一种亮蓝G中间体及其同分异构体的分离检测方法与流程

一种亮蓝g中间体及其同分异构体的分离检测方法
技术领域
1.本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种亮蓝g中间体及其同分异构体的分离检测方法。


背景技术：

2.目前，市场上采用的染色剂有吲哚菁绿、印度墨汁、亚甲蓝、spot、纳米碳、自体血等。在手术前，使用染色剂开始逐渐标记、定位适应症的病体组织。待染色定位完全后，将染色的病体组织通过手术进行准确切除，从而达到更好的准确率。
3.目前，市场上作为白内障手术染色剂的亮蓝g，其在合成过程中的中间体存在大量同分异构体，查询各国药典及文献，均未见到其同分异构体的检测分离方法及报道。因此，需要开发了一种能有效检测亮蓝g中间体化合物及其同分异构体分离的方法。
4.

技术实现要素：

5.针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是为亮蓝g中间体及其同分异构体的分离检测提供一种色谱条件稳定、可重现性好的普适性的检测方法。技术方案如下：
6.一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，所述方法为高效液相色谱法，以五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为磷酸盐缓冲液-酸性添加剂为流动相a，甲醇为流动相b，检测波长为256nm。
7.进一步地，所述色谱柱为capcell pak pfp 4.6
×
250mm 5μm；
8.进一步地，流动相a中缓冲液中酸性添加剂为三氟乙酸、甲酸；
9.进一步地，流动相a中缓冲液中酸性添加剂为0.0％～0.2％；
10.进一步地，流动相a中的缓冲盐为磷酸二氢钠缓溶液(0.01～0.05mol/l)或醋酸铵溶液(0.01～0.04mol/l)；
11.进一步地，流动相a中的缓冲盐用氢氧化钠、磷酸或醋酸调节ph至3.0～6.8；
12.进一步地，流动相b的洗脱比例为0min，20％～40％；5min，20％～40％；30min，50％～60％；45min，70％～80％进行变化；
13.进一步地，还包括：
14.检测条件为：流速1.0ml/min；柱温30℃。
15.本发明提供的方法，具有如下优点：
16.本发明提供的方法能够有效分离亮蓝g中间体及其同分异构体，准确测定测定中间体的含量，解决亮蓝g中间体及其同分异构体的分离分析问题，确保亮蓝g中间体的纯度，从而为亮蓝g的质量可控，提供了质量保证。
附图说明
17.图1为实施例1中的hplc色谱图；
18.图2为实施例2中的hplc色谱图；
19.图3为实施例3中的hplc色谱图。
具体实施方式
20.以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
21.实施例1
22.一种亮蓝g中间体与其同分异构体的检测分离方法
23.仪器与条件
24.安捷伦高效液相色谱仪：agilent 1260ii，vwd检测器
25.色谱柱：capcell pak pfp 4.6
×
250mm 5μm
26.流动相a：磷酸盐缓冲液(0.05mol/l磷酸二氢钠溶液，加三氟乙酸2ml，用氢氧化钠调节ph至3.0)；
27.流动相b：甲醇；
28.流速：1.0ml/min
29.柱温：30℃；
30.检测波长为256nm；
31.进样体积：20μl
32.按表1的梯度进行洗脱：
33.表1
[0034][0035]
实验步骤：
[0036]
取亮蓝g中间体及其同分异构体，分别用甲醇溶解，配置成含亮蓝g中间体0.5mg和同分异构体0.05mg的溶液，摇匀，作为样品溶液。按上述色谱条件进行液相分析，记录色谱图。
[0037]
结果见表2和图1。图1中im1的保留时间为18.933，im1-z1的保留时间为21.952，亮蓝g中间体与其同分异构体的分离度为5.28，大于1.5，分离度符合要求。
[0038]
表2
[0039][0040]
实施例2：
[0041]
一种亮蓝g中间体与其同分异构体的检测分离方法
[0042]
仪器与条件
[0043]
安捷伦高效液相色谱仪：agilent 1260ii，vwd检测器
[0044]
色谱柱：capcell pak pfp 4.6
×
250mm 5μm
[0045]
流动相a：磷酸盐缓冲液(0.02mol/l磷酸二氢钠溶液，加三氟乙酸2ml，用氢氧化钠调节ph至4.5)；
[0046]
流动相b：甲醇；
[0047]
流速：1.0ml/min
[0048]
柱温：30℃；
[0049]
检测波长为256nm；
[0050]
进样体积：20μl
[0051]
按表3的梯度进行洗脱。
[0052]
表3
[0053][0054]
实验步骤：
[0055]
取亮蓝g中间体及其同分异构体，分别用甲醇溶解，配置成含亮蓝g中间体10μg、同分异构体10μg和n-乙基-n-苄基间甲苯胺10μmg的混合溶液，摇匀，作为样品溶液。按上述色谱条件进行液相分析，记录色谱图。
[0056]
结果见表4和图2。图2中im1的保留时间为30.210，im1-z1的保留时间为31.939，亮蓝g中间体与其同分异构体的分离度为4.94大于1.5，分离度符合要求。
[0057]
表4
[0058][0059]
实施例3：
[0060]
一种亮蓝g中间体与其同分异构体的检测分离方法
[0061]
仪器与条件
[0062]
安捷伦高效液相色谱仪：agilent 1260ii，vwd检测器
[0063]
色谱柱：capcell pak pfp 4.6
×
250mm 5μm
[0064]
流动相a：磷酸盐缓冲液(0.01mol/l磷酸二氢钠溶液，加三氟乙酸1ml，用氢氧化钠调节ph至3.5)；
[0065]
流动相b：甲醇；
[0066]
流速：1.0ml/min
[0067]
柱温：30℃；
[0068]
检测波长为256nm；
[0069]
进样体积：20μl
[0070]
按表5的梯度进行洗脱：
[0071]
表5
[0072][0073]
实验步骤：
[0074]
取亮蓝g中间体及其同分异构体，分别用甲醇溶解，配置成含亮蓝g中间体0.5mg和同分异构体0.05mg的溶液，摇匀，作为样品溶液。按上述色谱条件进行液相分析，记录色谱图。
[0075]
结果见表6和图3。图3中im1的保留时间为22.816，im1-z1的保留时间为26.167，亮蓝g中间体与其同分异构体的分离度为1.53，大于1.5，分离度符合要求。
[0076]
表6
[0077][0078]
显然，上述实施例仅仅是为了清楚的说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通基数人员来说，在上述说明的基础上还可以做出掐不同形式的变化或变动。

