一种真菌诱导子及其制备方法和应用

1.本发明涉及中药农业技术领域，尤其是涉及一种真菌诱导子及其制备方法和应用。


背景技术：

2.丹参是唇形科鼠尾草属植物丹参salvia miltiorrhiza bge.的干燥根及根茎，具有显著的医学和经济价值，广泛用于治疗心脑血管和各种与炎症相关的疾病。其药用活性成分主要包括水溶性的酚酸类化合物及脂溶性的丹参酮类化合物，这些化合物均为次生代谢产物，具有良好的生物活性，当植物遭受逆境或在胁迫条件下才会大量合成与积累。随着现代生活水平提高、营养过剩体重超标的人群增多，同时生活节奏加快、生活压力变大，缺乏锻炼熬夜等，导致心脑血管疾病患病率越来越高，因此市场对丹参的需求也不断增加，但由于野生资源缺乏、种植技术有限、栽培产量低和质量不及野生等一系列问题，严重制约了丹参产业发展。所以提高栽培丹参的品质(即提高丹参中有效成分的含量)和抗逆性已然成为重要的问题。
3.丹参的药材品质与水溶性的酚酸类化合物和脂溶性的丹参酮类化合物密切相关，2020年版《中国药典》规定丹参干燥品中水溶性丹酚酸b含量不得低于3.0％，脂溶性丹参酮i、丹参酮ila、隐丹参酮的总量不得少于0.25％，作为评价丹参药材质量的主要指标。越来越多研究证明诱导子对药用植物中次生代谢产物的生物合成作用效果显著，是促进药用植物生长和次生代谢的有效调控手段，丹参活性成分的生物合成也受生物及非生物诱导子的调控，因此通过诱导子提升丹参药材品质是一个有效的途径。诱导子主要包括非生物诱导子和生物诱导子两类。非生物诱导子包括金属诱导子(ag
+
、co
2+
、cu
2+
等)、化学诱导子(茉莉酸甲酯、水杨酸及其衍生物等)和植物激素(赤霉素、吲哚乙酸等)，其中ag
+
被认为是丹参毛状根中酚酸类化合物和丹参酮生产的有效诱导子。生物诱导子包括病原菌与植物细胞成分,其中真菌诱导子应用最为广泛，xu等从丹参中分离出内生真菌mucorfragilis,该真菌提取物促进丹参毛状根中ra和salb的积累；罗琳等从野生寒兰的根中分离得到内生真菌后制成真菌诱导子，其能显著缩短白芨种子的萌发时间并促进白芨生长。但目前诱导子开发也存在部分金属诱导子(比如ag
+
)昂贵难以量产以大规模应用、环境污染、诱导子作用后存在作用弱、产量较低，底物选择性低等缺点。因此本发明提供一种新型真菌诱导子及其制备方法和应用，在中药农业领域具有重要的应用前景和价值。
4.本发明从丹参根中首次分离获得一种新型内生真菌，经分子和形态鉴定为岭南聚孢霉菌，由其制备的诱导子命名为h8y诱导子，是由岭南聚孢霉菌丝多糖制备而成。wu(curr microbiol,2013,66(1):40-8.)最早从红豆杉中分离出岭南聚孢霉，杨小林等(河南农业科学,2019,48(04):82-87)从患穗腐病的水稻中分离出了岭南聚孢霉，属于子囊菌亚门粪壳菌纲肉座菌目生赤壳科螺旋聚孢霉属岭南聚孢霉。虽然目前已有许多研究表明真菌诱导子能够促进植物次生代谢产物的积累，但关于该岭南聚孢霉菌能够促进丹参品质提升还未见报道，本研究中h8y真菌诱导子对丹参生长和次生代谢有正向调节作用，同时其材料容易获
得、制备方法简便，可大规模生产，环保无污染，可为新型诱导子开发、丹参及其他中药材品质栽培过程的精准调控奠定基础。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种真菌诱导子及其制备方法和应用，能够解决丹参种子发芽率低、品质差的问题，为保护丹参的野生资源，提高药用植物利用率提供了方法，对促进丹参资源可持续发展奠定基础。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种真菌诱导子，该真菌诱导子为h8y诱导子，其是由岭南聚孢霉菌丝多糖制备而成的。
