Hg42639基因抗盐性的应用

hg42639基因抗盐性的应用
技术领域
1.本发明属于植物生物工程和转基因技术领域，具体涉及盐生植物盐生草根系耐盐基因hg42639及其应用。


背景技术：

2.土壤盐渍化是世界性难题，已成为限制全球粮食生产的主要因素之一。但是现有土壤改改良措施如土壤化学改良技术，农田灌溉水利设施等难以长期维持现状，无法从根源上解决土壤盐渍化问题。
3.目前我国有各类可利用盐渍土作为重要后备耕地资源。且未来几十年全球气候变暖的现状导致亚热带地区年降水量逐年下降，农业灌溉的淡水资源不得不优先供应于人畜饮用和城市用水，迫使灌溉农业必须接受用咸水或盐水灌溉的现实。随着土壤盐渍化的加重，生物治理逐渐成为应对土壤盐渍化的重要举措之一，而培育高效耐盐作物是其重要实施环节之一。
4.盐生植物通过漫长的生物进化史本身累积了丰富的耐盐碱基因，能够在盐碱土中良好生长，引起了不少研究人员的密切关注。通过对盐生植物系统研究其耐盐机制，对提高作物的耐盐性至关重要(munns r等，2005)。
5.其中，藜科，盐生草属，盐生草，作为荒漠区重要牧草之一，盐生草比其它禾本科牧草的蛋白质及脂肪含量高，具有更高的饲用价值。其花期为7-8月，具有一定的观赏价值。作为西北旱区的特色植物之一，盐生草具有抗旱耐盐性的特征之一，挖掘其蕴含的耐盐基因、研究其耐盐机理，对作物抗逆性及培育抗逆新品种具有重要的研究意义(hen l，1979)。
6.现有技术存在的问题：现有技术中未报道关于盐生草根系耐盐基因hg42639参与响应盐胁迫调控方面的功能和应用。本发明以盐生草根系耐盐基因hg42639为切入点，克隆基因hg42639。进一步通过载体构建、亚细胞定位、拟南芥转化和构建酵母表达载体及酵母生长表型分析等方法研究盐生草根系耐盐基因hg42639的功能，旨在为培育耐盐品种提供耐盐候选基因，探究盐生草的耐盐调控机制，促进耐盐植物的培育提供理论和技术依据。


技术实现要素：

7.本发明要解决的关键技术问题在于提供盐生草根系耐盐基因hg42639的克隆及其响应盐胁迫的功能验证。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
8.1.盐生草根系耐盐基因序列，所述hg42639基因转录本序列如序列表seq no.1所示，所述hg42639基因发挥抗盐功能的片段如序列表seq no.2所示。
9.2.盐生草根系耐盐基因hg42639的基因克隆和载体构建方法，包括：
10.(1)植株材料和试剂选择；(2)rna提取与反转录；(3)引物设计和基因克隆；(4)构建过表达载体、亚细胞定位表达载体及酵母异源表达载体。
11.3.盐生草根系耐盐基因hg42639功能验证方法，包括：
12.(1)拟南芥遗传转化及转基因拟南芥抗性筛选；(2)转基因拟南芥获得及生长表型
分析；(3)酵母生长表型分析。
13.4.盐生草根系耐盐基因hg42639功能验证方法，包括：(1)pbi121-gfp-hg34456在本氏烟草中的亚细胞定位，(2)拟南芥遗传转化和耐盐性分析，(3)载体对酵母的转化及酵母生长表型分析。
14.5.盐生草hg42639基因在na
+
外排方面的应用，所述盐生草hg42639基因发挥功能的片段如序列表seq no.2所示。
15.6.盐生草hg42639基因增强拟南芥抗盐性的应用，所述盐生草hg42639基因发挥功能的片段如序列表seq no.2所示。
16.7.盐生草hg42639基因在烟草细胞核上表达的应用，所述盐生草hg42639基因发挥功能的片段如序列表seq no.2所示。
17.有益效果：盐生草能够抵抗100～500mm nacl胁迫而正常生长，是获取抗旱耐盐基因的重要野生资源，本发明在盐生草根系转录组学及蛋白组学分析的基础上，选取盐诱导表达基因的转录本序列，利用基因克隆的方式，成功克隆hg42639基因，并构建过表达载体侵染拟南芥进行抗性筛选和表型分析；构建酵母异源表达载体并进行表型分析。
18.发现在200mmol/l的nacl处理10d后野生型植株叶片小，出现枯黄等症状，而转hg42639基因植株可以正常生长，长势明显强于野生型，说明hg42639基因能显著提高拟南芥耐盐性，该基因可应用于耐盐作物新品种的培育当中。
