复合体I的调节剂的制作方法

复合体i的调节剂
1.本发明涉及具有式(i)的化合物
[0002][0003]
其药物组合物，以及其在治疗中的用途。出乎意料的是，所述化合物调节线粒体复合体i(nadh-醌氧化还原酶)功能，允许治疗或预防与复合体i nadh-醌氧化还原酶介导的氧化应激相关的病症。
[0004]
氧化应激反映了活性氧(ros)的产生和解毒作用之间的不平衡，所述活性氧可以通过ros浓度的升高、细胞信号传导的中断和/或蛋白质、dna或脂质的破坏/氧化而引起毒性作用。氧化应激被认为在许多疾病中起重要作用。
[0005]
多种酶在细胞中产生活性氧(ros)。ros的一个主要来源是通过复合体i进行氧化磷酸化。该酶是一种蛋白质复合体，由39个核基因和7个线粒体基因编码，其普遍表达并将电子从nadh转移到泛醌，与atp合成所需的质子易位相耦连。
[0006]
由于nadh-氧化比泛醌的还原快得多，酶在生理条件下被还原，并且在nadh-结合位点发生电子泄漏(即产生带负电荷的超氧化物o2·-自由基)。因此，uq还原的低效率与o2·-生成的升高相耦连，其可以在几种疾病中观察到，如leigh综合征、lhon病、amd或帕金森病等。
[0007]
复合体i产生的细胞毒性o2·-主要通过线粒体超氧化物歧化酶(sod2)解毒，产生过氧化氢，其通过多种酶解毒，如过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧还原蛋白等。鉴于复合体i在氧化磷酸化和氧化还原稳态中的至关重要性，发现可以抑制ros形成的试剂作为可能的治疗剂是非常令人感兴趣的。
[0008]
本文中未具体定义的术语应由本领域技术人员根据公开及上下文赋予它们含义。然而，说明书中所使用的，除非另有相反规定，否则以下术语具有所示含义，并遵守以下约定。
[0009]
在下面定义的基团、自由基或结构中，碳原子的数量通常在基团之前指明，例如，c1-6-烷基是指具有1-6个碳原子的烷基基团或自由基。通常，在ho、h2n、(o)s、(o)2s、nc(氰基)、hooc、f3c等基团中，本领域技术人员可以通过基团本身的自由价知道自由基与分子的连接点。对于包含两个或多个子基团的组合基团，最后命名的子基团是自由基连接点，例如，取代基“芳基-c1-3-烷基”是指芳基与c1-3-烷基基团结合，后者与核心或与连接该取代基的基团结合。
[0010]
在本发明的化合物以化学名称的形式且以化学式描述的情况下，如果有任何差异，则以化学式为准。星号(*)可用于子式中以指示连接到所定义的核心分子的键。
[0011]
本文使用的术语“取代”是指指定原子上的任何一个或多个氢被来自指定组中的
选项所替换，条件是不超过指定原子的正常化合价，并且取代产生稳定的化合物。
[0012]
除非特别指出，否则在说明书和权利要求书通篇中，给定的化学式或名称应包括互变异构体和所有立体、光学和几何异构体(例如对映异构体、非对映异构体、e/z异构体等)及其外消旋体，以及不同比例的不同的对映异构体的混合物，非对映异构体混合物，或存在这些异构体和对映异构体时的任何前述形式的混合物，以及盐，包括其药学上可接受的盐及其溶剂化物，例如水合物，包括游离化合物的溶剂化物或化合物的盐的溶剂化物。
[0013]
通常，根据本领域技术人员已知的合成原理，例如通过相应混合物的分离，通过使用立体化学纯的起始材料和/或通过立体选择性合成，可以获得基本上纯的立体异构体。本领域已知如何制备光学活性形式，例如通过外消旋体形式的拆分或通过合成，例如从光学活性的起始材料开始和/或通过使用手性试剂。
[0014]
本发明的对映体纯化合物或中间体可以通过不对称合成来制备，例如通过制备和随后分离合适的非对映体化合物或中间体，其可以通过已知方法进行分离(例如通过色谱分离或结晶)和/或通过使用手性试剂，例如手性起始材料，手性催化剂或手性助剂。
[0015]
此外，本领域技术人员知晓如何从相应的外消旋体混合物制备对映体纯化合物，例如通过在手性固定相上色谱分离相应的外消旋体混合物；或通过使用合适的拆分剂拆分外消旋体混合物，例如通过外消旋体化合物与光学活性酸或碱形成非对映异构体盐，随后拆分盐并从盐中释放目标化合物；或通过用光学活性手性辅助试剂衍生相应的外消旋体化合物，随后分离非对映异构体并去除手性辅助基团；或通过外消旋体的动力学拆分(例如通过酶促拆分)；通过在合适的条件下从对映体晶体的聚集物中进行对映选择性结晶；或通过在光学活性手性助剂存在下在合适的溶剂中(分步)结晶。
[0016]
术语卤素通常表示氟、氯、溴和碘。
[0017]
术语“烷基”，单独或与另一个自由基组合，表示具有1-6个c原子的非环状的、饱和的、支链的或直链的烃基自由基。例如，术语c1-5-烷基包括自由基h3c-、h3c-ch2-、h3c-ch2-ch2-、h3c-ch(ch3)-、h3c-ch2-ch2-ch2-、h3c-ch2-ch(ch3)-、h3c-ch(ch3)-ch2-、h3c-c(ch3)2-、h3c-ch2-ch2-ch2-ch2-、h3c-ch2-ch2-ch(ch3)-、h3c-ch2-ch(ch3)-ch2-、h3c-ch(ch3)-ch2-ch2-、h3c-ch2-c(ch3)2-、h3c-c(ch3)2-ch2-、h3c-ch(ch3)-ch(ch3)-和h3c-ch2-ch(ch2ch3)-。
[0018]
术语“环烷基”，单独或与另一个自由基组合，表示具有3至8个c原子的环状的、饱和的、无支链烃基自由基，优选3至5个c原子。例如，术语c3-8-环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基，以及术语c3-5-环烷基包括环丙基、环丁基和环戊基。
[0019]
将术语“卤代”添加到“烷基”或“环烷基”基团(饱和的或不饱和的)得到这些烷基或环烷基基团，其中一个或多个氢原子被卤原子取代，所述卤原子选自氟、氯或溴，优选氟和氯，特别优选氟。示例包括：h2fc-、hf2c-和f3c-。
[0020]
本文所使用的术语“芳基”，单独或与另一个自由基组合，表示含有6个碳原子的碳环芳香族单环基团，其任选地进一步稠合至第二个五元或六元的任选芳香族、饱和的或不饱和的碳环基团。芳基包括但不限于苯基、茚满基、茚基、萘基、蒽基、菲基、四氢萘基和二氢萘基。
[0021]
术语“杂环基”是指含有一个或多个选自n、o或s(o)r的杂原子的由3至14个环原子构成的饱和或不饱和的单环或多环体系，包括芳香环体系，其中r＝0、1或2，其中杂原子均
不是芳香环的一部分。术语“杂环基”旨在包括所有可能的同分异构形式。
[0022]
因此，术语“杂环基”包括以下示例性结构，其未被描述为自由基，因为只要保持适当的价态，每种形式都任选地通过与任何原子相连的共价键进行接附：
[0023]
[0024]
[0025][0026]
特别地，术语“杂环基”包括示例性化合物1至175和1001至1178中存在的环系统。
[0027]
术语“杂芳基”是指含有一个或多个选自n、o或s的杂原子的单环-芳香环体系，该体系由5至6个环原子构成，其中至少一个杂原子是芳香环的一部分。术语“杂芳基”旨在包括所有可能的同分异构形式。
[0028]
因此，术语“杂芳基”包括以下示例性结构，其未被描述为自由基，因为只要保持适当的价态，每种形式都任选地通过与任何原子相连的共价键进行接附：
[0029][0030]
本文所使用的短语“药学上可接受的”是指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内，适合于与人类和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，并且与合理的获益/风险比相匹配。
[0031]
本文所使用的“药学上可接受的盐”是指公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸盐或碱盐来修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的矿物的或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱性的或有机盐；等等。
[0032]
