蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生和改良盐碱土壤中的应用

1.本发明属于微生物改良土壤技术领域，具体涉及蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生和改良盐碱土壤中的应用。


背景技术：

2.在人口不断增加的背景下，有效利用有限的土地资源对于全球发展至关重要。但是当前的土地资源中，盐碱地广泛分布，盐碱地仍然是粮食安全的重要后备土地资源。针对我国土壤盐碱化程度日益加重、耕地资源日趋短缺以及粮食需求日益高涨的现状，改良盐碱地和促进植物在盐碱地中生长是保证农业的可持续发展的重要手段。目前，盐碱地改良是农业利用的基础，改良后的盐碱地资源具有多种利用途径，如发展草业和草地畜牧业、种植经济作物和中药材等。目前盐碱土壤改良的方法有化学法、物理法和生物法。物理和化学改良虽有成效，但可能存在工程量大、容易反盐、成本过高等问题，生物法包括种植耐盐碱植物和微生物改良盐碱土壤已成为最热门的研究方法。
3.种植耐盐碱植物的关键在于促进耐盐碱植物的生长。盐碱胁迫是植物生长的常见影响因子，会对植物的整个生长周期造成不同程度的抑制。复合微生物菌株比单菌株更能够长期发挥作用且效果显著稳定，可分泌不同的活性物质。因此，加强研究复合微生物菌株对耐盐碱植物的促生作用十分必要。


技术实现要素：

4.本发明的目的提供一种蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用，促进盐碱植物的生长。
5.本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用。
6.优选的，所述植物包括耐盐碱植物。
7.优选的，所述耐盐碱植物包括旱稻或油葵；所述植物促生包括提高出苗率、株高、叶面积和产量中的任一种或几种。
8.本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在改良盐碱土壤中的应用。
9.优选的，所述改良盐碱土壤包括1)～4)中的任一种或几种；
10.1)增加盐碱土壤持水力和供水能力；
11.2)降低盐碱土壤盐分含量；
12.3)提高盐碱土壤中全氮、速效磷、速效钾、氨态氮和硝态氮中的一种或几种养分含量；
13.4)提高土壤水稳定性团聚体含量。
14.优选的，所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的促生特性包括产nh3、溶无机磷、产iaa、产铁载体和产蛋白酶中的一种或几种。
15.优选的，所述蜡样芽孢杆菌包括蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2，所述短小芽
孢杆菌包括短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5；
16.所述蜡样芽孢杆菌g2的保藏编号为cgmccno.16671；所述短小芽孢杆菌g5的保藏编号为cgmccno.16879。
17.优选的，所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的应用方式包括制备成复合种子液或复合微生物肥后施用于植物或土壤；
18.所述复合种子液的制备包括：蜡样芽孢杆菌种子液和短小芽孢杆菌种子液混合得到；所述复合种子液中蜡样芽孢杆菌的活菌数为1.5
×
10
12
cfu/ml～1.8
×
10
12
cfu/ml；所述复合种子液中短小芽孢杆菌的活菌数为4
×
10
11
cfu/ml～5.5
×
10
11
cfu/ml；
19.所述复合微生物肥的制备包括：复合种子液发酵后得到复合微生物肥；所述发酵时应用的培养基组成为20g麦芽糖、16.8g酵母浸粉、4.0gna2hpo4、2.0gnah2po4、0.5gmgso4、0.2gcacl2和蒸馏水1l。
20.优选的，所述复合微生物肥中的蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌有效活菌数总和为50
×
10
12
cfu/ml～60
×
10
12
cfu/ml；所述复合微生物肥在种植盆中应用时复合微生物肥和盐碱土壤干重的质量比为(1～5ml)：1kg，所述复合微生物肥在田间应用时复合微生物肥应用量为1～2l/亩。
21.本发明提供了一种改良盐碱土壤的复合生物肥，复合生物肥包括蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2和短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5，所述蜡样芽孢杆菌g2保藏编号为cgmccno.16671；所述短小芽孢杆菌g5保藏编号为cgmccno.16879。
22.本发明的有益效果：本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用。本发明的蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌之间相互促进，具有协同增效的作用，通过产nh3、溶无机磷、产iaa、产铁载体和产蛋白酶，促进耐盐碱植物的生长。实施例结果：蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合微生物肥可以有效提高盐碱土壤中油葵的出苗率、叶面积和株高，提高旱稻的出苗率。
23.生物保藏信息
24.蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2，于2018年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.16671。
25.短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5，于2018年12月06日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.16879。
附图说明
26.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
27.图1为实施例2复合种子液在不同盐水平下的促生特性，其中a代表产nh3活性，b代表产iaa能力，c代表产铁载体能力，d代表溶磷效应，e代表产蛋白酶活性；