19.发现在外界na
+
、k
+
浓度一致的情况下，与转化空载体pyes2的酵母菌株相比，转化hg42639基因的酵母菌株长势较好，并且随着na
+
浓度的增加，这种对比现象更加明显，表明hg42639基因的转入减少了na
+
对酵母细胞的毒害，说明，hg42639基因参与na
+
的外排。
20.在k
+
为100mm时,转化空载体pyes2的酵母菌株与转化hg42639基因的酵母菌株均能生长，在k
+
＜7mm(0、0.2mm、1mm)时，转化空载体pyes2的酵母菌株不生长，转化hg42639基因的酵母菌株生长，说明该基因在酵母中的超表达具有弥补k
+
缺陷型酵母菌株cy162的功能，即在酵母中介导k
+
的吸收。
21.hg42639基因转入na
+
敏感型酵母菌株axt3能够减少na
+
对酵母细胞的毒害，说明，hg42639基因参与na
+
的外排；hg42639基因转入k
+
缺陷型酵母菌株cy162，在酵母中的超表达具有弥补k
+
缺陷型酵母菌株cy162的功能，即在酵母中介导k
+
的吸收。说明盐生草根系耐盐基因hg42639能够参与响应盐胁迫，进而发挥作用提高盐生草的耐盐性。
附图说明
22.图1为盐生草根系rna琼脂糖凝胶电泳图
23.图2为pcr扩增目的基因琼脂糖电泳图；其中，a：用于亚细胞定位、过表达载体部分的胶回收验证；b：用于酵母异源表达部分胶回收验证。
24.图3为菌液pcr扩增目的片段琼脂糖凝胶电泳图；其中，a：用于亚细胞定位部分，过表达载体部分的菌液pcr扩增；b：用于酵母异源表达部分的菌液pcr扩增。
25.图4为建亚细胞定位表达载体和过表达载体双酶切验证琼脂糖凝胶电泳图；其中，a：基因hg42639双酶切验证结果；b：gfp双酶切验证结果；c：gus双酶切验证结果。
26.图5为目的基因与载体使用ecor i、xba i两种限制性内切酶切割目的基因，经1％琼脂糖凝胶电泳检测，再通过dna胶回收试剂盒将目的基因与载体分别回收，并通过1％琼
脂糖凝胶进行胶回收检测的结果。其中，a：基因hg42639双酶切验证结果；b：gfp双酶切验证结果；c：gus双酶切验证结果。
27.图6为构建亚细胞定位表达载体和过表达载体阳性重组子鉴定琼脂糖凝胶电泳图；其中，a：hg42639基因构建pbi121-gfp菌液pcr验证；b：gfp重组质粒双酶切验证；c：hg42639基因构建pbi121-gus菌液pcr验证；d：gus重组质粒双酶切验证。
28.图7为亚细胞定位相关图；其中，a：亚细胞载体示意图；b：盐生草根系耐盐基因hg42639亚细胞定位图。
29.图8为过表达载体示意图。
30.图9为构建过表达载体阳性重组子的鉴定琼脂糖凝胶电泳图；其中，a：hg42639基因菌液pcr验证；b：重组质粒双酶切验证。
31.图10为拟南芥侵染流程图。
32.图11为转hg42639基因t0代拟南芥抗性苗筛选图。
33.图12为转hg42639基因拟南芥的抗性苗生长状况图。
34.图13为200mm nacl胁迫13天后的转hg42639基因拟南芥表型及野生型拟南芥表型。
35.图14为构建酵母异源表达载体琼脂糖凝胶电泳验证图；其中，a：hg42639基因构建表达载体胶回收验证图；b：pyes2-hg42639重组表达载体菌落pcr验证图。
36.图15为酵母异源表达载体示意图。
37.图16为载体对酵母的转化琼脂糖凝胶电泳验证图；其中，a：hg42639基因转化转化axt3酵母菌落pcr验证图；b：hg42639基因转化cy162酵母菌落pcr验证图。
38.图17为hg42639基因的超表达对na
+
、k
+
的吸收特性图；其中，a：hg42639基因和pyes2空载体在突变型酵母axt3中的表达；b:hg42639基因和pyes2空载体在突变型酵母cy162中的表达；c：酵母菌株体内积累的na
+
含量；d：酵母菌株体内积累的k
+
含量。
39.图18为hg42639基因和有效片段结构示意图。图中粗体为有效片段。
40.具体实施方法
