一种4-氮杂甾体化合物及其制备方法、用途及药物组合物与流程

1.本发明属于药物技术领域，具体涉及一种4-氮杂甾体化合物及其制备方法、用途及药物组合物。


背景技术：

2.非那雄胺(finasteride)化学名为n-叔丁基-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-甲酰胺，化学式为c
23h36
n2o2，结构式为：非那雄胺是睾酮代谢成为二氢睾丸酮过程中的细胞内酶-ii型5α-还原酶的特异性抑制剂。5α-还原酶在前列腺促使睾丸酮转化为二氢睾丸酮(dht)，造成前列腺肥大。非那雄胺通过抑制该酶降低血清二氢睾丸酮水平，使前列腺体积降低，尿流量增高，临床上用于治疗良性前列腺肥大。另一方面，dht是导致男性脱发(雄激素性脱发)的主要原因，非那雄胺通过阻断睾丸酮向dht转化，成功地用于治疗男性脱发。
3.度他雄胺(dutrsteride)，化学名称为n-{2,5-双(三氟甲基)苯基}-3-羰基-4-氮杂雄铵-5α-雄甾-1-烯-17β-甲酰胺，化学结构为：是葛兰素史克(gsk)公司开发的用于预防与治疗良性前列腺增生症的一种药物。度他雄胺属于5α还原酶抑制剂，也是能够同时抑制ⅰ型和ⅱ型2种5α还原酶的药物。度他雄胺较非那他雄安作用更迅速，效果更显著，具有双重抑制的优势。
4.目前，暂未发现非那雄胺和度他雄胺及其相关化合物在抑制癌症细胞方面的应用。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是，提供一种4-氮杂甾体化合物及其制备方法，并提供其在制备抑制癌细胞的药物中的用途，以及由其组成的药物组合物。
6.为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：
7.一种4-氮杂甾体化合物，其具有如下式i的结构(如图1所示)或其药学上可接受的盐：
[0008][0009]
其中，r选自c
1-5
烷基、c
1-5
卤代烷基、苯基、c
1-3
烷基取代的苯基或c
1-3
卤代烷基取代的苯基；
[0010]
r1、r2、r3相同或不同，各自独立地选自-oh、＝o、卤素、氨基、c
1-5
烷基、c
1-5
卤代烷基、c
1-5
烷氧基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基或c
2-5
酯基；
[0011]
m、n和i各自独立地选自0、1或2。
[0012]
上述的4-氮杂甾体化合物，优选的，所述r选自所述卤素选自f、cl、br或i。
[0013]
优选的，所述m、n和i均为0。
[0014]
更优选的，所述4-氮杂甾体化合物具有如下式ⅱ或式ⅲ的结构：
[0015][0016]
基于一个总的发明构思，本发明还提供一种4-氮杂甾体化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0017]
使式ⅳ化合物与nh
2-r发生酰胺反应，得到具有式i结构的化合物；或者
[0018]
使式
ⅴ
化合物先与nh
2-r发生酰胺反应再进行1,2位脱氢，或先进行1,2位脱氢再与nh
2-r发生酰胺反应，得到具有式i结构的化合物；
[0019]
所述式ⅳ、式
ⅴ
的结构式如下：
[0020][0021]
其中，r选自c
1-5
烷基、c
1-5
卤代烷基、苯基、c
1-3
烷基取代的苯基或c
1-3
卤代烷基取代的苯基；
[0022]
r1、r2、r3相同或不同，各自独立地选自-oh、＝o、卤素、氨基、c
1-5
烷基、c
1-5
卤代烷基、c
1-5
烷氧基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基或c
2-5
酯基；
[0023]
m、n和i各自独立地选自0、1或2。
[0024]
上述的制备方法，优选的，所述式
ⅴ
化合物为化合物5，所述制备方法包括如下步骤：
[0025]
由化合物5在二氯亚砜和碱的存在下与叔丁胺发生酰胺反应，得到化合物6，然后由化合物6在ddq和bstfa的存在下发生脱氢反应，得到式ⅱ化合物；或者
[0026]
由化合物5在ddq(2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌)和bstfa(双(三甲基硅基)三氟乙酰胺)的存在下发生脱氢反应得到化合物8，然后由化合物8在二氯亚砜和碱的存在下与3,5-二三氟甲基苯胺发生酰胺反应，得到式ⅲ化合物；