28.图2为实施例2不同处理组的甘草早期幼苗生长情况；
29.图3为实施例3～7和对比例1直筒盆土柱实验灌水后的整体状态展示图；
30.图4为实施例3～7和对比例1的土壤样品水分特征曲线变化图；
31.图5为应用例一各处理组油葵形态图，图5左侧为现蕾期(7月10号)各处理组油葵形态图，图5右侧为各处理组监测土壤盐分和养分含量图；
32.图6为应用例二f2处理组、f1处理组旱稻出苗情况；
33.图7为应用例二ck处理组旱稻出苗情况。
具体实施方式
34.本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用。
35.本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用，优选为蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合种子液或复合微生物肥在耐盐碱植物促生中的应用，更优选为蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合微生物肥在耐盐碱植物促生中的应用。
36.本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在改良盐碱土壤中的应用，优选为蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合种子液或复合微生物肥在改良盐碱土壤中的应用，更优选为蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合微生物肥改良盐碱土壤中的应用。本发明所述改良盐碱土壤包括1)～4)中的一种或几种；
37.1)增加盐碱土壤持水力和供水能力；
38.2)降低盐碱土壤盐分含量；
39.3)提高盐碱土壤中全氮、速效磷、速效钾、氨态氮和硝态氮中的一种或几种养分含量；
40.4)提高盐碱土壤水稳定性团聚体含量。
41.本发明所述复合微生物肥改良盐碱土壤更优选为同时增加土壤持水力和供水能力、降低土壤盐分含量、提高土壤中全氮、速效磷、速效钾、氨态氮和硝态氮含量和提高土壤水稳定性团聚体含量。
42.本发明所述蜡样芽孢杆菌优选包括蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2，所述蜡样芽孢杆菌g2的保藏编号为cgmccno.16671。
43.本发明所述短小芽孢杆菌优选包括短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5，所述短小芽孢杆菌g5的保藏编号为cgmccno.16879。
44.本发明所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌具有协同增效的作用。本发明所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的促生特性优选通过产nh3、溶无机磷、产iaa、产铁载体和产蛋白酶中的一种或几种实现，更优选为同时产nh3、溶无机磷、产iaa、产铁载体和产蛋白酶。
45.本发明所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的应用方式优选制备成复合种子液或复合微生物肥后施用于植物或土壤。本发明所述复合种子液的制备方法优选包括蜡样芽孢杆菌种子液和短小芽孢杆菌种子液混合得到；所述复合种子液中蜡样芽孢杆菌的活菌数优选为1.5
×
10
12
cfu/ml～1.8
×
10
12
cfu/ml，更优选为1.65
×
10
12
cfu/ml；所述复合种子液中短小芽孢杆菌的活菌数优选为4
×
10
11
cfu/ml～5.5
×
10
11
cfu/ml，进一步优选为4.95
×
10
11
cfu/ml。本发明所述蜡样芽孢杆菌种子液的制备优选包括蜡样芽孢杆菌活化后，接种到na液体培养基中进行种子培养，得到蜡样芽孢杆菌种子液。本发明所述蜡样芽孢杆菌活化优选将蜡样芽孢杆菌涂布于na固体培养基中进行活化培养得到蜡样芽孢杆菌单菌落。本发明所述活化培养的温度优选为28～35℃，更优选为30℃；所述活化培养的时间优选为46～
50h，更优选为48h；所述种子培养的转速优选为160～200rpm，更优选为180rpm。本发明所述na固体培养基的组成优选包括蛋白胨9～11g、牛肉膏2～4g、氯化钠4～6g、琼脂14～17g和蒸馏水1000ml，更优选为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g和蒸馏水1000ml。
46.得到蜡样芽孢杆菌单菌落，本发明优选将蜡样芽孢杆菌单菌落接种到na液体培养基中进行种子培养，得到蜡样芽孢杆菌种子液。本发明所述种子培养的温度优选为28～35℃，更优选为30℃；所述种子培养的时间优选为20～26h，更优选为24h；所述种子培养的转速优选为160～200rpm，更优选为180rpm。本发明所述na液体培养基的组成优选包括蛋白胨9～11g、牛肉膏2～4g、氯化钠4～6g和蒸馏水1000ml，更优选为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g和蒸馏水1000ml。
47.本发明所述短小芽孢杆菌种子液的制备优选包括短小芽孢杆菌活化后，接种到na液体培养基中进行种子培养，得到短小芽孢杆菌种子液。本发明所述短小芽孢杆菌活化优选将短小芽孢杆菌涂布于na固体培养基中进行活化培养得到短小芽孢杆菌单菌落。本发明所述活化培养的温度优选为28～35℃，更优选为30℃；所述活化培养的时间优选为46～50h，更优选为48h；所述种子培养的转速优选为160～200rpm，更优选为180rpm。本发明所述na固体培养基的组成优选包括蛋白胨9～11g、牛肉膏2～4g、氯化钠4～6g、琼脂14～17g和蒸馏水1000ml，更优选为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g和蒸馏水1000ml。