例如，这些盐包括来自苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、龙胆酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、4-甲基-苯磺酸、磷酸、水杨酸、琥珀酸、硫酸和酒石酸的盐。
[0033]
其它药学上可接受的盐可以用来自氨、l-精氨酸、钙、2,2'-亚氨基二乙醇、l-赖氨
酸、镁、n-甲基-d-葡糖胺、钾、钠和三(羟甲基)-氨基甲烷的阳离子形成。
[0034]
本发明的药学上可接受的盐可以由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸形式或游离碱形式与足量的合适的碱或酸在水中或在有机稀释剂如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈或其混合物中反应来制备。
[0035]
除上述提到的那些以外的其他酸的盐，例如其可用于纯化或分离本发明的化合物(例如三氟乙酸盐)，也构成本发明的一部分。
[0036]
上面给出的许多术语可以在式或基团的定义中重复使用，并且在每种情况下具有彼此独立的上面给出的含义之一。
[0037]
本发明提供一种式(i)的化合物或其盐
[0038][0039]
其中：
[0040]
r1是未取代的或被meo取代的c1-4-烷基；未取代的四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁基、二氧杂环庚基、吡咯烷基或哌啶基；或吡咯烷基或哌啶基，其中氮原子经甲基、异丙基、氧杂环丁基、乙氧羰基、乙酰基或三氟乙酰基取代；
[0041]
r2是5元、6元或7元未取代的或取代的含有1或2个选自o或n的杂原子的环，或未取代的或取代的含有1至3个选自n或o的杂原子的由4至11个环原子构成的螺环杂环基，所述环或螺环杂环基通过c＝c双键结合在式(i)中，并且所述环或螺环杂环基中的一个n原子可以被甲基、异丙基、乙酰基、苄氧羰基、苯基、氧杂环丁基或四氢吡喃基取代，并且其中一个或多个c原子可以被甲基或-oh取代；
[0042]
r3或r4各自独立地为氢；未取代的或被一个或多个f、甲氧基、未取代的或被一个或多个f取代的c3-8-环烷基取代的c1-6-烷基；芳基；由5至6个环原子构成的杂芳基，例如未取代的或取代的5-吡唑基，或由3至6个环原子构成的杂环基，其选自由氧杂环丁基、四氢吡喃基和吡咯烷基组成的组，所述杂环基是未取代的或被c1-6烷基、乙酰基、四氢呋喃基、氧杂环丁基取代；或羟乙基乙酰基；
[0043]
或r3和r4与附着的n一起形成杂环基环，所述杂环基环选自由吗啉基和吡咯烷基组成的组，所述吗啉基和吡咯烷基均为未取代的或被c1-6-烷基、f或羟基取代。
[0044]
式(i)中r1的代表性实施方案是
[0045]
其是未取代的或被meo取代；
[0046]
其是未取代的或氮原子被代的或氮原子被取代。
[0047]
式(i)中结构要素的代表性实施方案是
[0048]
[0049]
[0050][0051]
式(i)中含有r3和r4的氨基的代表性实施方案是
[0052]
[0053][0054]
式(i)中r1的单独实施方案是
[0055]
[0056][0057]
式(i)中r1的优选实施方案为四氢吡喃基和二氧杂环庚基。
[0058]
式(i)中通过c＝c双键结合的结构要素的单独实施方案是含有选自o或n的2个杂原子的6元或7元环，其中一个或两个n原子可以被甲基、异丙基、乙酰基、苄氧羰基、苯基、氧杂环丁基或四氢吡喃基取代，并且其中一个或者多个c原子可以被甲基或-oh取代。
[0059]
式(i)中的其他单独实施方案为
[0060][0061][0062]
式(i)中含有r3和r4的氨基的单独实施方案包括r3为氢而r4为未取代的或被氟(f)取代的异丙基、环丁基或环戊基。
[0063]
式(i)中含有r3和r4的氨基的其他单独实施方案为
[0064]
其为未取代的或被一个或多个f取代。
[0065]
本发明的化合物可以用一种方法制备，其中
[0066]
第一步使化合物(2-氟-5-硝基-苯基)-乙酸(化合物ii)
[0067][0068]
在合适的溶剂如二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、n-甲基-吡咯烷酮、乙腈、dmso、二氯甲烷、甲苯等中在高温与胺r1-nh2反应，生成化合物5-硝基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iii)
[0069][0070]
在接下来的步骤中，使5-硝基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iii)在高温在微波中在无溶剂的情况下或在合适的溶剂如哌啶中与合适的亲电试剂进行缩合，得到5-硝基-3-亚基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iv)
[0071][0072]
合适的亲电试剂可以是亚氨酸酯、酮和缩醛，例如5-甲氧基-3,6-二氢-2h-噁嗪、四氢吡喃-4-酮或2,2-二甲氧基-1-甲基-1-吡咯烷，它们是市售的或由本领域技术人员容易从市售的材料制备的。例如，亚氨酸酯可由合适的酰胺在合适的溶剂如二氯甲烷中通过与三甲基氧鎓四氟硼酸盐发生o-甲基化作用制备。
[0073]
下一步，化合物5-硝基-3-亚基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iv)被还原为5-氨基-3-亚基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物v)。
[0074][0075]
所述还原反应可以通过在高压下使用氢气和合适的催化剂(如雷尼镍)在合适的溶剂如甲醇中进行催化加氢来实现。
[0076]
为得到最终的式(i)化合物，可使式(v)化合物与合适的醛或酮和还原剂如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠等在合适的溶剂如加入有机酸如乙酸、ptsoh等的甲醇中反应。
[0077]
或者，可使胺(v)与携带离去基团的合适亲电试剂在合适的溶剂如dmf等中及在合适的碱如碳酸钾存在下反应发生取代反应，所述离去基团如cl、br、i、甲基磺酰基酯、三氟磺酰基酯、甲苯磺酰基酯等。
[0078]
在上述化合物中，可制备盐形式，其同样是本发明的主题，特别是药学上可接受的盐。其药物的制备是本发明的另一主题。
[0079]
根据本发明的化合物可用于人类患者的药物或药物组合物中。上述组合物可以在人体内用于临床治疗或诊断疾病。
[0080]
类似地，根据本发明的化合物可用于动物的药物或药物组合物。上述组合物可以在动物体内用于临床治疗或诊断动物的疾病。
[0081]
特别地，本发明的化合物可用于制备用于治疗或预防下述人类病症的药物组合物或药物。
[0082]
式1化合物的合适给药制剂对本领域普通技术人员来说是显而易见的，并且包括例如片剂、药丸、胶囊、栓剂、含片、锭剂、溶液、糖浆、酏剂、药囊、注射剂、吸入剂和粉末等。通过将一种或多种根据式i的化合物与已知的辅料混合，例如惰性稀释剂、载体、崩解剂、佐剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂，得到合适的片剂。
[0083]
上述药物组合物或药物包含0.1至2000毫克的治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。
[0084]
除了根据本发明的化合物之外，上述药物包括药学上可接受的载体。
[0085]
本发明涉及可用于治疗疾病、紊乱和病症的化合物，其中通过降低复合体i产生的ros来抑制氧化应激具有治疗益处。这包括但不限于治疗和/或预防神经性的或神经退行性病症或精神病症，以及非神经元性的病症，如心血管疾病、缺血再灌注损伤、癌症以及肺和线粒体疾病。
[0086]
神经性的或神经退行性病症包括例如帕金森氏症、阿尔茨海默氏症(ad)、亨廷顿舞蹈症、肌萎缩性侧索硬化症(als)、涉及视网膜功能障碍的疾病，如视网膜病变和年龄相关性黄斑变性(amd)，以及由创伤或其他损伤包括衰老引起的其他大脑疾病。
[0087]