7.本发明还提供了一种真菌诱导子的制备方法，包括以下步骤：
8.s1、将岭南聚孢霉h8y接种于pda培养基，在恒温培养箱中28℃培养3d；
9.s2、用灭菌的接种环挑取少量菌丝接种于pdb培养基中，在120-180r/min、温度28℃的恒温震荡器上培养3-10d，待菌丝体充分生长后收获；
10.s3、121℃高温高压灭菌20min，真菌菌丝体先经4层纱布过滤，随后通过布氏漏斗抽滤，收集菌丝体；
11.s4、将过滤得到的菌丝体，加入适量蒸馏水匀浆10min，70℃超声提取30min，收集滤液，合并步骤s3中菌液，经水浴蒸发浓缩后，加入无水乙醇至终浓度为80％，4℃冷藏3d，离心收集沉淀，加入适量蒸馏水溶解，于121℃高温灭菌20min后冷却至常温后保存于4℃备用。
12.本发明还提供了一种真菌诱导子在提高药用植物种子萌发率和药物品质中的应用。
13.优选的，上述应用，所述植物为丹参。
14.本发明还提供了上述的一种真菌诱导子在制备药用植物专属叶面肥和生物肥料中的应用。
15.本发明还提供了上述的一种真菌诱导子在制备药用植物专属植物种子萌发促进剂中的应用。
16.本发明还提供了上述的一种真菌诱导子在制备药用植物根类生长调节剂中的应用。
17.优选的，上述的应用中，所述药用植物包括丹参。
18.本发明还提供了上述的一种真菌诱导子在菌肥制备过程中的应用。
19.本发明所述的一种真菌诱导子及其制备方法和应用的优点和积极效果是：
20.1、本发明中h8y诱导子对丹参种子萌发及幼苗生长和初次生代谢产物有促进作用，为进一步研究丹参品质提升提供参考。
21.2、本发明中h8y诱导子是从丹参根中分离获得的，对丹参生长和次生代谢有正向调节作用，同时其材料容易获得、制备方法简便，可大规模生产，环保无污染。
22.下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
23.图1为本发明实施例中内生真菌h8y菌落形态图；
24.图2为本发明实施例中可溶性糖(葡萄糖)标准曲线图；
25.图3为本发明实施例中不同浓度h8y诱导子对丹参幼苗可溶性糖及可溶性蛋白含量的影响，其中a为丹参幼苗在不同浓度h8y诱导子作用下可溶性糖含量，b为丹参幼苗在不同浓度h8y诱导子作用下可溶性蛋白含量，采用anova法对数据进行分析，*表示该组与对照组之间在0.05水平具有显著性差异，p＜0.05，**表示该组与对照组之间在0.01水平具有显著性差异，p＜0.01；
26.图4为本发明实施例中叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白的含量(n＝10)，其中a为叶绿素a含量变化；b为叶绿素含量b变化；c为总叶绿素含量变化；d为叶片可溶性糖含量变化；e为叶片可溶性蛋白含量变化；
27.图5为本发明实施例中丹参样品uplc图，其中a为260nm对照品，b为280nm对照品；a、b中1为迷迭香酸，2为丹酚酸b，3为二氢丹参酮，4为隐丹参酮，5为丹参酮ⅱa；
28.图6为本发明实施例中不同诱导阶段5种次生代谢产物含量变化(n＝6)，其中a为丹酚酸b，b为迷迭香酸，c为二氢丹参酮，d为隐丹参酮，e为丹参酮ⅱa(ns.,****，p《0.0001；***，p《0.001；**，p《0.01；*，p《0.05)。
具体实施方式
29.以下通过附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
30.除非另外定义，本发明使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