48.得到短小芽孢杆菌单菌落，本发明优选将短小芽孢杆菌单菌落接种到na液体培养基中进行种子培养，得到短小芽孢杆菌种子液。本发明所述种子培养的温度优选为28～35℃，更优选为30℃；所述种子培养的时间优选为20～26h，更优选为24h；所述种子培养的转速优选为160～200rpm，更优选为180rpm。本发明所述na液体培养基的组成优选包括蛋白胨9～11g、牛肉膏2～4g、氯化钠4～6g和蒸馏水1000ml，更优选为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g和蒸馏水1000ml。
49.本发明短小芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌种子培养时应用的培养基优选为na固体培养基，本发明所述na液体培养基的组成优选包括蛋白胨9～11g、牛肉膏2～4g、氯化钠4～6g和蒸馏水1000ml，更优选为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g和蒸馏水1000ml。
50.得到蜡样芽孢杆菌种子液和短小芽孢杆菌种子液，本发明优选将所述蜡样芽孢杆菌种子液和所述短小芽孢杆菌种子液混合得到复合种子液。本发明所述混合的蜡样芽孢杆菌种子液和短小芽孢杆菌种子液的体积比优选为(1～2)：(1～2)，更优选为1：1。
51.得到复合种子液后，本发明对所述复合种子液进行发酵得到复合微生物肥，更优选为复合种子液接种到培养基中进行发酵得到复合微生物肥。
52.本发明所述复合种子液的制备方法已在上文描述，在此不再赘述。本发明所述复合种子液的接种量优选为特定培养基体积的1.5～3％，更优选为2％。
53.本发明复合种子液发酵的温度优选为25～30℃，进一步优选为26～28℃，更优选为28℃；复合种子液发酵的时间优选为24～36h，优选为24～30h，更优选为24h；复合种子液发酵的转速优选为160～200r/min，更优选为180r/min。本发明发酵时应用的培养基的组成优选包括麦芽糖20g，酵母浸粉16.8g，na2hpo44.0g，nah2po42.0g，mgso40.5g，cacl20.2g和蒸馏水1l。
54.发酵结束后，本发明优选得到的复合微生物肥中的蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌有效活菌数总和优选为(50～60)
×
10
12
cfu/ml，更优选为56.55
×
10
12
cfu/ml。本发明所述
复合微生物肥(也称为复合生物肥)稳定性强，可提高盐碱土壤保水性能、增加盐碱土壤持水和供水能力；降低盐碱土壤中盐分含量；可提高盐碱土壤的养分包括氮、磷、氨态氮和硝态氮；可有效提高盐碱土壤水稳定性团聚体含量；本发明的复合生物肥也可有效促进盐碱土壤中作物的生长，提高产量。
55.本发明提供了一种改良盐碱土壤的复合生物肥，复合生物肥包括蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2和短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5，所述蜡样芽孢杆菌g2保藏编号为cgmccno.16671；所述短小芽孢杆菌g5保藏编号为cgmccno.16879。本发明所述复合微生物肥优选为复合种子液接种到培养基中进行发酵得到复合微生物肥。本发明所述复合种子液的制备参数和对复合种子液进行发酵的参数在上文已经论述，在此不再赘述。
56.本发明优选将所述复合微生物肥或复合种子液随水施入盐碱土壤实现耐盐碱植物促生和/或改良盐碱土壤。本发明所述复合微生物肥和水的体积比优选为1：(1000～2000)，更优选为1：(1700～1800)。本发明所述复合微生物肥随水施入盐碱土壤是为了使复合微生物更容易渗透土壤，提高复合微生物肥的施用效果。
57.本发明所述耐盐碱植物优选包括旱稻或油葵，本发明所述植物促生包括提高出苗率、株高、叶面积和产量中的一种或几种，更优选为同时提高出苗率、株高、叶面积和产量。本发明所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合微生物肥可以有效促进盐碱土壤中油葵的出苗率、叶面积和株高，提高旱稻的出苗率，旱稻的出苗率提高幅度达79.99％～99.96％。
58.当复合微生物肥的有效活菌数为(50～60)
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cfu/ml时，本发明所述复合微生物肥的应用量优选为复合微生物肥和改良盐碱土壤干重的质量比为(1～5ml)：1kg，更优选为(4ml)：1kg。本发明所述盐碱土壤优选包括轻度盐碱土；所述轻度盐碱土的盐分含量优选为3.5-6.0g/kg，更优选为4.04g/kg，轻度盐碱土的ph值优选为7.8～8.6，更优选为为8.2。本发明所述改良盐碱土壤通过风干的方式得出改良盐碱土壤干重值。
59.当复合微生物肥的有效活菌数为(50～60)
×
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12
cfu/ml时，本发明所述复合微生物肥在田间应用时复合微生物肥应用量优选为1～2l/亩，更优选为1.5l/亩。
60.虽然国内外市场上销售的菌肥、菌剂种类繁多，但针对盐碱地改良的高效菌肥、菌剂较少，适用于不同地区盐碱地修复的微生物产品更是匮乏。本发明以蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2和短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5制备的复合种子液和复合微生物肥均具有耐盐碱特性，可以在盐碱土壤中生长繁殖，分泌促生物质，促进耐盐碱植物的生长。
61.本发明所述复合微生物肥，可以提高盐碱土壤保水性能，提高土壤含水量，最大增长率可达25.32％；可增加土壤持水和供水能力，处理后的土壤在不同吸力的容水度均提高；可使土壤盐分明显降低，最大可降低57％；可提高土壤的养分，处理后土壤中氮、磷、氨态氮和硝态氮最大分别增加了72.32％、68.64％、73.49％和79.27％；可有效提高土壤水稳定性团聚体含量，处理后水稳性团聚体含量相比对照组可最大增加82％。本发明的复合微生物肥可有效提高盐碱土上植物的出苗率、保苗率，促进生长，提高作物产量。
62.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
63.实施例1复合微生物种子液及复合微生物肥的制备