线粒体疾病包括莱伯氏遗传性视神经病变(lhon)、leigh综合征、红纤维不规则性肌阵挛性癫痫(merrf)、线粒体肌病、脑肌病、乳酸性酸中毒、中风样症状(melas)或糖尿病和耳聋(dad)。
[0088]
精神病症包括抑郁症(如重度抑郁症、重度抑郁症障碍、精神抑郁症、情绪不良、产后抑郁症和躁郁症)，以及与恐惧相关的疾病(如创伤后应激障碍、恐慌症、惧旷症、社交恐惧症、广泛性焦虑症、恐慌症、社交焦虑症、强迫症和分离焦虑症)，慢性疲劳综合征和自闭症。
[0089]
疼痛障碍包括痛觉性疼痛、炎症性疼痛、癌症疼痛和神经性疼痛(如癌症疼痛、骨关节炎疼痛、类风湿性关节炎疼痛、带状疱疹后神经痛、烧伤引起的疼痛和其他适应症)。疼痛可以是慢性的或急性的。
[0090]
非神经元病症包括肺部疾病，如慢性阻塞性肺病(copd)、特发性肺纤维化(ipf)和其他纤维化疾病、肾病、蛋白尿肾病、肝脏疾病，如与胆汁阻塞相关的肝脏血脂异常、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪肝(nafld)、瘙痒，与心血管系统或血管通透性功能障碍相关的病症，例如心力衰竭、肺动脉高压、急性呼吸窘迫综合征(ards)、适应不良的心脏重塑、与适应不良的血压控制相关的病症如高血压或低血压，肝炎和原生动物感染等传染病(包括疟疾、非洲昏睡病和美洲锥虫病)、肌少症和其他骨骼肌疾病、紊乱和其他病症，如糖尿病、胰岛素抵抗、代谢综合征和肥胖。
[0091]
本发明化合物合适的日剂量可以在0.1至2000毫克之间变化。
[0092]
实际的药物有效量或治疗剂量取决于本领域技术人员已知的因素，例如患者的年龄和体重、给药途径和疾病的严重程度。在任何情况下，该药物物质的给药剂量和给药方式允许递送适合患者病情的药物有效量。
[0093]
用于施用本发明化合物的合适组合物可由本领域普通技术人员生产，并包括例如片剂、药丸、胶囊、栓剂、含片、锭剂、溶液、糖浆、酏剂、药囊、注射剂、吸入剂和粉末。药学活性化合物的含量可在组合物整体的0.1至95重量％的范围内变化，优选5.0至90重量％。
[0094]
合适的片剂可以通过将本发明的化合物与已知的辅料(例如惰性稀释剂、载体、崩解剂、佐剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂)混合并将所得混合物压制成片剂来制得。
[0095]
本发明的化合物可作为单一活性药物成分使用，或与本领域已知的其他活性药物成分组合使用，用于治疗本发明关注的任何适应症。
[0096]
下表列出的化合物及其特征是为了说明本发明，而不是定义其范围。
[0097]
[0098]
[0099]
[0100]
[0101]
[0102]
[0103]
[0104]
[0105]
[0106]
[0107]
[0108]
[0109]
[0110]
[0111]
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[0116]
[0117]
[0118]
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]
[0124]
[0125]
[0126]
[0127]
[0128]
[0129]
[0130]
[0131]
[0132]
[0133]
[0134]
[0135]
[0136]
[0137]
[0138]
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[0140]
[0141]
[0142]
[0143]
[0144]
[0145]
[0146]
[0147]
[0148][0149]
实验部分
[0150]
以下实施例旨在说明本发明，而不限制其范围。
[0151]
通常，制备的化合物的熔点、ir、1h-nmr和/或质谱均已获得。除非另有说明，否则使用现成的硅胶60f254tlc板(e-.merck，darmstadt，货号1.05714)在无展开槽饱和的情况下获得rf值。洗脱液的比例是指所讨论的溶剂的体积单位。使用e.merck，darmstadt提供的硅胶(硅胶60，0.040-0.063mm)，货号1.09385.2500)进行色谱纯化。
[0152]
以下缩写可用于以下实施例：
[0153]
boctbuoc(o)
[0154]
ch环己烷
[0155]
cm二氯甲烷
[0156]
dipea二异丙基胺
[0157]
dmso二甲基亚砜
[0158]
dmfn,n-二甲基甲酰胺
[0159]
ea乙酸乙酯
[0160]
esi电喷射离子化
[0161]
h小时
[0162]
hplc高效液相色谱法
[0163]
m摩尔浓度
[0164]
meoh甲醇
[0165]
etoh乙醇
[0166]
min分钟
[0167]
ml毫升
[0168]
μl微升
[0169]
mmol毫摩尔
[0170]
μmol微摩尔
[0171]
mplc中压液相色谱法
[0172]
ms质谱
[0173]
nmpn-甲基-吡咯烷酮
[0174]
pd/c钯碳
[0175]
pe石油醚
[0176]
rf保留因子
[0177]
rt保留时间
[0178]
sat.饱和的
[0179]
tert.第三的
[0180]
tlc薄层色谱法
[0181]
tfa三氟乙酸
[0182]
thf四氢呋喃
[0183]
tbme叔丁基甲基醚
[0184]
uplc超高效液相色谱法
[0185]
所有提到的盐水都是指饱和的氯化钠水溶液。除非另有说明，否则所有温度均以℃(摄氏度)表示。除非另有说明，所有的反应都不是在室温在惰性气体下进行的。
实施例：
[0186]
实施例1：hplc/uplc方法
[0187]
方法a
[0188][0189]
方法b
[0190][0191]
方法c
[0192][0193][0194]
方法d
[0195][0196]
方法e
[0197][0198]
方法f
[0199][0200][0201]
方法g
[0202][0203]
方法h
[0204][0205]
方法i
[0206][0207]
方法j
[0208]
[0209]
方法k
[0210][0211][0212]
方法l
[0213][0214]
方法m
[0215][0216]
方法n
[0217][0218][0219]
方法o
[0220][0221]
方法p
[0222][0223]
实施例2：中间体a1、a2、a4、a5、a7至a9和a11的合成
[0224]
中间体a1：
[0225][0226]
(2-氟-5-硝基-苯基)乙酸(4.60克；23.10毫摩尔)和四氢呋喃-3-基胺(10.0克；114.78毫摩尔)/dmso(20毫升)，在45℃搅拌过夜。加入盐酸(水溶液；2m；92.4毫升；184.80毫摩尔)。在45℃搅拌1.5小时后，过滤生成的析出物，用水洗涤并干燥。
[0227]
ms(esi
+
)：m/z＝249[m+h]
+
[0228]
hplc(方法b)：r
t
＝1.0分钟
[0229]
以下中间体以类似中间体a1的方式制备：
[0230]
[0231][0232]
实施例3：中间体a3的合成
[0233]
步骤1：
[0234]
将(2-氟-5-硝基-苯基)-乙酸(500毫克；2.51毫摩尔)和氧杂环丁-3-基胺(936毫克；12.81毫摩尔)溶于dmso(2毫升)，45℃搅拌过夜。用制备型高效液相色谱纯化该混合物(洗脱液a：水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)。
[0235]
ms(esi
+
)：m/z＝251[m-h]-[0236]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝0.66分钟
[0237]
步骤2：
[0238]
将中间体a3步骤1(462毫克；0.92毫摩尔)和tbtu(0.71克；2.20毫摩尔)溶于dmf(8毫升)，在室温搅拌过夜。由此产生的析出物过滤并干燥。
[0239]
ms(esi
+
)：m/z＝235[m+h]
+
[0240]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝0.95分钟
[0241]
