一种诱导免疫耐受治疗类风湿性关节炎的微针贴片

1.本发明涉及经皮给药的微针贴片制剂技术领域，具体为一种共载自身抗原和免疫调节剂的聚合物微针在类风湿性关节炎中的应用，属于类风湿性关节炎治疗技术领域。


背景技术：

2.类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)是一种以慢性滑膜炎为特征的侵蚀性自身免疫性疾病，呈进行性病变并终生反复不断。这种疾病可引起关节肿痛、畸形甚至不同程度的残疾，极大影响患者的生活质量。根据世界卫生组织的统计，全世界有近2300万人患有风湿性关节炎，平均每名病人因类风湿性关节炎导致的直接经济支出超过1.5万元每年。考虑到类风湿性关节炎需要长期用药及其病情发展对人群正常工作能力的严重影响，类风湿性关节炎给国家和社会带来了沉重的经济负担。
3.传统的类风湿性关节炎治疗方案多采用口服或注射具有抑制炎症发展作用的合成药物，包括非甾体类抗炎药、抗风湿药和糖皮质激素。这些药物主要具有抗炎和非特异性免疫抑制作用，可暂时缓解疼痛，减轻炎症症状，但不能逆转炎症进展，防止关节进一步损伤，不能治愈疾病。患者对治疗方案依从性低，导致擅自停药、疾病复发，加重了疾病的治疗难度。近年来新开发的肿瘤坏死因子-α(tnf-α)阻滞剂等生物制剂可以靶向特异性的致病性炎症因子并表现出良好的疗效，但也存在损害免疫系统正常功能、引起感染的风险，且价格昂贵。迫切需要开发新的类风湿性关节炎治疗方法，针对类风湿性关节炎的病因，有效修复体内异常的免疫反应，恢复免疫平衡。
4.以上这些药物(化药或生物制剂)都是作为治疗类风湿性关节炎的一线药物，但由于在临床使用中主要以口服或注射(关节腔注射、静脉注射、皮下注射)为主要给药途径，治疗虽然有效，但依然存在很多问题。长期口服给药容易导致患者出现不同程度的胃肠道反应和肾脏毒副作用，经肝脏代谢存在首过效应，会降低药物的疗效；皮下和静脉注射经体循环发挥疗效，虽然药物生物利用度高，但由于选择性差，可能作用于多个靶器官或靶细胞，从而导致不良反应，且因为伴随疼痛，患者顺应性差；关节腔注射虽然能直接将药物注射到病灶部位，但是操作复杂，需要专人操作，同时痛感强烈，一般患者难以接受。
5.免疫耐受策略是近年来免疫学界研究的一个活跃领域。抗原诱导免疫耐受策略是通过给予类风湿性关节炎自身抗原诱导特异性免疫耐受，关闭免疫系统对类风湿性关节炎自身抗原的异常免疫反应。成功诱导免疫耐受可以增加调节性t细胞(treg)的比例，抑制1型辅助t细胞(th1)和17型辅助t细胞(th17)的分化和增殖，进而下调炎性细胞因子，最终重建免疫平衡。与针对整个免疫系统的免疫抑制策略不同，抗原特异性免疫耐受策略仅针对类风湿性关节炎相关的自身抗原来纠正紊乱的免疫系统，恢复免疫平衡。
6.类风湿性关节炎患者的自身抗原包括胶原蛋白、二型胶原蛋白、丝聚蛋白、纤维蛋白原、波形蛋白及其功能性表位肽，类风湿性关节炎患者体内可检测到针对上述自身抗原的特异性抗体和细胞免疫反应。有研究表明，口服自身抗原诱导的免疫耐受可以抑制大鼠佐剂性关节炎的发生。以上结果证明了自身抗原既是导致类风湿性关节炎的病因，也是诱
导免疫耐受发挥治疗作用的潜在耐受原。
7.免疫耐受诱导的另一个挑战是，单独使用自身抗原有加重免疫反应和炎症的风险，已有研究表明，共同递送自身抗原和免疫调节剂能解决这一问题。免疫调节剂剂是对机体的免疫反应具有调节功能的药物，能抑制与免疫反应有关细胞(t细胞和b细胞等)的增殖和功能，能调节机体免疫反应。相关机制研究进一步证明，地塞米松、环孢素、他克莫司、雷帕霉素等免疫调节剂可以调节免疫系统活化程度，激活treg细胞的分化与增殖，当免疫调节剂与自身抗原联合应用时，可有效诱导抗原特异性免疫耐受。
8.以往的研究主要通过口服和注射两种策略建立免疫耐受，这两种策略被认为是诱导免疫耐受最有效的策略。然而，这两种策略都有相当大的内在缺陷。对于口服策略，胃肠道中恶劣的酸性和碱性环境会导致抗原降解和失活。因此，需要大剂量的抗原，耐受诱导效率通常较低。静脉注射时，频繁注射带来的疼痛和感染风险导致患者依从性较差。