64.培养基：na固体培养基组成为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g和蒸馏水1000ml，ph＝7.3
±
0.1；
65.na液体培养基组成为蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml、ph＝7.3
±
0.1；
66.特定培养基组成为麦芽糖20g，酵母浸粉16.8g，na2hpo44.0g，nah2po42.0g，mgso40.5g，cacl20.2g和蒸馏水1l；
67.(1)菌种活化：将蜡样芽孢杆菌g2(cgmcc no.16671)于na固体培养基上活化，置于30℃恒温箱中培养48h，得g2单菌落，备用；
68.将短小芽孢杆菌g5(cgmcc no.16879)于na固体培养基上活化，置于30℃恒温箱中培养48h，得g5单菌落，备用。
69.(2)种子液的制备：挑取活化后的g2单菌落接入na液体培养基中，在温度为28℃、转速为180rpm恒温摇床培养24h后，得g2种子液，备用；
70.挑取活化后的g5单菌落，接入na液体培养基中，在温度为28℃、转速为180rpm恒温摇床培养24h后，得g5种子液，备用。
71.(3)复合种子液的制备：将g2种子液和g5种子液按照体积比为1：1混合后得到复合种子液；所述复合种子液中蜡样芽孢杆菌的活菌数为1.65
×
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cfu/ml；所述复合种子液中短小芽孢杆菌的活菌数为4.95
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11
cfu/ml。
72.(4)复合微生物肥的制备：将复合种子液接种在特定培养基中进行复合发酵。特定培养基的初始ph值为5，特定培养基装液量为100ml/250ml。复合种子液接种量为特定培养基体积的2％。复合发酵温度为30℃、复合发酵转速为180r/min，复合发酵时间为24h，即得复合微生物肥，所述复合微生物肥中的蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌有效活菌数总和为56.55
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12
cfu/ml。
73.实施例2复合种子液的耐盐能力及其在盐胁迫环境下的促生特性
74.1、复合种子液耐盐能力的测定
75.复合种子液为实施例1中步骤(3)制备得到的复合种子液；
76.tsb培养基组成为：胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨5g、氯化钠5g和蒸馏水1000ml，ph＝7.2
±
0.2，经121℃压力蒸汽灭菌后使用。
77.在原始tsb培养基中加入nacl制备系列浓度水平的tsb培养基以模拟不同水平盐条件。tsb培养基中nacl的终质量浓度分别为0mm、50mm、100mm、200mm和400mm，将复合种子液按体积比为1％接种于上述不同盐胁迫程度的tsb培养基中。接种后tsb培养基在温度为28℃、转速为180r/min的条件下摇床培养48h后得到培养液。培养液于600nm处吸光度处测定吸光度的大小即表示复合种子液耐盐能力的大小。每个nacl质量浓度条件下设3组重复平行实验。结果见表1。根据表1可知，复合种子液在不同的nacl质量浓度下可以生长繁殖，具有耐盐能力。
78.表1复合种子液的耐盐能力
[0079][0080]
2、复合种子液在模拟盐环境下的促生特性
[0081]
复合种子液为实施例1中步骤(3)制备得到的复合种子液。
[0082]
1)产nh3活性：取新鲜培养24h的复合种子液接种于含10ml蛋白胨水(蛋白胨10g、5gnacl和蒸馏水1000ml，ph＝7.6)的试管中，在温度为28℃条件下培养2d，每管加入0.5mlnessler's试剂，若出现黄褐色沉淀则说明具有产nh3活性，若无黄褐色沉淀则说明不具有产nh3活性。结果见图1和表2-1，根据图1和表2-1可知，复合种子液在不同水平盐胁迫下均具有产nh3的活性。
[0083]
2)溶无机磷能力：取新鲜培养24h的复合种子液接接种于pikovasky's溶磷培养基上，接种量为8μl，在温度为28℃条件下培养5d，若菌落周围出现透明圈则说明具有溶无机磷能力。结果见图1和表2-1，根据图1和表2-1可知，在大于等于100mm盐水平下复合种子液具有溶无机磷的能力。
[0084]
3)产iaa的能力：取新鲜培养24h的复合种子液接种于含色氨酸0.5g/l的lb液体培养基中，接种量为lb液体培养基体积的1％，在温度为28℃、转速为180r/min条件下振荡培养5d，在530nm下测定吸光度并计算iaa(吲哚乙酸)含量，计算iaa的标准曲线公式为y＝0.0147x-0.0004，r2＝0.9979，其中y为od
530
的含量，x为测定的iaa值。结果见图1和表2-1，根据图1和表2-1可知，复合种子液产iaa的能力在不同水平盐胁迫下均高于对照条件。4)产铁载体的能力：取新鲜培养24h的复合种子液接种于通用cas培养基平板上，接种量为8μl，在温度为28℃条件下培养5d，若菌落周围出现透明圈则为阳性，测定透明圈直径d(cm)与菌落直径d(cm)，并计算d/d值，d/d比值越大说明产铁载体活性越大。结果见图1和表2-1，根据图1和表2-1可知，复合种子液产在不同盐水平下均有产铁载体的能力。
[0085]
5)产蛋白酶活性：取新鲜培养24h的复合种子液采用滤纸片法接种于蛋白酶产生菌筛选培养基上，28℃培养5d，菌落周围出现透明圈为阳性。测定透明圈直径d(cm)与菌落直径d(cm)，并计算d/d值。d/d值越大说明产蛋白酶能力越强。结果见图1和表2-1，根据图1和表2-1可知，复合种子液产在不同盐水平下均有产蛋白酶活性。
[0086]
表2-1复合种子液在不同模拟盐环境下的促生特性
[0087][0088][0089]
注：复合种子液产iaa能力测定时原始吸光度为菌液稀释四倍后所得数据，因此，计算浓度时标准曲线公式得出的数据应乘以四倍。
[0090]
3、复合种子液的促生效应
[0091]
(1)甘草种子预处理：精选籽粒饱满、大小均一的甘草种子，先用质量浓度为85％的浓h2so4浸润45min，然后用蒸馏水冲洗3遍，再用质量浓度为0.1％的h2o2消毒10min，最后用蒸馏水冲洗数次后置于烧杯中，用蒸馏水浸泡6h使种子充分吸水，待用。
