d)对于snp标记4，正向引物seq id no:17和反向引物seq id no:20，以及探针seq id no:18；
[0212]
e)对于snp标记5，正向引物seq id no:22和反向引物seq id no:25，以及探针seq id no:23；
[0213]
f)对于snp标记6，正向引物seq id no:27和反向引物seq id no:30，以及探针seq id no:28；
[0214]
g)对于snp标记7，正向引物seq id no:32和反向引物seq id no:35，以及探针seq id no:33；
[0215]
h)对于snp标记8，正向引物seq id no:37和反向引物seq id no:40，以及探针seq id no:38；
[0216]
i)对于snp标记9，正向引物seq id no:42和反向引物seq id no:45，以及探针seq id no:43；
[0217]
j)对于snp标记10，正向引物seq id no:47和反向引物seq id no:50，以及探针seq id no:48。
[0218]
本发明还披露了根据本发明的snp标记中的至少一个、至少两个或至少三个用于在甜瓜植物(特别地栽培甜瓜植物)中进行转变外皮性状基因座的诊断性选择和/或基因分型的用途。
[0219]
本发明还披露了根据本发明的snp标记中的至少一个、至少两个或至少三个用于鉴别甜瓜植物(特别地栽培甜瓜植物，更特别地是根据本发明的甜瓜植物)中与转变外皮性状相关的基因型的存在和/或用于监测甜瓜植物(特别地栽培甜瓜植物，特别地包含lsl10等位基因的甜瓜植物)中转变外皮性状的渗入的用途。
[0220]
本发明进一步披露了可在涉及至少一个寡核苷酸引物或pcr寡核苷酸引物对(选自表4)的pcr反应中获得的多核苷酸(扩增产物)，其中扩增产物对应于可获得自甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先的包含本发明的转变外皮渗入序列的扩增产物。
[0221]
本文还考虑了与所述扩增产物的序列具有至少95％、特别地至少96％、特别地至少97％、特别地至少98％、特别地至少99％序列同一性的多核苷酸，和/或展现与可在上述pcr反应中获得的所述扩增产物的核苷酸序列杂交的核苷酸序列的多核苷酸。
[0222]
然后，根据本发明的和上文所述的扩增产物可用于产生或开发可用于鉴定转变外皮性状基因座的新引物和/或探针。
[0223]
因此，在一个实施例中，本发明进一步涉及衍生的标记，特别地衍生的引物或探针，其由根据本发明的且如上文所述的扩增产物通过本领域已知的方法开发，这些衍生的标记与转变外皮性状基因座遗传连锁。
[0224]
育种方法。
[0225]
在另外的实施例中，本发明提供了用于产生栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中该方法包括以下步骤：
[0226]
a)将根据前述实施例中任一项所述的植物与缺乏所述lsl10等位基因和所述渗入序列的栽培甜瓜植物杂交；
[0227]
b)选择子代植物，该子代植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝以及位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，所述选择步骤包括检测以下snp标记中的至少一个：
[0228]
i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0229]
ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0230]
iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0231]
iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0232]
v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0233]
vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的
g基因型；
[0234]
vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0235]
viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0236]
ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0237]
x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
[0238]
从而产生植物，该植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。
[0239]
在另外的实施例中，本发明提供了用于产生栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地粗皮甜瓜植物或网纹甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中该方法包括以下步骤：
[0240]
a)使根据前述实施例中任一项所述的植物与栽培甜瓜植物杂交，该栽培甜瓜植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝但缺乏与转变外皮表型相关的渗入序列；
[0241]
b)选择子代植物，该子代植物包含位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，所述选择步骤包括检测以下snp标记中的至少一个的有利的基因型：
[0242]
i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0243]
ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0244]
iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0245]
iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0246]
v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0247]
vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0248]
vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0249]
viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0250]
ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0251]
x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