9.微针，是利用微加工方式制成的长度在100-1000μm的微型针状结构，所述针体在穿刺皮肤角质层屏障时，不会触及神经组织和血管，因此微针递送药物几乎无痛微创，患者顺应性好。微针给药的优点众多，例如无痛给药，能够大大增加使用者的依从性；微针给药对专业技术要求极低，患者可自己给药；微针中药物以固体形式存在，稳定性好，便于运输储存等。然而，现有聚合物微针多将药物与基质溶解在溶剂中后制备微针，要求药物与基质具有相同的溶解性(溶于水或溶于有机溶剂)，在需要同时载水溶性和水不溶性药物时需要采取其他复杂的方法，如制备纳米粒、脂质体、包合物等。这些方法不仅加大了微针的制备难度，同时载药量进一步减小，微针的机械强度也易受到影响。


技术实现要素：

10.为了解决上述问题，本发明制备了一种共载自身抗原和免疫调节剂，用于治疗类风湿性关节炎的微针透皮给药贴片，并研究了其对类风湿性关节炎的免疫耐受诱导能力和治疗效果。一方面，本发明通过将生物相容性高分子基质材料和和自身抗原溶于水中，再加入免疫调节剂直接制备为混悬液的方式制备基质液，所述混悬液加入模具中形成针尖，干燥后浇筑背衬层溶液，最后脱模得到微针贴片，简化了微针制备步骤；另一方面，经皮同时递送自身抗原和免疫调节剂成功在自身免疫性疾病模型小鼠上诱导免疫耐受，发挥显著的治疗效果。同时，使用微针经皮给药，避免了传统口服治疗的毒副作用和注射给药伴随的疼痛和患者低顺应性的隐患。
11.本发明所述的微针贴片包括背衬层和针体，所述针体包括成针基质材料和药物，所述成针基质材料包括生物相容性高分子基质材料，所述药物包括类风湿性关节炎自身抗原和免疫调节剂。
12.所述生物相容性高分子基质材料包括透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、胶原蛋白、丝素蛋白、明胶、羟丙基甲基纤维素、硫酸软骨素、糊精、聚乙烯醇、羧甲基纤维素、羧甲基壳聚糖、硫酸葡聚糖、糖原、直链淀粉、葡聚糖、羟丙基纤维素、糖苷、壳聚糖、聚酯、聚羟基脂肪酸酯、羟基丁酸戊酸共聚酯、高分子聚丙烯酰胺、聚羟基脂肪酸-聚乙二醇、聚4-羟基酸、聚α-羟基酸、聚β-羟基酸、聚4-羟基丁酸酯、聚4-羟基戊酸酯、聚4-羟基己酸酯、聚酯酰胺、聚已内酯、聚丙交酯、聚乙醇酸交酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚二噁烷酮、聚原酸酯、聚醚酯、聚酐、乙醇酸-三亚甲基碳酸酯共聚物、聚磷酸酯、聚磷酸酯氨基甲酸酯、聚氨基酸、聚氰基
丙烯酸酯、聚三亚甲基碳酸酯、聚亚氨基碳酸酯、聚酪氨酸碳酸酯、聚碳酸酯、聚酪氨酸芳基酯、聚亚烷基草酸酯、聚磷酸肌酸及上述材料的衍生物中的至少一种。
13.在其中一些实施例中，所述成针基质材料优选为透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、丝素蛋白中的一种。
14.进一步优选的，所述成针基质材料优选为透明质酸，透明质酸的分子量为10-300kda，浓度为10-100％(m/v)；进一步优选的，透明质酸的分子量为10kda，浓度为50-100％。
15.在其中一些实施例中，所述类风湿性关节炎自身抗原包括胶原蛋白、二型胶原蛋白、丝聚蛋白、纤维蛋白原、波形蛋白及其功能性表位肽中的一种或多种；优选的，所述类风湿性关节炎自身抗原进一步优选为二型胶原蛋白多肽；进一步优选的，二型胶原蛋白多肽的浓度为0.1-10％(m/v)。
16.在其中一些实施例中，所述免疫调节剂为地塞米松、环孢素、他克莫司、雷帕霉素及其衍生物中的一种或多种；优选的，所述免疫调节剂优选为雷帕霉素；进一步优选的，雷帕霉素的浓度为0.05-5％(m/v)。
17.本发明还提供了一种治疗类风湿性关节炎的微针透皮给药贴片的制备方法:
18.(1)将类风湿性关节炎自身抗原溶解于水中得到溶液；
