一种双核微胶囊的制备方法

1.本发明涉及食品生物技术领域，具体是一种双核微胶囊的制备方法。
2.背景介绍
3.微胶囊是一种以天然材料，或者合成聚合物作为壁材，将液体、固体和气态物质作为芯材，通过物理、化学等方法包封成微粒子的技术。微胶囊形状多样，它可以是圆润球形、葡萄串状或不规则形状一般微胶囊直径范围在1-1000μm左右，其形态和大小等性质变化随壁材、芯材和包埋方法不同而改变。微胶囊突出点是，使包埋物质在特定条件下受到控制以不同的速率释放同时发挥其良好的生理特性。
4.益生菌微胶囊的本质就是使益生菌能保持一定活菌数量，并定植于特定部位，在人体中发挥益生特性。但目前，部分研究者仅仅是对单核微胶囊的制备，以及体外模拟胃肠液的耐受性的探索。然而对于互不干扰的益生菌定点靶向释放作用的双核微胶囊的制备及其在胃肠道的存活释放研究较少。此外益生菌活菌在消化道内会受到胃酸及胆盐的影响，活菌数降低，影响到达结肠的活菌发挥生物活性。然而益生菌类产品在运输、储存过程中活菌率下降严重，需要一个合适的方法来保护活菌。既能将两株需要不同培养环境的菌包埋在一起，达到互不干扰，又能通过不同壁材实现层层释放，靶向递送。
5.公开文献也报道了一些双核微胶囊的壁材及制备方法，例如：一种双核微胶囊及其制备方法与应用；申请号为201410028452.0，申请人为华南理工大学公开了一种双核微胶囊及其制备方法与应用：制备时，将三聚氰胺和甲醛溶液搅拌混合，调节体系ph值为8～9，将三聚氰胺甲醛混合溶液于65～70℃水浴锅中加热并搅拌，加入与蒸馏水，反应得到水溶性三聚氰胺-甲醛预聚体；然后将所述三聚氰胺-甲醛预聚体与乳化剂混合搅拌直至全部溶解，调节ph值，加入第一芯材，反应得到粒径为0.1～300μm的三聚氰胺-甲醛树脂微胶囊与第二芯材加入壳聚糖溶液中，用注射泵形成液滴，收集在cacl2溶液中，固化0.5h～3h；得到外形为球状，粒径为0.1～1000μm的双核微胶囊。本发明双核微胶囊能大幅降低活性芯材的释放速率，芯材之间互相影响小。
6.目前还未见其他有关双核微胶囊的相关报道。


技术实现要素：

7.本发明的目的是提供一种双核微胶囊制备方法，利用两次注射泵挤压制备，保证芯材互不干扰，双核能够定点释放，层层靶向递送。壁材巯基党参多糖与肠黏液中及细菌表面的半胱氨酸结合形成稳固的二硫键的特性，将其作为连接益生菌和肠黏液的中间桥梁，进而增强益生菌的肠道黏附性，促进益生菌的肠道黏附定植和增殖。此外，为了避免胃肠道极端环境对益生菌的威胁，增强益生菌的结肠靶向黏附定植性。本发明的双核微胶囊可直接作为饲料添加剂应用于动物养殖中。
8.本发明通过以下技术方案实现：一种双核微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
9.(1)巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液的制备：巯基化党参多糖与海藻酸钠溶液混合均匀，在加热条件下搅拌均匀；
10.(2)微胶囊的制备：将巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液与第一芯材混合均匀，形成具有粘度的悬浮液，通过单通道注射泵将该悬浮液挤成小液滴，滴落到cacl2中，固化得到第一微胶囊，将黄原胶或果胶与第二芯材混合均匀，通过单通道注射泵将该悬浮液挤成小液滴，滴落到cacl2中，固化得到第二微胶囊；
11.(3)双核微胶囊的制备过程：将第一微胶囊、第二微胶囊与2％～3％的海藻酸钠分别注入同轴双通道注射泵中形成液滴，再次滴入到cacl2溶液中，固化；用无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥得到外形为球状的双核微胶囊。