41.本发明专利下述实施例中使用方法和装置，如无特殊说明，均为常规方法和装置；所用器材、试剂均为试剂公司购买的常规器材和试剂。为使本发明专利的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对本发明专利的具体实施方式进行详细说明。这些优选实施方式的示例在具体实施例中进行了例示。在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明专利的技术方案，在实施例中仅仅示出了与根据本发明专利的方案密切相关的技术方案和/或处理步骤，而省略了关系不大的其他细节。
42.实施例1
43.本实施例提供盐生草hg42639基因，所述hg42639基因转录本序列如序列表seq no.1所示，所述hg42639基因发挥抗盐功能的片段如序列表seq no.2所示(如图18)。
44.实施例2
45.本实施例提供盐生草根系耐盐基因hg42639基因克隆和载体构建方法，包括：
46.1.植株材料和试剂选择
47.本发明所使用的盐生草实验所用盐生草(halogeton glomeratus)以及野生型拟南芥种子皆由本实验室保存。盐生草种播种于装有蛭石与细沙(体积比1:1混合)的花盆中，
在人工气候室培养，每天浇灌适量hoagland
′
s营养液，待幼苗长至2个月后，利用100mm nacl进行盐胁迫处理7d，挑取长势较好的盐生草叶片提取rna。本发明采用多糖多酚植物总rna提取试剂盒、反转录试剂盒、快速质粒小提试剂盒、dna胶回收试剂盒均购自天根生化科技有限公司。
48.2.rna提取与反转录
49.盐生草种子在ms培养基中培养两周后采集盐生草根部，使用天根植物总rna提取试剂盒提取rna后，使用天根反转录试剂盒primescript
tm
rt reagent kit with gdna eraser反转录为cdna，用作克隆的模板，具体操作过程参考其说明书。
50.结果显示：提取盐生草根系rna，通过超微量紫外分光光度计检测显示，各rna 260/280均在1.9～2.1之间，纯度较好。使用1％琼脂糖凝胶，120v电泳20min，检测结果同样显示rna质量较好，可用于后续反转录和功能验证实验(图1)。
51.3.引物设计和基因克隆
52.使用ncbi primer-blast(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)以hg42639基因的转录本序列设计引物设计克隆引物、亚细胞定位表达引物和过表达载体引物，并根据后续所用表达载体添加相应酶切位点及保护碱基，根据合成引物tm值设置温度，进行扩增。随后通过1％的琼脂糖凝胶电泳进行检测，并借助凝胶电泳成像仪器观察。其中引物设计、扩增体系、反应程序如下表所示。
53.表1克隆引物、亚细胞定位表达载体引物和过表达载体引物
[0054][0055]
表2酵母异源表达载体引物
[0056][0057]
使用premix taq预混液pcr扩增目的基因，pcr扩增体系为：
[0058][0059]
hg42639基因pcr反应程序为(用于后续构建瞬时表达载体，过表达载体部分)：
[0060][0061]
hg42639基因pcr反应程序为(用于后续构建酵母异源表达载体部分)：
[0062][0063][0064]
利用dna胶回收试剂盒(tiangel purification kit)回收目的片段，连接目的基因片段与pmd19-t载体，并转化大肠杆菌感受态trans1-t1进行蓝白斑筛选，及pcr检测。为使菌落充分显色，将过夜培养的平板倒置于4℃数小时。最终使用天根快速质粒小提试剂盒提取阳性克隆质粒后送生工生物工程有限公司测序。具体步骤见试剂盒说明书。
[0065]