[0027]
所述化合物5、化合物6和化合物8的结构式如下：
[0028][0029]
更优选的，所述制备方法包括如下步骤(以下化合物1-9的结构如图1-2所示)：
[0030]
(1)将化合物1与碱溶解于混合溶剂中，缓慢滴加氧化剂的水溶液，进行反应，反应完毕后过滤掉盐，加亚硫酸氢钠水溶液淬灭过量氧化剂，减压蒸馏除去有机溶剂，降温析晶，过滤后水淋洗，鼓风干燥得化合物2；
[0031]
(2)将化合物2与胺试剂加入溶剂中，进行反应，反应完毕后加入饮用水，减压蒸馏除去有机溶剂，降温析晶，过滤后水淋洗，鼓风干燥得化合物3；
[0032]
(3)将化合物3溶于溶剂中，加入催化剂，氢气置换，进行反应，反应完毕后加入适量饮用水，减压蒸馏除去有机溶剂，降温析晶，过滤后水淋洗，鼓风干燥得化合物4；
[0033]
(4)将化合物4溶解于1,4-二氧六环中，加入碱的水溶液，分批次缓慢加入卤代试剂，进行反应，反应完毕后往反应液中加入亚硫酸氢钠水溶液淬灭反应，盐酸调节ph至酸性，常压蒸馏回收二氧六环，过滤，鼓风干燥得化合物5；
[0034]
步骤(5)、(6)任选自以下两个方案：
[0035]
方案一：
[0036]
(5)将化合物5与碱溶解于溶剂中，滴加二氯亚砜，保温反应后，滴加叔丁胺，继续保温反应，反应完毕后加入氢氧化钠水溶液淬灭反应，分液，有机相加入水后减压蒸馏，降温析晶，过滤，鼓风干燥得化合物6；
[0037]
(6)将化合物6溶于溶剂中，加入ddq和bstfa，进行反应，反应完毕后加入亚硫酸氢钠水溶液淬灭反应，过滤，分液，有机相碳酸钠水溶液与亚硫酸氢钠水溶液水洗，减压蒸馏，丙酮置换，降温析晶，过滤，鼓风干燥得到化合物7，即所述的4-氮杂甾体化合物式ⅱ；
[0038]
方案二：
[0039]
(5)将化合物5溶于溶剂中，加入ddq和bstfa，进行反应，反应完毕后加入碳酸钾水溶液提取产物后，加入冰乙酸酸析，过滤，鼓风干燥得化合物8；
[0040]
(6)将化合物8与碱溶解于溶剂中，滴加二氯亚砜，保温反应后，滴加3,5-二三氟甲基苯胺，继续保温反应，反应完毕后加入氢氧化钠水溶液淬灭反应，分液，有机相加入适量水后减压蒸馏，降温析晶，过滤，鼓风干燥得到化合物9，即所述的4-氮杂甾体化合物式ⅲ。
[0041]
进一步优选的，在步骤(1)中，所述氧化剂为高锰酸钾或高锰酸钾与高碘酸钠的混合物，所述碱为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中任意一种或多种，所述碱溶液的溶剂为叔丁醇或异丙醇与水的混合溶剂，所述反应的温度为40-70℃；
[0042]
在步骤(2)中，所述胺试剂为甲酸铵或乙酸铵，所述溶剂为甲苯或二甲苯，所述反应的温度为100-140℃；
[0043]
在步骤(3)中，所述催化剂为钯碳或活性镍，所述溶剂为甲酸或乙酸，所述反应的温度为20-40℃，反应的压力为0.2-0.8mpa；
[0044]
在步骤(4)中，所述卤化试剂为溴素、二溴海因、二氯海因、nbs、ncs中任意一种或多种，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾，所述溶剂为1,4-二氧六环，所述反应的温度为0-20℃；
[0045]
在所述方案一、方案二的步骤(5)、(6)中，所述碱为三乙胺、吡啶、dmf中任意一种或多种，所述溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃中任意一种或多种，所述保温反应的温度为0-20℃，时间为1.5～2.5h；所述溶剂为甲苯或二甲苯，所述反应的温度为100-140℃。
[0046]
基于一个总的发明构思，本发明还提供一种4-氮杂甾体化合物在制备抑制癌细胞的药物中的用途。
[0047]
上述的用途，优选的，所述癌细胞包括前列腺癌细胞或结肠癌细胞。
[0048]
基于一个总的发明构思，本发明还提供一种药物组合物，其包含所述的4-氮杂甾体化合物和药学上可接受的辅料。
[0049]
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0050]
1、本发明的4-氮杂甾体化合物，其c-10位甲基为α构型(同时c-9位为βh)，相比c-10位为β构型的非那雄胺和度他雄胺，整体构象改变，除了具有非那雄胺/度他雄胺的药物活性外，对前列腺癌、结肠癌细胞也有较强的抑制作用，在制备治疗癌症的药物中具有很好的应用前景。