实施例4：中间体a6的合成
[0242][0243]
步骤1：
[0244]
将1,3-二氢-1-(哌啶-4-基)-(2h)-吲哚-2-酮(5.51克；25.49毫摩尔)和三乙胺(7.16毫升；50.99毫摩尔)溶于二氯甲烷(30毫升)，在冰浴中冷却。逐滴加入三氟乙酸酐(4.25毫升；30.59毫摩尔)。混合物在室温搅拌2小时。将混合物用nahco3(水溶液；9％；20毫升)稀释。在气体产生停止后，用二氯甲烷和水进一步稀释混合物。有机层分离、干燥和蒸发。用中压液相色谱(二氯甲烷/甲醇；1/0-》97/3)纯化残余物。
[0245]
ms(esi
+
)：m/z＝313[m+h]
+
[0246]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.25分钟
[0247]
步骤2：
[0248]
中间体a6步骤1(8.02克；25.68毫摩尔)溶于浓硫酸(45毫升)，冷却至-5℃。逐滴加入冷却的浓硫酸(15毫升)和浓硝酸(1.80毫升；28.25毫摩尔)的混合物。在-5℃搅拌1小时后，将混合物倒入冰水中。由此产生的析出物被过滤并干燥。将残余物吸收在二氯甲烷中。用碳酸氢钠(水溶液；9％)洗涤有机层，分离，干燥和蒸发。
[0249]
ms(esi
+
)：m/z＝358[m+h]
+
[0250]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.22分钟
[0251]
实施例5：中间体a10的合成
[0252][0253]
向硝酸钠(12.71克；149.48毫摩尔)和浓硫酸(22.9毫升；407.68毫摩尔)的冷却混合物中逐滴加入额外的浓硫酸(40毫升)。1-甲基-1,3-二氢吲哚-2-酮(20.0克；135.89毫摩尔)溶于浓硫酸(120毫升)，逐滴加入到冷却后的上述硝酸硫酸混合物中。将混合物升至室
温过夜。将混合物倒入冰水里。过滤产生的析出物，用水洗涤并干燥。残余物溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤，分离，干燥和蒸发。
[0254]
ms(esi
+
)：m/z＝193[m+h]
+
[0255]
高效液相色谱(方法h)：rt＝0.90分钟
[0256]
实施例6：中间体b1、b2、b4、b6、b7、b9和b10的合成
[0257]
以下中间体是根据所提供的参考资料制备的或可在商业上得到的：
[0258]
[0259]
[0260][0261]
实施例7：中间体b3、b5和b8的合成
[0262]
中间体b3：
[0263][0264]
将2-氧杂-6-氮杂-螺[3.4]辛烷-7-酮(1.00克；7.87毫摩尔)和三甲基氧鎓四氟硼酸盐(1.28克；8.65毫摩尔)溶于二氯甲烷(120毫升)，在室温搅拌过夜。混合物用饱和碳酸氢钠溶液稀释，直到不产生气体为止。有机层被分离、干燥和蒸发。
[0265]
ms(esi
+
)：m/z＝142[m+h]
+
[0266]
下列中间体以与中间体b3类似的方式制备：
[0267]
[0268][0269]
实施例8：中间体c1-c3、c5-c8、c10-c12、c14、c16、c18、c20-c25、c27-c29和c32-c36的合成
[0270]
中间体c1：
[0271][0272]
将中间体a1(700毫克；2.82毫摩尔)和中间b1(714毫克；6.20毫摩尔)在130℃在微波中搅拌20分钟。产生的析出物悬浮在甲醇中，过滤并干燥。
[0273]
ms(esi
+
)：m/z＝332[m+h]
+
[0274]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝1.29分钟
[0275]
以类似中间体c1的方法制备了下列中间体：
[0276]
[0277]
[0278]
[0279]
[0280]
[0281]
[0282]
[0283]
[0284]
[0285][0286]
实施例9：中间体c4和c31的合成
[0287]
中间体c4：
[0288][0289]
将中间体a4(1.50克；6.81毫摩尔)和四氢-4h-吡喃-4-酮(13.0毫升；140.76毫摩
尔)溶于哌啶(1.36毫升；13.62毫摩尔)，在100℃在微波中搅拌15分钟。蒸发溶剂。残余物在叔丁基甲基醚中搅拌。析出物被过滤并干燥。
[0290]
ms(esi
+
)：m/z＝303[m+h]
+
[0291]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.40分钟
[0292]
下列中间体是用与中间体c4类似的方法制备的：
[0293][0294]
实施例10：中间体c9和c13的合成
[0295]
中间体c9：
[0296][0297]
下面的反应是在氮气中进行的。
[0298]
将中间体a2(225毫克；1.24毫摩尔)和2,2-二甲氧基-1-甲基吡咯烷(450毫克；3.10毫摩尔)溶于氯仿(2.5毫升)，回流搅拌3小时。加入额外的2,2-二甲氧基-1-甲基-吡咯烷(1.2当量)，混合物在65℃搅拌过夜。混合物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。有机层被分离，用盐水洗涤，干燥和蒸发。残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0299]
ms(esi
+
)：m/z＝344[m+h]
+
[0300]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.26分钟
[0301]
以类似中间体c9的方法制备了下列中间体：
[0302][0303]
实施例11：中间体c15和c37的合成
[0304]
中间体c15：
[0305][0306]
将中间体c14(81毫克；0.16毫摩尔)溶于thf(5毫升)和碳酸钾(51毫克；0.37毫摩尔)溶于水(1.5毫升)，在40℃搅拌2h，混合物用盐水和ea稀释，有机层被分离，干燥和蒸发。
[0307]
ms(esi
+
)：m/z＝345[m+h]
+
[0308]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝0.9min
[0309]
以类似中间体c15的方法制备了以下中间体：
[0310][0311]
实施例12：中间体c17的合成
[0312][0313]
将中间体c16(800毫克；1.86毫摩尔)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(1/1；15毫升)，在室温搅拌1h。溶剂蒸发。残余物溶于二氯甲烷，用氢氧化钠(水溶液；1m)洗涤。有机层被分离、干燥和蒸发。
[0314]
ms(esi
+
)：m/z＝331[m+h]
+
[0315]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝0.91分钟
[0316]
实施例13：中间体c19的合成
[0317][0318]
步骤1：
[0319]
将中间体c18(2.70克；5.71毫摩尔)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(1/1；30毫升)，在室温搅拌1h。溶剂蒸发。
[0320]
ms(esi
+
)：m/z＝373[m+h]
+
[0321]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝1.15min
[0322]
步骤2：
[0323]
中间体c19步骤1(600毫克；1.23毫摩尔)、丙酮(448微升；6.17毫摩尔)和冰醋酸(182微升；3.33毫摩尔)溶于meoh(20毫升)中，在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(155毫克，2.47毫摩尔)，在室温搅拌2小时。额外加入丙酮(2毫升)。搅拌过夜后，用饱和碳酸氢钠溶液稀释混合物。有机层被分离、干燥和蒸发。
[0324]
ms(esi
+
)：m/z＝415[m+h]
+