12.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(1)中，巯基化党参多糖的制备方法包括如下步骤：提取党参多糖，分离纯化，将党参多糖溶于水中，加入碱液，搅拌，再加入一氯乙酸进行反应，反应结束后调节ph至中性，将透析得到的产物真空干燥处理得到羧甲基化党参多糖，将羧甲基化党参多糖溶于蒸馏水中，加入edc，搅拌，在氮气保护下加入n-乙酰-l-半胱氨酸，透析后得到巯基化党参多糖。
13.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(2)中，所述的第一芯材和第二芯材为：芽孢菌或酵母菌。
14.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(2)中，所述芽孢菌为凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌；所述酵母菌为布拉迪酵母菌或酿酒酵母菌。
15.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(2)中，巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液与第一芯材的体积比为1:1～1:1.5；黄原胶或果胶与第二芯材的体积比为1:1～1:1.5。
16.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(2)中，第一微胶囊的粒径为0.1～0.5mm，第二微胶囊的粒径为0.1～0.5mm。
17.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(2)所述的单通道注射泵的注射速率为0.1ml/min～1.7ml/min。
18.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(3)中，双核微胶囊的粒径为1～3mm。
19.上述的一种双核微胶囊的制备方法，步骤(3)所述的进行冷冻干燥，预冻初始温度为-20～-40℃，预冻时间为2～3h，放入-80℃超低温冷冻，时间为20～24h。
20.一种双核微胶囊，由上述任一项所述制备方法制得。
21.本发明的有益效果：
22.1.本发明以巯基化党参多糖作为一种益生元，添加到益生菌中增强益生菌的肠道黏附性，促进益生菌的肠道黏附定植和增殖。党参多糖是党参的主要活性成分具有多种功效，广泛应用于食品和制药行业。具有抗氧化、提高免疫力、抗炎作用及调节肠道菌群，促进益生菌的增殖等作用。在微胶囊壁材中添加除了具有黏附定植和增殖。还可以发挥抗炎、调节肠道菌群等功效。
23.2.本发明制备的微胶囊芯材互不干扰，双核微胶囊球形均匀，平均粒径1～3mm。内层不同壁材的包埋达到定点释放，外层包埋形成更加致密的保护结构，提高了益生菌在肠道环境中的活菌数，使足够数量的益生菌到达结肠黏附定植，发挥其功效，提高了微胶囊的贮藏性。
24.3.本发明制备的双核微胶囊可直接作为调节动物肠道的饲料添加剂应用于动物养殖中。
附图说明
25.图1为实施例1所得凝结芽孢杆菌微胶囊。
26.图2为实施例1所得布拉酵母菌微胶囊。
27.图3为实施例1所得双核微胶囊。
28.图4为实施例1所得单核微胶囊光学显微镜图。
29.图5为实施例1所得双核微胶囊光学显微镜图。
30.图6为otu水平特征值分venn图。
31.图7为pcoa分析的样本二维排序图。
32.图8为0天与30天在门水平上的细菌群落结构组成。
33.图9为0天与30天基于门水平上的差异物种(a:厚壁菌门；b:拟杆菌门；c:螺旋体菌门；d:放线菌门；e:变形菌门)
34.图10为0天与30天不同剂量组在科水平上的细菌群落结构组成图。
35.图11为0天与30天不同剂量组在属水平上的细菌群落结构组成图。
36.图12为0天与30天对照组与试验组粪便菌群lefse差异分析。
37.图13为0天与30天对照组与试验组kegg enzyme上的差异功能图。
具体实施方式
38.为了使本发明的技术方案和优点更加清楚，下面结合本发明的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
