硝普钠药物组合物和测定其中氰化物的方法与流程

1.本发明属于医药技术领域，涉及一种用于治疗高血压的药物组合物，尤其涉及一种硝普钠的药物组合物，该药物组合物优先的是以冷冻干燥粉针剂形式提供的或者是以溶液型注射液的形式提供的。进一步的，本发明涉及一种测定该等硝普钠药物组合物中的氰化物含量或限度的方法，更具体地说，涉及使用气相色谱法测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量或限度的方法。


背景技术：

2.硝普钠，sodium nitroprusside，cas号14402-89-2，分子式：c5fen6na2o或na2[fe(cn)5no]，分子量261.92，化学名：亚硝基铁氰化钠，英文化学名：pentakis(cyano-c)nitrosylferrate(2-)disodium。现行版中国药典以及美国药典、欧洲药典收载的硝普钠原料药均为亚硝基铁氰化钠二水合物，分子量297.95，该原料药为红棕色的结晶或粉末，在水中易溶，在乙醇中微溶。
[0003]
硝普钠早在19世纪即已制得(l.playfair,proc.roy.soc.london 5,846(1849))，其临床应用最早可以追溯20世纪20年代，20世纪50年代其在治疗高血压中的应用已得到有效确认，一直都存在着有关它的应用价值和潜在副作用的关注，尽管临床医师对其氰化物毒性较担心，但是它，仍然是目前最为有效、有时是唯一的控制急性高血压的药物。
[0004]
硝普钠一旦输入体内，将迅速分解成氰化物与一氧化氮(no)。一氧化氮是一种很强的血管扩张剂，它可以激活环鸟甘酸酶，然后导致细胞内环鸟甘酸(cgmp)浓度的增加，最后导致进入血管平滑肌细胞钙离子的减少，血管扩张。
[0005]
硝普钠对动脉、静脉有直接的扩张作用，同时还能保证重要器官的供血量，它也是非常强力的肺血管的扩张剂。硝普钠对缺氧造成的肺血管收缩有强力的拮抗作用。它的作用时间非常短，通常只有1～2min。当左心室衰竭时，它可以减少周围血管阻力、肺血管阻力和右心房压力，从而改善左心输出量。正常无心血管疾病的人，如果输入硝普钠，则心输出量会减低，因为心脏的回流量会减少。
[0006]
由于潜在的氰化物中毒副作用，临床上硝普钠制剂主要用于高血压急症，如高血压危象、高血压脑病、恶性高血压、嗜铬细胞瘤手术前后阵发性高血压等的紧急降压，也可用于外科麻醉期间进行控制性降压；还用于急性心力衰竭，包括急性肺水肿；亦用于急性心肌梗死或瓣膜(二尖瓣或主动脉瓣)关闭不全时的急性心力衰竭。
[0007]
一般地讲，从1960年以来，硝普钠已广泛应用于治疗高血压危象，硝普钠药效发挥快、容易滴定、快速降解和高有效率等特点，使它成为治疗高血压危象非常流行的药物。从1972年始，不断有研究报告硝普钠通过减少心脏收缩后负荷，减少左心充盈压，增加左心输出量对急性心肌梗塞有治疗作用，后来的研究亦证实了，它对急性心脏梗塞伴随的左心室衰竭、二尖瓣、三尖瓣反流有很好的治疗作用。最近几年，临床医师比较倾向于使用硝酸甘油来替代硝普钠治疗急性心肌梗塞，但如果急性心肌梗塞伴有严重的瓣膜关闭不全和反流，硝普钠可以发挥快速改善心脏功能的作用。有许多研究指出，不管是什么原因引起的慢
性心力衰竭，硝普钠都有改善心脏功能的作用，硝普钠与多巴胺或肾上腺素的联合使用能够显著的改善心脏的功能。控制性低血压是麻醉师经常采用的一种有效控制术中出血技术，硝普钠的快速降压，迅速失活和易于滴定使它成为一种理想的选择，骨科手术特别是脊柱手术，经常导致大量失血。控制性低血压可以提供一个相对的无血视野或减少输血量，当然考虑到稍普钠的副作用，也有许多麻醉师采用β受体阻滞剂，钙离子通道阻断剂及硝酸甘油作为替代选择。在主动脉瘤和主动脉狭窄修复术中，硝普钠及β受体阻断剂联合应用可以有效的减少主动脉内压力和防止分割性动脉瘤的形成。此外，嗜铬细胞瘤切除术仍然是医学上较难的一个手术，因为术中经常出现血压波动，有时会出现血压的急剧升高，这种情况用硝普钠非常合适，同时它的半衰期很短，不会导致术后低血压。心脏手术尤其是搭桥术和主动脉瓣修补术，经常会出现术中高血压，其引起高血压的机理不明。不管是什么机理，硝普钠都会很有效的控制它。心脏手术的患者30％～60％会出现术后高血压，这种术后高血压可以降低左心室功能，增加耗氧量，诱发术后出血，出现心率失常。硝普钠单用或与其他降血压药物合用是一种很合适的降低术后高血压的选择。硝普钠还是一种静脉血扩张剂，对于缓解心脏瓣膜置换术后的肺动脉高压亦有有效的治疗作用。
[0008]
现行版中国药典和美国药典均收载了硝普钠的原料药和冷冻干燥粉针剂，目前已上市的硝普钠冷冻干燥粉针剂有多个批准文号，而硝普钠注射液已于2022年由海南普利制药股份有限公司推向市场。现有国内市售的硝普钠冷冻干燥粉针剂规格为每瓶装25mg或50mg，而市售硝普钠注射液的规格为每瓶装50mg:2ml。
[0009]
硝普钠尤其是其注射制剂中的氰化物，是产品的重要品质指征。欧洲药典和美国药典的原料和制剂均未对氰化物进行检测；中国药典收载的硝普钠原料药未作氰化物检测，而其制剂中规定了使用中国药典2020年版四部通则0806第二法进行检测，规定了制剂中的限度为8ppm。然而该方法具有其固有的局限性，例如适合作限定检查，但是不适合计算氰化物的含量。另外，该药典方法测定时间过长，需要过夜处置，不但测定效率低，而且由于涉及氰化物处置，增加了劳动保护的成本。
[0010]
因此，本领域技术人员仍然期待有新的方法测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量。


技术实现要素：

[0011]
本发明的目的在于提供一种测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量的方法，期待该种方法能够呈现一个或多个方面的有益效果，例如测定方法准确可靠、容易定性或者定量计算氰化物含量、测定时间短、劳动保护的成本低等等。
[0012]
为此，本发明第一方面的提供了一种使用气相色谱测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量的方法，该方法包括如下步骤：
[0013]
(1)提供气相色谱仪和毛细管色谱柱以及衍生化反应瓶[所述毛细管色谱柱的固定液例如为聚乙二醇或者其它适用的固定液例如甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷等，例如以100％聚乙二醇为固定液；所述衍生化反应瓶包括一敞口小瓶和一具塞大瓶，小瓶可置入大瓶中，构成外瓶(大瓶)和内瓶(小瓶)构造，衍生化试剂和待测溶液分别添加于内瓶和外瓶后将外瓶密塞，外瓶液面和内瓶液面形成相通的气体氛围]；