[0051]
2、本发明的4-氮杂甾体化合物，针对人前列腺癌细胞ic
50
在＜50μm范围内，优选在＜20μm范围内，更优选在＜12μm范围内。本发明的化合物针对人结肠癌细胞ic
50
在＜40μm范围内，优选在＜15μm范围内，更优选在＜10μm范围内。
[0052]
3、因为整体构象改变，本发明的化合物溶出度高，生物利用度更高。
[0053]
4、本发明的制备方法，操作简单，效率高，成本低廉，环境友好，制备得到的产品纯度高，收率高。
附图说明
[0054]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0055]
图1是4-氮杂甾体化合物的结构为式ⅱ时其合成原理示意图；
[0056]
图2是4-氮杂甾体化合物的结构为式ⅲ时其合成原理示意图；
[0057]
图3是实施例1中4-氮杂甾体化合物为式ⅱ时其制备过程示意图；
[0058]
图4是实施例2中4-氮杂甾体化合物为式ⅲ时其制备过程示意图。
具体实施方式
[0059]
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。
[0060]
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
[0061]
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0062]
本发明中，术语“烷基”指直链或支链饱和脂肪族烃基团。在一些实施方式中，烷基具有1-8个碳原子(记为c
1-8
烷基)。在一些实施方式中，烷基具有1-6个碳原子(c
1-6
烷基)。在一些实施方式中，烷基具有1-3个碳原子(c
1-3
烷基)。c
1-6
烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、碳环基、烷氧基、卤素、羟基、氧代基、氨基、胺基、酰基、酰氧基或酯基。
[0063]
术语“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基。在一些实施方式中，烯基为c
2-8
烯基。在一些实施方式中，烯基为c
2-6
烯基。在一些实施方式中，烯基为c
2-4
烯基。所述碳-碳双键可为内部的(例如在2-丁烯基中)或末端的(例如在1-丁烯基中)。c2–6烯基的非限制性实例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、碳环基、烷氧基、卤素、羟基、氧代基、氨基、胺基、酰基、酰氧基或酯基。
[0064]
术语“炔基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上定义的烷基。在一些实施方式中，炔基为c
2-8
炔基。在一些实施方式中，炔基为c
2-6
炔基。在一些实施方式
中，炔基为c
2-4
炔基。非限制性实例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基等。炔基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、碳环基、烷氧基、卤素、羟基、氧代基、氨基、胺基、酰基、酰氧基或酯基。
[0065]“烷氧基”指-o-(烷基)和-o-(环烷基)，其中烷基和碳环基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
[0066]“酯基”是指基团-coorc，其中rc为如本文中所定义的烷基、烯基、炔基、碳环基或芳基。
[0067]“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
[0068]“卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0069]
当列举数值的范围时，意图包括在所述范围内的每个数值和子范围。例如“c
1-6
烷基”包括c1、c2、c3、c4、c5、c6、c
1-6
、c
1-5
、c
1-4
、c
1-3
、c
1-2
、c
2-6
、c
2-5
、c
2-4
、c
2-3
、c
3-6
、c
3-5
、c
3-4
、c
4-6
、c
4-5
和c
5-6
烷基。
[0070]“多个”指两个以上，例如2-5个、2-3个、2个、3个、4个或5个等。
