一种干酪乳杆菌的高密度培养方法

1.本发明属于微生物培养技术领域，尤其是涉及一种干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)的高密度培养方法。


背景技术：

2.干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)属于乳酸菌中的乳杆菌属，广泛存在于发酵食品和人体的口腔肠道，是研究和应用最广泛的乳酸菌菌种之一。目前，干酪乳杆菌作为一种具有潜力的益生菌，能够产生生物活性代谢物，经研究表明，干酪乳杆菌具有拮抗致病菌、调节肠道菌群平衡、增强机体免疫力等功能，另一方面，干酪乳杆菌中的部分菌株也具有作为产香发酵剂的优异性能，所制备附属发酵剂可提高发酵乳制品的香气和风味，目前国内外对产香型乳酸菌的研究较少，干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs具有优良的产香特性，可用于发酵乳制品如酮香型酸奶的生产。
3.高活性发酵剂的制备是菌种工业化生产的关键技术，其中微生物高密度培养是生产发酵剂的重要环节。对乳酸菌进行高密度培养，旨在提高体积产率，减小反应器容积，降低生产成本，提高菌体的发酵特性，最终获得优良的发酵剂。
4.高密度培养是一个相对概念，没有确切的定义，指应用一定的培养技术和装置提高菌体的发酵密度，菌体密度较普通培养有显著的提高，使微生物在相同体积设备下降低生产成本，缩短生产周期，最终提高特定产物的比生产率。抑制乳酸菌生长的主要影响因素主要包括代谢抑制、底物抑制、环境因素，环境因素则包括氧气、温度、搅拌和发酵液ph值等方面。
5.补料分批发酵在理论上和实践上都被认为是实现高细胞密度培养最有效的方法，也是最易操作的发酵类型，污染风险低，但生产力低，菌体的生长容易受到底物和产物的抑制作用。选择适当的培养基和补料发酵技术，将关键营养物质的浓度(通常是碳源)保持在最佳水平，通过该方法通常能获得更高的生物量，具有多种经济优势。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种操作简单且生产成本较低的干酪乳杆菌的高密度培养方法。
7.本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
8.本发明提供一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，包括以下步骤：
9.将干酪乳杆菌接种到优化培养基中，进行发酵培养，在发酵培养的过程中，添加阴离子交换树脂，添加补料培养基，培养得到高密度的干酪乳杆菌；
10.其中，优化培养基中以葡萄糖为碳源，以蛋白胨为氮源，以甜玉米汁为生长因子。
11.在本发明的一个实施方式中，所述干酪乳杆菌的高密度培养方法包括以下步骤：
12.取干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)在培养基平板上划线，在37℃培养箱中培养24-48h，至长出单菌落；
13.挑取单菌落，使用mrs肉汤进行液体培养12h，液体培养条件为37℃；
14.液体培养后的种子液按2％的接种量加入发酵罐中进行发酵培养，发酵罐中含有优化培养基，发酵培养条件为37℃发酵培养，发酵罐转速为90r/min，发酵培养8h时加入阴离子交换树脂，发酵培养12h时加入补料培养基。
15.在本发明的一个实施方式中，所述优化培养基的成分为：葡萄糖35g/l，蛋白胨62g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾3g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，甜玉米汁24g/l。
16.在本发明的一个实施方式中，所述阴离子交换树脂为经过预处理的阴离子交换树脂，预处理的方法为：取直径0.5-0.75mm的阴离子交换树脂首先用不锈钢筛筛去体积过小的树脂颗粒；接着，用去离子水浸泡经筛分的树脂，换水4-5次至出水澄清；最后，用5倍树脂体积的1mol/l氢氧化钠溶液浸泡1h，期间多次搅拌，10倍树脂体积的蒸馏水洗涤至出水；重复碱洗和水洗的步骤，得到预处理的阴离子交换树脂，将预处理的阴离子交换树脂用蒸馏水浸润后密闭保存。
17.在本发明的一个实施方式中，所述阴离子交换树脂为安珀莱特型号为ira-67的离子交换树脂。
18.在本发明的一个实施方式中，所述阴离子交换树脂的添加量为50g/l。所述阴离子交换树脂添加的主要目的在于吸附发酵产生的乳酸，以提高干酪乳杆菌的培养密度。
19.在本发明的一个实施方式中，所述补料培养基具体含量为：葡萄糖200g/l，蛋白胨150g/l，柠檬酸铵10g/l。
20.在本发明的一个实施方式中，所述补料培养基的加入量为发酵罐中培养基总质量的10％。
