用于生物正交捕获的防污微气泡及其制备与应用

1.本发明属于生物医学工程领域。更具体地说，本发明涉及一种用于生物正交捕获的防污微气泡及其制备与应用。


背景技术：

2.生物正交化学是一类可以发生在生物系统中的一类化学反应。他们具有高度的特异性，内源性的生物分子对反应没有干扰，并且生物兼容性好，通常在水或者pbs中进行，反应迅速，满足实时的研究需求，而引起了广泛关注。
3.专利公开号cn113092784a公开了功能化磁珠及采用其的生物正交化学的大分子一步捕获方法，其利用非偶联抗体小分子修饰的磁珠捕获大分子的方法不涉及抗原抗体反应，采用点击化学中的叠氮炔环加成反应原理，避免了非特异性结合蛋白的产生，一步法捕获蛋白质生物大分子，更加直接、高效、背景更低，且适用于变性条件下的蛋白捕获，适用性更广泛。相比于利用磁珠，中空玻璃微球是一种廉价、轻量、稳定、高强度的中空微米硅球。由于其低密度、自聚集特性，无需外力即可自发从溶液中分离。中空玻璃微球作为一种自驱动、自分离的材料有着巨大的生物分析应用潜力。中空玻璃微球通常在微米大小，粒径较大，因此比表面积小，和目标物的接触面积小；又因其表面积大，常常需要修饰大量的目标探针，以致在实际应用中利用率低，且生物识别探针修饰后难以长期保存。另外中空玻璃微球表面具有大量的负电荷，容易非特异吸附带有正电荷的污染物，特异性较低，致使中空玻璃微球未在生物正交化学中得到应用。


技术实现要素：

4.本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
5.本发明的一个目的是提供一种用于生物正交捕获的防污微气泡，其能够用于对含有相应生物正交分子修饰的物质进行高效、高特异的捕获，解决了中空玻璃微球非特异性强、效率低的问题。
6.为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种用于生物正交捕获的防污微气泡，其包括：
7.中空玻璃微球；
8.防污涂层，其设置在所述中空玻璃微球的表面，所述防污涂层为相变的bsa；
9.捕获层，其由n-羟基琥珀酰亚胺衍生物设置在所述防污涂层上得到。
10.优选的是，中空玻璃微球的直径为10-100μm。
11.优选的是，将bsa(牛血清白蛋白)溶液和tcep溶液混合，调节ph至5.0，得到相变的bsa。
12.优选的是，n-羟基琥珀酰亚胺衍生物为带有叠氮，炔烃，二苯并环辛炔，反式环辛烯或1,2,4,5-四嗪的n-羟基琥珀酰亚胺衍生物。
13.用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
14.1)往中空玻璃微球中加入到bsa溶液和tcep溶液，调节ph值至5.0，混合0.5-12h；
15.2)步骤1)的混合物，离心，除去下层溶液，加入超纯水洗涤，重复离心1-5次，真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡；
16.3)将步骤2)得到的具有防污功能的玻璃微气泡于n-羟基琥珀酰亚胺衍生物反应，离心，除去下层溶液，加入超纯水洗涤，重复离心1-5次，真空干燥，得到具有生物正交捕获的防污微气泡。
17.优选的是，步骤1)中，中空玻璃微球的质量为0.5-5g；bsa溶液的浓度为1-5mg/ml，体积为10-30ml；tcep溶液的浓度为10-50mm，体积为10-50ml。
18.优选的是，步骤2)中，具有防污功能的玻璃微气泡的质量为50-500mg，n-羟基琥珀酰亚胺衍生物的浓度为0.5-2mm，体积为0.5-5ml。
19.用于生物正交捕获的防污微气泡的应用，用于细胞、外泌体、蛋白质的分离检测。
20.优选的是，所述细胞为肿瘤细胞或内皮细胞。
21.优选的是，所述外泌体来源于健康细胞或肺癌、肝癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、膀胱癌、卵巢癌、乳房组织癌、胰腺癌、皮肤癌、胃癌、甲状腺癌、前列腺癌、头颈癌、食道癌、子宫癌、脑癌细胞的外泌体。
22.优选的是，所述蛋白质为cd45(淋巴细胞共同抗原)蛋白、epcam(上皮细胞黏附分子)蛋白、egfr(表皮生长因子)蛋白、her2(人类表皮因子受体2)蛋白、psa(前列腺特异抗原)蛋白、vegfr(血管内皮生成因子受体)蛋白、肿瘤标志物相关蛋白或细胞裂解得到的总蛋白。
23.本发明至少包括以下有益效果：
24.第一、本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡具有生物防污的特点，对非特异的细胞、核酸、蛋白都有很好的防污效果。
25.第二、本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡制备流程简单，原料便宜，稳定性好，可以在低温下长期储存，具有现场诊断的应用潜力。
