一种黄酮苷及其在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

(((2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)-4h-香豆素-4-酮。
10.在本发明的第二方面，本发明提供了一种药物组合物或药物制剂，其包含式i所示的黄酮苷化合物；或者进一步地，还包含至少一种药学上可接受的辅料。
11.在本发明的一些实施方式中，所述药物组合物或药物制剂以本发明式i所示的黄酮苷化合物为活性成分。
12.在本发明的一些实施方式中，所述药物制剂可经胃肠道给药或非经胃肠道给药。
13.在一些实施方式中，所述经胃肠道给药的剂型包括散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂或混悬剂；所述非经胃肠道给药剂型包括注射给药剂型、粘膜给药剂型和腔道给药剂型。
14.在一些实施方式中，所述注射给药剂型包括静脉注射、肌内注射、皮下注射、皮内注射和腔内注射；所述粘膜给药剂型包括滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片和贴膜剂；所述腔道给药剂型包括栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂和滴丸剂。
15.本发明的一些实施方式中包括生产所述组合物或药物制剂的方法，所述方法包括将活性物质(至少包含本发明的式i所示化合物)与合适的辅料混合，通过任意合适的方法制备，通常通过以所需比例均匀混合活性物质与液体和/或微细粉碎的固体辅料制备，然后如果需要，使所得混合物形成所需的形状。所述辅料可起到填充作用、粘合作用、崩解作用和润滑等作用，有时，还起到着色作用、矫味作用以及美观等作用，常用的辅料比如淀粉类(比如玉米淀粉、马铃薯淀粉等)、糖类(比如葡萄糖、蔗糖等)、纤维素类(比如微晶纤维素、羧甲基纤维素等)和无机盐类(比如无机钙盐等)等，更多的辅料可如《药用辅料手册》(handbook of pharmaceutical excipients)第八版(paul j sheskey,walter g cook,colin g cable)中所记载的。
16.在本发明的第三方面，本发明提供了式i所示黄酮苷化合物或包含该化合物的组合物或药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
17.在本发明的一些实施方式中，所述肿瘤包括但不限于非小细胞肺癌、乳腺癌和肝癌。
18.在本发明的第四方面，本发明提供了一种方法，其包括向受试者施用有效剂量的式i所示的黄酮苷化合物或包含该化合物的组合物或药物制剂治疗癌症。
19.在本发明的一些实施方式中，所述癌症包括但不限于非小细胞肺癌、乳腺癌和肝癌。
20.所述受试者是指已经是作为治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。
21.所述有效剂量是指包括本发明式i所示的黄酮苷化合物或包含该化合物在内的活性化合物或组合物或药物制剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其他医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。
22.在本发明的一些实施方式中，所述方法可以联合其他抗肿瘤药物使用，或者联合其他抗肿瘤疗法使用。
23.相较于现有技术，本发明的优势包括：
24.本发明提供了一种黄酮苷化合物，其结构如式i所示。该化合物经测试具备抗肿瘤活性，对于非小细胞肺癌、乳腺癌和肝癌的癌细胞表现出良好的抑制作用，且其作用明显优于阳性对照药5-氟尿嘧啶，有制备成抗肿瘤药物的潜力。
附图说明
25.构成本技术的一部分的说明书附图用来提供对本技术的进一步理解，本技术的示意性实施例及其说明用于解释本技术，并不构成对本技术的不当限定。以下，结合附图来详细说明本技术的实施方案，其中：
26.图1为本发明制备例中式ⅰ所示黄酮苷的1h-nmr。
27.图2为本发明实施例中式ⅰ所示黄酮苷的
13
c-nmr。
具体实施方式
28.下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
29.除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本技术所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本技术所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本技术方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
30.制备例黄酮苷的制备
31.黄酮苷结构如式i，其制备路线如下：
[0032][0033]
500ml圆底烧瓶中加入200ml无水甲醇，冰浴下缓慢滴加socl2(7.25ml,100mmol)，滴加完毕撤去冰浴，室温继续搅拌1h。然后加入灯盏花乙素(化合物1，4.62g，10mmol)，室温搅拌9h后，tlc(v
乙酸乙酯
:v
异丙醇
:v
水
＝4:2:1)检测反应完全。直接过滤得灯盏花乙素甲酯(化合物2，4.67g，98％)；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.85(s,1h),10.39(s,1h),7.93(d,j＝9.0hz,2h),7.00(s,1h),6.94(d,j＝9.0hz,2h),6.81(s,1h),5.28(d,j＝7.0hz,1h),4.20(d,j＝6.0hz,1h),3.70-3.90(m,3h),3.68(s,3h)；
13
c-nmr(125mhz,dmso-d6):δ182.8,169.7,164.5,161.6,151.3,149.4,147.3,130.8,128.9,121.7,116.4,106.3,102.9,100.2,93.9,75.7,75.4,73.1,71.8,52.4(-och3)。
[0034]
50ml圆底烧瓶中将化合物2(1.19g,2.50mmol)溶于25ml dmf中,室温搅拌下依次加入dipea(2.20ml,12.50mmol)、napbr(1.39g,6.25mmol)。室温搅拌过夜后，tlc(v
二氯甲烷
:v
甲醇
＝20:1)检测原料消失。将反应体系倒入100ml冰水中，乙酸乙酯(40ml
×
3)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，干法上样柱层析得化合物3(1.65g,87％)；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.01(s,1h),8.04(t,j＝8.7hz,4h),7.98
–