[0252]
从而产生植物，该植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表
型的果实。
[0253]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括：
[0254]
c)使所选择的子代自交或使所选择的子代与另一甜瓜植物杂交，以产生另外的子代。
[0255]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中选择另外的子代，并且再自交/杂交2代至10代。
[0256]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的方法，其中步骤a)的植物是甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先。
[0257]
在另一实施例中，本发明涉及提供转变外皮甜瓜植物、植物部分或种子的方法，其中所述方法包括以下步骤：
[0258]
a)使缺乏本发明的转变外皮渗入序列的第一植物与根据前述实施例中任一项所述的第二甜瓜植物杂交，
[0259]
b)获得子代甜瓜植物，以及
[0260]
c)任选地选择所述子代植物，其特征在于所述植物表现出转变外皮表型。
[0261]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中第一甜瓜植物是已经包含lsl10等位基因的至少一个拷贝的植物。在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中第二甜瓜植物是甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先。
[0262]
在另一实施例中，本发明涉及用于产生转变外皮甜瓜植物的方法，该方法包括以下步骤：
[0263]
a)提供根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物的种子，
[0264]
b)使所述种子发芽并从中生长成熟可育的植物，
[0265]
c)诱导a)下所述植物自花授粉，生长果实并从中收获可育种子，以及
[0266]
d)从c)下收获的种子生长植物，并且选择转变外皮甜瓜植物。
[0267]
在另一实施例中，本发明涉及用于为甜瓜植物提供转变外皮表型的方法，该方法包括以下步骤：
[0268]
a)选择包含与位于6号染色体上的一个渗入序列相关的转变外皮性状的甜瓜，其中所述性状可以通过表4中列出的snp标记的至少一个的存在来鉴定；
[0269]
b)使步骤a)的包含转变外皮性状的所述植物与甜瓜植物(特别地栽培甜瓜植物，其不包含转变外皮性状并且与步骤a)的植物相比不显示转变外皮表型)杂交，以及
[0270]
c)从与步骤b)的植物相比显示转变外皮表型的所述杂交中选择子代。
[0271]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中步骤b)的受体植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝。
[0272]
在另外的实施例中，本发明涉及用于产生表现出转变外皮表型的f1甜瓜植物的方法，该方法包括将近交甜瓜植物(其是根据前述实施例中任一项所述的植物)与不同的近交甜瓜植物杂交，以产生f1杂种子代。
[0273]
选择方法。
[0274]
在另外的实施例中，本发明提供了用于鉴别栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中所述植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝以及位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，其中所述方法包括以下步骤：检测以下snp标记中的至少一个：
[0275]
a)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0276]
b)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0277]
c)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0278]
d)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0279]
e)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0280]
f)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0281]
g)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0282]
h)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0283]
i)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0284]
j)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；
[0285]
从而鉴别甜瓜植物，该甜瓜植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。
[0286]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中该方法进一步包括检测以下snp标记的步骤：
[0287]
a)在对应于seq id no:51中的位置107的位置处的snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。
[0288]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括选择在所述一个或多个snp标记处包含有利的基因型的甜瓜植物，以及使所选择的甜瓜植物与第二甜瓜植物杂交，以产生子代甜瓜植物，这些子代甜瓜植物在所述snp标记处包含至少一个有利的基因型并表现出本发明的转变外皮表型。
[0289]
在另一实施例中，本发明涉及鉴别包含本发明的转变外皮渗入序列的甜瓜植物的方法，其中所述方法包括以下步骤：
[0290]
a)提供转变外皮性状分离的群体，
[0291]
b)从分离的群体中筛选表现出转变外皮表型的成员，其中所述性状可以通过本发
明的转变外皮渗入序列的存在来鉴定，
[0292]
c)选择分离的群体中的一个成员，其中所述成员包含转变外皮性状。
[0293]
在另外的实施例中，本发明提供了用于鉴别包含6号染色体上的渗入序列的栽培甜瓜植物的方法，其中所述渗入序列赋予转变外皮表型，该方法包括：
[0294]
a)提供转变外皮表型分离的群体，
[0295]
b)使用检测在表4中列出的snp标记中的至少一个的试剂盒来筛选所述群体，以及
[0296]
c)鉴别包含表4列表中选择的所述至少一个snp标记的植物。