[0071]“x选自a、b或c”、“x选自a、b和c”、“x为a、b或c”、“x为a、b和c”等不同用语均表达了相同的意义，即表示x可以是a、b、c中的任意一种或几种。
[0072]“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的芳基”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代的情形。
[0073]“取代(的)”指基团中的一个或多个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。
[0074]“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的且具有母体化合物的所需药理学活性的本发明的化合物的盐。具体地，这样的盐是无毒的，可为有机或无机酸加成盐和碱加成盐。
[0075]
甾体化合物甾环碳原子的标号如下，例如标号10的c原子记为“c-10位”，c-1位和c-2位记为“1,2位”。
[0076][0077]
1、在本发明的第一个具体实施方式中，当4-氮杂甾体化合物为式ⅱ时(即化合物7)，如图1所示，其合成原理如下：
[0078]
(1)化合物1(已知化合物，可用专利文献cn101360832a报道的方法合成)在氧化剂和碱的存在下发生氧化开环反应，氧化剂可以为高锰酸钾或者高锰酸钾与高碘酸钠的混合物，碱可以为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾，溶剂可以为叔丁醇或异丙醇与水的混合溶剂，得到化合物2；
[0079]
(2)化合物2在胺试剂的存在下发生关环反应，胺试剂可以为甲酸铵或者乙酸铵，溶剂可以为甲苯或二甲苯得到化合物3；
[0080]
(3)化合物3在金属催化剂和氢气作用下发生还原反应，催化剂可以为钯碳或者活性镍，溶剂可以为甲酸或者乙酸，得到化合物4；
[0081]
(4)化合物4在卤化试剂和碱作用下发生卤仿反应，卤化试剂可以为溴素、二溴海因、二氯海因、nbs、ncs，碱可以为氢氧化钠或者氢氧化钾，溶剂可以为1,4-二氧六环，反应温度为0-20℃，得到化合物5；
[0082]
(5)化合物5在二氯亚砜和碱的作用下与叔丁胺发生酰胺反应，碱可以为三乙胺、吡啶、dmf，溶剂可以为二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃，得到化合物6；
[0083]
(6)化合物6在ddq和bstfa的作用下发生脱氢反应，溶剂可以为甲苯或二甲苯，得到化合物7。
[0084]
当4-氮杂甾体化合物为式ⅱ时(即图1的化合物7)的具体制备方法，包括如下步骤：
[0085]
(1)将化合物1与碱溶解于混合溶剂中，缓慢滴加氧化剂的水溶液，保持温度在40-70℃进行反应，反应完毕后过滤掉盐，加适量亚硫酸氢钠水溶液淬灭过量氧化剂，减压蒸馏除去有机溶剂，降温析晶，过滤后水淋洗，鼓风干燥得化合物2；
[0086]
(2)将化合物2与胺试剂加入溶剂中，保持温度在100-140℃进行反应，反应完毕后加入适量饮用水，减压蒸馏除去有机溶剂，降温析晶，过滤后水淋洗，鼓风干燥得化合物3；
[0087]
(3)将化合物3溶于溶剂中，加入催化剂，氢气置换，保持温度在20-40℃、压力为0.2-0.8mpa进行反应，反应完毕后加入适量饮用水，减压蒸馏除去有机溶剂，降温析晶，过滤后水淋洗，鼓风干燥得化合物4；
[0088]
(4)将化合物4溶解于1,4-二氧六环中，加入适量碱的水溶液，分批次缓慢加入卤代试剂，保持温度在0-20℃进行反应，反应完毕后将往反应液中加入亚硫酸氢钠水溶液淬灭反应，盐酸调节ph至酸性，常压蒸馏回收二氧六环，过滤，鼓风干燥得化合物5；
[0089]
(5)将化合物5与碱溶解于溶剂中，滴加二氯亚砜，在0-20℃保温进行反应1.5～2.5h后，滴加叔丁胺，保持一定反应温度，反应完毕后加入氢氧化钠水溶液淬灭反应，分液，有机相加入适量水后减压蒸馏，降温析晶，过滤，鼓风干燥得化合物6；
[0090]
(6)将化合物6溶于溶剂中，加入ddq(2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌)和bstfa(双(三甲基硅基)三氟乙酰胺)，保持反应温度在100-140℃，反应完毕后加入亚硫酸氢钠水溶液淬灭反应，过滤，分液，有机相用碳酸钠水溶液与亚硫酸氢钠水溶液水洗，减压蒸馏，丙酮置换，降温析晶，过滤，鼓风干燥得化合物7。