19.(2)向上述溶液中加入生物相容性高分子基质材料，通过搅拌的方式使其完全溶解；
20.(3)加入免疫调节剂，充分搅拌得到混悬液；
21.(4)将上述混悬液加入到微针模具中，使用加压气体将溶液压入微针模具中，放入干燥釜中室温干燥，形成微针针尖；
22.(5)向模具中加入生物相容性高分子基质溶液，干燥，形成微针底座，脱模得到微针。
23.优选的，步骤(3)的搅拌时间为4h，步骤(4)、步骤(5)的干燥时间为2h。
24.相比于现有技术方案，本发明的有益效果为：
25.(1)本发明通过将可溶性药物成分制备成水溶液，不溶性药物成分制备为混悬液的方式制备基质液，简化了微针制备步骤。传统方法同时载可溶性和不溶性药物需要采取其他复杂的方法，如制备纳米粒、脂质体、包合物，或用两种溶剂溶解药物先后加入模具中，操作繁琐且微针成型率不高，本发明通过制备混悬液的形式同时载可溶性自身抗原和不溶性免疫调节剂，大大简化了微针制备流程。
26.(2)类风湿性关节炎作为一种长期慢性自身免疫性疾病，目前多采用基于抑制炎症策略的对标治疗，需要终生服药，且有病程反复的风险，而本发明制备的微针贴片经皮同时递送自身抗原和免疫调节剂，成功在自身免疫性疾病模型小鼠上诱导免疫耐受，针对病理机制治疗类风湿性关节炎。同时体内实验表明，本发明的治疗类风湿性关节炎微针贴片诱导免疫耐受逆转了小鼠胶原诱导型关节炎的进程，具有新药开发的前景。
27.(3)本发明利用微针贴片针对类风湿性关节炎患者这类需要长期用药的群体，解决了传统口服治疗的毒副作用和注射给药伴随的疼痛和患者低顺应性的问题。
附图说明
28.图1为本发明实施例1制备的共载二型胶原蛋白和雷帕霉素的微针。
29.图2为本发明实施例1微针贴片的皮肤穿刺图。
30.图3为本发明实施例2微针贴片治疗胶原诱导型关节炎小鼠的关节厚度和临床评分。
31.图4为本发明实施例2微针贴片治疗胶原诱导型关节炎小鼠的脚掌照片。
32.图5为本发明实施例2微针贴片治疗胶原诱导型关节炎小鼠的病理切片。
33.图6为本发明实施例3制备的共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针。
34.图7为本发明实施例3微针贴片的皮肤穿刺图。
35.图8为本发明实施例2微针贴片治疗胶原诱导型关节炎小鼠的关节厚度和临床评分。
36.图9为本发明实施例4微针贴片治疗胶原诱导型关节炎小鼠的脚掌照片。
37.图10为本发明实施例4微针贴片治疗胶原诱导型关节炎小鼠的病理切片。
38.图11为本发明实施例4微针贴片对胶原诱导型关节炎小鼠重塑免疫平衡的作用。
39.图12为本发明实施例5微针贴片对胶原诱导型关节炎小鼠诱导耐受性树突状细胞。
40.图13为本发明实施例5微针贴片贴片对胶原诱导型关节炎小鼠诱导免疫耐受的作用。
具体实施方式
41.以下实施例是对本发明的进一步说明，本领域的研究或技术人员可根据本发明里的内容了解本发明的优点。但是本领域技术人员应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案。本发明实施例使用的术语是为了描述特定的实施方案，不是为了限制本发明的保护范围。
42.本发明对所采用的原料来源不做限定，如果没有特殊说明，本发明所采用的原料均为本技术领域的普通市售产品。
43.实施例1
44.将二型胶原蛋白溶于水，制成0.3％(m/v)的水溶液，再加入透明质酸制成50％(m/v)的水溶液，加入雷帕霉素，搅拌4h制成均匀混悬液(0.05％，m/v)。
45.将上述混悬液加入到微针模具中，使用加压气体将溶液压入微针模具中，放入干燥釜中室温干燥2h，形成微针针尖。
46.向上述微针模具中加入30μl透明质酸溶液(50％，m/v)，干燥2h，即可最终剥离得到微针贴片。
47.所制备微针见图1，微针破裂压强为51.68
±
1.65mpa，杨氏模量为0.48
±
0.03gpa(如表1所示)，微针皮肤穿刺效果见图2，表明所制备微针能有效穿刺皮肤；微针可装载胶原蛋白30.07
±