[0297]
在另外的实施例中，本发明提供了用于鉴别6号染色体上的转变外皮性状的另外的甜瓜来源的方法，该方法包括：
[0298]
a)提供一种甜瓜植物或甜瓜种质或多种甜瓜植物或种质，
[0299]
b)使用检测在表4中列出的snp标记中的至少一个的试剂盒来筛选所述一种甜瓜植物或甜瓜种质或多种甜瓜植物或种质，以及
[0300]
c)鉴别包含表4列表中选择的所述至少一个snp标记的甜瓜植物或种质。
[0301]
在又另一实施例中，本发明涉及由根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物的基因组，优选地由甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先的基因组扩增的snp标记的用途，其中所述snp标记使用以下试剂盒中的一种来鉴定：
[0302]
a)正向引物seq id no:2和反向引物seq id no:5，以及探针seq id no:3；
[0303]
b)正向引物seq id no:7和反向引物seq id no:10，以及探针seq id no:8；
[0304]
c)正向引物seq id no:12和反向引物seq id no:15，以及探针seq id no:13；
[0305]
d)正向引物seq id no:17和反向引物seq id no:20，以及探针seq id no:18；
[0306]
e)正向引物seq id no:22和反向引物seq id no:25，以及探针seq id no:23；
[0307]
f)正向引物seq id no:27和反向引物seq id no:30，以及探针seq id no:28；
[0308]
g)正向引物seq id no:32和反向引物seq id no:35，以及探针seq id no:33；
[0309]
h)正向引物seq id no:37和反向引物seq id no:40，以及探针seq id no:38；
[0310]
i)正向引物seq id no:42和反向引物seq id no:45，以及探针seq id no:43；和/或
[0311]
j)正向引物seq id no:47和反向引物seq id no:50，以及探针seq id no:48；
[0312]
并且其中所述snp标记指示甜瓜植物中转变外皮性状的存在，以鉴别包含且表现出转变外皮性状的甜瓜植物。
[0313]
在另外的实施例中，本发明涉及用于评估表现出转变外皮表型的栽培甜瓜(melon)植物，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的基因型的方法，所述方法包括以下步骤：
[0314]
a)提供来自所述植物的样品，以及
[0315]
b)在所述样品中检测位于6号染色体上且与所述转变外皮表型相关的qtl基因座，所述qtl基因座的侧翼为snp标记1和10以及以下snp标记中的至少一个：
[0316]
i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0317]
ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g
基因型；
[0318]
iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0319]
iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0320]
v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0321]
vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0322]
vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0323]
viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0324]
ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0325]
x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；和/或
[0326]
xi)与侧翼为snp标记1和10的所述qtl基因座相关的任何其他dna标记。
[0327]
在另外的实施例中，本发明涉及在栽培甜瓜(melon)植物，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物中鉴别与转变外皮表型相关的渗入序列的方法，所述方法包括以下步骤：在所述植物中检测与所述转变外皮表型相关的qtl基因座遗传连锁的至少一个dna标记的等位基因，其中所述等位基因定位在侧翼为snp标记1和10的基因组区域中位于6号染色体上的所述qtl基因座的10cm内，优选地5cm内。
[0328]
在可替代的实施例中，本发明涉及在栽培甜瓜(melon)植物，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物中鉴别与转变外皮表型相关的渗入序列的方法，所述方法包括以下步骤：在所述植物中检测与所述转变外皮表型相关的qtl基因座遗传连锁的至少一个dna标记的等位基因，其中所述等位基因定位在侧翼为snp标记1和10的基因组区域中位于6号染色体上的所述qtl基因座上的公开参考基因组v cm3.5.1中的位置25115792bp与公开参考基因组v cm3.5.1中的位置30769753bp之间。
[0329]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中所述qtl基因座可以通过以下snp标记中的至少一个来鉴定：
[0330]
a)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0331]
b)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0332]
c)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0333]
d)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0334]
e)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0335]
f)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0336]
g)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0337]
h)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0338]
i)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0339]
j)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型。
