一株具有降解吲哚能力的粪产碱杆菌及其应用

1.本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株具有吲哚降解能力的粪产碱杆菌及其应用。


背景技术：

2.吲哚是吡咯与苯并联的一种典型的氮杂环芳烃化合物，又称2,3-苯并吡咯，化学式为c8h7n。吲哚类化合物广泛存在于医药废水、染料废水和畜牧排泄废水中，是造成养殖场环境恶化的主要因素，其引起的环境污染日益严重，当浓度较高时，会散发出让人呕吐的浓臭味。吲哚能够通过食物链累积在人体内，通过呼吸道进入人体，引起头痛、头晕、恶心。吲哚是比较典型的难降解有机物，化学结构稳定性较高，毒害性强，自然条件被降解难度大，对人类健康和自然环境具威胁大，所以对含吲哚的废水进行高效处理，对生态环境的可持续发展意义重大。


技术实现要素：

3.本发明的第一个目的是提供从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品中分离出的一株吲哚降解菌dm26。
4.本发明经16s rna序列鉴定为粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)，菌株能能以吲哚为唯一碳源进行生长。菌株生长和降解吲哚的最佳条件是：温度37℃，ph＝6.5，转速180rpm。本实验将从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品中分离的菌株dm26，通过对细菌的生理生化特征和16s rna基因序列分析，鉴定出菌株为粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)。所述的16s rna从第1位至第1400位之间的基因序列如seq id no.1所示，命名为粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为gdmcc no:63290，保藏日期为2022年3月24日。
5.本发明的第二个目的是提供一种菌剂，其含有上述粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26作为活性成分。
6.本发明的第三个目的是提供一种降解吲哚的方法，其是利用上述粪产碱杆菌dm26去降解。
7.优选，是将粪产碱杆菌dm26加入到含吲哚的液体体系中进行降解。
8.优选，所述的吲哚在体系中的浓度是0.6-1mm。
9.本发明的第四个目的是提供粪产碱杆菌dm26在降解吲哚中的应用。
10.本发明的粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26能以吲哚为唯一碳源的m9培养基中生长，对吲哚具有一定的降解效果，有较好的应用前景。
11.alcaligenes faecalis dm26，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为gdmcc no:63290，保藏日期为2022年3月24日。
附图说明
12.图1是粪产碱杆菌dm26的生长曲线；
13.图2是在培养基中剩余吲哚浓度曲线；
14.图3是粪产碱杆菌dm26的生长曲线；
15.图4是在培养基中剩余吲哚浓度曲线；
16.图5是粪产碱杆菌dm26的生长曲线；
17.图6是在培养基中剩余吲哚浓度曲线。
具体实施方式
18.下面结合附图对本发明作更进一步的说明。
19.本实验将从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品中分离的粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26，通过对细菌的16s rna基因序列分析，鉴定出菌株为粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)。所述的16s rna从第1位至第1400位之间的基因序列如seq id no.1所示，命名为粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26，该菌株已保藏于广东省微生物菌种保藏中心
20.(gdmcc)，地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为gdmcc no:63290，保藏日期为2022年3月24日。
21.实施例1
22.准备m9培养基：na2hpo4：6.8g/l；kh2po4：3.0g/l；nacl：0.5g/l；nh4cl：1.0g/l；mgso4：2mm；cacl2：0.1mm，ph＝6.5，溶剂为水，其配置方法是将各成分混合均匀。培养基在121℃高压蒸汽中灭菌20min后使用。
23.将从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品中分离的粪产碱杆菌dm26，用lb培养基进行培养，用分光光度法测定菌悬液的od
600
值，将菌悬液调至od
600
＝1.0，向m9培养液中加入1.0mm吲哚，稀释的菌悬液按体积比10％浓度加入该培养液中，做a、b两组培养，每组3个平行。
24.a组置于37℃、多功能酶标仪(biotek synergy h1)培养，从0时开始读取(作为对照)，每1h读取一次，测定培养基中粪产碱杆菌dm26的a
600
，并绘制菌株dm26生长曲线。(图1)
25.b组置于37℃、静置培养，从0时开始取样(作为对照)，每6h取样800μl，于-80℃保存。取样完成后，用乙酸乙酯对吲哚进行萃取，在800μl样品中加入1ml乙酸乙酯摇匀，静置30min，取上清液。再重复以上步骤一次。将萃取后样品浓缩成800μl，用0.22μm滤膜过滤。利用高效液相色谱hplc系统(thermo u3000)用c18柱(5μm，250
×
4.6mm)，进样量10μl，流速：0.5ml/min，流动相：80％甲醇(v/v)，20％超纯水(v/v)，柱温：30℃，在紫外波长为265nm检测吲哚出峰情况，每个样品保持30min。用1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0mm吲哚标准品作为对照样，得到吲哚浓度与吲哚峰面积之间的关系图，线性拟合为吲哚标准曲线，y为对应的峰面积，x为吲哚浓度。计算得出吲哚降解后在培养基中剩余吲哚浓度。(图2)
26.实施例2
27.准备m9培养基：na2hpo4：6.8g/l；kh2po4：3.0g/l；nacl：0.5g/l；nh4cl：1.0g/l；mgso4：2mm；cacl2：0.1mm。ph＝6.5。培养基在121℃高压蒸汽中灭菌20min后使用。
28.将从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品中分离的粪产碱杆菌dm26，用lb培养
基进行培养，用分光光度法测定菌悬液的od
600
值，将菌悬液调至od
600
＝1.0，向m9培养液中加入0.8mm吲哚，稀释的菌悬液按体积比10％浓度加入该培养液中，做a、b两组培养，每组3个平行。
29.a组置于37℃、多功能酶标仪(biotek synergy h1)培养，从0时开始读取(作为对照)，每1h读取一次，测定培养基菌株dm26的a
600
，并绘制菌株dm26生长曲线。(图3)
30.b组置于37℃、静置培养，从0时开始取样(作为对照)，每6h取样800μl，于-80℃保存。取样完成后，用乙酸乙酯对吲哚进行萃取，在800μl样品中加入1ml乙酸乙酯摇匀，静置30min，取上清液。再重复以上步骤一次。将萃取后样品浓缩成800μl，用0.22μm滤膜过滤。利用高效液相色谱hplc系统(thermo u3000)用c18柱(5μm，250