6.96μg，雷帕霉素21.45
±
2.40μg。
48.表1：共载二型胶原蛋白和雷帕霉素微针贴片的机械强度
[0049][0050]
实施例2
[0051]
将0.6ml二型胶原蛋白溶液(2mg/ml)与0.6ml完全弗氏佐剂装入注射器中，通过反复挤压微孔滤膜的方式制备得到1ml乳剂。选用7周龄的dba/1小鼠，每只尾根部皮下注射100μl上述乳剂，在第21天将完全弗氏佐剂替换为不完全弗氏佐剂制备乳剂，重复上述操作以制备胶原诱导型类风湿性关节炎(cia)模型。
[0052]
将小鼠随机分成五组，分别为：健康组、对照组(模型组)、载二型胶原蛋白的微针组、载雷帕霉素的微针组、共载二型胶原蛋白和雷帕霉素的微针组。其中健康组小鼠不经任何处理，其余4组均为cia模型小鼠。造模后第20天起，各组分别接受载二型胶原蛋白的微针(二型胶原蛋白30μg)、载雷帕霉素的微针(雷帕霉素20μg)、共载二型胶原蛋白和雷帕霉素的微针(二型胶原蛋白多肽30μg，雷帕霉素20μg)治疗，给药方式为用微针在小鼠的背部进行给药，每隔一天给一次药，共给6次。
[0053]
在给药后，每天用游标卡尺测量小鼠足底厚度，并对各组大鼠的关节肿胀度进行评分。图3的结果显示，二型胶原蛋白与雷帕霉素共同负载微针组的足底厚度及炎性指数均较模型组、微针-二型胶原蛋白组与微针-雷帕霉素组明显降低，说明二型胶原蛋白与雷帕霉素有协同效应。
[0054]
第46天拍摄小鼠脚掌照片，如图4所示，共载二型胶原蛋白和雷帕霉素的微针治疗后，小鼠足底红肿症状得到明显缓解，且显著优于微针-二型胶原蛋白组和微针-雷帕霉素组，表明二型胶原蛋白和雷帕霉素具有协同作用，对类风湿性关节炎有更好的疗效。
[0055]
处死小鼠后，摘取小鼠脚掌进行he染色，图5结果证明，cia模型组小鼠关节炎症严重，共载二型胶原蛋白和雷帕霉素的微针抑制关节炎症能力显著优于微针-二型胶原蛋白组和微针-雷帕霉素组，证明二型胶原蛋白和雷帕霉素具备协同作用，与单独使用两种药物相比，治疗效果更优。
[0056]
实施例3
[0057]
将二型胶原蛋白多肽溶于水，制成0.3％(m/v)的水溶液，再加入透明质酸制成50％(m/v)的水溶液，加入雷帕霉素，搅拌4h制成均匀混悬液(0.05％，m/v)。
[0058]
将上述混悬液加入到微针模具中，使用加压气体将溶液压入微针模具中，放入干燥釜中室温干燥2h，形成微针针尖。
[0059]
向上述微针模具中加入30μl透明质酸溶液(50％，m/v)，干燥2h，即可最终剥离得到微针贴片。
[0060]
所制备微针见图6，可见所制备共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素微针形状规则、针尖完整；破裂压强为55.64
±
1.43mpa，杨氏模量为0.44
±
0.03gpa(如表2所示)，微针皮肤穿刺效果见图7，表明所制备微针能有效穿刺皮肤；微针可装载胶原蛋白多肽31.21
±
0.60μg，雷帕霉素5.88
±
0.96μg。
[0061]
表2：共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素微针贴片的机械强度
[0062][0063]
实施例4
[0064]
将0.6ml二型胶原蛋白溶液(2mg/ml)与0.6ml完全弗氏佐剂装入注射器中，通过反复挤压微孔滤膜的方式制备得到1ml乳剂。选用7周龄的dba/1小鼠，每只尾根部皮下注射100μl上述乳剂，在第21天将完全弗氏佐剂替换为不完全弗氏佐剂制备乳剂，重复上述操作以制备胶原诱导型类风湿性关节炎(cia)模型。
[0065]