技术特征：
1.一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法，以五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为磷酸盐缓冲液-酸性添加剂为流动相a，甲醇为流动相b，检测波长为256nm。2.根据权利要求1所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，所述色谱柱为capcell pak pfp 4.6
×
250mm 5μm。3.根据权利要求1所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，流动相a中缓冲液中酸性添加剂为三氟乙酸、甲酸。4.根据权利要求3所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，流动相a中缓冲液中酸性添加剂为0.0％～0.2％。5.根据权利要求1所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠缓冲液，其浓度为0.01～0.05mol/l。6.根据权利要求1所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，流动相a中的缓冲液用氢氧化钠、磷酸或醋酸调节ph至3.0～6.8。7.根据权利要求1所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，流动相b的洗脱比例为0min，20％～40％；5min，20％～40％；30min，50％～60％；45min，70％～80％进行变化。8.根据权利要求1所述的一种亮蓝g中间体及其同分异构体的检测分离方法，其特征在于，还包括：检测条件为：流速1.0ml/min；柱温30℃。

技术总结
本申请涉及一种亮蓝G中间体及其同分异构体的分离检测方法，属于药物合成技术领域。所述方法为高效液相色谱法，以五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为磷酸盐缓冲液-酸性添加剂为流动相A，甲醇为流动相B，检测波长为256nm。本发明提供的方法，准确测定测定中间体的含量，解决亮蓝G中间体及其同分异构体的分离分析问题，确保亮蓝G中间体的纯度，从而为亮蓝G的质量可控，提供了质量保证。提供了质量保证。提供了质量保证。


技术研发人员：薛海鹏 李黎 陶述勤
受保护的技术使用者：湖南先施制药有限公司
技术研发日：2023.05.16
技术公布日：2023/9/14