26.第三、本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡借助表面的生物正交基团，可以用于对生物正交修饰的目标物的特异性捕获，速度快，效率高，在医学分析、诊断、治疗方面都有着巨大的应用前景。
27.第四、本发明利用相变bsa(ptb)涂布中空玻璃微球，以在中空玻璃微球上形成生物防污涂层，创造一个难以让污垢生物附着的表面，降低中空玻璃微球对核酸、蛋白等的非特异性吸附，提高中空玻璃微球在生物正交化学检测中的灵敏度和特异性。
28.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
29.图1为本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡的制备流程图；
30.图2为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡的涂层的荧光表征图；
31.图3为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡的涂层的sem和tem表征图；
32.图4为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡的防污性能的表征图；
33.图5为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡用于细胞捕获荧光图；
34.图6为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡用于细胞捕获的sem图，比例尺2μm；
35.图7为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡用于外泌体捕获的荧光图；
36.图8为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡用于外泌体捕获的sem图；
37.图9为对本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡用于蛋白捕获的荧光图。
具体实施方式
38.下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
39.应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
40.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
41.一种用于生物正交捕获的防污微气泡，其包括：
42.中空玻璃微球；
43.防污涂层，其设置在所述中空玻璃微球的表面，所述防污涂层为相变的bsa；
44.捕获层，其由n-羟基琥珀酰亚胺衍生物设置在所述防污涂层上得到。
45.在另一种技术方案中，中空玻璃微球的直径为10-100μm。
46.在另一种技术方案中，将bsa(牛血清白蛋白)的磷酸缓冲溶液和tcep的水溶液混合，调节ph至5.0，得到相变的bsa。
47.在另一种技术方案中，n-羟基琥珀酰亚胺衍生物为带有叠氮，炔烃，二苯并环辛炔，反式环辛烯或1,2,4,5-四嗪的n-羟基琥珀酰亚胺衍生物。
48.用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
49.1)往中空玻璃微球中加入到bsa溶液和tcep溶液，调节ph值至5.0，混合0.5-12h；
50.2)步骤1)的混合物，离心，除去下层溶液，加入超纯水洗涤，重复离心1-5次，真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡；
51.3)将步骤2)得到的具有防污功能的玻璃微气泡于n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)衍生物反应，离心，除去下层溶液，加入超纯水洗涤，重复离心1-5次，真空干燥，得到具有生物正交捕获的防污微气泡。
52.在另一种技术方案中，步骤1)中，中空玻璃微球的质量为0.5-5g；bsa溶液的浓度为1-5mg/ml，体积为10-30ml；tcep溶液的浓度为10-50mm，体积为10-50ml。
53.在另一种技术方案中，步骤2)中，具有防污功能的玻璃微气泡的质量为50-500mg，n-羟基琥珀酰亚胺衍生物的浓度为0.5-2mm，体积为0.5-5ml。
54.用于生物正交捕获的防污微气泡的应用，包括用于细胞的分离检测，用于外泌体的分离检测，用于蛋白质的分离检测。
55.在另一种技术方案中，所述细胞为肿瘤细胞或内皮细胞。
56.在另一种技术方案中，所述外泌体来源于健康细胞或肺癌、肝癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、膀胱癌、卵巢癌、乳房组织癌、胰腺癌、皮肤癌、胃癌、甲状腺癌、前列腺癌、头颈癌、食道癌、子宫癌、脑癌细胞的外泌体。