[0325]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝1.12min
[0326]
实施例14：中间体c26的合成
[0327][0328]
步骤1：
[0329]
将中间体c18(2.70克；5.71毫摩尔)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(1/1；30毫升)，在室温搅拌1h。溶剂蒸发。
[0330]
ms(esi
+
)：m/z＝373[m+h]
+
[0331]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝1.15min
[0332]
步骤2：
[0333]
中间体c26步骤1(300毫克；0.62毫摩尔)、乙酸酐(87微升；0.93毫摩尔)和三乙胺(316微升；1.85毫摩尔)溶于二氯甲烷(7毫升)中，在室温搅拌1小时。用饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷稀释混合物。有机层被分离、干燥和蒸发。
[0334]
ms(esi
+
)：m/z＝415[m+h]
+
[0335]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝1.40分钟
[0336]
实施例15：中间体c30的合成
[0337][0338]
步骤1：
[0339]
将中间体c29(500毫克；0.87毫摩尔)溶于四氢呋喃(17毫升)和碳酸钾(157毫克；1.13毫摩尔)溶于水中(12毫升)，在40℃搅拌5小时。混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用ea萃取。有机层用盐水洗涤，分离，干燥和蒸发。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0340]
ms(esi
+
)：m/z＝478[m+h]
+
[0341]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.46分钟
[0342]
步骤2：
[0343]
中间体c30步骤1(118毫克；0.25毫摩尔)、丙酮(90微升；1.24毫摩尔)和冰醋酸(36微升；0.67毫摩尔)溶于甲醇(8毫升)，在室温搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(31毫克；0.49毫摩尔)，在40℃搅拌2天。将混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)和二氯甲烷稀释。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物在甲醇中搅拌，过滤并干燥。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0344]
ms(esi
+
)：m/z＝520[m+h]
+
[0345]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.58分钟
[0346]
实施例16：中间体c38的合成
[0347][0348]
将中间体c29(203毫克；0.35毫摩尔)溶于四氢呋喃(7毫升)和碳酸钾(64毫克；0.46毫摩尔)溶于水(5毫升)，在40℃搅拌3天。将混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用ea萃取。有机层用盐水洗涤、分离、干燥和蒸发。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0349]
ms(esi+)：m/z＝494[m+h]
+
[0350]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.38分钟
[0351]
实施例17：中间体d1-d12、d15-d26和d28-d31的合成
[0352]
中间体d1
[0353][0354]
将中间体c1(862毫克；2.60毫摩尔)和雷尼镍(150毫克)溶于甲醇(25毫升)和四氢呋喃(50毫升)中，在parr装置中氢化(rt；50psi；4.5小时)，过滤掉催化剂，蒸发溶剂。
[0355]
ms(esi
+
)：m/z＝302[m+h]
+
[0356]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝0.67分钟
[0357]
下列中间体以与中间体d1类似的方法制备：
[0358]
[0359]
[0360]
[0361]
[0362]
[0363]
[0364]
[0365]
[0366]
[0367][0368]
[0369]
实施例18：中间体d13的合成
[0370][0371]
步骤1：
[0372]
将中间体c17(270毫克；0.82毫摩尔)、乙酸酐(85微升；0.90毫摩尔)和dipea(423微升；2.46毫摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)，在室温搅拌15分钟，蒸发溶剂。
[0373]
ms(esi
+
)：m/z＝373[m+h]
+
[0374]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.17min
[0375]
步骤2：
[0376]
中间体d13步骤1(430毫克；0.58毫摩尔)和雷尼镍(50毫克)溶于甲醇(5毫升)和thf(10毫升)，在parr装置中氢化(rt；50psi；17h)。过滤催化剂，蒸发溶剂。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.1％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0377]
ms(esi
+
)：m/z＝343[m+h]
+
[0378]
实施例19：中间体d14的合成
[0379][0380]
步骤1：
[0381]
将中间体c17(489毫克；1.48毫摩尔)，氧杂环丁-3-酮(160毫克；2.22毫摩尔)和冰醋酸(218微升；4.00毫摩尔)溶于甲醇(20毫升)中，在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(186毫克；2.96毫摩尔)，将混合物在室温搅拌1h。加入四氢呋喃(5毫升)。搅拌过夜后，加入
额外的氰基硼氢化钠(186毫克；2.96毫摩尔)。混合物用水稀释。蒸发有机溶剂，用二氯甲烷萃取水层。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物在甲醇中搅拌，过滤并干燥。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.1％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0382]
ms(esi
+
)：m/z＝387[m+h]
+
[0383]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.24分钟
[0384]
步骤2：
[0385]
中间体d14步骤1(164毫克；0.42毫摩尔)和雷尼镍(50毫克)溶于甲醇(5毫升)和thf(10毫升)中，在parr装置中氢化(rt；50psi；4小时)。过滤催化剂，蒸发溶剂。
[0386]
ms(esi
+
)：m/z＝357[m+h]
+
[0387]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝0.43分钟
[0388]
实施例20：中间体d27的合成
[0389][0390]
中间体c31(448毫克；1.30毫摩尔)和铁粉(392毫克；7.02毫摩尔)在水(14毫升)和乙醇(29毫升)中，加热回流。逐滴加入冰醋酸(0.79毫升；13.78毫摩尔)，混合物搅拌1h，蒸发有机溶剂，将残余物溶于二氯甲烷和水中。混合物用氢氧化钠(水溶液；5毫升)碱化。混合物通过硅藻土过滤。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物在甲醇/乙腈中搅拌，过滤，干燥。