[0091]
2、在本发明的第二个具体实施方式中，当4-氮杂甾体化合物的结构为式ⅲ时(即化合物9)，如图2所示，其合成原理如下：
[0092]
(1)-(4)由化合物1合成化合物5，方法与第一个具体实施方式相同；
[0093]
(5)化合物5在ddq和bstfa的作用下发生脱氢反应，溶剂可以为甲苯或二甲苯，得到化合物8；
[0094]
(6)化合物8在二氯亚砜和碱的作用下与3,5-二三氟甲基苯胺发生酰胺反应，碱可以为三乙胺、吡啶、dmf，溶剂可以为二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃，得到化合物9。
[0095]
当4-氮杂甾体化合物的结构为式ⅲ时(即图2的化合物9)的具体制备方法，包括如
下步骤：
[0096]
(1)-(4)由化合物1合成化合物5，方法与第一个具体实施方式相同；
[0097]
(5)将化合物5溶于溶剂中，加入ddq和bstfa，保持反应温度在100-140℃，反应完毕后加入碳酸钾水溶液提取产物后，加入冰乙酸酸析，过滤，鼓风干燥得化合物8；
[0098]
(6)将化合物8与碱溶解于溶剂中，滴加二氯亚砜，在0-20℃保温进行反应1.5～2.5h后，滴加3,5-二三氟甲基苯胺，保持一定反应温度，反应完毕后加入氢氧化钠水溶液淬灭反应，分液，有机相加入适量水后减压蒸馏，降温析晶，过滤，鼓风干燥得化合物9。
[0099]
3、在本发明的第三个具体实施方式中，提供一种药物组合物，其包含4-氮杂甾体化合物和药学上可接受的辅料。
[0100]
本发明药物组合物的剂型包括：片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂，混悬剂、溶液剂、乳剂、注射剂等。它们根据各自剂型的特点，给药途径包括口服、舌下、注射等。
[0101]
在一优选实施方案中，本发明提供的药物组合物为口服固体制剂，优选片剂。该口服固体制剂除活性成分4-氮杂甾体化合物外，还含有药用辅料。所述的药用辅料均是本领域常规的药用辅料，包括填充剂(又称稀释剂)、崩解剂、粘合剂或润湿剂、润滑剂(包括助流剂)等。药用辅料的用量可以按常规用量。
[0102]
所述的填充剂一般包括乳糖、微晶纤维素、甘露醇、预胶化淀粉、淀粉、蔗糖、糊精、山梨醇、碳酸钙、碳酸氢钙、羟丙基甲基纤维素和乙基纤维素等。它们可以单独使用也可以混合使用。
[0103]
所述的崩解剂一般包括淀粉、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮和低取代羟丙基纤维素等。它们可以单独使用也可以混合使用。
[0104]
所述的粘合剂或润湿剂一般包括聚维酮(聚乙烯吡咯烷酮)、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇、淀粉浆、水和各种浓度的乙醇溶液等。它们可以单独使用也可以混合使用。
[0105]
所述的润滑剂一般包括硬脂酸锌、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂富马酸钠、滑石粉、脂肪酸蔗糖酯、微粉硅胶、硬脂酸和固体聚乙二醇等。它们可以单独使用也可以混合使用。
[0106]
如果需要的话，还可以向上述组合物中添加其他辅料，如甜味剂(如阿司帕坦、甜菊素等)、着色剂(如黄色氧化铁、红色氧化铁等)、稳定剂(如柠檬酸、乳酸、苹果酸等)、ph调节剂(如碳酸氢钠、富马酸、柠檬酸等)。
[0107]
如果需要的话，上述组合物中还可以包含其他适宜的活性成分。
[0108]
上述口服固体制剂的制备可以按照本技术领域中制备口服固体制剂的常规方法进行，如：片剂可以采用湿法制粒压片、干法制粒压片、流化床制粒压片、粉末混合直接压片等方式制备。当所述口服固体制剂为片剂时，可根据需要对其进一步包衣，制成薄膜衣片、包糖衣片。其中包衣材料包括纤维素类、丙烯酸树脂类和糖类，如羟丙基甲基纤维素和蔗糖等，其中还可添加增塑剂、抗粘剂和遮光剂等。
[0109]
上述组合物的给药量根据患者病情性质和严重性、给药途径和患者年龄、体重等进行调整。
[0110]
4、在本发明的第四个具体实施方式中，提供4-氮杂甾体化合物在制备治疗癌症的药物中的用途，具体为前列腺癌或结肠癌。
[0111]