结果显示：以盐生草根系的cdna为模板，使用克隆引物，通过pcr扩增目的基因，将扩增产物于1％的琼脂糖凝胶，120v电泳15min(图2)。使用dna胶回收试剂盒(tiangel purification kit)回收扩增产物后，向pcr管中加入4μl胶回收产物、5μl solutionⅰ、1μlpmd19-t载体，使用瞬时离心机离心数秒将其混匀，然后取出放于金属浴(16℃)，连接12～16h。12～16h后转化大肠杆菌感受态细胞，向培养皿中倒入添加amp的lb培养基20～25ml并吹干。将感受态细胞(trans1-t1)与x-gal(20mg/ml)和iptg(24mg/ml)，按照x-gal：iptg＝4:1(体积比)，配制混合液。吸取100μl混合液打在固体培养皿，用涂布棒涂匀，晾干。吸取200μl摇好的菌液，迅速涂布于平板上，待晾干后，封口。先于37℃避光正面放置1h后，接着倒置培养，直至长出白色单菌落，进行蓝白斑筛选。将白斑挑至5ml含有氨苄青霉素(amp)的lb液体培养基中，37℃，200rpm遮光条件下培养，直至管内浑浊后进行菌液pcr检测(图3)。
[0066]
1.构建亚细胞定位表达载体、过表达载体及酵母异源表达载体
[0067]
载体活化：在无菌条件下，先将pbi121-gfp载体、pbi121-gus载体的菌液在lb固体培养基上进行载体活化，于37℃培养，挑取白色单克隆于lb液体培养基(已加50mg/ml kana)，将菌液摇至均一浑浊状态；向100μl大肠杆菌感受态加入2μl pyes2载体，通过冰浴、42℃热激90s、冰浴后加入900μl lb液体培养基(无抗生素)，37℃，180rpm培养45min。离心留100μl左右上清混匀菌体并涂至lb培养基平板(已加amp)上，封口。37℃培养15h左右。挑取长势较好的单克隆菌落于lb液体培养基(已加amp)，37℃摇荡培养14h左右。
[0068]
目的基因和表达载体质粒的提取：将克隆测序合适的菌液及载体活化菌液分别提取质粒。具体操作按照tiangen质粒提取试剂盒说明书操作。然后对提取的质粒使用超微量分光光度计测量浓度。
[0069]
目的基因和载体质粒双酶切：选取浓度最高的目的基因和pbi121-gfp载体质粒、pbi121-gus载体质粒及pyes2载体质粒使用xba i、sma i分别进行双酶切，然后置于金属浴中37℃，过夜，双酶切体系如表3-1。
[0070]
表3-1载体质粒与hg42639双酶切体系
[0071][0072]
目的基因和载体胶回收及胶回收验证：将酶切产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测。切掉含有目的基因条带和载体条带的胶，使用胶回收试剂盒回收目的片段与载体，并进行跑胶验证。
[0073]
目的基因和载体的连接：使用t4连接酶连接目的基因和pbi121-gfp载体、pbi121-gus载体和pyes2载体。按照ddh2o、目的片段、载体、10
×
t4dna ligase buffer的顺序加入pcr管中，瞬时离心后放于pcr仪中，65℃保温3min，接着冰浴数秒后加入t4dna ligase，封口，16℃金属浴过夜连接。连接体系如表3-2。
[0074]
表3-2目的基因片段与载体连接体系
[0075][0076]
转化大肠杆菌感受态细胞：通过转化大肠杆菌感受态细胞、蓝白板筛选与pcr检测，具体步骤同1.2.3。菌液测序成功后，提取质粒，并使用xba i、sma i进行双酶切验证，具体步骤同1.2.4。
[0077]
验证成功后，转化农杆菌gv3101：在无菌工作台中，将融化的lb固体培养基先后加入rif、kana混匀，倒入培养皿中。在2ml离心管中加入gv3101感受态细胞(50μl)与基因质粒(10μl)，用移液枪缓慢混匀，然后依次冰浴、加液氮、37℃水浴、再次冰浴。加入lb液体培养基(不添加rif、kana)，28℃，220rpm摇2～3h。离心去除多余的上清，留取100μl左右，将沉淀吸打均匀。吸取菌液涂于倒好的平板上，吹干菌液，28℃倒置培养约48h，待单菌落长出后，挑选多个单克隆并对其使用pcr验证。选取扩增出目的基因条带的阳性单克隆菌液保存菌种，送去测序公司测序。将测序的结果与基因的转录本序列比对(借助dnamain软件)。
[0078]
结果显示：使用xba i、sma i两种限制性内切酶分别切割目的基因、pbi121-gfp表达载体及pbi121-gus表达载体(图4)；使用ecor i、xba i两种限制性内切酶切割目的基因。经1％琼脂糖凝胶电泳检测。通过dna胶回收试剂盒(tiangel purification kit)将目的基