[0391]
ms(esi
+
)：m/z＝315[m+h]
+
[0392]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.07分钟
[0393]
实施例21：中间体e1的合成
[0394][0395]
中间体a10(11.0克；57.24毫摩尔)和pd/c(10％；1.0克)溶于二氯甲烷(200毫升)，在parr装置中氢化(rt；50psi；5小时)。额外加入pd/c(10％；1.0克)和甲醇(100毫升)，混合物氢化3小时。加入甲醛(水溶液；37％；22.70毫升；304.90毫摩尔)，混合物在无氢气压下搅拌10分钟，再进一步在氢气压下搅拌3小时。催化剂过滤，蒸发溶剂。残余物溶于氢氧化钠
(水溶液；1m)，用二氯甲烷萃取。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物用中压液相色谱法(二氯甲烷/甲醇＝98/2)纯化。
[0396]
ms(esi
+
)：m/z＝191[m+h]
+
[0397]
高效液相色谱法(方法p)：r
t
＝0.25分钟
[0398]
实施例22：中间体f1、f2和f4的合成
[0399]
中间体f1
[0400][0401]
步骤1：
[0402]
将中间体d19(430毫克；1.10毫摩尔)、1,4-二碘-丁烷(145微升；1.10毫摩尔)和碳酸钾(303毫克；2.19毫摩尔)溶于dmf(12毫升)，在70℃搅拌2小时。室温搅拌过夜后，混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用ea萃取。有机层用盐水洗涤、分离、干燥和蒸发。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0403]
ms(esi
+
)：m/z＝447[m+h]
+
[0404]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.57分钟
[0405]
步骤2：
[0406]
中间体f1步骤1(203毫克；0.46毫摩尔)和pd/c(10％；20毫克)溶于甲醇(20毫升)和四氢呋喃(10毫升)中，在parr装置中氢化(rt；50psi；1小时)。额外加入pd/c(10％)，混合物进行氢化。过滤催化剂，蒸发溶剂。
[0407]
ms(esi
+
)：m/z＝313[m+h]+
[0408]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.33分钟
[0409]
下面的中间体是用类似中间体f1的方法制备的：
[0410][0411]
实施例23：中间体f3和f5的合成
[0412]
中间体f3
[0413][0414]
步骤1：
[0415]
将中间d29(0.78克；1.74毫摩尔)、丙酮(631微升；8.70毫摩尔)和冰醋酸(256微升；4.70毫摩尔)溶于甲醇(20毫升)，在室温搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(219毫克；3.48
毫摩尔)，将混合物在室温搅拌过夜。混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用二氯甲烷萃取。有机层被分离、干燥和蒸发。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0416]
ms(esi
+
)：m/z＝491[m+h]
+
[0417]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.49分钟
[0418]
步骤2：
[0419]
中间体f3步骤1(348毫克；0.71毫摩尔)和pd/c(10％；35毫克)溶于甲醇(14毫升)和四氢呋喃(10毫升)中，在parr装置中氢化(rt；50psi；1.25小时)，过滤催化剂，蒸发溶剂。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0420]
ms(esi
+
)：m/z＝357[m+h]
+
[0421]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.19分钟
[0422]
下面的中间体以类似中间体f3的方式制备：
[0423][0424][0425]
实施例24：中间体g1的合成
[0426][0427]
下面的反应是在氩气下进行的。
[0428]
将中间体e1(700毫克；3.68毫摩尔)和二硫化碳(0.24毫升；4.05毫摩尔)溶于dmf(15毫升)，在冰浴中冷却。加入氢化钠(55％在矿物油中；0.32克；7.36毫摩尔)，混合物搅拌20分钟。将混合物温热至室温。在室温搅拌1小时后，将混合物倒入冰水中。产生的析出物被滤出，用水洗涤并干燥。
[0429]
ms(esi
+
)：m/z＝295[m+h]
+
[0430]
高效液相色谱法(方法h)：r
t
＝1.05分钟
[0431]
实施例25：化合物1001至1123的合成
[0432]
化合物1001：
[0433][0434]
将中间d1(150毫克；0.50毫摩尔)、二氢呋喃-3-酮(58微升；0.75毫摩尔)和冰醋酸(73微升；1.34毫摩尔)溶于甲醇(3毫升)，室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(63毫克；1.00毫摩尔)，混合物室温搅拌1小时。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0435]
ms(esi
+
)：m/z＝372[m+h]
+
[0436]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.11分钟
[0437]
与化合物1001的制备类似，得到下列化合物：
[0438]
[0439]
[0440]
[0441]
[0442]
[0443]
[0444]
[0445]
[0446]
[0447]
[0448]
[0449]
[0450]
[0451]
[0452]
[0453]
[0454]
[0455]
[0456]
[0457]
[0458]
[0459]
[0460]
[0461]
[0462]
[0463]
[0464]
[0465]
[0466]
[0467]
[0468]
[0469][0470]
实施例26：化合物1124至1147的合成
[0471]
化合物1124
[0472][0473]
将化合物1173(70毫克；0.22毫摩尔)、2-碘-2-(2-碘-乙氧基)-乙烷(32微升；0.22毫摩尔)和碳酸钾(61毫克；0.44毫摩尔)溶于dmf(3毫升)，在70℃搅拌2小时。另外加入2-碘-2-(2-碘-乙氧基)-乙烷(0.22毫摩尔)和碳酸钾(0.44毫摩尔)。混合物在70℃搅拌1.5h，在室温搅拌3天。将混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤、分离、干燥和蒸发。用制备型高效液相色谱法(洗脱液a：水+0.1％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0474]
ms(esi
+
)：m/z＝386[m+h]
+
[0475]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.19分钟
[0476]
类似于实施例1124的制备，得到下列化合物：
[0477]
[0478]
[0479]
[0480]
[0481]
[0482][0483]
实施例27：化合物1148至1151的合成
[0484]
化合物1148
[0485][0486]
中间体e1(200毫克；1.05毫摩尔)和7-甲氧基-3,4,5,6-四氢-2h-氮杂(134毫克；1.05毫摩尔)在170℃在微波中搅拌20分钟。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0487]