[0014]
(2)溶液的制备
[0015]
(2a)稀释剂：取无机酸适量加水制成酸水溶液(例如制成浓度为0.5％～2％例如1％的酸水溶液，所述无机酸例如磷酸或硫酸)；
[0016]
(2b)衍生化试剂：取氯胺t加水溶解并稀释制成氯胺t溶液(例如浓度为1％的氯胺t溶液，此浓度亦是其作为衍生化试剂的常用浓度)，作为衍生化试剂(临用新制)；
[0017]
(2c)空白溶液：取稀释剂置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)；
[0018]
(2d)对照品溶液：精密称取氰化钾对照品适量，用稀释剂溶解并稀释制成对照品溶液(例如，其浓度为0.2～10μg/ml例如0.5～5μg/ml例如0.5～2.5μg/ml例如1μg/ml)；
[0019]
取对照品溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)；
[0020]
(2f)供试品溶液：精密量取硝普钠药物组合物的水溶液(其中硝普钠浓度为20～50mg/ml例如25～50mg/ml例如25mg/ml；例如，该硝普钠药物组合物为溶液型注射液或者冷冻干燥粉针剂，若为注射液则直接取样，若为粉针剂则预先将其用水溶解并稀释制成含主成分25mg/ml的溶液)置衍生化反应瓶的外瓶中并加入无机酸适量(例如，其与硝普钠药物组合物水溶液的体积比为0.5～5：100例如为0.75～2：100例如为1：100)，摇匀，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)；
[0021]
(3)色谱条件：
[0022]
顶空进样时顶空瓶的平衡温度45～60℃例如50℃，平衡时间15～30分钟例如20分钟；
[0023]
(气相色谱其它条件为常规的条件，例如进样口温度180～240℃例如200℃，定量环温度80～120℃例如90℃，传输线温度80～120℃例如100℃，检测器(ecd)温度280～350℃例如300℃，进样时间0.5～5min例如0.5～2min例如1min，这些色谱条件是常规的且在上述范围内适当调整均不影响本发明方法的测定)；
[0024]
高纯氮气为载气，流速0.5～2.0ml/min例如1.0ml/min，分流比8～15：1例如10:1；
[0025]
程序升温：初始柱温38～45℃例如40℃维持4～6分钟例如5分钟，接着以每分钟28～35℃例如30℃的速率升温至180～240℃例如200℃，然后维持3～5分钟例如4分钟；
[0026]
(4)系统适用性试验要求：分别取空白溶液、对照品溶液顶空进样，记录色谱图，确定氰化物色谱峰；扣除空白溶剂中的干扰峰，氰化物色谱峰与其相邻色谱峰间的分离度应大于5例如应大于10，对照品溶液重复进样(例如，至少5次)的氰化物峰面积的rsd％不得大于10％例如不大于8％；
[0027]
(5)测定：分别取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中的氰化物含量。
[0028]
根据本发明第一方面的方法，其中还包括如下方式制备灵敏度溶液：
[0029]
(2e)精密移取步骤(2d)所得对照品溶液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液，取灵敏度溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其
是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)。
[0030]
根据本发明第一方面的方法，其中使用灵敏度溶液顶空进样测试所得色谱图中氰化物峰的信噪比不小于100。
[0031]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的内瓶和外瓶是一体化熔合设计的玻璃瓶结构，或者是由2个独立的玻璃瓶组合构成。对于一体化熔合设置的瓶子，可以分别向外瓶和内瓶加入液体，再对外瓶密塞；对于2个独立玻璃瓶组合构成的瓶子，可以向外瓶中加入液体，另将添加了另一液体的内瓶置入外瓶中，再对外瓶密塞。
[0032]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的外瓶是棕色玻璃瓶；和/或，所述衍生化反应瓶的内瓶是棕色玻璃瓶。
[0033]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的外瓶的塞子是橡胶塞。此种橡胶塞配置便于气相色谱顶空进样。
[0034]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的内瓶容积为0.5ml～5ml，优选为1ml～4ml，例如内瓶容积为1ml或2ml或3ml或4ml，例如衍生化反应瓶内瓶溶液体积占内瓶容积的1/4～3/4，优选1/2。
[0035]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的外瓶容积为5ml～50ml，优选为10ml～30ml，例如外容积为10ml或15ml或20ml或25ml。
[0036]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的内瓶容积为2ml，外瓶容积为20ml。
[0037]
根据本发明第一方面的方法，其中所述衍生化反应瓶的内瓶容积为2ml，外瓶容积为20ml，测试时，向内瓶中添加0.5ml衍生化试剂，向外瓶中添加1.0ml测试溶液(例如对照品溶液、供试品溶液、灵敏度溶液、空白溶液等)。
[0038]
本质上讲，本发明衍生化反应瓶的外瓶可以是气相色谱测试用的常规顶空瓶，内瓶为气相色谱测试用的常规进样小瓶，可以将2种常规玻璃瓶以分体的方式组合使用，亦可如本文所述使后者形成一体化熔合设置的瓶子，此时内瓶和外瓶的尺寸与上述常规顶空瓶和常规进样小瓶相当。
[0039]
根据本发明第一方面的方法，其中所述毛细管色谱柱为石英毛细管色谱柱。
[0040]
根据本发明第一方面的方法，其中所述毛细管色谱柱的规格为30m*0.25mm，0.5μm。
[0041]
根据本发明第一方面的方法，其中所述毛细管色谱柱为db-waxetr石英毛细管色谱柱，以100％聚乙二醇为固定液，规格30m*0.25mm，0.5μm。
[0042]
根据本发明第一方面的方法，其中在将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和任选的灵敏度溶液加至衍生化反应瓶时，是按如下方式添加的：取1.0ml该等溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得。