因与载体分别回收，并通过1％琼脂糖凝胶进行胶回收检测，显示目的基因与载体均回收成功(图5、图14a)。使用t4连接酶过夜连接目的基因与克隆，接着转化大肠杆菌，37℃培养过夜至长出单菌落。挑选多个单克隆并对其使用pcr验证。选取扩增出目的基因条带的阳性单克隆菌液送生物公司测序。
[0079]
阳性重组子的鉴定：随机挑取单菌落加入到lb液体培养基(已加kana抗生素)培养至菌液均一浑浊的状态，并进行菌落pcr验证；通过t4连接酶连接目的基因与pyes2载体并转化大肠杆菌，挑取单克隆并做菌液pcr扩增,结果显示，hg42639基因菌落pcr显示扩增出了与目的基因预期大小一致的片段(图6ac、图14b)。然后对pcr扩增出目的片段的菌液使用试剂盒(tiangen)提取重组质粒，并进行双酶切验证(图6bd)，由以上结果可以得出，亚细胞定位表达载体pbi121-gfp-hg42639、植物表达载体pbi121-gfp-hg42639及酵母异源表达载体构建成功(图7a、图8、图15)。
[0080]
实施例3
[0081]
本实施例提供盐生草根系耐盐基因hg42639在参与植物耐盐性方面的应用，包括：
[0082]
1.pbi121-gfp-hg42639在本氏烟草中的亚细胞定位
[0083]
将pbi121-gfp与pbi121-gfp-hg42639瞬时转化烟草，通过使用激光共聚焦显微镜观察基因在烟草细胞中的亚细胞定位(马玲珑，2015)。由图7可以看出，pbi121-gfp空载体在烟草细胞中各个位置均表达，而pbi121-gfp-hg42639主要在细胞质中观察到绿色荧光，少量分布于细胞核中，确定hg42639基因在细胞质和细胞核中表达。
[0084]
2.拟南芥遗传转化及转基因拟南芥表型分析
[0085]
浸染前剪去已经受精的长角果，并保证转基因拟南芥植株上有大量不成熟的花簇，并浇够足量营养液。选择长势健壮的植株进行侵染，侵染前一天将拟南芥苗植株置于弱光环境下。侵染时，将拟南芥植株在塑料杯中的侵染液中侵染1min，吸水纸吸去多余的侵染液，并在侵染结束后使用封口膜将植株包裹，侵染流程如图10。暗培养2d后，揭开遮盖物正常培养且不必使用太强光照(aida h s等，2005)。
[0086]
待转基因拟南芥长出的长角果变黄或棕色时，及时将t0代种子轻轻剪下收集于离心管中，并在40mg/lkana的1/2ms培养基上进行抗性筛选(邹兰，2017)。可以看出转化hg42639基因的种子在1/2ms培养基上中具有kana抗性的苗子长势良好，不具有kana抗性的苗子变黄或者白化死亡(图11)。
[0087]
将获得的抗性植株移栽至营养基质中继续培养，数周后的抗性植株生长状况图如图12。将t1代转hg42639基因种子和野生型拟南芥(col-1)种子播种于培养基质(蛭石：珍珠岩为1:1体积比混合)中，在人工温室中培养，待幼苗长至1个月后，停止浇灌营养液，进行200mm nacl处理并观察幼苗生长情况，结果发现，盐胁迫处理10d时野生型拟南芥植株严重萎蔫，到13d时已完全发黄枯萎；而转hg42639基因拟南芥耐盐性良好，能够继续存活(图13)。由此，hg42639基因能够显著提高拟南芥耐盐性，该基因可用于植物或作物耐盐育种。
[0088]
3.载体对酵母的转化及酵母生长表型分析
[0089]
以pyes2空载质粒为对照，将pyes2和目的基因的质粒使用醋酸锂转化法转化axt3和cy162酵母并通过营养缺陷型培养基挑选单克隆，利用菌液pcr扩增、电泳检测进行阳性鉴定。结果表明，hg42639基因转化axt3酵母，菌液扩增出了符合目的基因大小的条带；(图16a)。hg42639基因转化cy162酵母的菌液扩增出目的条带(图16b)。
[0090]
axt3是一种对na
+
敏感的酵母菌株，不含atp酶(ena1～ena4)，故对na
+
极其敏感(amtmann等，2001)。在外界na
+
、k
+
浓度一致的情况下，与转化空载体pyes2的酵母菌株相比，转化hg42639基因的酵母菌株长势较好，并且随着na
+
浓度的增加，这种对比现象更加明显。向酵母菌株长势较好表明hg42639基因的转入减少了na
+