[0340]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，
[0341]
其中所述方法进一步包括选择包含所述渗入序列的栽培甜瓜(melon)植物，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的步骤。
[0342]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中所述qtl基因座可以通过以下snp标记中的至少一个来鉴定
[0343]
a)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置25115792bp的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；
[0344]
b)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置25507734bp的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；
[0345]
c)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置25660237bp的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；
[0346]
d)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置25714720bp的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；
[0347]
e)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置26327861bp的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；
[0348]
f)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置27206596bp的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；
[0349]
g)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置28161883bp的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；
[0350]
h)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置29331322bp的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；
[0351]
i)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置30261023bp的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或
[0352]
j)在对应于公开参考基因组v cm3.5.1中的位置30769753bp的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型。
[0353]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例所述的方法，其中所述方法进一步包括选择包含所述渗入序列的栽培甜瓜(melon)植物，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)
植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的步骤。
[0354]
在另外的实施例中，本发明涉及通过鉴别与转变外皮表型相关的qtl来鉴别表现出所述转变外皮表型的栽培甜瓜(melon)植物，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的方法，该方法包括以下步骤：
[0355]
a)从甜瓜植物中检测至少一个dna标记，该dna标记与转变外皮表型相关的染色体区间连锁，其中所述染色体区间的两侧翼为与seq id no:1和46具有至少80％序列同一性的snp标记；以及
[0356]
b)鉴别包含所述至少一个dna标记的所述甜瓜植物。
[0357]
栽培和使用方法。
[0358]
本发明还涉及用于在甜瓜植物栽培和甜瓜果实收获期间减少果实消耗浪费的方法，该方法包括以下步骤：
[0359]
a)用生长为根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物的种子来播种甜瓜田地；
[0360]
b)优选地使用如以下实例2中所述的测定来监测外皮颜色从未成熟时的绿色变成在达到完全成熟时的黄色；
[0361]
c)在完全成熟时收获果实，当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，这些果实的外皮颜色的范围为15至20(a-d)。
[0362]
在以这样的方法使用时，本发明的植物允许当甜瓜果实已达到完全成熟时的最佳的收获时间点。因此，甜瓜果实以其最佳消费状态进入市场，从而限制了未成熟或过度成熟的甜瓜果实所观察到的果实浪费。
[0363]
本发明进一步涉及可从根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物获得的转变外皮繁殖材料用于生长甜瓜植物以产生转变外皮甜瓜植物的用途，其中所述转变外皮表型可在标准测定，特别地如以下实例2中所述的测定中评估。
[0364]
本发明还涉及可从根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物获得的转变外皮繁殖材料用于生产甜瓜果实的用途。
[0365]
在另一实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的栽培甜瓜(melon)植物、植物部分或种子，更优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物、植物部分或种子用于生长植物以及产生和收获农作物和/或果实的用途。
[0366]
在另一实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的栽培甜瓜(melon)植物，更优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物用于产生用于新鲜市场或用于食品加工的果实的用途。
[0367]