[0092]
(2)实验设计：采用完全随机设计，共设2个处理，分别为盐胁迫处理组(s，nacl的质量浓度为150mm)、施用本发明实施例1中步骤(3)制备得到的复合种子液处理组(s+b，在复合种子液中加入nacl，复合种子液中nacl的质量浓度为150mm)。选取步骤(1)充分吸水、饱满均一的甘草种子，吸干表面水分，均匀摆放在垫有双层无菌滤纸的培养皿(直径9cm)，每皿50粒，盐胁迫处理组的每皿加入10ml质量浓度为150mm的氯化钠溶液，复合种子液处理组的每皿加入10ml氯化钠质量浓度为150mm的复合种子液，每个处理组设置3个平行实验。种子萌发实验条件为光照处理12h，温度为28℃；黑暗处理12h，温度为20℃。每个皿每天用称重法加蒸馏水至恒质量以保持恒定的基质条件。发芽结束后采用游标卡尺测定各处理甘草幼苗胚芽和胚根的粗度，60℃烘干测定各自干重，结果见下图2和表2-2。根据表2-2和图2可知，本发明制备的复合种子液能够促进盐环境下甘草幼苗的生长。
[0093]
表2-2处理组甘草种子的萌发情况
[0094][0095]
注：同一列不同字母代表处理间差异显著，p＜0.05。
[0096]
实施例3复合微生物肥改良盐碱土壤的方法及效应
[0097]
1、试验材料
[0098]
(1)实施例1所制备的复合微生物肥；(2)盐碱土：试验土样取自宁夏银川市西夏区南梁农场1队试验田0～20cm表层土壤。将取回土样置于阴凉处风干，剔除土壤样品中的植物残根和石砾等杂物，经风干、磨碎、过筛2.5mm备用。土壤机械组成采用丹东市百特仪器有限公司生产的bettersizer2000激光粒度分析仪进行测定，土壤物理性砂粒、粉粒体积分数分别为86.47％、12.39％。依据国际制土壤质地分类标准，该土壤为砂壤土，供试土壤容重为1.41g/cm3，田间持水率以质量百分含量计为20.99％，初始含盐量为4.04g/kg，ph值为8.2，属于轻度盐碱土(轻度盐碱土的类型根据文献(赵子珍,尹雪峰.同朔地区风蚀沙化盐碱地造林技术[j].内蒙古林业调查设计,2012,35(05):60-61.)判定)。
[0099]
2、试验方法及设计
[0100]
用底部带孔的直筒盆进行土柱模拟入渗试验。直筒盆的直径为19.5cm，高度为16.5cm。按照干容重进行填装，每个直筒盆共装风干土6.90kg，具体填装步骤为：先在直筒盆底部填装风干土后压实，压实风干土的厚度为2cm，风干土铺在之前压实土的上部。设置3个平行实验，共3个直筒盆。
[0101]
复合微生物肥的施用量为1ml/kg风干土，即每个直筒盆共施用复合微生物肥6.9ml，复合微生物肥随第一次灌水渗入土壤。试验期间共灌水三次，根据饱和灌水量计算每次灌透时的水量为1750ml。
[0102]
每次灌水后的直筒盆放在室外温棚自然蒸发10天后取样。第一次取样后对所有试验盆进行第二次透灌，透灌后继续自然蒸发10天，进行第二次取样，第二次取样后对所有试验盆进行第三次透灌，透灌后继续自然蒸发10天，进行第三次取样。第二次和第三次透灌只施用水1750ml。
[0103]
实施例4
[0104]
同实施例3，唯一的区别在于步骤2试验方法及设计中的复合微生物肥的施用量为2ml/kg风干土。
[0105]
实施例5
[0106]
同实施例3，唯一的区别在于步骤2试验方法及设计中的复合微生物肥的施用量为3ml/kg风干土。
[0107]
实施例6
[0108]
同实施例3，唯一的区别在于步骤2试验方法及设计中的复合微生物肥的施用量为4ml/kg风干土。
[0109]
实施例7
[0110]
同实施例3，唯一的区别在于步骤2试验方法及设计中的复合微生物肥的施用量为5ml/kg风干土。
[0111]
对比例1
[0112]
同实施例3，唯一的区别在于步骤2试验方法及设计中的复合微生物肥的施用量为0ml/kg风干土，即未施用复合微生物肥。
[0113]
实施例3～7和对比例1的复合微生物肥施用量和灌水总量见表3-1。实施例3～7和对比例1土柱实验灌水后见图3。
[0114]
表3-1实施例3～7和对比例1的复合微生物肥施用量和第一次灌水总量
[0115]
处理组复合微生物肥施用量(ml)水量(ml)灌水总量(ml)对比例1017501750实施例36.91743.11750实施例413.81736.21750实施例520.71729.31750实施例627.61722.41750实施例734.51715.51750
[0116]
对实施例3～7和对比例1的取样土壤进行测试，测定项目和方法具体如下：
[0117]
(1)土壤水稳定性团聚体含量
[0118]
实施例3～7和对比例1三次取样后的土分别利用湿筛法测定土壤团聚体，具体如下：
[0119]
将孔径大小分别为2、1、0.5、0.25、0.053mm的套筛自上而下叠放，称取ck处理组100g土壤样品放置于最上面的筛子上，将套筛缓缓放入水中静置浸泡5min后，用团聚体分析仪以振动频率40次/min、振幅5cm、振荡5min进行土壤样品分级。最后将筛子缓缓从水中取出，将各个筛子中的各级土壤团聚体收集到铝盒中，放置在烘箱中烘干称重测定土壤各级团聚体含量。烘箱的温度设置为55℃。
[0120]
水稳定性大团聚体含量(r
0.25
)计算公式为：
[0121][0122]
公式(1)中：r
0.25
为粒径大于0.25mm的团聚体含量(％)；m
r》0.25
为粒径大于0.25mm团聚体的重量(g)；m
t
为团聚体的总质量(g)。
[0123]
(2)土壤质量含水量
[0124]
实施例3～7和对比例1三次取样后的土立即利用烘干法测定土壤质量含水量。
[0125]
采用烘干法：取实施例3～7和对比例1各个处理组直筒盆中2～10cm土壤，平行实验的土样分别测定土壤质量含水量。
[0126]
土壤质量含水量(％)＝(m
1-m2)/m2×
100
ꢀꢀ
(2)
[0127]
公式(2)中：m1、m2分别为原土质量和烘干土质量。
[0128]
(3)土壤水分特征曲线
[0129]
实施例3～7和对比例1采用环刀取样三次后，得到土样。分别将土样在蒸馏水中浸泡48h，使土壤呈饱和状态。采用压力膜仪法，选定不同的压力值，测定土壤的水吸力与土壤质量含水量之间的关系。
[0130]
土壤水分特征曲线根据公式(3)采用gardner幂函数方程进行拟合。
[0131]
θ＝as-b
ꢀꢀ
(3)
[0132]