21.在本发明的一个实施方式中，发酵培养过程中，补加阴离子交换树脂，以控制发酵液的ph值维持在5.0到5.5之间。
22.在本发明的一个实施方式中，所述干酪乳杆菌选择保藏编号为cctccno.m2017364的干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs。
23.本发明结合树脂吸附和分批补料，对发酵液的ph值和乳酸含量进行控制，提高干酪乳杆菌的生产效率，降低生产成本。
24.本发明通过优化发酵培养基，树脂吸附和分批补料三种方法，有效地将副产物乳酸产量控制在较低水平，同时可以确保干酪乳杆菌能够迅速繁殖到高浓度，经过16h发酵培养，活菌数达到10.01lgcfu/ml，是干酪乳杆菌tcs在未经优化培养下的活菌数(9.04lgcfu/ml)的9.3倍，提高了干酪乳杆菌菌体得率，为高产香特性发酵剂的工业化生产提供理论基础，从而有助于该菌应用于乳品加工、功能食品生产等领域。
25.与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
26.(1)培养基优化的培养改良策略可以使菌株获得充足的碳源、氮源、生长因子，最大程度提高活菌数。
27.(2)树脂吸附结合分批补料的高密度培养方式，该方法可以有效地将副产物乳酸产量控制在较低水平。
28.(3)实现干酪乳杆菌高密度培养，同时可以确保干酪乳杆菌能够迅速繁殖到高浓度，活菌数达到10.01lgcfu/ml，投资低、操作简单，利用干酪乳杆菌生产企业原有设备即可
实施。
附图说明
29.图1为碳源种类对干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs活菌数的影响；
30.图2为氮源种类对干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs活菌数的影响；
31.图3为生长因子对干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs活菌数的影响；
32.图4为甜玉米汁浓度对干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs活菌数的影响；
33.图5为干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs发酵过程加入树脂的体系ph变化；
34.图6为干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs发酵过程加入树脂的体系葡萄糖的变化；
35.图7为3种培养方式对产香型干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs活菌数的影响。
36.图8为本发明一种干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs高密度培养方法的工艺流程图。
具体实施方式
37.下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
38.本发明以下实施例中所用的干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs，其生物学名称为：lacticaseibacilllus casei，分类命名为：干酪乳杆菌，由上海应用技术大学香料香精技术与工程学院食品风味调控创新团队从传统发酵酸奶中分离鉴定，并保存于保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心，邮编：430072，保藏编号为(cctcc no.m2017364)，在专利cn108676742b中有公开。
39.本发明以下各实施例中所用的mrs培养基，制备方法为：葡萄糖20g/l，蛋白胨10g/l，牛肉浸粉10g/l，酵母提取物5g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，即得到mrs培养基。
40.本发明各实施例中所用的优化培养基，制备方法为：葡萄糖35g/l，蛋白胨62g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾3g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，甜玉米汁24g/l。
41.在本发明的各实施例中树脂的预处理方法为：直径约0.5-0.75mm的安珀莱特离子交换树脂(amberlite ira-67)首先用不锈钢筛筛去体积过小的树脂颗粒。接着，用去离子水浸泡经筛分的新树脂，换水4-5次至出水澄清。最后，用5倍树脂体积的1mol/l氢氧化钠溶液浸泡1h，期间多次用玻璃棒搅拌，10倍树脂体积的蒸馏水洗涤至出水。重复上述碱洗和水洗的步骤，将预处理好的树脂用蒸馏水浸润后密闭保存。