57.在另一种技术方案中，所述蛋白质为cd45(淋巴细胞共同抗原)蛋白、epcam(上皮细胞黏附分子)蛋白、egfr(表皮生长因子)蛋白、her2(人类表皮因子受体2)蛋白、psa(前列腺特异抗原)蛋白、vegfr(血管内皮生成因子受体)蛋白、肿瘤标志物相关蛋白或细胞裂解得到的总蛋白。
58.实施例1
59.一种用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
60.1)称取1g的中空玻璃微球加入50ml的离心管中，加入20ml浓度为2mg/ml的bsa(牛血清白蛋白)和20ml浓度为25mm的tcep溶液，使用氢氧化钠溶液(1m)调节ph至5.0，室温下于旋转混合仪上混合2h；
61.2)步骤1)的混合液于1000rpm离心1分钟，除去下层溶液；加入超纯水洗涤，重复离心3次，37℃真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)，于-20℃中保存。
62.3)称取100mg的gb@ptb，于1ml 1mm的叠氮乙酸-n-羟基琥珀酰亚胺酯的pbs溶液中，室温反应2小时，4000rpm离心10s，除去下层溶液，使用超纯水洗涤，重复离心3次后真空干燥，得到具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@n3)。
63.实施例2
64.一种用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
65.1)称取1g的中空玻璃微球加入50ml的离心管中，加入20ml浓度为2mg/ml的bsa和20ml浓度为25mm的tcep溶液，使用氢氧化钠溶液(1m)调节ph至5.0，室温下于旋转混合仪上混合2h；
66.2)步骤1)的混合液于1000rpm离心1分钟，除去下层溶液；加入超纯水洗涤，重复离心3次，37℃真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)，于-20℃中保存。
67.3)称取100mg的gb@ptb，于1ml 1mm的5-己炔酸-nhs酯的pbs溶液中，室温反应2小时，4000rpm离心10s，除去下层溶液，使用超纯水洗涤，重复离心3次后真空干燥，得到具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@alkyne)。
68.实施例3
69.一种用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
70.1)称取1g的中空玻璃微球加入50ml的离心管中，加入20ml浓度为2mg/ml的bsa和20ml浓度为25mm的tcep溶液，使用氢氧化钠溶液(1m)调节ph至5.0，室温下于旋转混合仪上混合2h；
71.2)步骤1)的混合液于1000rpm离心1分钟，除去下层溶液；加入超纯水洗涤，重复离心3次。37℃真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)，于-20℃中保存。
72.3)称取100mg的gb@ptb，于1ml 1mm的二苯并环辛炔-nhs酯的pbs溶液中，室温反应2小时，4000rpm离心10s，除去下层溶液，使用超纯水洗涤，重复离心3次后真空干燥，得到具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@dbco)。
73.实施例4
74.一种用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
75.1)称取1g的中空玻璃微球加入50ml的离心管中，加入20ml浓度为2mg/ml的bsa和20ml浓度为25mm的tcep溶液，使用氢氧化钠溶液(1m)调节ph至5.0，室温下于旋转混合仪上混合2h；
76.2)步骤1)的混合液于1000rpm离心1分钟，除去下层溶液；加入超纯水洗涤，重复离心3次。37℃真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)，于-20℃中保存。
77.3)称取100mg的gb@ptb，于1ml 1mm的反式环辛烯(tco)-nhs酯的pbs溶液中，室温反应2小时，4000rpm离心10s，除去下层溶液，使用超纯水洗涤，重复离心3次后真空干燥，得到具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tco)。
78.实施例5
79.如图1所示，一种用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，包括以下步骤：