7.88(m,6h),7.75(d,j＝8.4hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,1h),7.52(dd,j＝9.1,6.7hz,4h),7.26(d,j＝8.7hz,2h),7.15(s,1h),6.94(s,1h),5.75(d,j＝5.2hz,1h),5.56(d,j＝5.3hz,1h),5.47(d,j＝7.5hz,1h),5.45
–
5.37(m,3h),5.28(d,j＝11.2hz,1h),5.14(d,j＝11.2hz,1h),4.26(d,j＝9.5hz,1h),3.66(s,3h),3.46(ddd,j＝14.0,10.6,5.7hz,3h)；
13
c-nmr(125mhz,dmso-d6):δ182.37,169.24,163.86,161.56,156.12,152.87,152.27,135.21,134.09,132.77,132.72,132.65,132.62,131.32,128.43,128.19,127.90,127.83,127.68,127.64,127.56,126.85,126.55,126.41,126.27,126.12,126.06,125.74,123.00,115.52,105.94,103.51,99.33,93.88,75.77,75.34,74.25,72.98,71.37,69.73,52.02。
[0035]
将化合物3(0.80g,1.06mmol)悬浮于甲醇30ml中，室温剧烈搅拌下少量多次加入硼氢化钠(0.80g,21.20mmol)。3h后tlc(v
二氯甲烷
∶v
甲醇
＝15：1)检测显示反应完全。向反应体系中加入15ml10％乙酸溶液，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，有机相减压浓缩得粗品，将所得粗品悬浮于10ml乙酸乙酯,加热回流30min后，自然冷却，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空干燥得淡黄色固体式ⅰ黄酮苷(0.65g,85％)。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.00(s,1h),8.17
–
7.85(m,10h),7.76(d,j＝7.3hz,1h),7.60(d,j＝7.7hz,1h),7.52(s,4h),7.25(d,j＝7.5hz,2h),7.09(s,1h),6.95(s,1h),5.60(s,1h),5.40(s,2h),5.22(dt,j＝36.7,14.3hz,5h),4.68(s,1h),3.74(s,1h)；
13
c-nmr(125mhz,dmso-d6):δ182.42,163.88,161.60,156.70,152.71,152.35,135.34,134.15,132.82,132.78,132.70,132.67,131.39,128.51,128.25,127.97,127.89,127.72,127.61,126.94,126.65,126.59,126.48,126.34,126.18,126.11,125.78,123.04,115.58,105.82,103.50,100.17,94.40,77.34,76.88,74.30,73.42,69.76,69.65,60.71,54.95。式i所示黄酮苷的氢谱和碳谱分别如图1和图2中所示。
[0036]
实验例黄酮苷抗肿瘤活性测试
[0037]
试验细胞：实验使用3种不同类型的人源肿瘤细胞，包括人非小细胞肺癌细胞a549、人乳腺癌细胞mcf-7以及肝癌细胞hepg 2。
[0038]
试验方法：
[0039]
1、ic
50
测定
[0040]
1)药物配制：用dmso将式i化合物(制备例)溶至10mm浓度后，10倍梯度稀释为1mm、100μm、10μm、1μm、0.1μm。储备液浓度及工作浓度如下表所示：
[0041]
储备液浓度工作浓度10mm100μm1mm10μm100μm1μm10μm100nm1μm10nm0.1μm1nm
[0042]
2)细胞培养及铺板：三种均用含10％fbs的dmem培养基培养，待其融合度达到75-85％时，进行消化计数，均匀铺至96孔板中。初始细胞数如下表所示：
[0043]
细胞每孔细胞数a5492000mcf-73000hepg 22000
[0044]
3)加药：细胞铺板24小时后进行加药，每板均设dmso溶剂对照孔。
[0045]
4)mtt检测：加药48小时后，加入mtt，孵育4小时后，弃上清，加100μl dmso，摇床摇10min后上机检测od
570
与od
720
数值，细胞存活率计算公式如下：
[0046]
细胞存活率＝(加药组
od570-加药组
od720
)/(dmso组
od570-dmso组
od720
)
×
100％
[0047]
通过graphpad软件计算化合物ic
50
。
[0048]
2、试验结果:
[0049]
ic
50
检测结果(单位：μm)
[0050][0051][0052]
通过上表数据分析可以看出式ⅰ所示的黄酮苷化合物对人非小细胞肺癌细胞a549、人乳腺癌细胞mcf-7以及肝癌细胞hepg 2均显示出良好的抑制活性，其肿瘤抑制活性明显优于阳性对照药5-氟尿嘧啶，显示此黄酮苷具有较好的抗肿瘤应用前景。
[0053]
以上所述仅为本技术的优选实施例而已，并不用于限制本技术，尽管参照前述实施例对本技术进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。

技术特征：
1.一种化合物，其结构如式i所示：2.一种药物组合物，其包含权利要求1中所述的化合物。3.一种药物制剂，其包含权利要求1中所述的化合物和至少一种药学上可接受的辅料。4.式i所示化合物或包含该化合物的组合物或药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用；5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为非小细胞肺癌。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺癌。7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。

技术总结
本申请提供一种黄酮苷及其在制备抗肿瘤药物中的应用。所述黄酮苷的结构如式I所示：所述黄酮苷化合物具备抗肿瘤活性，对非小细胞肺癌、乳腺癌和肝癌均具备良好的抑制作用，且明显优于阳性对照药5-氟尿嘧啶，有制备成抗肿瘤药物的潜力。有制备成抗肿瘤药物的潜力。有制备成抗肿瘤药物的潜力。


技术研发人员：颜世强 张伟 吴丽莎 何淑旺 王文笙 程中伟 胡醒
受保护的技术使用者：北京达因高科儿童药物研究院有限公司
技术研发日：2023.05.25
技术公布日：2023/8/24