公式(3)中，θ为土壤质量含水量(％)，s为土壤水吸力(kpa)；a、b为参数，a代表土壤持水能力，b代表土壤水吸力变化时土壤含水量变化的速度；
[0133]
将公式(3)gardner方程求导可得容水度的表达式，见公式(4)。
[0134][0135]
(4)土壤盐分和养分测定方法
[0136]
试验基地设立土壤墒情在线监测系统(购买自北京盟创伟业科技有限公司)，该系统主要由自动运行的信息采集终端和上位机中控系统组成。将土壤水分传感器插到土壤中直接获取土壤的水分信息，再将其转成模拟电压信号传到信息采集终端，然后通过无线通信网络传到上位机中控系统，最终通过算法进行土壤墒情信息数据分析，自动剔除不稳定的数据后存储到系统数据库中。
[0137]
对实施例3～7和对比例1的取样土壤进行测试，测定结果具体如下：
[0138]
(1)土壤水稳定性团聚体和土壤质量含水量
[0139]
不同剂量复合微生物肥在入渗结束后土壤水稳定团聚体和土壤质量含水量结果见表3-2。土壤团聚体的组成及基本特性是决定土壤侵蚀、压实、板结物理过程与作用的关键指标之一，是土壤肥力的基础和评价土壤质量的重要指标。通常将粒径大于0.25mm的团聚体含量作为指标，并称为水稳定性团聚体。根据公式(1)和公式(2)计算的土壤水稳定性团聚体和土壤质量含水量结果见表3-2。由表3-2可知，在土层中，施用不同剂量复合微生物肥处理的土壤水稳定性团聚体含量均大于对比例1，且实施例3～7处理分别较ck提高了17.8％、63％、82％、54.7％和64.4％，说明复合微生物肥的施用可以改善盐碱土壤的团粒结构。复合微生物肥施加量为实施例3～7的剖面含水量分别较ck提高了19.97％、12.16％、15.25％、25.32％和17.79％，说明复合微生物肥的使用可以改善盐碱土壤的保水性能，进而提高盐碱土壤质量含水量。
[0140]
表3-2不同处理下土壤水稳性团聚体和土壤质量含水量
[0141]
处理组土壤水稳定性团聚体含量(％)土壤质量含水量(％)对比例17.3
±
0.5d19.59
±
0.44e实施例38.6
±
0.3c23.54
±
0.26b实施例411.9
±
0.5b21.97
±
0.2d实施例513.3
±
0.2a22.58
±
0.37cd实施例611.3
±
0.4b24.55
±
0.24a实施例712
±
0.4b23.08
±
0.17bc
[0142]
注：同列不同小写字母代表处理间差异显著，p＜0.05。
[0143]
(2)土壤供水和持水能力
[0144]
①
土壤水分特征曲线和容水度表达式
[0145]
土壤水分特征曲线表征了土壤质量含水量与土壤水吸力之间的关系，反应了土壤水能量与数量之间关系，是研究土壤水分保持和运动的基本特征曲线。对比例1、实施例3～7不同处理的土壤在0～1000kpa范围内的土壤水分特征曲线如图4所示，具体数据见表3-3。由图4可知，当土壤土壤质量含水量相同时，土壤水吸力随着复合微生物肥施加量的增加呈现先增大后减小的趋势，其中实施例6的土壤水吸力最大，即向土壤中施入复合微生物肥能使土壤基质势降低，土壤对水分的保持能力增强。
[0146]
表3-3为对比例1、实施例3～7不同处理的土壤在0～1000kpa范围内的土壤质量含水量
[0147][0148][0149]
通过公式(3)和公式(4)拟合土壤水分特征曲线和土壤的容水度，如表4所示，拟合系数均在0.953以上，说明建立的幂函数方程能较好地反映土壤水分特征曲线的变化。公式(3)中的参数a反映土壤持水能力大小，a值越大，土壤的持水能力越强；参数b反映土壤水吸力变化时，土壤含水量变化的速度，b值越大，土壤体积土壤质量含水量变化的速度越快。对比例1、实施例3～7不同处理组参数a分别为36.30、37.13、40.34、39.69、41.41、40.06，对比例1、实施例3～7不同处理组参数b分别为0.161、0.162、0.154、0.157、0.155，可知，实施例3
～7不同处理组的土壤持水能力均大于对比例1，土壤含水量变化的速度均小于对比例1。实施例6对于土壤持水性能的作用效果最优，并经过反复的干湿循环，使土壤质地变得更疏松，增加了土壤中大孔隙的数量。
[0150]
表4对比例1和实施例3～7的土壤水分特征曲线和容水度
[0151]
处理组土壤水分特征曲线表达式容水度的表达式相关系数对比例1θ＝36.30s-0.161
c(θ)＝5.84s-1.161
0.991实施例3θ＝37.16s-0.162
c(θ)＝6.02s-1.162
0.988实施例4θ＝40.43s-0.154
c(θ)＝6.22s-1.154
0.971实施例5θ＝39.69s-0.157
c(θ)＝6.23s-1.157
0.996实施例6θ＝41.41s-0.155
c(θ)＝6.42s-1.155
0.976实施例7θ＝40.06s-0.157
c(θ)＝6.29s-1.157
0.953
[0152]
2)土壤水分常数
[0153]
结合表4中的土壤水分特征曲线表达式计算出土壤水分常数，结果见表5。施用不同剂量复合微生物肥均能不同程度地提高土壤田间持水量(即毛管悬着水达到最大值时的土壤含水量(土壤水吸力为30kpa))、有效水含量(即土壤中能被植物根系吸收的水量(土壤水吸力为500kpa))和萎蔫含水量(即作物凋萎并不能复原时的含水量(土壤水吸力为1500kpa))，实施例3～7处理组的土壤田间持水量分别较对比例1提高了2.04％、14.1％、10.86％、16.43％和11.91％，土壤有效水分别较对比例1提高了1.72％、16.32％、12.06％、18.35％和13.11％，土壤萎蔫含水量分别较对比例1提高了1.61％、17.17％、12.61％、19.14％和13.68％。
[0154]
表5对比例1和实施例3～7不同处理的土壤水分常数
[0155]
处理组土壤田间持水量(％)土壤有效水含量(％)土壤萎蔫含水量(％)对比例120.9913.3511.18实施例321.4213.5811.36实施例423.9515.5313.10实施例523.2714.9612.59实施例624.4415.8013.32实施例723.4915.1012.71
[0156]
3)土壤容水度
[0157]