39.实施例1双核微胶囊的制备
40.1、党参多糖的提取
41.将党参切成薄片，置于50℃烘干箱内48h，干燥后的党参薄片用超细粉碎机进行粉碎，并将干粉用100目筛进行筛分，筛分后的党参干粉加入石油醚在室温下处理6h去除脂肪，抽滤得滤渣，再用85％乙醇处理24h除去色素和小有机化合物，再次抽滤得到滤渣，得到的党参滤渣放于烘箱内50℃干燥2h，再按照1:20(w/v)的比例加入蒸馏水，90℃提取2h，10000r/min下离心15min，取上清液，得到的沉淀再按照热水提取工艺反复提取3次，70℃减压浓缩至适当体积，得到的溶液按照1:4(v/v)比例用无水乙醇进行醇沉，4℃放置12h，将醇沉后的溶液在4000r/min下离心10min，得到多糖沉淀，将沉淀用蒸馏水复溶，sevag法除蛋白，除蛋白后的溶液再经-80℃反复冻融3次除去剩余的少量的蛋白，用无水乙醇1:4(v/v)再次沉淀12h，离心后的沉淀用蒸馏水复溶，得到的溶液用透析袋(截留量8000-14000da)流动水透析48h，之后用蒸馏水透析48h，将透析后的多糖溶液冻干，即得党参粗多糖。
42.2、党参多糖的分离纯化
43.将粗多糖溶液按照一定比例溶解于蒸馏水中，并用0.45μm的水系滤膜过滤，将过滤后的多糖溶液先用琼脂糖deae-52阴离子凝胶色谱柱(2.6cm
×
40cm)进行分离，以不同浓度的nacl(0、0.1、0.2、0.3、0.4和0.5m)为洗脱液，以1ml/min的流速梯度洗脱，5min/管收集洗脱液，每个洗脱梯度收集50管，利用苯酚硫酸法检测每管洗脱液的多糖含量，并绘制洗脱曲线，将同一洗脱液的洗脱峰合并，并用透析袋(截留量3500da)蒸馏水透析48h，将透析液冻干。
44.将分离得到的多糖按照一定浓度用蒸馏水溶解，并用0.45μm的水系滤膜过滤，将
过滤后的多糖溶液再经葡聚糖凝胶g-100色谱柱(1.6
×
30cm)进行分离，以蒸馏水为洗脱液，5min/管收集洗脱液，收集50管，利用苯酚硫酸法检测每管洗脱液的多糖含量，并绘制洗脱曲线，将洗脱峰合并，并用透析袋(截留量3500da)蒸馏水透析48h，将透析液冻干得到党参多糖。
45.3、羧甲基党参多糖的制备
46.将1g党参多糖溶于50ml去离子水中，充分溶解后，加入150ml naoh溶液(3mol/l)，搅拌10min，加入20g一氯乙酸，65℃下反应4h，冷却至室温，调节ph值至7.0，进行透析，直至剩余试剂被消除，将透析得到的产物真空干燥处理即得羧甲基化党参多糖，真空干燥的真空度为9pa，先在-30℃干燥24h，再升温至40℃干燥12h。
47.4、巯基党参多糖的制备
48.将100mg羧甲基党参多糖溶解于20ml蒸馏水中，充分溶解后，再加入166mg edc，活化反应体系中的羧基，室温搅拌1h，之后在氮气保护下加入76mg n-乙酰-l-半胱氨酸(nac)，搅拌反应24h，蒸馏水透析24h除去体系中edc和nac，冻干，即得到巯基党参多糖。
49.5、巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液的制备
50.将巯基化党参多糖与海藻酸钠溶液以体积比0.5：2～1：3混合均匀，在80～90℃水浴锅中加热并搅拌均匀。海藻酸钠质量分数为2％～3％，当巯基化党参多糖与海藻酸钠溶液以体积比为0.5:2混合时，由于混合物黏度过高会导致挤出困难，造成微胶囊粒径过大。当巯基化党参多糖与海藻酸钠溶液以1：1混合时，微胶囊表面光滑形态完整，包埋率最高。
51.6、微胶囊的制备：
52.第一芯材凝结芽孢杆菌的活化，试管斜面保存的凝结芽孢杆菌接种到灭菌的mrs培养基中，于37℃培养48h得一级种子液；一级种子液以10％的接种量接种到灭菌的mrs培养基中，于37℃培养48h得二级发酵液；发酵液离心收集菌泥，菌泥用0.85％的生理盐水洗涤3次，重悬于10ml的生理盐水中得到凝结芽孢杆菌浓缩菌液，活菌数为2
×
10
10