31.本发明所用丹参成熟种子及一年生丹参幼苗植株均市购获得，制备诱导子的新型内生真菌h8y从丹参植株健康根中分离获得。本发明中所用仪器及试剂均市购所得。
32.本发明以丹参为研究对象，考察真菌岭南聚孢霉(h8y)诱导子对丹参生长和初次生代谢产物积累的影响。
33.实施例1
34.1.1真菌的鉴定
35.内生真菌分子鉴定采用dna提取试剂盒对分离出来的内生真菌进行dna提取，对its dna区域序列进行pcr扩增。pcr扩增反应体系(总20μl)：2μl目标真菌模板dna，its1和its4引物(10μmol/l)各1μl，2
×
taq pcr master mix 10μl，ddh2o补至20μl。
36.pcr特异扩增采用rdna-its区段的通用反应引物：正向引物its 1f(如seq id no.1所示)：5
’‑
tccgtaggtgaacctgcgg-3’和反向引物its 4r(如seq id no.2所示)：5
’‑
tcctccgcttattgatatgc-3’。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳合格后，将pcr原液送往第三方公司进行后续测序工作。用snapgene软件去除叠峰等不合格的序列，进行序列拼接，登陆ncbi将整理好的各菌株its序列与genbank中的已知序列进行比对，并利用软件mega 7.0中的最大似然法构建系统发育树，同时进行形态鉴定，确定菌株的具体信息。
37.利用blas t-2.9.0及mega 7.0进行比对分析，以最大似然法构建系统发育树。结合菌落形态和its序列分析得到，该菌为一类菌，被鉴定为子囊菌亚门(ascomycota)粪壳菌纲(sordariomycetes)肉座菌目(hypocreales)生赤壳科(bionectriaceae)螺旋聚孢霉属(clonostachys)岭南聚孢霉(clonostachyepichloe)。岭南聚孢霉h8y的序列为如seq id no.3所示。
38.1.2内生真菌诱导子(h8y诱导子)的制备
39.h8y诱导子为真菌菌丝醇提物，将实验室保存的岭南聚孢霉(h8y)接种于pda培养基，在恒温培养箱中28℃培养3d(结果如图1所示)。用灭菌的接种环挑取少量菌丝接种于pdb培养基中，在转速120-180r/min、温度28℃的恒温震荡器上培养7-10d，待菌丝体充分生长后收获。121℃高温高压灭菌20min。真菌菌丝体先经4层纱布过滤，随后通过布氏漏斗抽滤，收集菌丝体。将过滤得到的菌丝体，加入适量蒸馏水匀浆10min。70℃超声提取30min，收集两次滤液(合并第一次菌液)，经水浴蒸发浓缩后，加入无水乙醇至终浓度为80％，4℃冷藏3d，离心收集沉淀，加入适量蒸馏水溶解，于121℃高温灭菌20min后冷却至常温后保存于4℃备用。诱导子添加量以多糖浓度计算，多糖浓度检测使用苯酚浓硫酸法。
40.以吸光度(a)为纵坐标，葡萄糖含量(c)为横坐标绘制可溶性糖(葡萄糖)标准曲线(如图2所示)，将稀释后的诱导子母液吸光度平均值数据代入回归方程得h8y诱导子母液浓度为2.200mg/ml。
41.实施例2丹参种子萌发试验
42.净选足量丹参种子用清水浸泡30min后依次用75％酒精和1％次氯酸钠消毒，再用蒸馏水冲洗5遍后备用。挑选饱满均匀、大小相近的种子，取50粒种子放置在垫有2层滤纸的培养皿中。h8y诱导子组浓度设为0.5mg/ml、0.75mg/ml、1.0mg/ml三个梯度，蒸馏水为对照，每组设置5个重复。在25℃恒温光照培养箱中培养14d，光照强度5500lx，光照时长设置14h/天。每天记录不同处理下的丹参种子的发芽状态，统计各组丹参种子的发芽率(丹参种子萌发的胚根突破种子外层的种皮后，以丹参种子胚根生长的长度≥1mm作为认定丹参种子发芽的指标。)连续观察14d后终止实验。在第10天统计丹参种子发芽率，第14天测量并统计各组丹参幼苗的根长和鲜重数据。统计完成后将各组丹参幼苗烘干后标记保存，结果如表1和表2所示，
