一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液的制作方法

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液。


背景技术：

[0002] 病毒是由一个核酸分子(dna或rna)与蛋白质构成的非细胞形态，靠寄生生活的介于生命体及非生命体之间的有机物种，可以利用宿主细胞系统进行复制的微小, 无完整细胞结构的亚显微粒子，病毒不具细胞结构，无法独立生长和复制, 但病毒可以感染所有的具有细胞的生命体, 具有遗传、复制等生命特征。
[0003]
由病毒引起的人类疾病种类繁多，如新冠病毒等感染，最主要的检测方法就是病毒核酸检测，通过核酸检测法判断人体是否感染病毒，核酸检测法中核酸物质的完整性是确保检测灵敏度和准确性的关键，核酸物质采用病毒保存液进行保存转运。
[0004]
市场中，多数病毒保存液会通过添加抗生素来抑制菌体生长繁殖，延长保存液的储存时间，防止样本采集储存后菌体繁殖影响诊断结果，但是抗生素管控和滥用的危害也及其巨大，因此需要引入其他成分提高保存液储存时间且不影响样本核酸物质的完整性。
[0005]
另外，病毒保存液中多加入红色酚红指示剂，便于观察、辨识也可以一定程度的通过颜色快速判断产品质量（产品ph值变化会显示不同颜色），但产品分为灭活型、非灭活型等不同型号，使用过程中容易混淆。
[0006]
鉴于此，提出本发明。


技术实现要素：

[0007]
为克服现有技术或者使用过程中存在的问题，本发明提供一种不含抗生素，且能够有效保存病毒样本的蓝色保存液，区别于酚红的颜色。
[0008]
本发明保存液包括：缓冲溶液0.07%-0.35%（w/v）、表面活性剂0.05%—0.1%（w/v）、核酸稳定剂0.1%—0.5%(v/v) 、病毒灭活剂5%-20%(w/v)、消泡剂10%-30%(v/v)、蓝色指示剂0.0003%—0.0008%(w/v)。
[0009]
可选地，所述缓冲溶液为乙酸铵0.07%—0.23%（w/v）、乙酸0.02%—0.15%（v/v）、乙二胺四乙酸二钠0.1%—0.35%（w/v）、氢氧化钠0.02%—0.08%（w/v）。
[0010]
可选地，所述表面活性剂为十二烷基肌氨酸钠0.05%—0.1%（w/v）、吐温-20 0.1%——0.5%（v/v）中一种或几种组合。
[0011]
可选地，所述核酸稳定剂为甘油0.1%—0.5%(v/v)。
[0012]
可选地，所述病毒灭活剂为异硫氰酸胍5%-20%(w/v)、盐酸胍10%-20%(w/v)中一种或几种组合。
[0013]
可选地，所述消泡剂为无水乙醇10%-30%(v/v)。
[0014]
可选地，所述蓝色指示剂为孔雀石绿0.0003%—0.003%(w/v)。
[0015]
可选地，所述组分还包括余量的水。
[0016]
可选地，所述病毒保存液的ph值为4.8—6.2。
[0017]
可选地，所述蓝色指示剂做为抑菌剂，不含抗生素。
[0018]
采用上述配方，本发明具有如下优点：本发明可有效的保存核酸样本，稳定保存7天，核酸无明显降解情况，本保存液配制方法简单，原料容易获得，性质稳定，不使用抗生素，保存液颜色为蓝色，可以区别酚红指示剂的颜色。
具体实施方式
[0019]
在下文中，仅简单地描述了某些示例性实施例。正如本领域技术人员可以认识到的那样，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，可通过各种不同方式修改所描述的实施例。因此，描述被认为本质上是示例性的而非限制性的。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0020]
实施例一：
[0021]
一种有效保存病毒样本的蓝色保存液，包括以下组分成分：称取乙酸铵1g、乙酸0.5ml、乙二胺四乙酸二钠盐0.15g、氢氧化钠0.4g、十二烷基肌氨酸钠 0.5g、甘油1ml 、异硫氰酸胍100g、无水乙醇150ml、孔雀石绿0.003g，最终溶液用纯化水定容1l，ph调节至6.0，配制完成后，将溶液通过0.2um的滤芯过滤。
[0022]
实施例二：
[0023]
本发明的病毒保存液进行抑菌性效果试验，试验方法如下：
[0024]
利用培养至对数生长期的金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，进行病毒保存液抑菌性的验证，2支塑料管中各取800ul病毒保存液，1支加入黄色葡萄球菌，1支加入白色念珠菌，震荡混匀；混合液保存10min分别取200ul接种到tsa固体培养基中培养，金黄色葡萄球菌35℃培养7天，白色念珠菌25℃培养5天；混合液保存20min分别取200ul接种到tsa固体培养基中培养；混合液保存30min分别取混合液200ul接种到tsa固体培养基中培养；金黄色葡萄球菌和白色念珠菌各取200ul加入800ul pbs溶液，同法操作进行阳性对照；取pbs溶液作为阴性对照。该组试验重复3次，以排除试验的偶然性。
[0025]
实验数据见说明书表1。
[0026]
表1病毒保存液抑菌性能统计表
[0027][0028]
由表1试验结果可以看出，病毒保存液保存10min时，白色念珠菌培养平均菌落数0.67 cfu/皿，金黄色葡萄球菌培养平均菌落数3 cfu/皿；病毒保存液保存20min和保存30min，白色念珠菌和金黄色葡萄球菌培养结果均未见有菌生长；试验中阳性对照组的菌株正常生长，阴性对照组无菌生长，故该病毒采样管抑菌能力良好。
[0029]
实施例三：
[0030]
本发明的病毒保存液进行核酸保存稳定性的试验，试验方法如下：
[0031]
将目标病毒（肠道病毒ev71）加入到待测样本中，35℃条件下保存1天、4天、7天，每个时间点做3个平行样标记；
[0032]
根据核酸提取检测试剂盒说明书进行操作，每个pcr反应管中加入17ul evpcr反应液a、加入3ul evpcr反应液b，再分别加入处理好的待测样本、阳性对照、阴性对照各5ul，终体积为25ul/管，盖紧管盖，立即低速离心。
[0033]
pcr检测：将pcr反应管放入abi7500荧光pcr扩增仪进行扩增检测；反应结束后分析结果如表2。
[0034]
表2核酸保存效果实验结果
[0035]
[0036]
由表2的结果可以看出，3组平衡样结果相对稳定，核酸在35℃条件下可稳定保存7天。
[0037]
综上所述：本发明的病毒保存液在不添加抗生素的情况下，溶液保持有效的抑菌性能，且样本可有效保存1周，防止核酸降解，保存液显蓝色，区别于酚红指示剂的颜色，容易区分，防止混淆。
[0038]
可以理解，本发明是通过一些实施例进行描述的，本领域技术人员知悉的，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种改变或等效替换。另外，在本发明的指导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本技术的权利要求范围内实施例都属于本发明所保护的范围内。