cfu/ml。
53.第二芯材布拉迪酵母菌活化：试管斜面保存的布拉迪酵母菌菌接种到灭菌的ypd培养基中，于28℃培养48h，得一级种子液；一级种子液以10％的接种量接种到灭菌的ypd培养基中，于28℃培养48h，得二级发酵液；发酵液离心收集菌泥，菌泥用0.85％的生理盐水洗涤3次，重悬于10ml的生理盐水中得到布拉迪酵母菌浓缩菌液，活菌数为2
×
10
10
cfu/ml。
54.将壁材巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液与第一芯材凝结芽孢杆菌浓缩菌液以体积比为1:1～1:1.5的比例混合均匀，形成具有粘度的悬浮液，通过单通道注射泵将该悬浮液挤成小液滴，滴落到2％的cacl2中，固化1h～2h，得到粒径为0.1～0.5mm的凝结芽孢杆菌微胶囊，如图1所示。将壁材2％的黄原胶与第二芯材布拉迪酵母菌浓缩菌液以体积比为1:1～1:1.5的比例混合均匀，通过单通道注射泵将该悬浮液挤成小液滴，滴落到2％的cacl2中，固化1h～2h，得到粒径为0.1～0.5mm的布拉迪酵母菌微胶囊，如图2所示。
55.巯基化党参多糖在凝结芽孢杆菌浓缩菌液中的浓度为0.5％～1％，海藻酸钠质量分数为2％～3％。
56.当壁材与芯材比例为1:1时，壁材较厚，不能及时释放出活菌数，致使包埋率降低，且挤出的微胶囊会出现拖尾现象，而壁材与芯材比例为1：1.5时，制备的微胶囊形态良好，成规则的颗粒状，此时包埋率也达到最大。
57.单通道注射泵的注射速率为0.1ml/min～1.7ml/min。
58.7、双核微胶囊的制备过程：将凝结芽孢杆菌微胶囊和布拉迪酵母菌微胶囊与质量分数为2％的海藻酸钠分别注入同轴双通道注射泵中形成液滴，再次收集到cacl2溶液中，固化0.5h～1h；用无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥后得到得到外形为球状，粒径为1～3mm的双核微胶囊。双核微胶囊最外层为海藻酸钠，里面包含着巯基化党参多糖包埋的微胶囊和黄原胶等壁材包埋的微胶囊两种核，如图3和图5所示。
59.同轴双通道注射泵中，外层注射泵的速率为0.05ml/min～0.1ml/min，内层注射泵的速率为0.1ml/min～1ml/min。
60.冷冻干燥，预冻初始温度为-20～-40℃，预冻时间为2～3h，将其放入-80℃超低温冷冻干燥，时间为20～24h。
61.实施例2
62.按照本发明的方法制备得到的益生菌微胶囊进行了如下性能的测定:
63.(1)微胶囊在模拟人工胃液中的耐受性
64.分别取1g实施例1制备的双核微胶囊加至9ml预热的人工胃液试管中，置于37℃，100r/min水浴摇床中恒温震荡培养，在0h、0.5h、1h、1.5h、2h时取样。微胶囊无菌蒸馏水洗涤2-3次后，于解囊液中裂解。采用平板计数法测定。3次平行取平均值，最后得出微胶囊中的活菌数。相同条件下，以未包埋的混合菌悬液作为对照。在胃中消化2h后凝结芽孢杆菌和布拉酵母双核微胶囊活菌存活率为88.63％。
65.表1微胶囊在模拟人工胃液中的耐受性(存活率)
[0066][0067]
(2)微胶囊在连续模拟胃肠液中的存活实验
[0068]
分别取1g实施例1制备的双核微胶囊加至9ml的模拟胃液中，在37℃，100r/min的恒温摇床中处理3h。分别在0h，1h、2h、3h时取样计数。经模拟胃液处理过的样品，于4℃，4000r/min离心5min，收集沉淀转移至9ml的模拟肠液中混合均匀，同样条件置于摇床中震荡3h。在0h，1h、2h、3h取样，进行梯度稀释后菌落计数，相同条件下，以混合游离菌作对照进行计数。凝结芽孢杆菌和布拉酵母菌双核微胶囊活菌存活率为79.31％。
[0069]
计算方法：
[0070]
模拟胃液存活率(％)＝(人工胃肠液处理后1g样品的活菌数/(cfu/g)/人工胃肠液处理前1g样品的活菌数/(cfu/g))
×
100％
[0071]
表2微胶囊在连续模拟肠液中的存活率