[0043]
根据本发明第一方面的方法，其中在用对照品溶液测定所得色谱图中，氰化物峰的理论板数为大于20000，例如大于25000。
[0044]
根据本发明第一方面的方法，其中将对照品溶液或者供试品溶液与衍生化试剂密封于衍生化反应瓶中后在室温处放置5小时，分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h时进行顶空气相色谱测定，得到6个结果的rsd小于15％例如小于12％例如小于10％。
[0045]
进一步的，本发明第二方面提供了一种用于气相色谱测定硝普钠药物组合物中的
氰化物含量的衍生化反应瓶，其包括一敞口小瓶和一具塞大瓶，小瓶可置入大瓶中，构成外瓶(大瓶)和内瓶(小瓶)构造，衍生化试剂和待测溶液分别添加于内瓶和外瓶后将外瓶密塞，外瓶液面和内瓶液面形成相通的气体氛围。
[0046]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中所述衍生化反应瓶的内瓶和外瓶是一体化熔合设计的玻璃瓶结构，或者是由2个独立的玻璃瓶组合构成。对于一体化熔合设置的瓶子，可以分别向外瓶和内瓶加入液体，再对外瓶密塞；对于2个独立玻璃瓶组合构成的瓶子，可以向外瓶中加入液体，另将添加了另一液体的内瓶置入外瓶中，再对外瓶密塞。
[0047]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中外瓶是棕色玻璃瓶；和/或，所述衍生化反应瓶的内瓶是棕色玻璃瓶。
[0048]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中外瓶的塞子是橡胶塞。此种橡胶塞配置便于气相色谱顶空进样。
[0049]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中内瓶容积为0.5ml～5ml，优选为1ml～4ml，例如内瓶容积为1ml或2ml或3ml或4ml，例如衍生化反应瓶内瓶溶液体积占内瓶容积的1/4～3/4，优选1/2。
[0050]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中外瓶容积为5ml～50ml，优选为10ml～30ml，例如外容积为10ml或15ml或20ml或25ml。
[0051]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中内瓶容积为2ml，外瓶容积为20ml。
[0052]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中内瓶容积为2ml，外瓶容积为20ml，测试时，向内瓶中添加0.5ml衍生化试剂，向外瓶中添加1.0ml测试溶液(例如对照品溶液、供试品溶液、灵敏度溶液、空白溶液等)。
[0053]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其用于气相色谱测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量的方法包括如下步骤：
[0054]
(1)提供气相色谱仪和毛细管色谱柱以及衍生化反应瓶[所述毛细管色谱柱的固定液例如为聚乙二醇或者其它适用的固定液例如甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷等，例如以100％聚乙二醇为固定液]；
[0055]
(2)溶液的制备
[0056]
(2a)稀释剂：取无机酸适量加水制成酸水溶液(例如制成浓度为0.5％～2％例如1％的酸水溶液，所述无机酸例如磷酸或硫酸)；
[0057]
(2b)衍生化试剂：取氯胺t加水溶解并稀释制成氯胺t溶液(例如浓度为1％的氯胺t溶液，此浓度亦是其作为衍生化试剂的常用浓度)，作为衍生化试剂(临用新制)；
[0058]
(2c)空白溶液：取稀释剂置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)；
[0059]
(2d)对照品溶液：精密称取氰化钾对照品适量，用稀释剂溶解并稀释制成对照品溶液(例如，其浓度为0.2～10μg/ml例如0.5～5μg/ml例如0.5～2.5μg/ml例如1μg/ml)；
[0060]
取对照品溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)；
[0061]
(2f)供试品溶液：精密量取硝普钠药物组合物的水溶液(其中硝普钠浓度为20～
50mg/ml例如25～50mg/ml例如25mg/ml；例如，该硝普钠药物组合物为溶液型注射液或者冷冻干燥粉针剂，若为注射液则直接取样，若为粉针剂则预先将其用水溶解并稀释制成含主成分25mg/ml的溶液)置衍生化反应瓶的外瓶中并加入无机酸适量(例如，其与硝普钠药物组合物水溶液的体积比为0.5～5：100例如为0.75～2：100例如为1：100)，摇匀，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)；
[0062]
(3)色谱条件：
[0063]
顶空进样时顶空瓶的平衡温度45～60℃例如50℃，平衡时间15～30分钟例如20分钟；
[0064]
(气相色谱其它条件为常规的条件，例如进样口温度180～240℃例如200℃，定量环温度80～120℃例如90℃，传输线温度80～120℃例如100℃，检测器(ecd)温度280～350℃例如300℃，进样时间0.5～5min例如0.5～2min例如1min，这些色谱条件是常规的且在上述范围内适当调整均不影响本发明方法的测定)；
[0065]
高纯氮气为载气，流速0.5～2.0ml/min例如1.0ml/min，分流比8～15：1例如10:1；
[0066]
程序升温：初始柱温38～45℃例如40℃维持4～6分钟例如5分钟，接着以每分钟28～35℃例如30℃的速率升温至180～240℃例如200℃，然后维持3～5分钟例如4分钟；
[0067]
(4)系统适用性试验要求：分别取空白溶液、对照品溶液顶空进样，记录色谱图，确定氰化物色谱峰；扣除空白溶剂中的干扰峰，氰化物色谱峰与其相邻色谱峰间的分离度应大于5例如应大于10，对照品溶液重复进样(例如，至少5次)的氰化物峰面积的rsd％不得大于10％例如不大于8％；
[0068]