在另一实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的栽培甜瓜(melon)植物、植物部分或种子，优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物、植物部分或种子的用途，其中所述栽培甜瓜(melon)植物、植物部分或种子，优选地所述栽培甜瓜(cucumis melo)植物、植物部分或种子是甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先的。
[0368]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的栽培甜瓜(melon)植物、植物部分或种子，更优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物、植物部分或种子用于播种田地、温室或塑料大棚的用途。
[0369]
在另一实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的栽培甜瓜(melon)
植物，更优选地栽培甜瓜(cucumis melo)植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物用于通过目视监测指示果实完全成熟的果皮颜色来优化甜瓜果实的收获时间的用途。
[0370]
在另外的实施例中，本发明涉及根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物对缺乏转变外皮性状的甜瓜植物赋予所述性状的用途。本发明进一步涉及根据前述实施例中任一项所述的甜瓜植物将转变外皮性状渗入缺乏所述性状的甜瓜植物中的用途。
[0371]
在另外的实施例中，本发明涉及seq id no 1-50中任一个用于筛选存在位于6号染色体上且与转变外皮表型相关的qtl基因座的甜瓜植物群体的用途。
[0372]
在另外的实施例中，本发明涉及seq id no 1、6、11、16、21、26、31、36、41或46中任一个用于筛选存在位于6号染色体上且与转变外皮表型相关的qtl基因座的甜瓜植物群体的用途。
[0373]
基于本发明的描述，拥有如本文所述的甜瓜株系19mna106815(其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下)或其子代或祖先(包含所述渗入基因序列以及lsl10等位基因的至少一个拷贝)的技术人员使用本领域熟知的育种技术在本文披露的snp标记的支持下能毫无困难地将本发明的所述渗入基因序列转移到其他各种类型的甜瓜植物中。
[0374]
种子保藏详情
[0375]
申请人已于2020年10月19日以atcc登录号pta-126875向atcc(美国典型培养物保藏中心(american type culture collection，atcc)，10801大学大道，马纳萨斯，弗吉尼亚州20110，美国)保藏至少625颗网纹甜瓜杂种植物19mna106815种子。
[0376]
申请人选择专家解决方案，并要求根据epc第32(1)条或其他国家或条约的相应法律和规则(专家证人条款)仅向专家发布保藏的材料，直到专利授权的提及公布为止，或者如果申请被驳回、撤回或者视为撤回的，自申请日起20年。
[0377]
网纹甜瓜杂种植物19mna106815的lsl10等位基因以及6号染色体上的转变外皮qtl是杂合的，即，株系19mna106815包含lsl10等位基因的一个拷贝以及位于6号染色体上且与转变外皮表型相关的来自闻瓜的渗入序列的一个拷贝。
[0378]
实例
[0379]
实例1：种质和群体发展
[0380]
实例1a.供体发展。
[0381]
在闻瓜植物(在成熟时转变)与网纹甜瓜(“09msp006888”)植物(在成熟时不转变)之间进行杂交，以获得鉴别为“10msp002234”的f1植物。将f1植物自交以产生本文称为“12msp005549”的f2群体。使用单粒传法，播种200颗f2植物并推进到f3家族。在加利福尼亚州的田地，通过转变外皮性状的表型评估来评估f3家族。使用自花授粉将本文称为“13msp005602”的最佳f3家族推进到f4代。根据最佳和稳定的性状表达选择最佳f4子代。转变外皮性状用英国皇家园艺学会比色卡测量，并且转变外皮性状的表型表达对应于比色卡上的15-20(a-d)颜色范围。发现一个f4株系对于该性状是稳定的，并且将其指定为“14mna106599”。将此网纹甜瓜株系用作供体以用转变外皮性状转化良种亲本株系。
[0382]
实例1b.遗传定位转变外皮性状的群体发展。
[0383]
使用指定为“13msp005602”的网纹甜瓜f3株系(参见实例1a)和粗皮甜瓜长保质期lsl10近交株系来发展f2定位群体。将f2群体指定为“14cme-bws3”。在加利福尼亚州的田地播种了800颗f2单株，并对长保质期lsl10背景中转变外皮性状的表达进行了表型评估。
[0384]
实例2：方案。
[0385]
实例2a.转变外皮性状表型的评估和评分。
[0386]
在正常的长保质期lsl10甜瓜背景下，完全成熟果实的外皮保持灰绿色至绿色。这对应于使用皇家园艺学会比色卡时135-143(a-d)的颜色范围(cuevas等人,2010)。根据包含qtl6的至少一个拷贝的长保质期lsl10甜瓜植物的颜色从绿色到黄色的变化监测果实的成熟。在后者的植物中，果实颜色在成熟时变成黄色，黄色范围对应于使用皇家园艺学会比色卡的15-20(a-d)。根据加利福尼亚州夏季的正常日常环境条件，达到完全成熟的天数(并观察相关的外皮颜色变化)典型地从82天到85天不等。
[0387]
实例2b.长保质期表型的评估。
[0388]
评估包含qtl6的至少一个拷贝的哈密瓜长保质期lsl10甜瓜产生在成熟时具有保留的长保质期特征的果实的能力。成熟时，在花梗附接处没有形成离层，因此果实不会从藤上滑落。
[0389]
实例2c.鉴别转变外皮性状的qtl及相应渗入序列的方法。
[0390]
针对qtl发现，使用lsl10等位基因标记对“14cme-bws3”群体的800个f2个体进行预筛选(参见实例6)，并选择含有lsl10基因座的至少一个拷贝的372个f2个体，并定期使用跨越基因组的150个基因标记进行基因分型。构建了遗传图谱，并将372个所选个体的转变外皮表型数据用于qtl检测。
[0391]
使用r统计框架中的r/qtl包进行qtl检测。首先，使用函数
‘
calc.genoprob’来计算基因型概率(步骤1cm)。进行haley-knott回归，以提供标准区间作图结果的近似值。然后，调用函数
‘
stepwiseqtl’，其提供了完全自动化的模型选择向前/向后算法。主效应的lod阈值由10,000次排列决定。该算法考虑了不同的可能相互作用(例如，上位性)。函数
‘
refineqtl’用于在多重qtl模型(最大似然估计)的背景下细化qtl的位置。函数
‘
fitqtl’用于拟合定义的qtl模型并获得qtl效应的估计。
[0392]
实例3：一种与转变外皮表型相关的qtl的鉴定
[0393]
实例3a.位于6号染色体上的qtl对成熟时转变外皮的影响。
[0394]
基于从“14cme-bws3”群体的372个所选f2个体的转变外皮表型鉴定一种qtl。表1显示了染色体位置，以lod评分测量的qtl的影响，以及由6号染色体上的qtl解释的转变外皮表型的变异百分比。
[0395]
表1：与转变外皮表型相关的重要qtl。
[0396]