任何疾病或病症的“治疗”是指改善所述疾病或病症(即，阻止/抑制所述疾病或降低其临床症状的至少一种的表现、程度或严重度)。在另一实施方式中，“治疗”是指改善至少一个物理参数，所述物理参数可不为受试者可辨别的。在又一实施方式中，“治疗”是指物理地(例如，可辨别的症状的稳定化)、生理学地(例如，物理参数的稳定化)、或以两者调节疾病或病症。在另外的实施方式中，“治疗”涉及减缓疾病的发展。
[0112]
实施例1：
[0113]
一种4-氮杂甾体化合物，如图3所示，其制备方法包括如下步骤：
[0114]
将30g化合物1溶解于600ml叔丁醇和60ml水中，升温至80℃，保温80～90℃滴加高锰酸钾与高碘酸钠的混合水溶液(0.6g高锰酸钾与105g高碘酸钠溶于600ml水)，滴加完毕后保温80～90℃反应2小时，反应完毕后降至室温，过滤。滤液中加入亚硫酸氢钠水溶液(60g亚硫酸氢钠溶于120ml水)，减压蒸馏除尽叔丁醇，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物2，收率96.7％。
[0115]
将30g化合物2与28g醋酸铵加入60ml甲苯中，升温至100～110℃反应8小时，反应完毕后，加入300ml水，减压蒸馏至除尽甲苯，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物3，收率97.2％。
[0116]
将25g化合物3溶解于500ml冰醋酸中，加入2.5g钯碳，氢气置换三次，加氢气至p
h2
＝0.4～0.5mpa；在20～30℃温度下保温反应16小时，反应完毕后，加入500ml水，减压蒸馏至除尽冰乙酸，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物4，收率96.9％。
[0117]
将22g化合物4溶解于250ml 1，4-二氧六环中，加入100ml 40％氢氧化钠水溶液，分三次缓慢加入45g二溴海因，室温搅拌2小时后，加入20ml 15％亚硫酸氢钠淬灭反应，浓盐酸调节ph＝2，常压蒸馏回收1，4-二氧六环，加入500ml水，搅拌，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物5，收率98.8％。
[0118]
将20g化合物5溶解于200ml氯仿中，降温至0℃，控温0～10℃滴加16g二氯亚砜，滴加完毕后保温0～10℃温度下保温反应2小时，控温0～10℃滴加40g叔丁胺，加完毕后保温0～10℃温度下保温反应2小时，反应完毕后，加入200ml水淬灭反应，分液，有机相中加入200ml水，减压蒸馏至除尽二氯甲烷，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物6，收率98.2％。
[0119]
将20g化合物6溶解于400ml甲苯中，加入16gddq，70gbstfa，升温至100～110℃反应5小时，降至室温，加入亚硫酸氢钠水溶液(30g亚硫酸氢钠溶于400ml水)，搅拌1小时后，过滤，滤液分液，有机相分别用15％碳酸钠水洗一次，15％亚硫酸氢钠水洗一次，减压蒸馏近干，丙酮夹带一次至白色固体析出，加入少量丙酮搅拌，过滤，少量丙酮淋洗，50℃鼓风干燥得化合物7(式ⅱ)，收率89.8％。
[0120]
化合物7经检测，1h-nmr(500mhz，cdcl3)δ(ppm)：0.57(s，3h)，0.72(s，3h)，1.01～1.08(m，3h)，1.27～1.52(m，5h)，1.32(s，9h)，1.61～1.81(m，7h)，2.14(dd，1h)，3.35～3.45(m，lh)，5.21(s，lh)，5.56(s，1h)，5.82(d，1h)，6.80(d，lh)。ms-ei m/z：373[m
+
h]
+
。
[0121]
实施例2：
[0122]
一种4-氮杂甾体化合物，如图4所示，其制备方法包括如下步骤：
[0123]
将30g化合物1溶解于600ml叔丁醇和60ml水中，升温至80℃，保温80～90℃滴加高锰酸钾与高碘酸钠的混合水溶液(0.6g高锰酸钾与110g高碘酸钠溶于600ml水)，滴加完毕
后保温80～90℃反应2小时，反应完毕后降至室温，过滤。滤液中加入亚硫酸氢钠水溶液(60g亚硫酸氢钠溶于120ml水)，减压蒸馏除尽叔丁醇，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物2，收率97.2％。
[0124]