技术特征：
1. 一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于：主要由缓冲溶液0.7%-3.5%（w/v）、表面活性剂0.05%—0.1%（w/v）、核酸稳定剂0.1%—0.5%(v/v) 、病毒灭活剂5%-20%(w/v)、消泡剂10%-30%(v/v)、蓝色指示剂0.0003%—0.0008%(w/v)。2.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于：缓冲溶液为乙酸铵0.07%—0.23%（w/v）、乙酸0.02%—0.15%（v/v）、乙二胺四乙酸二钠0.1%—0.35%（w/v）、氢氧化钠0.02%—0.08%（w/v）。3.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，表面活性剂为十二烷基肌氨酸钠0.05%—0.1%（w/v）、吐温-20 0.1%——0.5%（v/v）中一种或几种组合。4.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，核酸稳定剂为甘油0.1%—0.5%(v/v)。5.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，病毒灭活剂为异硫氰酸胍5%-20%(w/v)、盐酸胍10%-20%(w/v)中一种或几种组合。6.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，消泡剂为无水乙醇10%-30%(v/v)。7.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，蓝色指示剂为孔雀石绿0.0003%—0.003%(w/v)。8.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，所述组分还包括余量的水。9.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液的ph值为4.8—6.2。10.根据权利要求1所述的一种不含抗生素的蓝色抑菌病毒保存液，其特征在于，蓝色指示剂做为抑菌剂，不含抗生素。

技术总结
本发明为一种用于病毒核酸快速提取的试剂，该提取试剂含有缓冲溶液0.07%-0.35%（w/v）、表面活性剂0.05%—0.1%（w/v）、核酸稳定剂0.1%—0.5%(v/v)、病毒灭活剂5%-20%(w/v)、消泡剂10%-30%(v/v)、蓝色指示剂0.0003%—0.0008%(w/v)；本发明的病毒保存液在不添加抗生素的情况下，溶液保持有效的抑菌性能，且样本可有效保存1周，防止核酸降解，保存液显蓝色，区别于酚红指示剂的颜色，容易区分，防止混淆。淆。


技术研发人员：赵爱景 顾俊成
受保护的技术使用者：杭州医国仁生物科技有限公司
技术研发日：2023.05.28
技术公布日：2023/8/13