ms(esi
+
)：m/z＝286[m+h]
+
[0488]
高效液相色谱法(方法h)：r
t
＝1.05分钟
[0489]
与实施例27的制备类似，可得到下列化合物：
[0490][0491]
实施例28：化合物1152至1163的合成
[0492]
化合物1152
[0493][0494]
将中间体f1(30毫克；0.10毫摩尔)、3-(2h)-呋喃酮二盐酸盐(9微升；0.12毫摩尔)和冰醋酸(13微升；0.24毫摩尔)溶于甲醇(2毫升)，在50℃搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(12毫克；0.19毫摩尔)，在室温搅拌过夜。混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用二氯甲烷萃取。有机层被分离、干燥和蒸发。用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化残余物。
[0495]
ms(esi
+
)：m/z＝383[m+h]
+
[0496]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.42分钟
[0497]
类似于实施例1152的制备，得到下列化合物：
[0498]
[0499]
[0500]
[0501][0502]
实施例29：化合物1164的合成
[0503][0504]
将中间体f4(100毫克；0.26毫摩尔)、乙酸酐(37微升；0.39毫摩尔)和dipea(134微升；0.78毫摩尔)溶于二氯甲烷(3毫升)，在室温搅拌1小时。混合物用碳酸氢钠(水溶液；9％)稀释，用二氯甲烷萃取。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物溶于甲醇，过滤析出物。析出物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0505]
ms(esi
+
)：m/z＝425[m+h]
+
[0506]
高效液相色谱法(方法b)：r
t
＝0.84分钟
[0507]
实施例30：化合物1165至1166的合成
[0508]
化合物1165：
[0509][0510]
将中间体f5(30毫克；0.10毫摩尔)、乙酰氯(6微升；0.09毫摩尔)和三乙胺(20微升；0.14毫摩尔)溶于四氢呋喃(3毫升)，在室温搅拌10分钟。加入额外的乙酰氯。将混合物
用水稀释，用二氯甲烷萃取。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.1％三氟乙酸，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0511]
ms(esi
+
)：m/z＝357[m+h]
+
[0512]
高效液相色谱法(方法d)：r
t
＝0.62分钟
[0513]
与化合物1165的制备类似，得到以下化合物：
[0514][0515]
实施例31：化合物1167至1168的合成
[0516]
化合物1167：
[0517][0518]
将中间体g1(90毫克；0.31毫摩尔)和n1-苯基-乙烷-1,2-二胺(42毫克；0.31毫摩尔)溶于正丁醇(2毫升)，在220℃在微波中搅拌15分钟。蒸发溶剂，残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.1％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0519]
ms(esi
+
)：m/z＝335[m+h]
+
[0520]
高效液相色谱法(方法h)：r
t
＝1.02分钟
[0521]
类似于实施例1167的制备，得到下列化合物：
[0522][0523]
实施例32：化合物1169至1171的合成
[0524]
化合物1169
[0525][0526]
将中间体c35(100毫克；0.26毫摩尔)、甲醛(水溶液；37％；0.19毫升；2.58毫摩尔)和雷尼镍(50毫克)溶于甲醇(10毫升)中，在parr装置中氢化(rt；1.1巴；8h)。过滤掉催化剂，蒸发溶剂。残留物在甲醇中搅拌，过滤并干燥。
[0527]
ms(esi
+
)：m/z＝328[m+h]
+
[0528]
高效液相色谱法(方法)：r
t
＝0.72分钟
[0529]
类似于实施例1169的制备，得到下列化合物：
[0530][0531][0532]
实施例33：化合物1172至1174的合成
[0533]
化合物1172
[0534][0535]
将中间体c35(200毫克；0.52毫摩尔)和雷尼镍(50毫克)溶于甲醇(10毫升)中，在parr装置中氢化(rt；1.1巴；8小时)。过滤掉催化剂，蒸发溶剂。残余物用制备型高效液相色
谱(洗脱液a.水+0.1％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0536]
ms(esi
+
)：m/z＝300[m+h]
+
[0537]
高效液相色谱法(方法l)：r
t
＝0.63分钟
[0538]
类似于实施例1172的制备，得到下列化合物：
[0539][0540][0541]
实施例34：化合物1175的合成
[0542]
[0543]
将中间体c35(200毫克；0.52毫摩尔)和雷尼镍(50毫克)溶于甲醇(10毫升)中，在parr装置中氢化(rt；1.1巴；8小时)。过滤掉催化剂，蒸发溶剂。残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.1％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0544]
ms(esi
+
)：m/z＝314[m+h]
+
[0545]
高效液相色谱法(方法m)：r
t
＝1.12分钟
[0546]
实施例35：化合物1176的合成
[0547][0548]
将中间体c4(1.78克；5.90毫摩尔)和铁粉(1.78克；31.87毫摩尔)溶于水(56.5毫升)和乙醇(116毫升)，在80℃搅拌。逐滴加入冰醋酸(3.58毫升；62.55毫摩尔)，混合物在80℃搅拌1小时。蒸发有机溶剂，用氢氧化钠(7毫升)碱化水层，用二氯甲烷萃取。通过硅藻土过滤铁。有机层被分离、干燥和蒸发。残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0549]
ms(esi
+
)：m/z＝273[m+h]
+
[0550]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.16分钟
[0551]
实施例36：化合物1177的合成
[0552][0553]
将中间体d1(150毫克；0.50毫摩尔)、溴环丁烷(101毫克；0.75毫摩尔)和碳酸钾(138毫克；1.00毫摩尔)溶于dmf(3毫升)，在70℃搅拌4小时。额外加入溴环丁烷(101毫克；0.75毫摩尔)，混合物在80℃搅拌过夜。额外加入溴环丁烷(101毫克；0.75毫摩尔)。在90℃搅拌4小时后，残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0554]
ms(esi
+
)：m/z＝356[m+h]
+
[0555]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝0.89分钟
[0556]
实施例37：化合物1178的合成
[0557][0558]
将实施例146(65毫克；0.15毫摩尔)和pd/c(10％；10毫克)溶于甲醇(5毫升)中，在parr装置中氢化(rt；50psi；1小时)。过滤掉催化剂，除去溶剂。残余物用制备型高效液相色谱(洗脱液a.水+0.15％浓氨水，洗脱液b：甲醇)纯化。
[0559]
ms(esi
+
)：m/z＝313[m+h]
+
[0560]
高效液相色谱法(方法a)：r
t
＝1.34分钟
[0561]
实施例38：生物测定
[0562]
化合物的生物活性由以下方法测定：