将30g化合物2与30g醋酸铵加入70ml甲苯中，升温至100～110℃反应8小时，反应完毕后，加入300ml水，减压蒸馏至除尽甲苯，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物3，收率97.2％。
[0125]
将25g化合物3溶解于600ml冰醋酸中，加入2.5g钯碳，氢气置换三次，加氢气至p
h2
＝0.4～0.5mpa；在20～30℃温度下保温反应18小时，反应完毕后，加入500ml水，减压蒸馏至除尽冰乙酸，降温，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物4，收率96.9％。
[0126]
将22g化合物4溶解于240ml 1，4-二氧六环中，加入100ml 40％氢氧化钠水溶液，分三次缓慢加入40g二氯海因，室温搅拌2小时后，加入20ml 15％亚硫酸氢钠淬灭反应，浓盐酸调节ph＝2，常压蒸馏回收1，4-二氧六环，加入500ml水，搅拌，过滤，滤饼用水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物5，收率98.8％。
[0127]
将20g化合物5溶解于800ml甲苯中，加入16gddq，70gbstfa，升温至100～110℃反应6小时，降至室温，加入150ml 10％碳酸钾水溶液，搅拌1小时，分液，水相中滴加80g冰乙酸，大量白色固体析出，过滤，水淋洗至中性，50℃鼓风干燥得化合物8，收率90.2％。
[0128]
将15g化合物8溶解于300ml氯仿中，降温至0℃，控温0～10℃滴加16g二氯亚砜，滴加完毕后保温0～10℃温度下保温反应2小时，控温0～10℃滴加30g 3,5-二三氟甲基苯胺，加完毕后保温0～10℃温度下保温反应2小时，反应完毕后，加入200ml水淬灭反应，分液，有机相减压蒸馏近干，乙酸乙酯置换，后加入少量乙酸乙酯搅拌2小时，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯淋洗，50℃鼓风干燥得化合物9(式ⅲ)，收率98.2％。
[0129]
化合物9经检测，1h-nmr(500mhz，cdcl3)δ(ppm)：0.62(s，3h)，0.96(s，3h)，1.01～1.18(m，2h)，1.32～1.97(m，8h)，2.13～2.30(m，2h)，2.33～2.45(m，6h)，3.32～3.42(m，lh)，5.76(s，1h)，7.45(d，lh)，7.50(s，1h)，7.74(d，1h)，8.78(s，lh)。ms-ei m/z：529[m
+
h]
+
。
[0130]
实施例3：
[0131]
一种实施例1或实施例2的4-氮杂甾体化合物在制备治疗前列腺癌或结肠癌的药物中的用途。为了验证4-氮杂甾体化合物对前列腺癌、结肠癌的抑制作用，证明4-氮杂甾体化合物在制备治疗前列腺癌或结肠癌的药物中的应用效果，本发明提供以下药理实验。
[0132]
1.试验方法
[0133]
1.1实验分组及样品配制
[0134]
各实施例化合物样品均采用溶媒二甲亚砜(dmso)配制成100mm的母液，用各细胞培养对应的完全培养基稀释成工作液，浓度为100、30、10、3、1、0.3μm。设置溶媒对照组、不同浓度的阳性对照组、不同浓度的样品处理组。
[0135]
1.2细胞培养
[0136]
人前列腺癌细胞(du 145)培养基为含10％fbs(胎牛血清)的mem培养基；人结肠癌细胞(hct-116)培养基为含10％fbs的mccoy’s 5a。生长状态良好时，每2天传代一次，传代比例为1：3。在净化工作台中弃去培养基，用1
×
pbs清洗2次，然后加入600μl的0.25％胰蛋白酶消化，约1～3min后，待细胞脱落，加入3ml的含10％fbs的各细胞对应的培养基以终止胰酶的消化作用，吹打成单细胞悬液，转入ep管中，以1000rpm离心5min。弃去培养基，加入
新鲜的培养基重悬，按一定比例(细胞密度约为105/ml)接种到新的培养瓶中，放置于37℃、5％co2培养箱中培养。
[0137]
1.3细胞接种
[0138]
取生长状态良好的细胞，常规消化收集细胞，调节du 145细胞密度至2
×
104个/ml，调节hct-116细胞至2
×
104个/ml，各细胞悬液均以100μl/孔的密度分别接种至96孔培养板中，十字交叉振摇各10次，使细胞均匀铺于孔底，将培养板放置于co2培养箱中培养24h。