土壤容水度是土壤释水的量化指标，可用于评价土壤水分有效性程度，其反映了土壤水吸力变化时引起的土壤含水量的变化，随土壤水吸力的增大而减小，表征了土壤水分的有效性及供水能力的强弱。在相同土壤水吸力条件下，土壤容水度越大，表示土壤的供水能力越强。根据表4中的容水度表达式计算出土壤容水度，结果见表6，根据表6可知，在任意水吸力下，实施例3～7处理组的土壤容水度均均大于对比例1，且在整个入渗阶段，实施例6在任意水吸力下的容水度均大于其余处理。说明施加任一剂量复合微生物肥都能有效提高土壤的容水度，且在实施例6的复合微生物肥的添加剂量效果最佳。
[0158]
表6不同土壤水吸力下的土壤容水度(单位ml/(kpa
·
g))
[0159][0160][0161]
(4)土壤盐分与养分含量测定
[0162]
利用土壤墒情监测系统测定对比例1和实施例3～7的土壤盐分和养分含量。
[0163]
对比例1和实施例3～7处理组相同深度处的土壤盐分和养分测定结果见表7。根据表7可知，在整个土层中，实施例3～7处理组相比于对比例1均明显降低了土壤含盐量，盐分降低幅度分别为13.45％、9.11％、25.95％、57.01％和46.65％。土壤中有效的氮磷钾对植物的生长至关重要，实施例3～7处理组相比于对比例1均明显增加了盐碱土壤中各种养分含量。对比例1处理组的土壤全氮含量相比于对比例1分别增加了8.1％、16.51％、31.85％、72.32％、59.07％；土壤速效磷含量相比于对比例1分别增加了12.04％、30.53％、37.85％、68.64％、62.73％；土壤速效钾含量相比于对比例1分别增加了11.6％、21.11％、43.76％、73.09％、47.72％；土壤氨态氮含量相比于对比例1分别增加了19.04％、59.06％、67.45％、73.49％、70.47％；土壤硝态氮含量相比于对比例1分别增加了9.35％、29.8％、35.77％、79.27％、72.21％。
[0164]
由此可知，本发明的复合微生物菌肥可以有效降低盐碱地土壤的盐分含量，提高土壤养分含量。
[0165]
表7不同处理组土壤盐分和养分
[0166][0167]
注：同列不同小写字母代表处理间差异显著，p＜0.05。
[0168]
综上，采用随水入渗的方式施用不同剂量复合微生物肥均可明显改良盐碱化土壤，具体体现为：复合微生物肥降低盐碱化土壤的盐分含量，降低幅度为9.11％～57.01％；复合微生物菌肥培肥盐碱土壤即增加盐碱土壤的全氮、速效磷、速效钾、氨态氮和硝态氮的含量，增加幅度分别为8.10％～72.32％、12.04％～68.64％、11.60％～73.09％、19.04％～73.49和9.35％～79.27％。
[0169]
应用例一、复合微生物肥对盐碱土壤中油葵出苗生长及土壤盐分、水分和养分的影响
[0170]
1试验材料：试验所用土样同于实施例3步骤1试验材料中(2)的盐碱土。所用植物材料为油葵。实施例1制备的复合微生物肥。
[0171]
2试验方法及设计：采用室外盆栽试验方法，所用试验盆及装土方法同实施例3。实验设置3个处理组，分别为ck处理组、f1处理组、f2处理组，其中ck处理组每个试验盆中复合微生物肥的施用量为0ml，水施用量1750ml(达到饱和含水量状态)；f1处理组每个试验盆中复合微生物肥的施用量为1ml/kg风干土，即复合微生物肥6.9ml，水施用量1743.1ml，复合微生物肥和水共1750ml(达到饱和含水量状态)；f2处理组每个试验盆中复合微生物肥的施用量为2ml/kg风干土，即复合微生物肥施用量为13.8ml，水施用量1736.2ml，复合微生物肥和水共1750ml(达到饱和含水量状态)。每个处理组设置3个平行实验，共3个试验盆。
[0172]
ck处理组、f1处理组、f2处理组灌溉后土壤培养一周，期间保持土壤湿润。于5月24号种植开始进行油葵种子播种，每盆播9粒种子，每个处理组播种3盆。油葵播种后一周统计出苗率并进行定苗，定苗为2株/盆。在油葵现蕾期和开花期分别采集两次油葵植物样品进行油葵生长指标测定，油葵现蕾期的两次采集时间分别为6月28号和7月10号；油葵开花期的两次采集时间分别为7月20号和7月28号。在油葵现蕾期7月10号和开花期7月28号分别进行一次土壤进行测定(土壤样品测定结果采用两次平均值)，见图5。在整个油葵生长期间，根据整体土壤墒情定期进行灌溉，每次灌溉时各处理灌水量统一，不考虑需水量对作物生长的影响。测定结果均为3盆重复的平均值。
[0173]
3、测定项目和方法
[0174]
(1)土壤盐分和养分含量测定：同实施例三的步骤3测定项目和方法。
[0175]
(2)油葵生长指标：在油葵现蕾期和花期分别在试验盆中两次测定油葵作物生长指标。用卷尺测量每株油葵的株高。用直尺对叶片进行逐片测量，叶长为叶片基部到叶尖测
量值，叶宽为叶片最宽处测量值，累计算出每株油葵的叶面积，油葵单叶面积(cm2)＝叶长(cm)
×
叶宽(cm)
×
0.65。
[0176]
4、测定结果
[0177]
ck处理组、f1处理组、f2处理组的油葵作物生长指标测定结果见表8，根据表8可知，f1处理组、f2处理组的油葵出苗率明显提高，且f2处理组的油葵高于f1处理。由此可知，复合微生物肥对不同生长阶段的油葵生长均有明显促进作用，即明显提高了油葵的株高和叶面积。油葵现蕾期f2处理组的油葵株高作用优于f1处理组，而油葵开花期对叶面积的作用f1处理组强于f2处理组。
[0178]
表8不同处理下复合微生物肥对盐碱土壤上油葵株高及叶面积的影响
[0179][0180]
ck处理组、f1处理组、f2处理组的盆栽油葵土壤盐分及养分的测定结果见表9，f1处理组、f2处理组的土壤盐分含量相对于ck组均降低，可知，不同剂量复合微生物肥处理均显著降低了盐碱土壤的盐分含量。f1处理组、f2处理组的土壤养分含量相对于ck组均提高，可知，不同剂量复合微生物肥处理均显著提高了土壤中的全氮、氨态氮、硝态氮、速效磷、速效钾的含量。综上，施用本发明的复合微生物肥可降低盆栽油葵的土壤盐分含量、增加土壤养分含量。
[0181]
表9不同处理组盆栽油葵土壤盐分含量和养分含量
[0182][0183]
综上，本发明的复合微生物肥可以提高油葵种子的出苗率，促进油葵植株的生长，降低盆栽油葵的土壤盐分含量和养分含量。
[0184]
应用例二、复合微生物肥对盐碱土壤中旱稻出苗生长的影响
[0185]
1、试验材料
[0186]
试验所用土样同于实施例三步骤(2)中的盐碱土。所用植物材料为旱稻。
[0187]
实施例1制备的复合微生物肥。
[0188]
2、试验方法及设计：
[0189]
采用室外盆栽试验方法。所用试验盆及装土方法同实施例三。实验设置3个处理组，分别为ck处理组、f1处理组、f2处理组，