[0563]
实验a：测定对复合体i介导的ros的抑制(ci)
[0564]
酶动力学实验允许检测通过复合体i产生的ros。因此，复合体i从牛心脏中纯化(sharpley等，2006，biochemistry，45(1)：241-8)。首先进行亚细胞分级以获得粗线粒体部分，然后进行低渗裂解和差速离心，从中获得线粒体膜。将线粒体膜溶解，然后进行离子交换色谱法和体积排除色谱，得到含有少量复合体iv污染的复合体i的酶制品。这些制品用于研究通过复合体i、底物nadh(1μm)和氧气(环境)生成ros的过程。在含有amplex red和辣根过氧化物酶的偶联反应中，通过amplex red的氧化反应来检测产生的ros。
[0565]
本发明化合物的ic50是通过使用8个点的浓度-响应实验测试该化合物来估计的。
[0566]
在384孔微量滴定板中，将5微升测试化合物(终浓度范围为0.01nm至30μm，在测定缓冲液中稀释和1％dmso终浓度)或对照与5微升底物混合物(3μm nadh、10μm amplex red、1mm 1,6-二磷酸果糖和1mm aso4)混合。酶促反应通过加入15微升酶混合物(含有20微克/毫升复合体i、2u/毫升辣根过氧化物酶、1u/毫升醛缩酶、1u/毫升丙糖异构酶、1u/毫升甘油醛-3-磷酸脱氢酶)开始，产生ros，随后在室温每53秒测量557nm处的吸收的增加，持续12分钟，然后进行线性回归(斜率分析)。为了评估化合物的效力，采用4参数s形剂量-响应模型，通过非线性回归曲线拟合，当复合体i的活性为50％时，计算ic50值。
[0567]
实验b：细胞保护(ht22)测定
[0568]
为了显示细胞背景下的选择性通路参与，小鼠神经母细胞瘤细胞(ht-22)的内源性抗氧化剂谷胱甘肽被消耗，导致线粒体和细胞水平的氧化应激和细胞死亡(tan s,sagara y,liu y,maher p,schubert d.the regulation of reactive oxygen species production during programmed cell death.j cell biol.1998；141：1423-1432)。通过与高浓度谷氨酸(5mm)孵育，这些细胞内的谷胱甘肽被耗尽，从而抑制胱氨酸的摄取，这导致线粒体来源的活性氧的积累，最终导致细胞死亡。
[0569]
在384孔板中，将2000个ht-22细胞接种于50微升细胞培养基(含10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的dmem)中且培养24小时，然后与谷氨酸(以诱导细胞死亡)或媒介物在存在试验化合物(最终0.01-30μm)的情况下(100％活细胞)孵育16小时。细胞活力通过加入10％alamar blue试剂来评估，37℃孵育1小时，然后测定荧光(激发530nm，发射590nm)。
[0570]
为了评估化合物的效价，通过非线性回归曲线拟合，使用4参数s形剂量-响应模型(见复合体i测定)，计算ec50值。

技术特征：
1.一种式(i)的化合物或其盐其中：r1是未取代的或被meo取代的c1-4-烷基；四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁基、二氧杂环庚基、吡咯烷基或哌啶基；或吡咯烷基或哌啶基，其中氮原子经甲基、异丙基、氧杂环丁基、乙氧羰基、乙酰基或三氟乙酰基取代；r2是5元、6元或7元未取代的或取代的含有1或2个选自o或n的杂原子的环，或未取代的或取代的含有1至3个选自n或o的杂原子的由4至11个环原子构成的螺环杂环基，所述环或螺环杂环基通过c＝c双键结合在式(i)中，并且所述环或螺环杂环基中的一个n原子可以被甲基、异丙基、乙酰基、苄氧羰基、苯基、氧杂环丁基或四氢吡喃基取代，并且其中一个或多个c原子可以被甲基或-oh取代；r3或r4各自独立地为氢；未取代的或被一个或多个f、甲氧基、未取代的或被一个或多个f取代的c3-8-环烷基取代的c1-6-烷基；芳基；由5至6个环原子构成的杂芳基；或选自氧杂环丁基、四氢吡喃基和吡咯烷基的杂环基，所述杂环基是未取代的或被c1-6-烷基、乙酰基、四氢呋喃基、氧杂环丁基或羟乙基乙酰基取代；或r3和r4与附着的n一起形成杂环基环，所述杂环基环选自由吗啉基和吡咯烷基组成的组，所述吗啉基和吡咯烷基均为未取代的或被c1-6-烷基、f或羟基取代。2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中r1是其是未取代的或被meo取代；其是未取代的或氮原子被的或氮原子被取代。
3.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中r1是4.根据权利要求2所述的化合物或其盐，其中r1是四氢吡喃基或二氧杂环庚基。5.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中r2是含有1或2个选自o或n的杂原子的5元、6元或7元环，其通过c＝c双键结合在式(i)中，其中一个或两个n原子可以被甲基、异丙基、乙酰基、苄氧羰基、苯基、氧杂环丁烷基或四氢吡喃基取代，并且其中一个或者多个c原子可以被甲基或-oh取代。6.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中所述结构要素是
7.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中式(i)中含有r3和r4的氨基是
8.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中式(i)中含有r3和r4的氨基包括r3为氢而r4为未取代的或被氟(f)取代的异丙基、环丁基或环戊基。9.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中式(i)中含有r3和r4的氨基是其是未取代的或被f取代。10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物的盐。11.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中式(i)是化合物1至175和1001至1178中任一个所述的式。
12.一种药物，其用根据权利要求1-11中任一项所述的化合物或其盐制备。13.根据权利要求1所述的化合物的制备方法，其包括(a)使用合适的溶剂使(2-氟-5-硝基-苯基)-乙酸(化合物ii)与胺r1-nh2反应，形成5-硝基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iii)(b)使5-硝基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iii)在高温在微波中在无溶剂的情况下或在合适的溶剂如哌啶中与合适的亲电试剂进行缩合，得到5-硝基-3-亚基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iv)(c)还原5-硝基-3-亚基-2,3-二氢-1h-吲哚-2-酮(化合物iv)，得到被氨基取代的吲哚-2-酮(化合物v)(d1)使式(v)的化合物与醛或酮及合适的还原剂反应，得到式(i)的化合物，或(d2)使式(v)的胺与携带离去基团的合适亲电试剂在合适的碱存在下发生取代反应。14.一种药物组合物，其用于治疗或预防人类神经性的或神经退行性或精神病症，所述药物组合物包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。15.根据权利要求14所述的药物组合物，其包含0.1至2000毫克治疗有效量的根据权利
要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

技术总结
本发明描述了具有式(I)的调节线粒体复合体I(NADH-醌氧化还原酶)功能的化合物。醌氧化还原酶)功能的化合物。醌氧化还原酶)功能的化合物。


技术研发人员：K
受保护的技术使用者：勃林格殷格翰国际有限公司
技术研发日：2021.02.09
技术公布日：2023/10/8