染色体lod％varp值(chi2)625.8523.9《0.001
[0397]“lod”＝对数拟然评分，“％var”＝由qtl解释的表型变异百分比，“p值(chi2)”＝通过卡方分析随机机会检测到qtl的概率。
[0398]
qtl在“14cme-bws3”发现群体中显示加性或半显性影响。与存在两个纯合亲本等位基因时相比，在qtl位置处仅存在供体等位基因的一个拷贝显示中等的转变外皮表型。
[0399]
实例4：赋予转变外皮的序列向lsl10哈密瓜背景中的渗入
[0400]
网纹甜瓜lsl10哈密瓜背景在成熟时不转变，然而闻瓜甜瓜果皮在成熟时颜色改变。通过选择如实例2中所述的植物并将其回交到lsl10哈密瓜育种株系来将闻瓜甜瓜植物中存在的转变外皮表型相关的基因序列渗入lsl10哈密瓜育种材料中。
[0401]
先进的育种株系在长保质期和不滑落特征方面突出了与轮回亲本相似的表型，同时包含转变外皮表型的有利渗入序列。表型结果以及qtl6和lsl10等位基因中是否存在代表性标记的测试结果总结于下表2中。
[0402]
表2：是否存在qtl6和lsl10的特征snp标记以及相应的表型。
[0403][0404]
现有的商业杂种(sweet spring)以及轮回的lsl10哈密瓜轮回亲本(材料3和4)是非跃变的、不滑落的并且不转变外皮的。它们只携带lsl10等位基因的至少一个拷贝，并且它们的甜瓜果皮颜色在成熟时保持绿色(rhs范围135至143(a-d))。相反，包含qtl6以及lsl10等位基因的所有转化哈密瓜株系(材料5至10)均表现出转变外皮表型(rhs范围15至20(a-d))，同时保留成熟甜瓜果实的长保质期和不滑落特征。此外，即使实验杂种(包括保藏材料，材料2、11和12)仅包含qtl6的一个拷贝，它们也表现出转变外皮表型(rhs范围15至20(a-d))。也就是说，包含qtl6的至少一个拷贝(特征在于跨越基因区间64.8-73.7cm的snp标记)以及lsl10 snp标记的至少一个拷贝的所有株系和杂种均表现出转变外皮表型，同时保留了甜瓜果实的长保质期和不滑落特征。
[0405]
在此区域内，在qtl区间内的十个snp(se3980、se3992、se4033、se4031、se3981、se4009、se3978、se3987、se3729和se3982)显示对供体转变外皮等位基因的选择具有特异性，并且其中snp标记se4033、se4031、se3981、se4009、se3978、se3987、se3729与qtl最密切连锁。下表3显示了qtl6的基因和物理位置两者以及与所述转变外皮(rt)qtl等位基因紧密连锁的十个snp标记的位置。
[0406]
表3.6号染色体上的qtl的遗传图谱
[0407][0408][0409]
实例5：qtl6的序列和snp标记信息
[0410]
snp标记se3980、se3992、se4033、se4031、se3981、se4009、se3978、se3987、se3729和se3982，及其各自pcr引物/探针(用于检测)的序列信息总结在下表4中。
[0411]
表4.
[0412][0413][0414]
作为实例，6号染色体上的位置24564648bp/25225792bp处的snp标记1(se3980)(分别基于参考pit92 v7序列或公开基因组版本cm3.5.1)的特征在于seq id no:1的靶序列的位置61处的特定snp标记(闻瓜供体相对于受体等位基因)。也披露了seq id no 2和5的相应正向和反向引物，以及对seq id no 3和4的供体或受体等位基因具有特异性的探针。
[0415]
实例6：lsl10等位基因的序列和snp标记信息
[0416]
snp标记se1787的遗传图谱信息以及序列信息，及其各自的pcr引物/探针(用于检测)总结在下表5和表6中。此标记可用于检测当渗入粗皮甜瓜或网纹甜瓜背景中时的lsl10等位基因。它可以来自保藏材料19mna106815，或者也可以来自其他现有的公开可用来源，
如pi 420176(perpina等人2017)。
[0417]
表5. 10号染色体上的lsl10等位基因的遗传图谱。
[0418][0419]
表6.
[0420][0421][0422]
文献目录
[0423]
·
cuevas et al.(2010),euphytica 173:129-140.
[0424]
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pech et al.(2008),plant science 175:114-120.
[0425]
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perpina et al.(2017),hortscience 52(11):1633-1638.
[0426]
·
pitrat et al.(2000),proc.cucurbitaceae 2000,eds n.katzir&h.s.pqris,acta hort.510。

技术特征：
1.一种栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物，其基因组中包含：a)lsl10等位基因的至少一个拷贝，以及；b)来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，所述渗入序列与转变外皮表型相关，位于6号染色体上并且包含以下snp标记中的至少一个：i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；其中所述植物产生表现出长保质期表型的甜瓜果实，并且其中所述甜瓜果实在达到完全成熟时进一步表现出转变外皮表型。2.根据权利要求1所述的植物，其中所述转变外皮表型的特征在于外皮颜色从未成熟时的绿色变成在达到完全成熟时的黄色。3.根据权利要求2所述的植物，其中当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在完全成熟时的黄色的范围为15至20(a-d)。4.根据权利要求3所述的植物，其中当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述甜瓜果皮在完全成熟时的黄色为19a或19b。5.根据权利要求1至4中任一项所述的植物，其中当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述未成熟甜瓜果皮的绿色的范围为135至143(a-d)。6.根据权利要求1至5中任一项所述的植物，其中当使用英国皇家园艺学会比色卡的色标测量时，所述未成熟甜瓜果皮的绿色为138c、138d或139a。7.根据权利要求1至6中任一项所述的植物，其中如实例2a中所披露的评估所述转变外皮表型。