42.在本发明的以下各实施例中的分批补料策略为：加入树脂并发酵至12h时，在火焰保护下经接种口加入浓缩的补料培养基。补料培养基的成分主要是碳源葡萄糖、氮源蛋白胨及少量柠檬酸铵，具体含量为：葡萄糖200g/l，蛋白胨150g/l，柠檬酸铵10g/l。
43.实施例1
44.产香型干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs增殖培养基优化，步骤如下：
45.以mrs基础培养基成分为参考依据，对培养基中的碳源、氮源、缓冲盐成分进行优化，并额外添加生长因子进行优化。其它培养条件为：接种量2％，培养温度37℃，培养时间：12h。
46.(1)碳源
47.以mrs培养基为基础，蛋白胨10g/l，牛肉浸粉10g/l，酵母提取物5g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l不变，测定不同碳源(葡萄糖、半乳糖、葡萄糖：半乳糖(质量比3:1)、蔗糖、山梨糖醇、葡萄糖：山梨糖醇(质量比3:1)，添加量均为20g/l)对发酵液活菌数的影响，结果如图1结果所示，干酪乳杆菌tcs在单糖中的生长情况比多糖中的生长情况更好，葡萄糖作为一种能够直接被乳酸菌利用的单糖，能显著促进其生长代谢；同时，在两种碳源混合的发酵模式下，菌体活菌数比在单一碳源中培养的数量略高，但并无显著差异。
48.(2)氮源
49.以葡萄糖35g/l为基础，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l不变，测定不同氮源(蛋白胨、脱脂乳、酵母提取物、牛肉浸粉、酸水解酪蛋白、丝氨酸，添加量均为20g/l)对发酵液活菌数的影响，结果如图2所示，单一使用蛋白胨能够比使用复配的三种氮源(即对照组)效果更好，因此，选择蛋白胨作为培养基中的氮源成分。
50.(3)生长因子
51.种类的确定：以葡萄糖35g/l，蛋白胨62g/l为基础，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l不变，测定额外添加不同生长因子(苹果汁、胡萝卜汁、番茄汁、甜玉米汁、平菇汁，添加量均为20g/l)对发酵液活菌数的影响，结果如图3所示，使用玉米汁对培养基进行优化，得到的活菌数是未添加生长因子时的2.38倍，因此，选择甜玉米汁作为培养基中的生长因子。
52.浓度的确定：以碳氮源优化结果为基础，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l不变，测定额外添加不同浓度的生长因子(选择上一步试验中增菌效果最好的生长因子，浓度分别为0，5，10，20，40g/l)对发酵液活菌数的影响。结果如图4所示，在不同浓度下(5，10，20，40g/l)，甜玉米汁的增菌效果均无显著差异，但均和对照组有显著差异，因此，选取其中较小的浓度5g/l进行后续试验。
53.实施例2
54.产香型干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs高密度培养策略中阴离子交换树脂乳酸吸附及吸附选择性的测定，具体操作步骤如下：
55.(1)阴离子交换树脂乳酸吸附量的测定
56.配置三份0.1mol/l的乳酸溶液100ml于250ml烧杯中，分别加入5g/l、10g/l、15g/l的树脂，200r/min下常温或恒温37℃反应3h，过滤分离树脂后，通过酸碱滴定法测定溶液中剩余的乳酸量，根据公式q＝(c0－c)v/m，计算树脂对乳酸的表观交换吸附量(或平衡吸附量)。其中，q为离子交换树脂的表观交换吸附量，g/g；c0为吸附前乳酸含量，g/l；c为吸附后
剩余的乳酸含量，g/l；v为乳酸溶液体积，l；m为树脂的用量，对于0.1mol/l的乳酸溶液，c0＝9g/l。结果如表1所示，较少用量的树脂不足以吸附发酵中生成的乳酸，随着树脂用量的增加，表观吸附量降低，吸附效率变差，在实际发酵过程中也可能继续吸附发酵液中的其它物质。综合考虑吸附量和吸附效率，选择50g/l的树脂用量进行后续实验。
57.表1为树脂对乳酸的表观吸附量随树脂用量的变化情况
[0058][0059][0060]
(2)阴离子交换树脂乳酸吸附选择性的测定
[0061]
在发酵液中人为添加乳酸，随后加入50g/l的树脂量，测定吸附前后发酵液中的乳酸含量和葡萄糖含量。结果如表2所示，反应0.5h后树脂能完成大部分的离子交换，向含有0.06mol/l乳酸的mrs溶液中加入50g/l的树脂，可以将酸完全吸附；向含有0.1mol/l乳酸的优化培养基溶液中加入50g/l的树脂，酸未被完全吸附，树脂不足，吸附部分乳酸后溶液的ph值比初始溶液的ph值略高。吸附过程中，葡萄糖含量没有明显变化，树脂对乳酸的选择性高，此时体系中乳酸含量约为0.06mol/l，树脂在吸附乳酸的同时，体系中的乳酸随着菌体生长仍在不断增加，因此，在菌体培养到8h时，加入50g/l的树脂继续培养。