[0072][0073][0074]
实施例3作为调节动物肠道的饲料添加剂应用于动物养殖
[0075]
1材料与方法
[0076]
1.1试验动物与分组
[0077]
试验在沈阳某奶牛养殖场，试验选用6头胎次(2胎)、产犊日期、产奶量相近，处于泌乳中期的荷斯坦奶牛。随机分组为空白对照组试验，微胶囊制剂试验组。每组3头，对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加10g微生态制剂，预试期为7天，正试试验期为28天。
[0078]
试验奶牛在同一畜舍内采用固定槽位拴系饲养，各组饲养管理水平一致。
[0079]
1.2测定指标
[0080]
试验开始前和结束收集对照组与试验组奶牛粪便进行微生物多样性测定。对照组为c，试验组为h。
[0081]
2试验结果
[0082]
2.1细菌的venn图分析
[0083]
如图6所示，为不同饲喂时间，对照组与试验组样品的otu水平venn图，所有样品中共有otu数为814个，试验组特有otu为40个，饲喂30天试验组比0天具有更多特有otu。表明复合微胶囊制剂的加入能够改变肠道菌群otu的组成。
[0084]
2.2基于otu水平的pca分析
[0085]
β多样性样本距离越近，物种组成结构越相似。基于分析初步区分了对照组与不同剂量组奶牛在第0天和30天的粪便微生物谱的差异。如图7所示，基于bray-curtis距离算法和分析的pcoa，pc1贡献率为23.79％，pc2贡献率为15.35％。下图显示了对照组、试验组的粪便微生物群的空间分离。第0天对照组、试验组样本均位于横坐标上方，而第30天对照组、试验组样本均位于横坐标下方。样本距离大，饲喂不同时间差异明显，表明饲喂微胶囊制剂能够影响微生物分布。
[0086]
2.3门水平上的细菌群落结构
[0087]
对6份样品的otu进行分类注释，以确定粪便微生物群的共同位置和相对丰度。基于门水平上进行分类，如图8所示，6个样品中细菌有厚壁菌门(firmicutes)、拟杆菌门(bacteriodetes)、螺旋体菌门(spirochactota)、放线菌门(actinobacteria)、变形菌门(proteobacteria)和patescibacteria。第0天的细菌组成，对照组与试验组样品群落组成基本相似，优势菌为厚壁菌门(firmicutes)，拟杆菌门(bacteriodetes)。饲喂30天的细菌组成，厚壁菌门(firmicutes)中试验组(62.91％)含量大于对照组(55.47％)。饲喂30天与0天相比，厚壁菌门(firmicutes)含量呈现下降，对照组下降16.79％、试验组下降9.27％，较对照组下降幅度小。拟杆菌门(bacteriodetes)整体呈现含量上升，对照组增加8.28％，试验组较对照组增加1.73％，低剂量组和中剂量组含量均小幅度增加。螺旋体菌门(spirochactota)试验组含量下降，对照组含量增加。变形菌门(proteobacteria)对照组增加了1.23％、试验组增加了0.20％。说明添加双核微胶囊制剂能够改变肠道优势菌群的丰度。厚壁菌门(firmicutes)整体下降的原因可能是试验在12月进行，天气变冷导致厚壁菌门(firmicutes)丰度下降。
[0088]
2.4科水平上的细菌群落结构
[0089]
在科水平，如图10所示，6份样品丰度排名前10的物种分别为颤螺旋菌科(f__oscillospiraceae)、毛螺菌科(f__lachnospiraceae)、理研菌科(f__rikenellaceae)、消