[0139]
1.4细胞处理
[0140]
取步骤1.1中配制的实施例化合物样品工作液，分别浓度以100μl/孔加入至对应孔内，使各孔终体积为200μl(100μl细胞培养基，100μl样品工作液)，终浓度分别为50、15、5、1.5、0.5、0.15μm，同时设置溶媒对照组，浓度分别为50、15、5、1.5、0.5、0.15μm的阳性对照组，各组复孔数均为3个。在37℃、5％co2条件下培养72h。
[0141]
1.5细胞增殖od值检测
[0142]
细胞处理72h后，在每孔加入噻唑兰(mtt)20μl，在37℃、5％co2条件下继续培养4h，小心吸弃各孔内液体，在孔内加入150μl/孔的dmso，震荡10min。
[0143]
在酶标仪上设定a1-h1孔(8孔)的od值均值为调零值，在492nm处检测各孔od值。
[0144]
1.6结果计算
[0145]
以溶媒对照组od值设定为100％细胞活力，其余各组od值与溶媒对照组od值的比值为相对细胞活力。以细胞增殖率评价样品对du 145或hct-116细胞的活性，若出现有增殖抑制率＞100％时，判定为系统误差，按100％计。
[0146]
抑制率计算公式为：抑制率(％)＝(1-od
样品
/od
溶媒
)
×
100％
[0147]
使用spss软件计算半数抑制率(ic
50
)。
[0148]
2.实验结果
[0149]
表1部分实施例和对比例的化合物对各癌细胞的ic
50
值
[0150][0151]
注：du145为人前列腺癌细胞，hct-116为人结肠癌细胞。
[0152]
综上所述，化合物7和化合物9针对人前列腺癌细胞针对人结肠癌细胞ic50《10μm，有较强的抑制作用，而非那雄胺和度他雄胺的抑制作用不明显。
[0153]
以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
r发生酰胺反应，得到具有式i结构的化合物；所述式ⅳ、式
ⅴ
的结构式如下：其中，r选自c
1-5
烷基、c
1-5
卤代烷基、苯基、c
1-3
烷基取代的苯基或c
1-3
卤代烷基取代的苯基；r1、r2、r3相同或不同，各自独立地选自-oh、＝o、卤素、氨基、c
1-5
烷基、c
1-5
卤代烷基、c
1-5
烷氧基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基或c
2-5
酯基；m、n和i各自独立地选自0、1或2。7.根据权利要求6所述的4-氮杂甾体化合物的制备方法，其特征在于，所述式
ⅴ
化合物为化合物5，所述制备方法包括如下步骤：由化合物5在二氯亚砜和碱的存在下与叔丁胺发生酰胺反应，得到化合物6，然后由化合物6在ddq和bstfa的存在下发生脱氢反应，得到式ⅱ化合物；或者由化合物5在ddq和bstfa的存在下发生脱氢反应得到化合物8，然后由化合物8在二氯亚砜和碱的存在下与3,5-二三氟甲基苯胺发生酰胺反应，得到式ⅲ化合物；所述化合物5、化合物6和化合物8的结构式如下：8.一种如权利要求1-5中任一项所述4-氮杂甾体化合物或由权利要求6-7中任一项所述制备方法制备得到的4-氮杂甾体化合物在制备抑制癌细胞的药物中的用途。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌细胞包括前列腺癌细胞或结肠癌细胞。10.一种药物组合物，其特征在于，其包含如权利要求1-5中任一项所述4-氮杂甾体化合物或由权利要求6-7中任一项所述制备方法制备得到的4-氮杂甾体化合物和药学上可接受的辅料。

技术总结
本发明公开了一种4-氮杂甾体化合物，其C-10位甲基为α构型，除了具有非那雄胺/度他雄胺的药物活性外，对前列腺癌、结肠癌细胞也有较强的抑制作用。该4-氮杂甾体化合物的制备方法，操作简单，效率高，成本低廉，环境友好，制备得到的产品纯度高，无毒副物质生成，收率高，适合大规模产业化生产。本发明还公开了该4-氮杂甾体化合物在制备抑制癌细胞的药物中的用途，以及一种由4-氮杂甾体化合物组成的药物组合物，经药理实验验证，对前列腺癌、结肠癌细胞具有较强的抑制作用，在制备抑制癌细胞的药物中具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。


技术研发人员：戴枫林 唐杰 罗桂芳 刘喜荣
受保护的技术使用者：湖南醇健制药科技有限公司
技术研发日：2022.08.12
技术公布日：2023/8/24