[0190]
其中ck处理组未施用复合微生物肥，施水量1750ml。f1处理组中施用复合微生物肥1ml/kg风干土，即每个试验盆中复合微生物肥施用6.9ml，施水量1743.1ml，复合微生物肥和水共施用1750ml。f2处理组中施用复合微生物肥2ml/kg风干土，即每个试验盆中复合微生物肥施用13.8ml，施水量1736.2ml，复合微生物肥和水共施用1750ml。
[0191]
土壤培养一周，期间保持土壤湿润。于5月24号进行旱稻种子播种，播种后一周统计出苗率，每盆播种37粒种子。每个处理组设置3个平行实验，共3个试验盆，结果为3盆的平均值。
[0192]
3、测定结果
[0193]
ck处理组、f1处理组、f2处理组的旱稻的出苗率见表10、图6和图7，其中图6从上至下第一行三个试验盆为f2处理组的旱稻出苗情况，从上至下第二行三个试验盆为f1处理组的旱稻出苗情况。根据表10、图6和图7可知，不同剂量复合微生物肥处理即f1处理组、f2处理组均显著提高了旱稻的出苗率，提高幅度达79.99％～99.96％，促进旱稻的生长。
[0194]
表10不同处理组旱稻出苗率统计结果
[0195][0196]
综上，本发明的复合种子液具有耐盐能力，能够产nh3、具有溶无机磷、产iaa、产铁载体、产蛋白酶。复合种子液制备的复合微生物肥能够改善盐碱土壤的保水性能，进而提高盐碱土壤土壤质量含水量，增强土壤对水分的保持能力，提高土壤田间持水量、土壤有效水含量、土壤萎蔫含水量和土壤容水度。复合微生物肥还能够降低盐碱地土壤的盐分含量，提高土壤养分含量，并具有植物促生作用。
[0197]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

技术特征：
1.蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物包括耐盐碱植物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述耐盐碱植物包括旱稻或油葵；所述植物促生包括提高出苗率、株高、叶面积和产量中的任一种或几种。4.蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在改良盐碱土壤中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述改良盐碱土壤包括1)～4)中的任一种或几种；1)增加盐碱土壤持水力和供水能力；2)降低盐碱土壤盐分含量；3)提高盐碱土壤中全氮、速效磷、速效钾、氨态氮和硝态氮中的一种或几种养分含量；4)提高土壤水稳定性团聚体含量。6.根据权利要求1～5任意一项所述的应用，其特征在于，所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的促生特性包括产nh3、溶无机磷、产iaa、产铁载体和产蛋白酶中的一种或几种。7.根据权利要求1～5任意一项所述的应用，其特征在于，所述蜡样芽孢杆菌包括蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2，所述短小芽孢杆菌包括短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5；所述蜡样芽孢杆菌g2的保藏编号为cgmccno.16671；所述短小芽孢杆菌g5的保藏编号为cgmccno.16879。8.根据权利要求1～5任意一项所述的应用，其特征在于，所述蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的应用方式包括制备成复合种子液或复合微生物肥后施用于植物或土壤；所述复合种子液的制备包括：蜡样芽孢杆菌种子液和短小芽孢杆菌种子液混合得到；所述复合种子液中蜡样芽孢杆菌的活菌数为1.5
×
10
12
cfu/ml～1.8
×
10
12
cfu/ml；所述复合种子液中短小芽孢杆菌的活菌数为4
×
10
11
cfu/ml～5.5
×
10
11
cfu/ml；所述复合微生物肥的制备包括：复合种子液发酵后得到复合微生物肥；所述发酵时应用的培养基组成为20g麦芽糖、16.8g酵母浸粉、4.0gna2hpo4、2.0gnah2po4、0.5gmgso4、0.2gcacl2和蒸馏水1l。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述复合微生物肥中的蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌有效活菌数总和为50
×
10
12
cfu/ml～60
×
10
12
cfu/ml；所述复合微生物肥在种植盆中应用时复合微生物肥和盐碱土壤干重的质量比为(1～5ml)：1kg，所述复合微生物肥在田间应用时复合微生物肥应用量为1～2l/亩。10.一种改良盐碱土壤的复合生物肥，其特征在于，复合生物肥包括蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)g2和短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)g5，所述蜡样芽孢杆菌g2保藏编号为cgmccno.16671；所述短小芽孢杆菌g5保藏编号为cgmccno.16879。

技术总结
本发明属于微生物改良土壤技术领域，具体涉及蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在植物促生和改良盐碱土壤中的应用。本发明提供了蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌在耐盐碱植物促生中的应用。本发明的蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌之间相互促进，具有协同增效的作用，通过产NH3、溶无机磷、产IAA、产铁载体和产蛋白酶，促进耐盐碱植物的生长。实施例结果：蜡样芽孢杆菌和短小芽孢杆菌制备的复合微生物肥可以有效提高盐碱土壤中油葵的出苗率、叶面积和株高；提高旱稻的出苗率、促进生长。促进生长。促进生长。


技术研发人员：张新慧 景何仿 董嘉琪 郎多勇
受保护的技术使用者：宁夏医科大学
技术研发日：2023.02.21
技术公布日：2023/8/24