80.1)称取1g的中空玻璃微球(gb)加入50ml的离心管中，加入20ml浓度为2mg/ml的bsa和20ml浓度为25mm的tcep溶液，使用氢氧化钠溶液(1m)调节ph至5.0，室温下于旋转混合仪上混合2h；
81.2)步骤1)的混合液于1000rpm离心1分钟，除去下层溶液；加入超纯水洗涤，重复离心3次。37℃真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)，于-20℃中保存。
82.3)称取100mg的gb@ptb，于1ml 1mm的1,2,4,5-四嗪(tz)-nhs酯的pbs溶液中，室温反应2小时，4000rpm离心10s，除去下层溶液，使用超纯水洗涤，重复离心3次后真空干燥，得到具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)。
83.实施例6
84.对实施例5的中空玻璃微球(gb)、具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)、具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)进行表征。
85.对于荧光表征，由于相变bsa(ptb)具有β-淀粉样蛋白，使用硫磺素t(tht)即可对微气泡表面的涂层进行表征。称取1mg的gb，gb@ptb，gb@ptb@tz，于含有1mm tht的pbs溶液中37℃反应2小时。超纯水洗涤5次，使用激光共聚焦显微镜进行观察。为了证明生物正交的能力，1mg的gb，gb@ptb，gb@ptb@tz和cy5标记的tco染料(tco-cy5)(2μm)在200μl的pbs中于室温反应10分钟。超纯水洗涤5次，使用激光共聚焦显微镜进行观察。
86.荧光表征结果如图2所示，使用ptb修饰的gb@ptb和gb@ptb@tz在使用tht染色后，微气泡的表面出现了明显的荧光信号，而没有修饰的gb表面没有任何信号。证明了ptb成功的在微气泡表面形成。另外在加入了tco-cy5后，只有tz修饰的微气泡表面出现了明显的荧光信号，证明了微气泡的生物正交能力。
87.为了观察ptb涂层在微气泡表面的形态，使用sem和tem进行观察。如图3所示。普通的gb表面相对平整，几乎没有较大的颗粒。而使用ptb修饰的微气泡表面有明显的纳米颗粒，证明了ptb可以在微气泡表面形成一层纳米膜。
88.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡的表征结果与实施例5制备的gb@ptb@tz的表征结果相似。
89.实施例7
90.考察实施例5的中空玻璃微球(gb)、具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)、具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)的防污性能
91.取1mg的gb，gb@ptb和gb@ptb@tz，与dio标记的a431细胞、mcf7细胞、jurkat细胞混合，考察gb，gb@ptb和gb@ptb@tz对细胞的防污能力。
92.取1mg的gb，gb@ptb和gb@ptb@tz，与1mg/ml fitc标记的bsa，10μg/ml的alexa fluor 488标记的igg混合，考察gb，gb@ptb和gb@ptb@tz对蛋白的抗污能力。
93.取1mg的gb，gb@ptb和gb@ptb@tz，与5μm的ssdna混合，考察gb，gb@ptb和gb@ptb@tz对核酸的防污能力。
94.结果如图4所示，gb对于大部分生物污染物都有一定的非特异吸附。而具有ptb涂层的中空玻璃微球对于细胞，蛋白和核酸都有良好的防污能力。证明了生物正交防污微气泡的成功制备。
95.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡的防污性能与实施例5制备的gb@ptb@tz的防污性能相似。
96.实施例8
97.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的来自血样的单核细胞的捕获。
98.取1ml全血细胞，使用商业化红细胞裂解液进行处理，得到单核细胞。将细胞混悬于100μl含有1mm的tco-nhs酯中孵育10分钟，得到正交修饰的细胞。将正交修饰的细胞和生物正交防污微气泡进行混合，即可实现血样中的单核细胞的捕获。
99.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的来自血样的单核细胞的捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的来自血样的单核细胞的捕获结果相似。
100.实施例9