(5)测定：分别取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中的氰化物含量。
[0069]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中还包括如下方式制备灵敏度溶液：
[0070]
(2e)精密移取步骤(2d)所得对照品溶液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液，取灵敏度溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得(例如，外瓶与内瓶中的液体体积比为1～5：1尤其是1～4：1尤其是2～3：1例如3：1或2：1，例如内瓶液体体积为0.5ml)。
[0071]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中使用灵敏度溶液顶空进样测试所得色谱图中氰化物峰的信噪比不小于100。
[0072]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中所述毛细管色谱柱为石英毛细管色谱柱。
[0073]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中所述毛细管色谱柱的规格为30m*0.25mm，0.5μm。
[0074]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中所述毛细管色谱柱为db-waxetr石英毛细管色谱柱，以100％聚乙二醇为固定液，规格30m*0.25mm，0.5μm。
[0075]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中在将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和任选的灵敏度溶液加至衍生化反应瓶时，是按如下方式添加的：取1.0ml该等溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得。
[0076]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中在用对照品溶液测定所得色谱图中，
氰化物峰的理论板数为大于20000，例如大于25000。
[0077]
根据本发明第二方面的衍生化反应瓶，其中将对照品溶液或者供试品溶液与衍生化试剂密封于衍生化反应瓶中后在室温处放置5小时，分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h时进行顶空气相色谱测定，得到6个结果的rsd小于15％例如小于12％例如小于10％。
[0078]
进一步的，本发明第三方面提供了一种硝普钠药物组合物，其为玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂的药物制剂形式，其中按亚硝基铁氰化钠二水合物计，注射液或冻干燥粉针剂每瓶包含硝普钠25mg或50mg。
[0079]
进一步的，本发明第四方面提供了制备商品化形式的硝普钠药物组合物的方法，包括如下步骤：
[0080]
i)按照注射液制备方法或者冷冻干燥粉针剂制备方法，制备玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂的药物制剂形式的硝普钠药物组合物，按亚硝基铁氰化钠二水合物计，注射液或冻干燥粉针剂每瓶包含硝普钠25mg或50mg；
[0081]
ii)将步骤i)所得硝普钠药物组合物使用本发明第一方面任一项所述方法测定其中的氰化物含量；
[0082]
iii)若步骤ii)测得氰化物含量小于20ppm例如15ppm例如10ppm时，将玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂用纸质包装盒包装，得到商品化形式的硝普钠药物组合物。
[0083]
本发明硝普钠药物组合物及其制备方法以及它们的测定氰化物含量的方法呈现如本文所述至少一个方面的效果，例如测试溶液配制简单，gc测定时程短等等。
[0084]
硝普钠是一种硝基氢氰酸盐，直接作用于动静脉血管床的强扩张剂。该药对阻力和容量血管都有直接扩张作用，对后负荷的作用大于硝酸甘油，故可使患者的左室充盈压减低，心排血量增加。对慢性左室衰竭患者的急性失代偿，硝普钠比呋塞米收效更快，更强。由于硝普钠主要作用于冠状动脉循环中阻力血管，故可引起冠状动脉缺血。硝普钠可使心肌和肺的动静脉分流增加，故总血流量的增加，未必表现为灌注情况获得改善的那部分血流增加。其每搏血量的增加可抗衡末梢血管阻力的减低，故动脉血压不会有很大下降。心率一般不增加，甚至可因血流动力学的改善而减低。其作用机制与硝酸酯类相同，能使血管内皮细胞释放no及激活鸟苷酸环化酶，增加细胞内cgmp水平，扩张血管。临床上血流动力学改变的具体类型及内在病变基础，可能有助于对药物的选择。泵功能明显失常、左室充盈压增高而末梢血管阻力显著增加，出现心排血量减低而动脉压正常或增高的患者，选用硝普钠短期静脉滴注为宜。硝普钠需新鲜配制静脉给药。硝普钠的半衰期极短。其作用维持时间仅5～15min，故应静脉滴注维持疗效。其先由红细胞转变为氰化物，再由肝中硫氰酸酶转化为终末代谢物硫氰酸。硫氰酸由肾排出，肾功能正常者的半衰期是4～7天。肾功能衰竭患者有蓄积性。若剂量太大，血中的代谢产物硫氰酸盐过高易发生中毒。
[0085]
硝普钠的适应症：对各种高血压急症如急进型高血压、高血压危象、高血压脑病或高血压合并主动脉剥离(夹层血肿形成)，硝普钠应列为首选；对心脏外科手术后反应性高血压，也可采用硝普钠；对高血压并发急性左侧心力衰竭、肺水肿，硝普钠应及早使用；对急性心肌梗死并发左侧心力衰竭，发病已超过8h且对一般治疗无效者，可考虑采用硝普钠；对各种病因引起的难治性心衰，可采用硝普钠与多巴酚丁胺合用，进行“冲击治疗”数日，常可使病情缓解，有时疗效可维持数周；急性二尖瓣、主动脉瓣关闭不全、室间隔穿孔：使用硝普
钠后血流前向阻力降低，反流量及左向右分流量均可减少，从而使病情有所缓解，可作为外科手术前的准备。
[0086]
硝普钠的用法用量：成人常用量静脉滴注，开始每分钟按体重0.5μg/kg，根据治疗反应以每分钟0.5μg/kg递增，逐渐调整剂量，常用剂量为每分钟按体重3μg/kg。极量为每分钟按体重10μg/kg；总量为按体重3.5mg/kg；用作麻醉期间短时间的控制性降压，滴注最大量为每分钟按体重0.5mg/kg；小儿常用量静脉滴注，每分钟按体重1.4μg/kg，按效应逐渐调整用量。
附图说明
[0087]