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的植物，其中i)所述snp标记1的a基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:2和反向引物seq id no:5，以及探针seq id no:3扩增核酸片段来鉴定；ii)所述snp标记2的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:7和反向引物seq id no:10，以及探针seq id no:8扩增核酸片段来鉴定；iii)所述snp标记3的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:12和反向引物seq id no:15，以及探针seq id no:13扩增核酸片段来鉴定；iv)所述snp标记4的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:17和反向引物seq id no:20，以及探针seq id no:18扩增核酸片段来鉴定；v)所述snp标记5的c基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:22和反向引物seq id no:25，以及探针seq id no:23扩增核酸片段来鉴定；vi)所述snp标记6的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:27和反向引物seq id no:30，以及探针seq id no:28扩增核酸片段来鉴定；vii)所述snp标记7的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:32和反向引物seq id no:35，以及探针seq id no:33扩增核酸片段来鉴定；viii)所述snp标记8的a基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:37和反向引物seq id no:40，以及探针seq id no:38扩增核酸片段来鉴定；ix)所述snp标记9的a基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:42和反向引物seq id no:45，以及探针seq id no:43扩增核酸片段来鉴定；和/或x)所述snp标记10的c基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:47和反向引物seq id no:50，以及探针seq id no:48扩增核酸片段来鉴定。9.根据权利要求1至8中任一项所述的植物，其中所述渗入序列包含seq id no:1、seq id no:6、seq id no:11、seq id no:16、seq id no:21、seq id no:26、seq id no:31、seq id no:36、seq id no:41和/或seq id no:46中的至少一个，或与所述序列中的一个或多个具有至少80％同一性的序列。10.根据权利要求1至9中任一项所述的植物，其中所述lsl10等位基因包含以下snp标记：a)在对应于seq id no:51中的位置107的位置处的snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。11.根据权利要求10所述的植物，其中a)所述snp标记11的g基因型可以在pcr中通过用寡核苷酸引物对：正向引物seq id no:52和反向引物seq id no:55，以及探针seq id no:53扩增核酸片段来鉴定。12.根据权利要求10至11中任一项所述的植物，其中所述lsl10等位基因包含seq id no:51、或与所述序列具有至少80％同一性的序列。13.根据权利要求1至12中任一项所述的植物，其中所述植物的所述lsl10等位基因和/或位于6号染色体上的所述渗入序列是纯合的。14.根据权利要求1至13中任一项所述的植物，其中所述lsl10等位基因和所述渗入序列包含在甜瓜株系19mna106815或其子代或祖先中，所述甜瓜株系19mna106815的代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的植物，其中所述植物通过将甜瓜株系19mna106815或其子代或祖先与不含所述渗入序列的甜瓜植物杂交获得，所述甜瓜株系19mna106815的代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下。16.根据权利要求1至15中任一项所述的植物，其中所述植物是近交、双单倍体或杂种植物。17.一种甜瓜株系19mna106815的植物，其代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下。18.一种根据权利要求1至17中任一项所述的植物的植物部分。19.一种种子，其产生根据权利要求1至18中任一项所述的植物或植物部分。20.一种用于产生栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中所述方法包括以下步骤：a)将根据权利要求1至17中任一项所述的植物与缺乏所述lsl10等位基因和所述渗入序列的栽培甜瓜植物杂交；b)选择子代植物，所述子代植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝以及位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，所述选择步骤包括检测以下snp标记中的至少一个：i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；从而产生植物，所述植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述方法进一步包括：c)使所选择的子代自交或使所选择的子代与另一甜瓜植物杂交，以产生另外的子代。22.根据权利要求21所述的方法，其中选择另外的子代，并且再自交/杂交2代至10代。23.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中步骤a)的植物是甜瓜株系19mna106815或其子代或祖先，所述甜瓜株系19mna106815的代表性种子保藏在atcc登录号pta-126875下。24.一种用于产生表现出转变外皮表型的f1甜瓜植物的方法，所述方法包括将为根据权利要求1至17中任一项所述的植物的近交甜瓜植物与不同的近交甜瓜植物杂交，以产生f1杂种子代。25.