43.从表1和表2结果可知，施加0.75mg/mlh8y诱导子处理后，丹参种子萌发率为32.96
±
2.00％，根长为30.92
±
4.14mm，鲜重为18.14
±
2.41mm，分别为对照组的1.40、1.76和1.47倍，均具有显著性差异(p《0.05)，对丹参种子萌发及幼苗生长促进作用最好，施加0.50mg/mlh8y诱导子处理后，丹参种子萌发率为29.66
±
2.33％，根长为29.36
±
4.65mm，鲜重为17.40
±
3.21mm，施加1.00mg/mlh8y诱导子处理后，丹参种子萌发率为29.98
±
1.47％，根长为29.73
±
3.93mm，鲜重为16.38
±
2.20mm，与对照组相比均具有显著性，差异有统计学意义(p《0.05)，故h8y诱导子能够促进丹参种子萌发及萌发后的生长，增加生物量积累。但施加0.50和1.00mg/mlh8y诱导子对丹参萌发及幼苗生长促进作用相近，而0.75mg/mlh8y诱导子处理后对丹参种子萌发率的影响明显高于其他两组，推测h8y诱导子可能存在一定的剂量依赖性。
44.表1不同浓度诱导子对丹参种子发芽率的影响(m
±
sd，n＝5)
[0045][0046]
表2不同浓度诱导子对丹参幼苗根长和鲜重的影响(m
±
sd，n＝8)
[0047][0048]
(注：采用anova法对各组发芽率数据进行多重比较。两组间无相同小写字母表示这两组之间具有显著性差异(p《0.05)，两组间具有相同小写字母表示两组之间不具有显著性差异(p》0.05)。)
[0049]
实验测得的发芽率数值较低，主要原因可能是实验所用为丹参陈种子，已有研究表明，丹参种子适宜低温储存，且丹参陈种子的生活力、发芽率偏低。运用丹参陈种子作为实验材料，施加新型内生真菌h8y诱导子处理，可为解决囤积丹参陈旧种子发芽率及幼苗生长提供新思路。
[0050]
对保存好的由丹参种子萌发而来的丹参幼苗采用苯酚浓硫酸法测定各处理组可溶性糖含量，采用考马斯蓝g-250法测定各处理组丹参幼苗可溶性蛋白含量，结果如图3所示。
[0051]
由图3中a、b分析可知，采用1.00mg/mlh8y诱导后丹参萌发幼苗中可溶性糖含量为43.10mg/ml，可溶性蛋白含量为40.68μg，分别为对照组的1.11和3.27倍，均具有显著性差异，有统计学差异(p《0.01)，在此浓度下可溶性蛋白积累远远高于对照组；采用0.75mg/mlh8y诱导后丹参萌发幼苗中可溶性糖含量为40.78mg/ml，可溶性蛋白含量为18.07μg，分别为对照组的1.05和1.45倍，具有显著性差异；采用0.50mg/mlh8y诱导后丹参萌发幼苗中可溶性糖含量为44.11mg/ml，可溶性蛋白含量为11.55μg，分别为对照组的1.14和0.93倍，该浓度下的可溶性糖含量和对照组相比具有显著性差异，有统计学差异(p《0.01)。说明新型内生真菌h8y诱导子能够促进丹参萌发幼苗
[0052]
实施例3丹参盆栽试验
[0053]