图1：氰离子衍生化反应瓶的结构示意图，
[0088]
图2：对照品溶液色谱图，
[0089]
图3：灵敏度溶液色谱图，
[0090]
图4：供试品溶液色谱图。
具体实施方式
[0091]
下面提供一些具体实例来进一步说明本发明，这些实例中所用的各种试剂和仪器等，若未特别说明，均是容易从市场获得的。在本发明中，若未特别说明，所用的顶空瓶(衍生化反应瓶)为棕色的玻璃瓶。
[0092]
实施例1：测定硝普钠注射液中氰化物含量的方法
[0093]
本实施例测定方法的基本原理是，在密闭容器和一定温度下，样品中的氰化物在酸性条件下用氯胺t将其衍生为氯化氰。但由于硝普钠活性强，不可将衍生化试剂直接加入供试品溶液中。本发明方法采用图1所示顶空瓶装置，作为氰离子的衍生化反应瓶，该顶空瓶由一体式设计的内外2个玻璃瓶构成，内瓶敞口，外瓶可用橡胶塞密封，内瓶内的空间与外瓶内的空间是相通的，将衍生化试剂氯胺t溶液置于顶空瓶的内瓶中，将供试品溶液(或对照品溶液)加至顶空瓶的外瓶中(亦可将衍生化试剂置外瓶，供试品溶液或对照品溶液置内瓶)，用橡胶塞密封顶空瓶，在密闭的空间里，供试品溶液挥发出的氰化氢气体与氯胺t溶液挥发出的氯气结合，生成气体衍生物氯化氰。待氯化氰在气相和液相中达到平衡后，将气相部分导入气相色谱仪进行分离，用电子捕获检测器检测，以外标法计算，即可对供试品中的氰化物进行定量。
[0094]
上述衍生化反应瓶的内瓶容积为0.5ml～5ml，优选为1ml～4ml，例如内瓶容积为1ml或2ml或3ml或4ml，例如衍生化反应瓶内瓶溶液体积占内瓶容积的1/4～3/4，优选1/2。
[0095]
上述衍生化反应瓶的外瓶容积为5ml～50ml，优选为10ml～30ml，例如外容积为10ml或15ml或20ml或25ml。当然，本发明亦可采用小瓶和大瓶独立的玻璃瓶，测试时将小瓶置于大瓶内，形成类似于上述一体式设计的内瓶和外瓶的空间结构。
[0096]
具体测定方法包括如下步骤：
[0097]
(1)提供气相色谱仪和聚乙二醇为固定液的毛细管色谱柱以及衍生化反应瓶[本实施例使用agilent7890b gc 7697a hs气相色谱仪，db-waxetr石英毛细管色谱柱(100％聚乙二醇为固定液，30m*0.25mm，0.5μm)，衍生化反应瓶为图1所示内瓶容积2ml、外瓶容积20ml的一体化熔合设计的玻璃瓶结构；其它类似型号的气相色谱仪和毛细管色谱柱以及衍
生化反应瓶亦将是适用的]；
[0098]
(2)溶液的制备
[0099]
(2a)稀释剂：取磷酸适量加水制成1％磷酸溶液；
[0100]
(2b)衍生化试剂：取0.5g氯胺t，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制得1％氯胺t溶液，作为衍生化试剂(临用新制)；
[0101]
(2c)空白溶液：取稀释剂1.0ml置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得；
[0102]
(2d)对照品溶液：
[0103]
精密称取氰化钾对照品约125mg，置100ml量瓶中，用水(亦可用稀释剂)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液
①
；
[0104]
精密量取2.0ml对照品贮备液
①
置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液
②
；
[0105]
精密量取1.0ml对照品贮备液
②
置25ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液(相当于1μg/ml)；
[0106]
取1.0ml对照品溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得；
[0107]
(2e)灵敏度溶液：精密移取对照品溶液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液(相当于0.01μg/ml)，取1.0ml灵敏度溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得；
[0108]
(2f)供试品溶液：精密量取1.0ml硝普钠注射液(海南普利制药产，规格50mg/2ml)置衍生化反应瓶的外瓶中并加入10μl磷酸，摇匀，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得；
[0109]
(3)色谱条件：
[0110]
顶空进样时顶空瓶的平衡温度50℃，平衡时间20分钟；
[0111]
进样口温度200℃，定量环温度90℃，传输线温度100℃，检测器(ecd)温度300℃，进样时间1min；高纯氮气为载气，流速1.0ml/min，分流比10:1；
[0112]
程序升温：初始柱温40℃维持5分钟，接着以每分钟30℃的速率升温至200℃，然后维持4分钟；
[0113]
(4)系统适用性试验要求：分别取空白溶液、对照品溶液、灵敏度溶液顶空进样，记录色谱图，确定氰化物色谱峰(本实施例条件下氰化物色谱峰的保留时间约为2.7min)；扣除空白溶剂中的干扰峰，氰化物色谱峰与其相邻色谱峰间的分离度应大于5，对照品溶液重复进样(至少5次，本实施例6次)的氰化物峰面积的rsd％不得大于10％；灵敏度溶液色谱图中氰化物峰的信噪比应不小于100；
[0114]
(5)测定：分别取空白溶液、对照品溶液、灵敏度溶液、供试品溶液顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中的氰化物含量。
[0115]
实施例2：使用实施例1方法的方法学性能和样品测定
[0116]
使用本实施例1的方法进行测定，一些典型结果提供如下。
[0117]
1、保留时间和分离度
[0118]
一次典型的6次测定对照品溶液所得色谱图中氰化物保留时间、分离度、峰面积及
相关rsd％结果如下表。
[0119]
项目123456平均值rsd％保留时间(min)2.7322.7322.7322.7322.7322.7322.7320.00峰面积15581.917508.617295.017715.417881.118573.817426.05.76分离度16.6216.6216.6216.4316.5216.4316.50.57
[0120]
6针对照品溶液中氰化物保留时间的rsd小于0.1％，峰面积的rsd小于6.0％，氰化物与相邻色谱峰间的分离度均大于16，符合验证的一般性要求。
[0121]