化链球菌科(f__peptostreptococcaceae)、螺旋体科(f__spirochaetaceae)、普雷沃菌科(f__prevotellaceae)、鼠杆菌科(f__muribaculaceae)、双歧杆菌科(f__bifidobacteriaceae)、和ucg-010。f__anaerovoracaceae0天与饲喂30天试验组相比丰度显著降低(p《0.05)，颤螺旋菌科(f__oscillospiraceae)、毛螺菌科(f__lachnospiraceae)、理研菌科(f__rikenellaceae)、消化链球菌科(f__peptostreptococcaceae)饲喂30天试验组与对照组相比，物种丰度都呈现增加趋势，而致病菌螺旋体科饲喂30天与0天对照组相比，丰度增加；而试验组丰度降低，表明饲喂双核微胶囊制剂能够抑制致病菌的增加。
[0090]
2.5属水平上的细菌群落结构
[0091]
在属水平上，如图11所示，24份粪便样品中共鉴定出291个属种。饲喂30天的试验组与0天的试验组相比较，瘤胃球菌属(g__ucg-005)、理研菌属(g__rikenellaceae_rc9_gut_group)、未培养的毛螺菌属(g__unclassified_f__lachnospiraceae)、未鉴定的鼠杆菌属(g__norank_f__muribaculaceae)的平均相对丰度增加，较对照组分别增加了2.33％、0.307％、3.09％、3.909％。密螺旋体属(g__treponema)和索氏梭菌属(g__paeniclostridium)饲喂30天的试验组较对照组丰度下降明显。
[0092]
2.6奶牛肠道菌群物种lefse分析
[0093]
差异菌群筛选结果结合物种在门水平、科水平和属水平上的丰度变化，发现试验组与对照组在0天和饲喂30天物种差异明显，因此选择0天的对照组和试验组与饲喂30天的对照组与试验组进行lefse分析。如图12-13所示，共发现27个差异菌群。选择lda阈值为2，分类水平从门水平到属水平。饲喂30天的试验组标记物种为10个，分别是拟杆菌科rf16菌群f__bacteroidales_rf16_group、未排位的拟杆菌科rf16菌群g__norank_f__bacteroidales_rf16_group、瘤胃球菌属(ruminococcus)、颤杆菌属(oscillibacter)、g__elusimicrobium、o__elusimicrobiales、c__elusimicrobia、p__elusimicrobiota、f__elusimicrobiaceae、直肠真杆菌属(agathobacter)，拟杆菌属标记最大。而饲喂30天对照组的标记物种为3个，包括琥珀酸弧菌科(succinivibrionaceae)、气单胞菌目(aeromonadales)、琥珀酸弧菌属(succinivibrio)。
[0094]
通过wilcoxon秩和检验，对0天和饲喂30天的对照组和试验组的kegg功能通路enzyme进行分析，0天试验组和饲喂30天的试验组在代谢途径上存在显著性差异(p＝0.2712)，具有显著差异的代谢通路主要有5个，分别是谷氨酸合成酶(nadh)、谷氨酸合成酶(nadph)、色氨酸合成酶、苷酶、n-acetylmuramoyl-l-alanine酰胺酶。
[0095]
综上所述，双核微胶囊制剂的加入能够改变肠道菌群otu的组成和微生物分布。门水平，试验组较对照组增加了拟杆丰度，抑制了厚壁菌门下降，具有显著性。饲喂30天与0天相比试验组f__anaerovoracaceae丰度显著降低，致病菌螺旋体菌科丰度降低。属水平上，试验组瘤胃球菌科、理研菌属、未培养的毛螺菌属、未鉴定的鼠杆菌属丰度菌增加，密螺旋体属和索氏梭菌属丰度下降。对试验组进行物种lefse分析，发现试验组标记物种有10个，而对照组标记物种仅有3个。b.coagulanssn-8菌株和s.boulardiisn-6菌株制备的双核微胶囊制剂能够增加肠道有益菌，抑制致病菌，为后续反刍动物替抗微生态制剂的研究提供一定的思路和理论参考。

技术特征：