101.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的肝癌细胞捕获。
102.取105个hepg2(人肝癌)细胞，使用10μm dio于无血清的dmem中进行预先染色20分钟。300g离心3min后，除去上清，于100μl含有1mm的tco-nhs酯中孵育10分钟，得到正交修饰的细胞。将正交修饰的细胞和生物正交防污微气泡进行混合，即可实现hepg2细胞的捕获。
103.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的肝癌细胞捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的肝癌细胞捕获结果相似。
104.实施例10
105.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的皮肤癌细胞捕获。
106.取105个a431(人类鳞状细胞癌)细胞，使用10μm dio于无血清的dmem中进行预先染色10分钟。300g离心3min后，除去上清，于100μl含有1mm的tco-nhs酯中孵育10分钟，得到正交修饰的细胞。将正交修饰的细胞和生物正交防污微气泡进行混合，即可实现细胞的捕获。
107.如图5所示，dio染色的细胞被成功的捕获到了微气泡表面。使用戊二醛对捕获的细胞进行固定，使用sem对捕获的细胞进行观察，如图6所示，可以看到细胞很好的附着在微气泡表面。
108.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的皮肤癌细胞捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的皮肤癌细胞捕获结果相似。
109.实施例11
110.考察实施例5制备的中空玻璃微球(gb)、具有防污功能的玻璃微气泡(gb@ptb)、具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的肺癌外泌体捕获。
111.取107个的来自于a549(非小细胞肺癌)细胞的外泌体，于100μl含有5μm的tco-nhs酯的pbs溶液中，室温反应30分钟，得到tco修饰的外泌体。取0.4mg的gb@ptb@tz和tco修饰的外泌体室温混合10分钟，即可实现外泌体的捕获。
112.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的肺癌外泌体捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的肺癌外泌体捕获结果相似。
113.实施例12
114.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的肝癌外泌体捕获。
115.取107个的来自于hepg2(人肝癌)细胞的外泌体，于100μl含有5μm的tco-nhs酯的pbs溶液中，室温反应30分钟，得到tco修饰的外泌体。取0.4mg的gb@ptb@tz和tco修饰的外泌体室温混合10分钟，即可实现外泌体的捕获。
116.为了观察被捕获的外泌体，使用dii对捕获的外泌体进行染色。如图7所示，微气泡表面有明显的荧光信号。使用戊二醛对捕获的外泌体进行固定，使用sem进行观察。如图8所示，微气泡表面附着了明显的膜结构，证明了外泌体的成功捕获。
117.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的肝癌外泌体捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的肺癌外泌体捕获结果相似。
118.实施例13
119.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的cd45蛋白捕获。
120.取2ng的cd45重组蛋白，加入1μl的tco-nhs酯(10mm)，于100μl的pbs中室温反应10分钟，得到tco修饰的蛋白。取0.4mg的gb@ptb@tz和tco修饰蛋白室温混合10分钟，即可实现cd45蛋白的捕获。
121.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的cd45蛋白捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的cd45蛋白捕获结果相似。
122.实施例14
123.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的egfr蛋白捕获。
124.取2ng的egfr重组蛋白，加入1μl的tco-nhs酯(10mm)，于100μl的pbs中室温反应10分钟，得到tco修饰的蛋白。取0.4mg的gb@ptb@tz和tco修饰蛋白室温混合10分钟，即可实现egfr蛋白的捕获。