×
4.6mm)，进样量10μl，流速：0.5ml/min，流动相：80％甲醇(v/v)，20％超纯水(v/v)，柱温：30℃，在紫外波长为265nm检测吲哚出峰情况，每个样品保持30min。用1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0mm吲哚标准品作为对照样，得到吲哚浓度与吲哚峰面积之间的关系图，线性拟合为吲哚标准曲线，y为对应的峰面积，x为吲哚浓度。计算得出吲哚降解后在培养基中剩余吲哚浓度。(图4)
31.实施例3
32.准备m9培养基：na2hpo4：6.8g/l；kh2po4：3.0g/l；nacl：0.5g/l；nh4cl：1.0g/l；mgso4：2mm；cacl2：0.1mm。ph＝6.5。培养基在121℃高压蒸汽中灭菌20min后使用。
33.将从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品中分离的粪产碱杆菌dm26，用lb培养基进行培养，用分光光度法测定菌悬液的od
600
值，将菌悬液调至od
600
＝1.0，向m9培养液中加入0.6mm吲哚，稀释的菌悬液按体积比10％浓度加入该培养液中，做a、b两组培养，每组3个平行。
34.a组置于37℃、多功能酶标仪(biotek synergy h1)培养，从0时开始读取(作为对照)，每1h读取一次，测定培养基菌株dm26的a
600
，并绘制菌株dm26生长曲线。(图5)
35.b组置于37℃、静置培养，从0时开始取样(作为对照)，每6h取样800μl，于-80℃保存。取样完成后，用乙酸乙酯对吲哚进行萃取，在800μl样品中加入1ml乙酸乙酯摇匀，静置30min，取上清液。再重复以上步骤一次。将萃取后样品浓缩成800μl，用0.22μm滤膜过滤。利用高效液相色谱hplc系统(thermo u3000)用c18柱(5μm，250
×
4.6mm，进样量10μl，流速：0.5ml/min，流动相：80％甲醇(v/v)，20％超纯水(v/v)，柱温：30℃，在紫外波长为265nm检测吲哚出峰情况，每个样品保持30min。用1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0mm吲哚标准品作为对照样，得到吲哚浓度与吲哚峰面积之间的关系图，线性拟合为吲哚标准曲线，y为对应的峰面积，x为吲哚浓度。计算得出吲哚降解后在培养基中剩余吲哚浓度。(图6)
36.从图2、4、6中可以看出，本发明的粪产碱杆菌dm26 1天内完成0.6、0.8、1mm吲哚降解，具有降解吲哚的能力。
37.seq id no.1
38.tgcagtcgaacggcagcgcgagagagcttgctctcttggcggcgagtggcggacgggtgagtaatatatcggaacgtgcccagtagcgggggataactactcgaaagagtggctaataccgcatacgccctacgggggaaagggggggatcgcaagacctctcactattggagcggccgatatcggattagctagttggtggggtaaaggctcaccaaggcaacgatccgtagctggtttgagaggacgaccagccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaattttggacaatgggggaaaccctgatccagccatcccgcgtgtatgatgaaggccttcgggttgtaaagtacttttggcagagaagaaaaggtatcccctaatacgggatactgctgacggtatctgcagaataagcaccggctaa
ctacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgtgtgtaggcggttcggaaagaaagatgtgaaatcccagggctcaaccttggaactgcatttttaactgccgagctagagtatgtcagaggggggtagaattccacgtgtagcagtgaaatgcgtagatatgtggaggaataccgatggcgaaggcagccccctgggataatactgacgctcagacacgaaagcgt
39.ggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccctaaacgatgtcaactagctgttggggccgttaggccttag
40.tagcgcagctaacgcgtgaagttgaccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaaggaattgacggggacccg
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45.gccaacccgcgagggggagccaatctcagaaacccgatcgtagtccggatcgcagtctgcaactcgactgcgtgaagtcg
46.gaatcgctagtaatcgcggatcagaatgtcgcggtgaatacgttcccgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccatggg
47.agtgggtttcaccagaagtaggtagcctaaccgtaaggagggcg。

技术特征：
1.粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26，保藏编号为gdmcc no:63290。2.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的粪产碱杆菌(alcaligenes faecalis)dm26作为活性成分。3.一种降解吲哚的方法，其特征在于，是利用权利要求1所述的粪产碱杆菌dm26去降解。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，是将粪产碱杆菌dm26加入到含吲哚的液体体系中进行降解。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的吲哚在体系中的浓度是0.6-1mm。6.权利要求1所述的粪产碱杆菌dm26在降解吲哚中的应用。

技术总结
本发明公开了一株具有降解吲哚能力的粪产碱杆菌及其应用，属于微生物领域。该菌株从受微生物污染的化妆品乳液原材料样品分离得到的粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)，菌株编号为DM26，保藏号为GDMCC No:63290，于2022年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC No:63290。该菌株能以吲哚为唯一碳源的M9培养基中生长，对吲哚具有一定的降解效果，有较好的应用前景。有较好的应用前景。有较好的应用前景。


技术研发人员：彭红 周刚 王颖思 彭如群 施庆珊 谢小保
受保护的技术使用者：广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）
技术研发日：2023.06.30
技术公布日：2023/10/8