一份典型的对照品溶液色谱图如图2所示，显示氰化物保留时间2.732min，与其相邻峰的分离度大于5.0，该色谱图氰化物峰算得的色谱柱理论板数为33740。经观测，使用本实施例1方法测定供试品溶液或对照品溶液二百次以上的理论板数均能保持在28000以上，未见因测定次数增加而造成理论板数降低的现象。
[0122]
2、信噪比
[0123]
一份典型的灵敏度溶液色谱图如图3所示，录得其信噪比s/n为182。
[0124]
3、样品测定结果及稳定性
[0125]
根据本实施例1的方法，测定3批硝普钠注射液(海南普利制药提供)，结果如下表。
[0126]
供试品测得氰化物浓度(n＝6)rsdrsdx普利硝普钠注射液lot19.46ppm4.84％8.53％普利硝普钠注射液lot210.37ppm5.16％9.86％普利硝普钠注射液lot39.18ppm4.17％8.79％
[0127]
上表中，rsdx栏测定结果是同一样品配制成的供试品溶液与衍生化试剂密封于衍生化反应瓶中后在室温处放置5小时，分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h时进行顶空气相色谱测定所得6个结果的rsd统计值，rsd显示均小于15％。这些结果表明，使用本实施例方法，供试品溶液与衍生化试剂密封于衍生化反应瓶中后在室温处放置5小时内是稳定的。
[0128]
普利硝普钠注射液(lot1)的一个典型的供试品溶液色谱图见图4。
[0129]
此外，本发明人使用一份对照品溶液与衍生化试剂密封于衍生化反应瓶中，平行制备6份，在室温处放置，分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h时进行顶空气相色谱测定，得到6个结果的rsd为9.26％，这也表明本实施例方法对于对照品溶液在室温处放置5小时内也是稳定的。
[0130]
实施例3：改用分体式的顶空瓶测定硝普钠注射液中的氰化物含量
[0131]
本实施例参考实施例1和实施例2的方法，不同的仅是将其中的一体式顶空瓶改为分体式的，即外瓶为一个20ml具塞玻璃瓶(可以是常规的20ml气相色谱进样顶空瓶)，内瓶为一个2ml敞口玻璃瓶(可以是常规的2ml气相进样小瓶)，内瓶可以从外瓶的瓶口放入其中，组成与图1类似但内外瓶可分离的构造；测试时，向外瓶中加入1.0ml对照品溶液或供试品溶液等测试溶液，另将添加了0.5ml衍生化试剂的内瓶小心放入外瓶中，将外瓶加盖密封即可。例如，空白溶液、对照品溶液、灵敏度溶液、供试品溶液分别照如下方式制得：
[0132]
(2c)空白溶液：取稀释剂1.0ml，置20ml顶空瓶中，在同一顶空瓶中，小心放置一个装有0.5ml衍生化试剂的2ml气相进样小瓶，加盖密封，即得；
[0133]
(2d)对照品溶液：按照实施例1所述分别制得对照品贮备液
①
、对照品贮备液
②
、对照品溶液，接着，取1.0ml对照品溶液置20ml顶空瓶中，在同一顶空瓶中，小心放置一个装
有0.5ml衍生化试剂的2ml气相进样小瓶，加盖密封，即得；
[0134]
(2e)灵敏度溶液：精密移取对照品溶液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液(相当于0.01μg/ml)，取1.0ml灵敏度溶液置20ml顶空瓶中，在同一顶空瓶中，小心放置一个装有0.5ml衍生化试剂的2ml气相进样小瓶，加盖密封，即得；
[0135]
(2f)供试品溶液：精密量取1.0ml硝普钠注射液(海南普利制药产，规格50mg/2ml)置20ml顶空瓶中，加磷酸10μl，摇匀，在同一顶空瓶中，小心放置一个装有0.5ml衍生化试剂的2ml气相进样小瓶，加盖密封，即得。
[0136]
其余操作和测试条件与实施例1和实施例2相同，各项测定结果与实施例2所载结果基本相同：
[0137]
6次测定对照品溶液的保留时间平均值为2.733(rsd《0.1％)，峰面积平均值18142.4(rsd＝6.13％)，分离度平均值16.8(rsd＝0.64％)；灵敏度溶液的信噪比s/n为173；3批硝普钠注射液(5小时内分6次测定，n＝6)测定结果分别为：普利硝普钠注射液lot1＝9.34ppm(rsd＝6.57％)、普利硝普钠注射液lot2＝10.92ppm(rsd＝5.84％)、普利硝普钠注射液lot3＝9.48ppm(rsd＝6.23％)。
[0138]
实施例4：改变稀释剂测定硝普钠注射液中的氰化物含量
[0139]
本实施例参考实施例1和实施例2的方法，不同的仅是将其中使用的磷酸替换为硫酸、盐酸或硝酸，例如稀释剂替换为1％的硫酸溶液、盐酸溶液或硝酸溶液，配制供试品溶液时将10μl磷酸替换为等体积的硫酸、盐酸或硝酸，其余操作和测试条件与实施例1和实施例2相同。结果发现，使用硫酸时各项测定结果与实施例2所载结果基本相同：6次测定对照品溶液的保留时间平均值为2.731(rsd《0.1％)，峰面积平均值17884.7(rsd＝5.74％)，分离度平均值15.7(rsd＝0.56％)；灵敏度溶液的信噪比s/n为194；3批硝普钠注射液(5小时内分6次测定，n＝6)测定结果分别为：普利硝普钠注射液lot1＝9.31ppm(rsd＝6.03％)、普利硝普钠注射液lot2＝10.73ppm(rsd＝6.31％)、普利硝普钠注射液lot3＝9.74ppm(rsd＝5.78％)，并且测试过程中未见氰化物色谱峰理论板数的下降。但是，在使用盐酸和硝酸的情况下，发现在测定20次以上后，氰化物色谱峰计算的理论板数会从33000左右迅速降低至15000以下，这是完全不可接受的。因此，依据本发明方法，所使用的酸可以是磷酸或硫酸。
[0140]
本实施例参考实施例1和实施例2的方法，不同的仅是将其中使用的稀释剂改为0.5％磷酸溶液或2％磷酸溶液，其余操作和测试条件与实施例1和实施例2相同。结果发现，使用两种浓度磷酸时各项测定结果与实施例2所载结果基本相同，例如6次测定对照品溶液的峰面积平均值18063.2(rsd＝5.12％)，相应3批硝普钠注射液氰化物测定结果均在9～11ppm范围内且6次测定的rsd均在4.8％～6.1％范围内，测试过程中未见氰化物色谱峰理论板数的下降。
[0141]
本实施例参考实施例1和实施例2的方法，不同的仅是在制备供试品溶液时加入7.5μl磷酸或者15μl磷酸，其余操作和测试条件与实施例1和实施例2相同。结果发现，使用两种浓度磷酸时各项测定结果与实施例2所载结果基本相同，例如6次测定对照品溶液的峰面积平均值17897.4(rsd＝5.47％)，相应3批硝普钠注射液氰化物测定结果均在9～11ppm范围内且6次测定的rsd均在4.6％～5.7％范围内，测试过程中未见氰化物色谱峰理论板数的下降。
[0142]