125.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的egfr蛋白捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的egfr蛋白捕获结果相似。
126.实施例15
127.考察实施例5制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡(gb@ptb@tz)对正交修饰的总蛋白捕获。
128.取105个细胞使用1ml非变性细胞裂解液进行裂解，离心后取上清得到细胞的总蛋白。取100μl加入1μl的tco-nhs酯(10mm)，室温反应10分钟，得到tco修饰的蛋白。取0.4mg的gb@ptb@tz和tco修饰蛋白室温混合10分钟，即可实现蛋白的捕获。
129.为了对捕获的蛋白进行检测，使用100nm有cy5标记的dna适配体对捕获的蛋白进
行检测。如图9所示，cy5标记的epcam适配体可以成功的识别微气泡上面捕获的epcam蛋白，证明了蛋白的成功捕获。
130.实施例1-4制备的具有生物正交功能的防污玻璃微气泡对正交修饰的总蛋白捕获结果与实施例5制备的gb@ptb@tz对正交修饰的总蛋白捕获结果相似。
131.尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

技术特征：
1.用于生物正交捕获的防污微气泡，其特征在于，包括：中空玻璃微球；防污涂层，其设置在所述中空玻璃微球的表面，所述防污涂层为相变的bsa；捕获层，其由n-羟基琥珀酰亚胺衍生物设置在所述防污涂层上得到。2.根据权利要求1所述的用于生物正交捕获的防污微气泡，其特征在于，中空玻璃微球的直径为10-100μm。3.根据权利要求1所述的用于生物正交捕获的防污微气泡，其特征在于，将bsa溶液和tcep溶液混合，调节ph至5.0，得到相变的bsa。4.根据权利要求1所述的用于生物正交捕获的防污微气泡，其特征在于，n-羟基琥珀酰亚胺衍生物为带有叠氮，炔烃，二苯并环辛炔，反式环辛烯或1,2,4,5-四嗪的n-羟基琥珀酰亚胺衍生物。5.如权利要求1所述的用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)往中空玻璃微球中加入bsa溶液和tcep溶液，调节ph值至5.0，混合0.5-12h；2)步骤1)的混合物，离心，除去下层溶液，加入超纯水洗涤，重复离心1-5次，真空干燥，得到具有防污功能的玻璃微气泡；3)将步骤2)得到的具有防污功能的玻璃微气泡于n-羟基琥珀酰亚胺衍生物反应，离心，除去下层溶液，加入超纯水洗涤，重复离心1-5次，真空干燥，得到具有生物正交捕获的防污微气泡。6.根据权利要求5所述的用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，其特征在于，步骤1)中，中空玻璃微球的质量为0.5-5g；bsa溶液的浓度为1-5mg/ml，体积为10-30ml；tcep溶液的浓度为10-50mm，体积为10-50ml。7.根据权利要求5所述的用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法，其特征在于，步骤2)中，具有防污功能的玻璃微气泡的质量为50-500mg，n-羟基琥珀酰亚胺衍生物的浓度为0.5-2mm，体积为0.5-5ml。8.如权利要求1所述的用于生物正交捕获的防污微气泡的应用，其特征在于，用于细胞、外泌体、蛋白质的分离检测。9.如权利要求8所述的用于生物正交捕获的防污微气泡应用，其特征在于，所述细胞为肿瘤细胞或内皮细胞。10.如权利要求8所述的用于生物正交捕获的防污微气泡应用，其特征在于，所述外泌体来源于健康细胞或肺癌、肝癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、膀胱癌、卵巢癌、乳房组织癌、胰腺癌、皮肤癌、胃癌、甲状腺癌、前列腺癌、头颈癌、食道癌、子宫癌、脑癌细胞的外泌体。

技术总结
本发明公开了一种用于生物正交捕获的防污微气泡，其包括：中空玻璃微球；防污涂层，其设置在所述中空玻璃微球的表面，所述防污涂层为相变的BSA；捕获层，其由N-羟基琥珀酰亚胺衍生物设置在所述防污涂层上得到。本发明还公开了用于生物正交捕获的防污微气泡的制备方法及应用。本发明的用于生物正交捕获的防污微气泡借助表面的生物正交基团，可以用于对生物正交修饰的目标物的特异性捕获，速度快，效率高，具有广泛的应用体系和应用前景。具有广泛的应用体系和应用前景。具有广泛的应用体系和应用前景。


技术研发人员：杨帆 向远航 韦缤琪 李新春 卢昊
受保护的技术使用者：广西医科大学
技术研发日：2023.04.27
技术公布日：2023/8/23