苗期促生试验采用盆栽试验。试验所用的丹参为1年生丹参幼苗，移栽前将丹参的主根长度修剪一致，种于高23cm，上口径29cm，下口径19cm的塑料盆，每盆4株，基质采用包括泥炭土，珍珠岩和蛭石的混合基质。盆栽放于空地，定期浇灌霍格兰营养液和水。每花盆种4株丹参，每个处理5重复。盆栽试验于移栽1个月后开始，诱导子喷施采用叶面喷施，每次喷施100ml。实验浓度根据前期幼苗预实验来确定。实验设置喷1mg/ml岭南聚孢霉诱导子(h8y)组及喷清水(ck)组。实验开始后一周喷施3次，每隔1周取材1次，喷施前取材1次共取4
次，每次每盆喷施100ml。丹参根洗干净后一部分在烘箱50℃干燥，另一部分在液氮冷冻后放入-80℃冰箱。最后一次喷施结束后取叶片，105℃烘箱杀青半小时，50℃烘干至恒重。测定丹参叶片中叶绿素、可溶性糖及可溶性蛋白含量。通过uplc再对诱导第0周，第1周，第3周，第5周盆栽丹参的干燥根中次生代谢产物进行定量分析。
[0054]
3.1盆栽丹参叶片初生代谢产物测定
[0055]
叶绿素含量结果如图4中a、b、c所示，由图4中a、b、c可知，在施加h8y诱导子处理第1、3、5周后，丹参叶片中叶绿素a含量分别为对照组的1.18、1.08、1.17倍，叶绿素b含量分别为对照组的1.13、1.08、1.08倍，总叶绿素含量分别为对照组的1.13、1.06、1.05倍，其中h8y诱导第1周时，叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量与对照组相比涨幅最大，分别为对照组的1.18、1.13和1.13倍。表明内生真菌h8y诱导子对丹参叶片中叶绿素积累有促进趋势。
[0056]
可溶性糖及可溶性蛋白含量，利用苯酚浓硫酸法对丹参叶片中可溶性糖含量进行检测，结果如图4中d和e所示，由图4中d可知，h8y诱导第3周起，h8y诱导子处理组中可溶性糖含量均高于对照组，分别为对照组的1.46和1.27倍。表明内生真菌h8y诱导子有益于丹参叶片可溶性糖增长。而h8y诱导子子对丹参叶片可溶性蛋白无明显影响作用。
[0057]
3.2丹参根次生代谢产物的uplc检测
[0058]
uplc的检测条件：色谱柱：waters acquity uplc beh-c18柱(2.1nm
×
100nm，1.7μm)；流动相：0.5％甲酸溶液(a)—乙腈(b)系统，色谱条件根据现有技术作适当修改：0-0.5min，5-10％b；0.5-6.0min，10-23％b；6.0-7.8min，23-30％b；7.8-9.0min，30-42％b；9.0-11.5min，42-45％b；11.5-14.5min，45-46％b；14.5-17.5min，46-85％b；17.5-19.5min，100％b；19.5-20min，5％b。流速0.4ml/min，进样量2μl，柱温35℃，样品管理器温度4℃。在此色谱条件下，分别配制5种成分的单标，单标混合后制成混标，混标中各标品中浓度分别为迷迭香酸0.62mg/ml，丹酚酸b0.125mg/ml，二氢丹参酮0.59mg/ml，隐丹参酮0.14mg/ml，丹参酮ⅱa
0.2mg/ml。uplc图如图5所示。
[0059]
供试品溶液配制：取丹参干燥药材，进行粉碎，过0.25mm筛。精密称取药材粉末0.1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇溶液10ml，静置过夜，超声提取30min(功率：200w；频率：40khz)，加超纯水补足重量，摇匀，溶液过滤，取上清。并经微孔滤膜(0.22μm)过滤，作为供试品溶液备用。
[0060]
盆栽丹参根次生代谢产物测定
[0061]