将小鼠随机分成五组，分别为：健康组、对照组(模型组)、载二型胶原蛋白多肽的微针组(mn-cii)、载雷帕霉素的微针组(mn-rapa)、共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针组(mn-cii-rapa)(即本发明的治疗类风湿性关节炎的微针)。其中健康组小鼠不经任何处理，其余4组均为cia模型小鼠。造模后第20天起，mn-cii组、mn-rapa组和mn-cii-rapa分别接受载二型胶原蛋白多肽的微针(二型胶原蛋白多肽30μg)、载雷帕霉素的微针(雷帕霉素5μg)、共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针(二型胶原蛋白多肽30μg，雷帕霉素5μg)治疗，给药方式为用微针在小鼠的背部进行给药，每隔一天给一次药，共给6次。
[0066]
开始给药后每隔一天用游标卡尺测定小鼠脚掌厚度，以及对各组cia小鼠关节肿胀程度进行评分。图8结果表明，共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针组的脚掌厚度和炎症评分显著低于模型组、微针-二型胶原蛋白多肽组和微针-雷帕霉素组，和健康组基本一致，可见，本发明的共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针中，二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素具有协同作用，对类风湿性关节炎治疗效果优异。
[0067]
第46天拍摄小鼠脚掌照片，图9结果表明共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针改善小鼠脚掌因炎症所造成红肿现象的能力显著优于微针-二型胶原蛋白多肽组和微针-雷帕霉素组，和健康组基本一致。可见，二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素具有协同作用，对类风湿性关节炎治疗效果优异。
[0068]
处死小鼠后，摘取小鼠脚掌进行he染色及番红固绿染色，图10结果证明，cia模型组小鼠关节炎症严重，软骨结构受损，共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针抑制关节炎症、保护软骨结构的能力显著优于微针-二型胶原蛋白多肽组和微针-雷帕霉素组，证明二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素具备协同作用，与单独使用两种药物相比，治疗效果更优。
[0069]
处死小鼠后，将小鼠脚掌研磨，离心得到上清即为小鼠关节提取液，采用酶联免疫吸附测定法(elisa)检测关节提取液中il-4、tnf-α、il-17a、tgf-β的含量。如图11所示，二型胶原蛋白多肽联合雷帕霉素治疗能够降低关节部位促炎细胞因子(il-4、tnf-α、il-17a)的含量，同时提高抑炎细胞因子(tgf-β)的含量；其中共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针组在抑制il-4和提高tgf-β方面显著优于微针-二型胶原蛋白多肽组和微针-雷帕霉素组，可见，二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素具有协同作用。
[0070]
向同时摘取小鼠双侧腹股沟淋巴结和脾脏，研磨后通过密度梯度离心分离得到淋
巴细胞悬液，分别标记treg细胞(cd4+cd25+foxp3+)以及th1细胞(il-4+cd4+)检测小鼠体内主要淋巴器官内的淋巴细胞表型情况，图11结果表明，共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针治疗后小鼠主要淋巴器官中treg细胞增多，th1细胞则明显减少，同时treg/th1平衡偏向于treg细胞，重塑了关节炎小鼠免疫平衡。综上可知，二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素有协同作用，二者结合比单独使用能更好地诱导免疫耐受，重塑免疫平衡。
[0071]
实施例5