实施例5：改变用平衡温度或平衡时间测定硝普钠注射液中的氰化物含量
[0143]
如本发明实施例1所述，顶空进样时顶空瓶的平衡温度50℃，平衡时间20分钟。
[0144]
本实施例考察变更平衡温度和/或平衡时间对方法的影响。参考实施例1和实施例2的方法，不同的是顶空进样时顶空瓶的平衡温度设定为45℃或60℃，其它条件不变，结果发现，使用两种平衡温度时各项测定结果与实施例2所载结果基本相同，例如6次测定对照品溶液的峰面积平均值17584.2(rsd＝5.35％)和17937.4(rsd＝5.82％)。
[0145]
参考实施例1和实施例2的方法，不同的是顶空进样时顶空瓶的平衡时间设定为15分钟或30分钟，其它条件不变，结果发现，使用两种平衡时间时各项测定结果与实施例2所载结果基本相同，例如6次测定对照品溶液的峰面积平均值17821.6(rsd＝6.07％)和18224.8(rsd＝5.44％)。根据上述结果，本发明顶空进样时顶空瓶的平衡温度45～60℃，平衡时间15～30分钟是可行的。
[0146]
但是，在进一步的考察中，当平衡温度进一步降低至35℃或升高至75℃时，发现低平衡温度时对照品溶液主峰面积明显的降低，6次测定对照品溶液的峰面积平均值11473.4(rsd＝6.43％)；而高平衡温度时对照品溶液主峰面积虽然无明显变化但是偏差变大，6次测定对照品溶液的峰面积平均值18024.3(rsd＝14.62％)，因此平衡温度过高或过低都是不可取的。
[0147]
另外，在进一步参考实施例1和实施例2方法的考察中，当平衡时间进一步降低至10分钟或升高至60分钟时，发现低平衡时间时对照品溶液主峰面积明显的降低，6次测定对照品溶液的峰面积平均值12424.6(rsd＝5.75％)；而高平衡时间时对照品溶液主峰面积虽然无明显变化但是偏差变大，6次测定对照品溶液的峰面积平均值17863.1(rsd＝12.84％)，因此平衡时间过高或过低都是不可取的。
[0148]
实施例6：测定硝普钠冷冻干燥粉针剂中的氰化物含量
[0149]
参考实施例1和实施例2的方法，测定了3批注射用硝普钠冷冻燥粉针剂，测试方法仅仅是改变制备供试品溶液：先向每瓶粉针剂中准确加入2ml(50mg/每瓶的规格)5％葡萄糖注射液使粉针剂溶解，接着精密量取1.0ml所得溶液置衍生化反应瓶中进行后续的处理。
[0150]
使用对照品溶液获得的保留时间、分离度、信噪比、理论板数等参数均与实施例2相同，3批注射用硝普钠冷冻燥粉针剂的测定结果如下：粉针剂1氰化物浓度(n＝6)＝11.24ppm(rsd＝5.78％)、粉针剂2氰化物浓度(n＝6)＝9.32ppm(rsd＝4.46％)、粉针剂3氰化物浓度(n＝6)＝10.67ppm(rsd＝6.13％)。以上粉针剂1制法如下：参照cn107412259b说明书[0062]-[0069]之实施例2的方法制得，每瓶装活性成分50mg；粉针剂2制法如下：参照cn 115350140 a说明书[0059]-[0066]之实施例3的方法制得，每瓶装活性成分50mg；粉针剂3制法如下：参照cn 103768096 a说明书[0028]-[0036]之实施例1的方法制得，每瓶装活性成分50mg。
[0151]
在本发明的其它一些实例中，还使用以甲基聚硅氧烷或苯基甲基聚硅氧烷作为毛细管色谱柱的固定液进行试验，结果均显示优良测试结果，例如主成分峰理论板数均达30000以上，主成分峰与相邻杂质峰的分享度均大于13，对照品溶液重复测试6次的rsd均小于8％，灵敏度溶液顶空进样测试所得色谱图中氰化物峰的信噪比均大于150。
[0152]
实施例7：制备商品化形式的硝普钠药物组合物
[0153]
本实施例提供制备商品化形式的硝普钠药物组合物的方法，该制备商品化形式的硝普钠药物组合物是玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂的药物制剂形式，其中
按亚硝基铁氰化钠二水合物计，注射液或冻干燥粉针剂每瓶包含硝普钠25mg或50mg。
[0154]
本实施例制备商品化形式的硝普钠药物组合物的方法，包括如下步骤：
[0155]
i)按照注射液制备方法或者冷冻干燥粉针剂制备方法，制备玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂的药物制剂形式的硝普钠药物组合物，按亚硝基铁氰化钠二水合物计，注射液或冻干燥粉针剂每瓶包含硝普钠25mg或50mg；
[0156]
ii)将步骤i)所得硝普钠药物组合物使用本发明实施例1～2的方法测定其中的氰化物含量；
[0157]
iii)若步骤ii)测得氰化物含量小于20ppm例如15ppm例如10ppm时，将玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂用纸质包装盒包装，得到商品化形式的硝普钠药物组合物。
[0158]
药品制造技术领域的普通技术人员公知，在制备商品化形式药物制剂时，该药物制剂通常是以市售包装的形式体现，例如注射液或者注射用粉针剂每瓶用(小)纸盒包装，必要时多个小纸盒包装到一个大纸盒中，以此包装形式销售，在将药瓶装载到纸盒中之前，需要先对药品进行检验，检验合格或者检验后认定为合格时才能进一步包装到纸盒中，因此，对药瓶内部药物中的氰化物含量进行测定的过程，亦是制备商品化形式的药物组合物的一个必经步骤。
[0159]
以上对本发明各个方面进行了说明，应当理解，这些实例仅是示意性的，本发明保护范围并不限于此类实例。

技术特征：
1.使用气相色谱测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量的方法，该方法包括如下步骤：(1)提供气相色谱仪和毛细管色谱柱以及衍生化反应瓶；(2)溶液的制备(2a)稀释剂：取无机酸适量加水制成浓度为0.5%~2%的酸水溶液；(2b)衍生化试剂：取氯胺t加水溶解并稀释制成氯胺t溶液，作为衍生化试剂；(2c)空白溶液：取稀释剂置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得；(2d)对照品溶液：精密称取氰化钾对照品适量，用稀释剂溶解并稀释制成对照品溶液，其浓度为0.2~10mg/ml；取对照品溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得；(2f)供试品溶液：精密量取浓度为20~50mg/ml的硝普钠药物组合物的水溶液置衍生化反应瓶的外瓶中并加入无机酸适量，该无机酸与硝普钠药物组合物水溶液的体积比为0.75~2：100例如为1：100，摇匀，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得；(3)色谱条件：顶空进样时顶空瓶的平衡温度45~60