通过uplc对第0周、第1周、第3周、第5周盆栽丹参的干燥根中五种成分进行含量测定，结果如图6所示，由图6可知，施加内生真菌h8y诱导子后，各成分除了丹酚酸b在第5周出现短暂下降至对照组以下外，其余成分在各个时间点均高于对照组。其中丹酚酸b在诱导第三周时含量显著高于对照组，为对照组的1.36倍，有显著性差异(p《0.001)；迷迭香酸和二氢丹参酮在诱导第1至3周时含量均显著高于对照组，隐丹参酮在诱导第一周和第五周含量显著高于对照组，丹参酮ⅱa在第三周含量显著高于对照组，为对照组的2.22倍,上述差异均具有统计学意义。表明内生真菌h8y诱导子能够影响丹参次生代谢活动，一定程度促进其次生代谢产物的积累。
[0062]
图6中5种次生代谢产物含量呈下降趋势，与文献报道相反(陈晓梅，真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长及次生代谢产物的影响)。综合分析认为主要与丹参的移栽、丹参生长期及外界条件的变化有关。首先，丹参苗是药材基地挖出来的种苗，没有迅速栽种，导致种
苗一定程度的失水。此外在移栽进盆之前，为了保证实验条件一致，人为将丹参修剪得长短一致，导致丹参受到机械损伤。因此认为次生代谢产物含量降低的原因可能是干旱胁迫和机械损伤。其次，在丹参苗运输过程中由于气温过高，为了保证丹参存活率，运输过程中剪掉了大部分的叶子，而移栽入盆后，丹参地上部分才开始萌发新芽，根部营养供应地上部分的生长，导致丹参根部次生代谢物质含量降低。此外从丹参生长期来看，据赵志刚(丹参生长规律和栽培方式及加工方法的研究[d].2014,北京中医药大学)等报道，丹酚酸b在5月中旬即植株盛花期量最高，此后到7月中旬一直处于降低直至最低点。随着丹参地上部分不断生长发育，丹酚酸b的含量逐渐开始积累，到9月时，含量相对稳定，而9月之后，丹酚酸b含量不断降低，并延续到11月中旬。同时还发现除丹酚酸b以外，迷迭香酸和丹参酮类成分在9-11月也出现了骤降的趋势，这与本研究的实验结果一致，因此可能是因为此时丹参根正处于快速生长期，次生代谢产物降低。
[0063]
3.3方法学考察
[0064]
方法学考察包括：线性关系考察、精密度、重复性、稳定性和加样回收率实验。
[0065]
线性关系考察：准确称取对照品粉末，超声溶解于75％甲醇，分别配制5种成分的单标，单标混合后制成混标，混标中各标品中浓度分别为迷迭香酸0.62mg/ml，丹酚酸b 0.125mg/ml，二氢丹参酮0.59mg/ml，隐丹参酮0.14mg/ml，丹参酮ⅱa 0.2mg/ml。将混标分别稀释1/2、1/4、1/8、1/16，1/32倍，得到不同浓度下峰面积的值，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归分析，计算回归方程及线性范围，结果见表3，5种成分在相应范围内与峰面积线性关系良好。
[0066]
精密度：按照本实施例“uplc的检测条件”同一液相条件下，分别将对照品连续进6次样，记录峰面积并计算rsd值。结果表明不同成分含量峰面积的rsd《3％，表明仪器精密度良好。
[0067]
重复性：准确称取6份0.100g丹参样品，按照本实施例“uplc的检测条件”同一液相条件下检测，记录峰面积并计算rsd值。结果表明不同成分含量峰面积的rsd《3％，表明实验重复性良好。
[0068]
稳定性：将供试品分别放置分别放置0、2、4、8、12，24h，按照本实施例“uplc的检测条件”同一液相条件下检测，记录峰面积并计算rsd值。结果表明不同成分含量峰面积的rsd《3％，表明在24h内样品稳定性好。
[0069]
加样回收率：准确称取一份已知含量的丹参样品，分别以1：1加入各对照品，在本实施例“uplc的检测条件”同一液相条件下检测，记录峰面积并计算平均回收率和rsd值。结果表明各成分的加样回收率rsd在95％-105％，表明加样回收率达到要求。
[0070]