一种用于鉴别栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，其中所述植物包含lsl10等位基因的至少一个拷贝以及位于6号染色体上的来自闻瓜的渗入序列的至少一个拷贝，其中所述方法包括以下步骤：检测以下snp标记中的至少一个：a)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；b)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；c)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；d)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；e)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；f)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；g)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；h)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；i)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或j)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；从而鉴别甜瓜植物，所述甜瓜植物产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述方法进一步包括检测以下snp标记的步骤：a)在对应于seq id no:51中的位置107的位置处的snp标记11的杂合或纯合状态的g基因型。
27.根据权利要求25或26中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括选择包含所述一个或多个snp标记的甜瓜植物，并且使所选择的甜瓜植物与第二甜瓜植物杂交，以产生子代甜瓜植物，所述子代甜瓜植物包含所述snp标记中的至少一个且产生具有长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的果实。28.一种产生甜瓜种子的方法，所述方法包括从根据权利要求19所述的种子生长甜瓜植物，并且允许所述植物产生另外的甜瓜种子。29.一种用于评估栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的基因型的方法，其中所述植物产生表现出长保质期表型以及在达到完全成熟时转变外皮表型的甜瓜果实，所述方法包括以下步骤：a)提供来自所述植物的样品，以及b)在所述样品中检测位于6号染色体上且与所述长保质期表型以及转变外皮表型相关的qtl基因座，所述qtl基因座的侧翼为snp标记1和10、以及以下snp标记中的至少一个：i)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；ii)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；iii)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；iv)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；v)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；vi)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；vii)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；viii)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；ix)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或x)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型；和/或xi)与侧翼为snp标记1和10的所述qtl基因座相关的任何其他dna标记。30.一种在栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物中鉴别与在达到完全成熟时转变外皮表型相关的渗入序列的方法，所述方法包括以下步骤：在所述植物中检测与所述转变外皮表型相关的qtl基因座遗传连锁的至少一个dna标记的等位基因，其中所述等位基因定位在侧翼为snp标记1和10的基因组区域中位于6号染色体上的所述qtl基因座的10cm内，优选地5cm内。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述qtl基因座可以通过以下snp标记中的至少
一个来鉴定a)在对应于seq id no:1中的位置61的位置处的snp标记1的杂合或纯合状态的a基因型；b)在对应于seq id no:6中的位置55的位置处的snp标记2的杂合或纯合状态的g基因型；c)在对应于seq id no:11中的位置65的位置处的snp标记3的杂合或纯合状态的g基因型；d)在对应于seq id no:16中的位置49的位置处的snp标记4的杂合或纯合状态的g基因型；e)在对应于seq id no:21中的位置53的位置处的snp标记5的杂合或纯合状态的c基因型；f)在对应于seq id no:26中的位置83的位置处的snp标记6的杂合或纯合状态的g基因型；g)在对应于seq id no:31中的位置103的位置处的snp标记7的杂合或纯合状态的g基因型；h)在对应于seq id no:36中的位置115的位置处的snp标记8的杂合或纯合状态的a基因型；i)在对应于seq id no:41中的位置87的位置处的snp标记9的杂合或纯合状态的a基因型；和/或j)在对应于seq id no:46中的位置196的位置处的snp标记10的杂合或纯合状态的c基因型。32.根据权利要求31所述的方法，所述方法进一步包括选择包含所述渗入序列的栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物的步骤。33.一种方法，其通过鉴别与转变外皮表型相关的qtl来鉴别表现出长保质期表型以及所述转变外皮表型的栽培甜瓜植物，优选地栽培哈密瓜植物，更优选地网纹甜瓜植物或粗皮甜瓜植物，所述方法包括以下步骤：a)从甜瓜植物中检测至少一个dna标记，所述dna标记与转变外皮表型相关的染色体区间连锁，其中所述染色体区间的两侧翼为与seq id no:1和46具有至少80％序列同一性的snp标记；以及b)鉴别包含所述至少一个dna标记的所述甜瓜植物。34.一种鉴别6号染色体上的转变外皮性状的甜瓜来源的方法，所述方法包括：a)提供一种或多种甜瓜材料，b)使用检测表4中列出的snp标记中的至少一个的试剂盒来筛选所述一种或多种甜瓜材料，以及c)鉴别包含在表4列表中选择的所述至少一个snp标记的野生甜瓜种质。35.seq id no 1-50中的任一个用于筛选存在位于6号染色体上且与转变外皮表型相关的qtl基因座的甜瓜植物群体的用途。

技术总结
本发明涉及新型甜瓜植物，这些新型甜瓜植物产生表现出长保质期性状以及成熟指标性状的组合的果实。本发明还涉及所述植物的种子和部分，例如果实。本发明进一步涉及制造和使用这样的种子和植物的方法。本发明还涉及与成熟时转变外皮表型相关的新型基因序列，当与长保质期等位基因组合时，这些新型基因序列显著改变成熟甜瓜果实的特征，作为可靠的成熟指标同时保留适合的适销特征并且产生新型甜瓜植物类型。类型。


技术研发人员：R
受保护的技术使用者：先正达农作物保护股份公司
技术研发日：2021.10.26
技术公布日：2023/8/13