[0072]
将0.6ml二型胶原蛋白溶液(2mg/ml)与0.6ml完全弗氏佐剂装入注射器中，通过反复挤压微孔滤膜的方式制备得到1ml乳剂。选用7周龄的dba/1小鼠，每只尾根部皮下注射100μl上述乳剂，在第21天将完全弗氏佐剂替换为不完全弗氏佐剂制备乳剂，重复上述操作以制备胶原诱导型类风湿性关节炎(cia)模型。
[0073]
将小鼠随机分成五组，分别为：健康组、对照组(模型组)、载二型胶原蛋白多肽的微针组(mn-cii)、载雷帕霉素的微针组(mn-rapa)、共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针组(mn-cii-rapa)(即本发明的治疗类风湿性关节炎的微针)。其中健康组小鼠不经任何处理，其余几组均为cia模型小鼠。造模后第20天起，mn-cii组、mn-rapa组和mn-cii-rapa分别接受载二型胶原蛋白多肽的微针(二型胶原蛋白多肽30μg)、载雷帕霉素的微针(雷帕霉素5μg)、共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针(二型胶原蛋白多肽30μg，雷帕霉素5μg)治疗，给药方式为微针在小鼠的背部进行给药，每隔一天给一次药，共给6次。
[0074]
第33天处死小鼠，剪取1cm*1cm大小的一块背部皮肤，剪碎后加入1ml含胶原酶的磷酸盐缓冲液，37℃震荡30min，取出后研磨得到皮肤细胞悬液，用流式抗体对细胞表面cd11c、cd40、cd80分子进行染色，以此标记dc细胞。结果表明，造模后皮肤中cd11c+细胞比例提高，但是共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针组第二信号分子cd40和cd80表达下降，表明其有效诱导了皮肤中耐受型dc的产生，即可表达第一信号分子(cd11c)，但是缺乏第二信号(cd40、cd80)，见图12。
[0075]
处死小鼠后，摘取脾脏，研磨后通过密度梯度离心得到淋巴细胞悬液，向12孔板中每孔加入500μl淋巴细胞细胞悬液，并加入500μl二型胶原蛋白多肽(10μg/ml)，刺激72h后离心，取上清用elisa试剂盒检测il-6、tnf-α、il-10的含量。结果证明了接受抗原再刺激后共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针组的脾脏淋巴细胞分泌促炎细胞因子il-6、tnf-α明显减少，但是抑炎细胞因子il-10的分泌量增多，见图13。可见，二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素有协同作用，共载二型胶原蛋白多肽和雷帕霉素的微针能够在主要淋巴器官中重塑免疫平衡，并诱导抗原特异性免疫耐受。
[0076]
综上可知，本发明通过将可溶性成分制备成溶液，不溶性成分制备为混悬液的方式制备基质液，所述混悬液加入模具中形成针尖，干燥后浇筑背衬层溶液，最后脱模得到微针贴片，简化了微针制备步骤。进一步，本发明利用微针贴片可经皮同时递送自身抗原和免疫调节剂，有效诱导了皮肤中耐受型树突状细胞的产生，在主要淋巴器官中降低炎性t细胞，提高调节性t细胞比例，逆转了异常激活的免疫系统，同时降低了关节部位促炎细胞因子，提高了抑炎细胞因子，成功诱导免疫耐受，重塑免疫平衡，显著缓解了关节肿胀(即脚掌厚度)和炎症表现，将其恢复至与健康组相当，可见，本发明对对类风湿性关节炎发挥了预料不到的优异的治疗效果。此外，本发明利用微针贴片对类风湿性关节炎患者这类需要长期用药的群体进行给药，解决了传统口服治疗的毒副作用和注射给药伴随的疼痛和患者低
顺应性的问题。
[0077]
以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

技术特征：