1.一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液的制备：巯基化党参多糖与海藻酸钠溶液混合均匀，在加热条件下搅拌均匀；(2)微胶囊的制备：将巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液与第一芯材混合均匀，形成具有粘度的悬浮液，通过单通道注射泵将该悬浮液挤成小液滴，滴落到cacl2中，固化得到第一微胶囊，将黄原胶或果胶与第二芯材混合均匀，通过单通道注射泵将该悬浮液挤成小液滴，滴落到cacl2中，固化得到第二微胶囊；(3)双核微胶囊的制备过程：将第一微胶囊、第二微胶囊与2％～3％的海藻酸钠分别注入同轴双通道注射泵中形成液滴，再次滴入到cacl2溶液中，固化；用无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥得到外形为球状的双核微胶囊。2.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，巯基化党参多糖的制备方法包括如下步骤：提取党参多糖，分离纯化，将党参多糖溶于水中，加入碱液，搅拌，再加入一氯乙酸进行反应，反应结束后调节ph至中性，将透析得到的产物真空干燥处理得到羧甲基化党参多糖，将羧甲基化党参多糖溶于蒸馏水中，加入edc，搅拌，在氮气保护下加入n-乙酰-l-半胱氨酸，透析后得到巯基化党参多糖。3.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的第一芯材和第二芯材为：芽孢菌或酵母菌。4.根据权利要求3所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述芽孢菌为凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌；所述酵母菌为布拉迪酵母菌或酿酒酵母菌。5.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液与第一芯材的体积比为1:1～1:1.5；黄原胶或果胶与第二芯材的体积比为1:1～1:1.5。6.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，第一微胶囊的粒径为0.1～0.5mm，第二微胶囊的粒径为0.1～0.5mm。7.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的单通道注射泵的注射速率为0.1ml/min～1.7ml/min。8.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，双核微胶囊的粒径为1～3mm。9.根据权利要求1所述的一种双核微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的进行冷冻干燥，预冻初始温度为-20～-40℃，预冻时间为2～3h，放入-80℃超低温冷冻，时间为20～24h。10.一种双核微胶囊，其特征在于，由权利要求1-9任一项所述制备方法制得。

技术总结
本发明涉及食品生物技术领域，具体是一种双核微胶囊的制备方法。包括如下步骤：巯基化党参多糖与海藻酸钠溶液混合均匀；将巯基化党参多糖与海藻酸钠的混合液与第一芯材混合均匀形成悬浮液，挤成小液滴，滴落到CaCl2中，得到第一微胶囊，将黄原胶或果胶与第二芯材混合挤成小液滴，滴落到CaCl2中，得到第二微胶囊；将第一微胶囊、第二微胶囊与海藻酸钠分别注入同轴双通道注射泵中形成液滴滴入到CaCl2溶液中，固化；洗涤过滤，冷冻干燥得到双核微胶囊。本发明制备的双核微胶囊芯材互不干扰，双核微胶囊球形均匀，平均粒径1～3mm。内层不同壁材的包埋达到定点释放，外层包埋形成更加致密的保护结构，提高了微胶囊的贮藏性。提高了微胶囊的贮藏性。提高了微胶囊的贮藏性。


技术研发人员：乌日娜 武俊瑞 刘晓燕 方海田 刘慧燕 赵春光 张燚 张英 赵鹏飞 闫丹丽 刘晓宇
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：2023.06.29
技术公布日：2023/9/20