表3 5种成分的回归方程、线性范围及相关系数
[0071][0072]
实施例4h8y诱导子对陈旧甘草种子发芽率的影响
[0073]
具体实验步骤同实施例2，发芽率如表4所示。
[0074]
表4
[0075]
不同浓度诱导子对陈旧甘草种子发芽率的影响(m
±
sd，n＝5)
[0076][0077]
由表4可知，施加0.75mg/mlh8y诱导子处理后，甘草种子萌发率为35.86
±
2.12a％，与对照组具有显著性差异(p《0.05)，对甘草种子萌发作用最好；施加0.50mg/mlh8y诱导子处理后，甘草种子萌发率为30.65
±
2.43％，施加1.00mg/mlh8y诱导子处理后，丹参种子萌发率为33.68
±
1.56％，与对照组相比均具有显著性，差异有统计学意义(p《0.05)，故h8y诱导子能够促进甘草种子萌发。说明h8y诱导子对包括甘草在内的其他药用植物的种子萌发同样具有显著促进作用。
[0078]
因此，本发明采用上述的一种真菌诱导子及其制备方法和应用，能够解决丹参种子发芽率低、品质差的问题，为保护丹参的野生资源，提高药用植物利用率提供了方法，对促进丹参资源可持续发展奠定基础。
[0079]
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。

技术特征：
1.一种真菌诱导子，其特征在于：该真菌诱导子为h8y诱导子，其是由岭南聚孢霉菌丝多糖制备而成的。2.如权利要求1所述的一种真菌诱导子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、将岭南聚孢霉h8y接种于pda培养基，在恒温培养箱中培养，培养温度20℃-37℃，培养时间1-5天；s2、用灭菌的接种环挑取少量菌丝接种于pdb培养基中，在恒温震荡器上培养，条件：转速120-180r/min，温度25℃-35℃，培养3～10d，待菌丝体充分生长后收获；s3、121℃高温高压灭菌20min，真菌菌丝体先经4层纱布过滤，随后通过布氏漏斗抽滤，收集菌丝体；s4、将过滤得到的菌丝体，加入适量蒸馏水匀浆，70℃超声提取30min，收集滤液，合并步骤s3中菌液，经水浴蒸发浓缩后，加入无水乙醇至终浓度为80％，冷藏，离心收集沉淀，加入适量蒸馏水溶解，于121℃高温灭菌20min后冷却至常温后保存于4℃备用。3.如权利要求1所述的一种真菌诱导子在提高药用植物种子萌发率和药物品质中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述植物为丹参。5.如权利要求1所述的一种真菌诱导子在制备药用植物专属叶面肥和生物肥料中的应用。6.如权利要求1所述的一种真菌诱导子在制备药用植物专属植物种子萌发促进剂中的应用。7.如权利要求1所述的一种真菌诱导子在制备药用植物根类生长调节剂中的应用。8.根据权利要求5-7任一项所述的应用，其特征在于：所述药用植物包括丹参。9.如权利要求1所述的一种真菌诱导子在菌肥制备过程中的应用。

技术总结
本发明公开了一种真菌诱导子及其制备方法和应用，涉及中药农业技术领域。本发明中真菌诱导子为H8Y诱导子，H8Y诱导子不仅可以促进丹参种子的萌发，还可以提高初次生代谢物的含量，进而促进有效成分的积累，提升丹参的品质。本发明采用上述的一种真菌诱导子及其制备方法和应用，解决了丹参种子发芽率低、品质差的问题，为保护丹参的野生资源，提高药用植物利用率提供了方法，对促进丹参资源可持续发展奠定基础。定基础。定基础。


技术研发人员：王学勇 晋小雁 许文娟 李堰
受保护的技术使用者：北京中医药大学
技术研发日：2023.07.07
技术公布日：2023/10/15