对酵母细胞的毒害，说明hg42639基因参与na
+
的外排(图17a)。
[0091]
cy162是一种k
+
缺陷型酵母菌株，不含k
+
外排蛋白trk1、trk2(等，2002)，在k
+
为100mm时,转化空载体pyes2的酵母菌株与转化hg42639基因的酵母菌株均能生长，在k
+
＜7mm(0、0.2mm、1mm)时，转化空载体pyes2的酵母菌株不生长，转化hg42639基因的酵母菌株生长，说明该基因在酵母中的超表达具有弥补k+缺陷型酵母菌株cy162的功能，即在酵母中介导k
+
的吸收(图17b)。
[0092]
当酵母菌株置生长环境中na+浓度增大时，axt3-hg42639菌株体内k
+
含量、na
+
含量均减少(图17c)；当酵母菌株置生长环境中k
+
浓度增大时，cy162-hg42639菌株体内k
+
含量增加而na
+
含量减少(图17d)。
[0093]
综上，盐生草根系耐盐基因hg42639基因通过参与na
+
的外排及介导k
+
的吸收进而参与响应植物盐胁迫，从而提高植物耐盐性。
[0094]
以上所述仅是本技术的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本技术的保护范围。
[0095]
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distribution and bifurcating salt sensitivity inarabidopsisby genetic disruption of the na+transporterathkt1[j].febs letters,2002,531(2):157-161.

技术特征：
1.盐生草hg42639基因，其特征在于所述hg42639基因转录本序列如序列表seq no.1所示，所述hg42639基因发挥抗盐功能的片段如序列表seq no.2所示。2.盐生草根系耐盐基因hg42639的基因克隆和载体构建方法，其特征在于所述方法包括：(1)植株材料和试剂选择；(2)rna提取与反转录；(3)引物设计和基因克隆；(4)构建过表达载体、亚细胞定位表达载体及酵母异源表达载体。3.盐生草根系耐盐基因hg42639功能验证方法，其特征在于所述方法包括：(1)拟南芥遗传转化及转基因拟南芥抗性筛选；(2)转基因拟南芥获得及生长表型分析；(3)酵母生长表型分析。4.盐生草根系耐盐基因hg42639功能验证方法，其特征在于所述方法包括：(1)pbi121-gfp-hg34456在本氏烟草中的亚细胞定位，(2)拟南芥遗传转化和耐盐性分析，(3)载体对酵母的转化及酵母生长表型分析。5.盐生草hg42639基因在na
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外排方面的应用，其特征在于所述盐生草hg42639基因发挥功能的片段如序列表seq no.2所示。6.盐生草hg42639基因增强拟南芥抗盐性的应用，其特征在于所述盐生草hg42639基因发挥功能的片段如序列表seq no.2所示。7.盐生草hg42639基因在烟草细胞核上表达的应用，其特征在于所述盐生草hg42639基因发挥功能的片段如序列表seq no.2所示。

技术总结
本发明涉及盐生草根系耐盐基因Hg42639的基因克隆和功能应用，属于植物生物工程技术领域。本发明首次从盐生草根系中克隆到耐盐基因Hg42639，通过克隆盐生草根系耐盐相关基因Hg42639，构建亚细胞定位表达载体，通过烟草瞬时表达进行基因定位，发现Hg42639基因为非跨膜性蛋白，亚细胞定位在细胞质和细胞核上；构建过表达载体，稳定遗传转化拟南芥进行耐盐性鉴定，发现转基因植株比非转基因植株耐盐性显著增强；构建酵母异源表达载体，进一步验证Hg42639基因的功能，发现Hg42639基因参与Na


技术研发人员：李葆春 胡尚钦 许静玉 孙祥岭 汪军成 姚立蓉 王化俊 孟亚雄 马小乐 司二静 杨轲 黄志磊 顾鹏程 王玉杰 王昊 赵雅滨
受保护的技术使用者：甘肃农业大学
技术研发日：2023.02.15
技术公布日：2023/8/23