1.一种治疗类风湿性关节炎的微针透皮给药贴片，其特征在于，所述微针贴片包括背衬层和针体，所述针体包括成针基质材料和药物，所述成针基质材料包括生物相容性高分子基质材料，所述药物包括类风湿性关节炎自身抗原和免疫调节剂。2.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎的微针，其特征在于所述生物相容性高分子基质材料包括透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、胶原蛋白、丝素蛋白、明胶、羟丙基甲基纤维素、硫酸软骨素、糊精、聚乙烯醇、羧甲基纤维素、羧甲基壳聚糖、硫酸葡聚糖、糖原、直链淀粉、葡聚糖、羟丙基纤维素、糖苷、壳聚糖、聚酯、聚羟基脂肪酸酯、羟基丁酸戊酸共聚酯、高分子聚丙烯酰胺、聚羟基脂肪酸-聚乙二醇、聚4-羟基酸、聚α-羟基酸、聚β-羟基酸、聚4-羟基丁酸酯、聚4-羟基戊酸酯、聚4-羟基己酸酯、聚酯酰胺、聚已内酯、聚丙交酯、聚乙醇酸交酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚二噁烷酮、聚原酸酯、聚醚酯、聚酐、乙醇酸-三亚甲基碳酸酯共聚物、聚磷酸酯、聚磷酸酯氨基甲酸酯、聚氨基酸、聚氰基丙烯酸酯、聚三亚甲基碳酸酯、聚亚氨基碳酸酯、聚酪氨酸碳酸酯、聚碳酸酯、聚酪氨酸芳基酯、聚亚烷基草酸酯、聚磷酸肌酸及上述材料的衍生物中的至少一种。3.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎的微针，其特征在于，所述类风湿性关节炎自身抗原为胶原蛋白、二型胶原蛋白(collagen typeii,cii)、丝聚蛋白、纤维蛋白原、波形蛋白及其功能性表位肽中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的治疗类风湿性关节炎的微针，其特征在于，所述免疫调节剂为地塞米松、环孢素、他克莫司、雷帕霉素及其衍生物中的一种或多种。5.一种根据权利要求1-4任一项所述治疗类风湿性关节炎微针的制备方法，其特征在于，所述微针的制备方法包括以下步骤：1)将类风湿性关节炎自身抗原溶解于水中得到透明溶液；2)向上述溶液中加入生物相容性高分子基质材料，通过搅拌的方式使其完全溶解；3)加入免疫调节剂，充分搅拌得到混悬液；4)将上述混悬液加入到微针模具中，使用加压气体将溶液压入微针模具中，放入干燥釜中室温干燥2h，形成微针针尖；5)向模具中加入生物相容性高分子基质溶液，干燥2h，形成微针底座，脱模得到微针。6.根据权利要求5所述的微针的制备方法，其特征在于，所述类风湿性关节炎自身抗原溶液中自身抗原的浓度为0.1％-10％(m/v)，所述免疫调节剂的浓度为0.05％-5％(m/v)。7.根据权利要求1-4任一项所述的微针透皮给药贴片在制备诱导免疫耐受、调节免疫平衡药物和/或制备治疗自身免疫性疾病的药物中的应用。8.根据权利要求7所述的微针透皮给药贴片的应用，其特征在于，所述治疗自身免疫疾病的药物为抗类风湿性关节炎药物。

技术总结
本发明公开了一种自身抗原肽和免疫调节剂共载的聚合物微针贴片及其制备方法，并研究了它们逆转类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)免疫功能障碍的能力。制备方法为：将生物相容性高分子基质材料和自身抗原溶解于纯水中，再加入免疫调节剂搅拌得到混悬液。所述混悬液加入模具中形成针尖，干燥后浇筑背衬层溶液，最后脱模得到微针贴片。动物实验表明微针具有足够的机械强度来穿皮递送药物，有效诱导给药部位的耐受性树突状细胞，进一步激活调节性T细胞(Treg)的分化，显著上调抑炎细胞因子，下调促炎细胞、抗体和细胞因子，有效恢复类风湿性关节炎的免疫平衡，最终几乎完全消除了类风湿性关节炎症状和炎症浸润。本发明中的微针制备方法简单快速，有较好的临床转化前景。转化前景。


技术研发人员：孙逊 杜广盛 赵元豪 熊坤
受保护的技术使用者：四川大学
技术研发日：2023.06.07
技术公布日：2023/10/8