[0062]
表2为树脂对发酵液中乳酸的吸附情况
[0063][0064]
实施例3
[0065]
产香型干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs的高密度培养策略中在优化培养基的基础上，树脂吸附结合分批补料法优化，具体包括如下步骤：
[0066]
优化培养基的成分为：葡萄糖35g/l，蛋白胨62g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾3g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，甜玉米汁24g/l。在优化培养基的基础上，将种子液接种到装有2.5l优化培养基发酵液的5l发酵罐中，设置转速为90r/min，温度为37℃，不通气，不控制ph值，先进行一段时间的分批培养。8h时，在火焰保护下经接种口倒入50g/l无菌树脂。加入树脂并反应至12h时，在火焰保护下经接种口加入浓缩的补料液。补料培养基的成分主要为碳源葡萄糖、氮源蛋白胨及少量柠檬酸铵。具体含量为：葡萄糖200g/l，蛋白胨150g/l，柠檬酸铵10g/l，继续培养。
[0067]
对比实施例1
[0068]
一种干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs在未经优化的基础mrs培养基
中的培养方式，具体包括如下步骤：
[0069]
将保藏的干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs菌种以2％(v/v)接种量接种于灭菌的mrs液体培养基中，37℃培养12h，活化传代两次，即得种子液，将制备好的种子液接种到装有2.5l未经优化的基础mrs培养基中的5l发酵罐中，设置转速为90r/min，温度为37℃，常规分批培养16h，即为未优化的基础培养方式。
[0070]
对比实施例2
[0071]
一种干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs在优化培养基中的培养方式，具体包括如下步骤：
[0072]
在对比实施例1的基础上，发酵罐中使用优化培养基进行发酵培养，优化培养基的成分为：葡萄糖35g/l，蛋白胨62g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾3g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，甜玉米汁24g/l。
[0073]
对比实施例3
[0074]
一种干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs在优化培养基的基础上加入树脂的培养方式，具体包括如下步骤：
[0075]
在对比实施例2的基础上，8h后，每隔2h在火焰保护下经接种口倒入无菌树脂，即为在优化培养基的基础上加入树脂的培养方式。
[0076]
效果例1
[0077]
干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs对比实施例2与对比实施例3的ph值与底物利用情况的对比。
[0078]
将制备好的种子液接种到装有2.5l优化培养基发酵液的5l发酵罐中，设置转速为90r/min，温度为37℃，不通气，不控制ph值，进行一段时间的分批培养。当培养阶段进入菌体对数生长期中期或ph值降至5.0时，在火焰保护下经接种口倒入无菌树脂，适时地添加树脂，将ph值保持在5.0至5.5之间。每隔2h取一定量的发酵液，其中1ml立即用于测定此时的活菌数，剩余发酵液在8000r/min条件下离心10min后取上清液，于-20℃保存，用于测定上清液中的剩余葡萄糖含量。结果如图5、6所示，8h时ph值降到5.0左右，发酵液ph值在显著回升，ph值上升至5.5左右后，生成的乳酸量超过被吸附的乳酸量，ph值开始降低。当ph值再次降低到约5.0时，补加一次一半用量的树脂，发酵液的ph值能够维持在5.0到5.5之间。发酵进入对数生长期后大量底物被消耗，加入树脂后，在10h时葡萄糖含量降低到15g/l以下。
[0079]
效果例2
[0080]
干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs对比实施例2、对比实施例3及实施例3的活菌数变化对比。
[0081]