°
c例如50
°
c，平衡时间15~30分钟例如20分钟；进样口温度180~240
°
c，定量环温度80~120
°
c，传输线温度80~120
°
c，ecd检测器温度280~350
°
c，进样时间0.5~5min；高纯氮气为载气，流速0.5~2.0ml/min，分流比8~15：1；程序升温：初始柱温38~45
°
c维持4~6分钟，接着以每分钟28~35
°
c的速率升温至180~240
°
c，然后维持3~5分钟；(4)系统适用性试验要求：分别取空白溶液、对照品溶液顶空进样，记录色谱图，确定氰化物色谱峰；扣除空白溶剂中的干扰峰，氰化物色谱峰与其相邻色谱峰间的分离度应大于5，对照品溶液重复进样的氰化物峰面积的rsd%不得大于10%；(5)测定：分别取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中的氰化物含量；其中：所述毛细管色谱柱的固定液选自聚乙二醇、甲基聚硅氧烷和苯基甲基聚硅氧烷；所述衍生化反应瓶包括一敞口小瓶和一具塞大瓶，小瓶可置入大瓶中，构成外瓶即大瓶和内瓶即小瓶的构造，衍生化试剂和待测溶液分别添加于内瓶和外瓶后将外瓶密塞，外瓶液面和内瓶液面形成相通的气体氛围；所述空白溶液、对照品溶液或供试品溶液和所述衍生化试剂分别加至外瓶与内瓶中的液体体积比为1~4：1尤其是2~3：1例如内瓶液体体积为0.5ml；所述无机酸选自磷酸或硫酸。2.根据权利要求1的方法，其中还包括如下步骤(2e)制备灵敏度溶液：(2e)精密移取步骤(2d)所得对照品溶液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液，取灵敏度溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封，即得；其中，外瓶与内瓶中的液体体积比为1~4：1尤其是2~3：
1例如内瓶液体体积为0.5ml)。3.根据权利要求1的方法，其中：使用灵敏度溶液顶空进样测试所得色谱图中氰化物峰的信噪比不小于100；所述衍生化反应瓶的内瓶和外瓶是一体化熔合设计的玻璃瓶结构，或者是由2个独立的玻璃瓶组合构成；所述衍生化反应瓶的外瓶和内瓶各自独立的是棕色玻璃瓶；和/或，所述衍生化反应瓶的外瓶的塞子是橡胶塞。4.根据权利要求1的方法，其中：所述衍生化反应瓶的内瓶容积为1ml~4ml，衍生化反应瓶内瓶溶液体积占内瓶容积的1/4~3/4；所述衍生化反应瓶的外瓶容积为10ml~30ml；和/或，所述衍生化反应瓶的内瓶容积为2ml，外瓶容积为20ml，测试时，向内瓶中添加0.5ml衍生化试剂，向外瓶中添加1.0ml测试溶液。5.根据权利要求1的方法，其中：所述毛细管色谱柱为石英毛细管色谱柱，其规格为30m*0.25mm，0.5μm；或者，所述毛细管色谱柱为db-waxetr石英毛细管色谱柱，以100%聚乙二醇为固定液，规格30m*0.25mm，0.5μm。6.根据权利要求1的方法，其中：在将空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和任选的灵敏度溶液加至衍生化反应瓶时，是按如下方式添加的：取1.0ml该等溶液置衍生化反应瓶的外瓶中，另向衍生化反应瓶的内瓶中加入0.5ml衍生化试剂，加盖密封，即得；在用对照品溶液测定所得色谱图中，氰化物峰的理论板数大于20000，例如大于25000；和/或，将对照品溶液或者供试品溶液与衍生化试剂密封于衍生化反应瓶中后在室温处放置5小时，分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h时进行顶空气相色谱测定，得到6个结果的rsd小于15%、小于12%或者小于10%。7.用于气相色谱测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量的衍生化反应瓶，其包括一敞口小瓶和一具塞大瓶，小瓶可置入大瓶中，构成外瓶即大瓶和内瓶即小瓶的构造，衍生化试剂和待测溶液分别添加于内瓶和外瓶后将外瓶密塞，外瓶液面和内瓶液面形成相通的气体氛围。8.根据权利要求7的衍生化反应瓶，其中：所述内瓶和外瓶是一体化熔合设计的玻璃瓶结构，或者是由2个独立的玻璃瓶组合构成；外瓶是棕色玻璃瓶；内瓶是棕色玻璃瓶；外瓶的塞子是橡胶塞；内瓶容积为0.5ml~5ml，衍生化反应瓶内瓶溶液体积占内瓶容积的1/4~3/4；外瓶容积为5ml~50ml；或者，内瓶容积为2ml，外瓶容积为20ml，测试时，向内瓶中添加0.5ml衍生化试剂，向外瓶中添加1.0ml测试溶液。9.一种硝普钠药物组合物，其为玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂的药物制剂形式，其中按亚硝基铁氰化钠二水合物计，注射液或冻干燥粉针剂每瓶包含硝普钠25mg或50mg。10.制备商品化形式的硝普钠药物组合物的方法，包括如下步骤：i)按照注射液制备方法或者冷冻干燥粉针剂制备方法，制备玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂的药物制剂形式的硝普钠药物组合物，按亚硝基铁氰化钠二水合物计，注射液或冻干燥粉针剂每瓶包含硝普钠25mg或50mg；ii)将步骤i)所得硝普钠药物组合物使用权利要求1~6任一项所述方法测定其中的氰
化物含量；iii)若步骤ii)测得氰化物含量小于20ppm或15ppm时，将玻璃瓶密封包装的注射液或者冷冻干燥粉针剂用纸质包装盒包装，得到商品化形式的硝普钠药物组合物。

技术总结
本发明涉及硝普钠药物组合物和测定其中氰化物的方法。具体地说，一方面，涉及使用气相色谱测定硝普钠药物组合物中的氰化物含量的方法，该方法包括如下步骤：提供气相色谱仪和毛细管色谱柱以及衍生化反应瓶；配制衍生化试剂和供试品溶液等，将其置衍生化反应瓶外瓶，另向衍生化反应瓶内瓶中加入衍生化试剂，加盖密封；使用顶空进样方式，以高纯氮气为载气进行气相色谱测试，使用程序升温进行分析，记录对照品溶液和供试品溶液色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中的氰化物含量。还涉及上述方法使用的衍生化反应瓶，以及制备所述硝普钠药物组合物的方法。本发明方法呈现如说明书所述一个或多个方面的效果，例如测试效率高，测试结果准确。结果准确。


技术研发人员：郑金琪 李彩霞 徐月婷 曾苏 洪利娅 王知坚 顾霄 陈平平 张晨
受保护的技术使用者：浙江省食品药品检验研究院
技术研发日：2023.07.28
技术公布日：2023/10/11