8h时在火焰保护下经接种口倒入无菌树脂，根据ph值的变化适时地添加树脂，将ph值保持在5.0至5.5之间。12h时在火焰保护下经接种口加入10％(质量分数)补料培养基，补料培养基的成分主要是碳源葡萄糖、氮源蛋白胨及少量柠檬酸铵。具体含量为：葡萄糖200g/l，蛋白胨150g/l，柠檬酸铵10g/l。结果如图7所示，使用优化培养基常规分批发酵，活菌数最高达到9.66lgcfu/ml；分批培养至8h时向发酵液中添加弱碱性阴离子树脂，活菌数最高达到9.87lgcfu/ml。在12h时加入补料，活菌数进一步提高，而不补料的实验组活菌数有所下降。将离子交换法与补料分批法结合，同时解除了酸抑制、盐胁迫和底物抑制对菌体生长的影响，最终达到了10.01lgcfu/ml的活菌数，是干酪乳杆菌tcs在未经优化的活菌数
(9.04lgcfu/ml)的9.3倍。
[0082]
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将干酪乳杆菌接种到优化培养基中，进行发酵培养，在发酵培养的过程中，添加阴离子交换树脂，添加补料培养基，培养得到高密度的干酪乳杆菌；其中，优化培养基中以葡萄糖为碳源，以蛋白胨为氮源，以甜玉米汁为生长因子。2.根据权利要求1所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述干酪乳杆菌的高密度培养方法包括以下步骤：取干酪乳杆菌在培养基平板上划线，在37℃培养箱中培养24-48h，至长出单菌落；挑取单菌落，使用mrs肉汤进行液体培养12h，液体培养条件为37℃；液体培养后的种子液按2％的接种量加入发酵罐中进行发酵培养，发酵罐中含有优化培养基，发酵培养8h时加入阴离子交换树脂，发酵培养12h时加入补料培养基。3.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述优化培养基的成分为：葡萄糖35g/l，蛋白胨62g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸铵2g/l，磷酸氢二钾3g/l，吐温-80 1g/l，无水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，甜玉米汁24g/l。4.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂为经过预处理的阴离子交换树脂，预处理的方法为：取直径0.5-0.75mm的阴离子交换树脂首先用不锈钢筛筛去体积过小的树脂颗粒；接着，用去离子水浸泡经筛分的树脂，换水4-5次至出水澄清；最后，用5倍树脂体积的1mol/l氢氧化钠溶液浸泡1h，期间多次搅拌，10倍树脂体积的蒸馏水洗涤至出水；重复碱洗和水洗的步骤，得到预处理的阴离子交换树脂，将预处理的阴离子交换树脂用蒸馏水浸润后密闭保存。5.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂为安珀莱特型号为ira-67的离子交换树脂。6.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂的添加量为50g/l。7.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述补料培养基具体含量为：葡萄糖200g/l，蛋白胨150g/l，柠檬酸铵10g/l；所述补料培养基的加入量为发酵罐中培养基总质量的10％。8.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，发酵培养条件为37℃发酵培养，发酵罐转速为90r/min。9.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，发酵培养过程中，补加阴离子交换树脂，以控制发酵液的ph值维持在5.0到5.5之间。10.根据权利要求1或2所述的一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于，所述干酪乳杆菌选择保藏编号为cctcc no.m2017364的干酪乳杆菌(lacticaseibacilllus casei)tcs。

技术总结
本发明涉及一种干酪乳杆菌的高密度培养方法，将干酪乳杆菌接种到优化培养基中，进行发酵培养，在发酵培养的过程中，添加阴离子交换树脂，添加补料培养基，培养得到高密度的干酪乳杆菌；其中，优化培养基中以葡萄糖为碳源，以蛋白胨为氮源，以甜玉米汁为生长因子。本发明通过优化发酵培养基，树脂吸附和分批补料三种方法，有效地将副产物乳酸产量控制在较低水平，同时可以确保干酪乳杆菌能够迅速繁殖到高浓度，经过16h发酵培养，活菌数达到10.01lgCFU/mL，是干酪乳杆菌TCS在未经优化培养下的活菌数(9.04lgCFU/mL)的9.3倍，提高了干酪乳杆菌菌体得率，为高产香特性发酵剂的工业化生产提供理论基础，从而有助于该菌应用于乳品加工、功能食品生产等领域。功能食品生产等领域。功能食品生产等领域。


技术研发人员：陈臣 郭天宇 葛畅 吴迪 黄娟 于海燕 田怀香
受保护的技术使用者：上海应用技术大学
技术研发日：2023.07.27
技术公布日：2023/10/8