一种具有抑制真菌活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用

1.本发明属于动物无抗饲料领域、植物保护学科中的生物防治领域和病原微生物学中的抗真菌药物领域，具体涉及一种具有抑制真菌活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用。


背景技术：

2.我国正式步入饲料“禁抗”时代，寻找安全有效的“替抗”产品是目前研究的热点。在饲料中加入益生菌，可以调节肠道微生物稳态、免疫系统稳态、增强动物机体免疫力，促进动物生长，提高饲料转化效率，是最具开发潜力的“替抗”产品之一。据统计，全世界范围内真菌每年感染数十亿人，大约导致150万人死亡。目前，在治疗真菌感染方面主要有四种抗真菌类药物(咪唑类、棘白菌素类、多烯类和嘧啶类)，但同时对这些药物不断上升的耐药性演变为一个主要问题。真菌还可导致植物常见的白粉病、锈病和黑粉病，占植物病害总数的80％。常规防治真菌病害的农药多是化学农药，化学农药虽然能够防治农林病虫害，也会对人畜和环境产生危害。
3.芽孢杆菌是重要的益生菌、生防菌，可以产生多种抑菌抗菌物质如脂肽类抗生素。常见的脂肽类抗生素有，杆菌霉素d、杆菌霉素a、芬芥素a、芬芥素b、伊枯草菌素a、伊枯草菌素b、伊枯草菌素c、伊枯草菌素d、表面活性素aa、表面活性素ab、抗霉枯草菌素f和抗霉枯草菌素a。其中表面活性素、芬芥素和伊枯草菌素具有优越的抗真菌能力。由于脂肽发酵生产和分离纯化存在多种技术难题，至今还没有单一方法可以把任何一种脂肽物质从复杂的混合物中提取并纯化出来，往往通过多种方法联合使用。本发明专利中的bacillus amyloliquefaciens pm415具有生产表面活性素和芬芥素的潜力，是潜在的替抗益生菌、生防菌，具有广阔的应用前景。目前还没有bacillus amyloliquefaciens pm415菌株相关脂肽类抗生素的报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种具有抑制真菌活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用。
5.本发明第一个提供的是一种具有抑制真菌活性的解淀粉芽孢杆菌-bacillus amyloliquefaciens pm415。
6.本发明的第二个目的是提供上述bacillus amyloliquefaciens pm415在制备无抗饲料、生物农药或抗真菌药物中的应用。
7.优选，是bacillus amyloliquefaciens pm415的发酵液在制备生物农药或抗真菌药物中的应用。
8.发酵液制备方法如下：将bacillus amyloliquefaciens pm415菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基(每升含有蛋白胨10g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，ph为7.2
±
0.2)中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，ph 7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料得发酵液。所述的发酵培养基为：每升含有谷氨酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，酵母提取物1.0g,
kh2po41.0g，feso
4 0.15mg,mnso
4 0.5mg
,
cuso
4 0.16mg 0.15mg,mgso
4 0.5g，kcl 0.5g，余量为水。
9.进一步优选是bacillus amyloliquefaciens pm415的发酵液的上清液在制备无抗饲料、生物农药或抗真菌药物中的应用。
10.所述的发酵液的上清液是将bacillus amyloliquefaciens pm415发酵液离心获取上清液。
11.优选，所述的真菌是黑曲霉。
12.本发明的第三个目的是提供bacillus amyloliquefaciens pm415在制备脂肽中的应用。
13.将bacillus amyloliquefaciens pm415菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在25 0r/min，ph 7.0条件下培养60h，发酵完成即获得bacillus amyloliquefaciens pm415发酵液；所述的发酵培养基为：每升含有谷氨酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，酵母提取物1.0g,kh2po41.0g，feso4 0.15mg,mnso4 0.5mg,cuso4 0.16mg 0.15mg,mgso4 0.5g，kcl 0.5g，余量为水；发酵液完成离心10000
×
g 30min，除去菌体，上清液用6mol/l hcl调ph＝4，4℃静置12h，8000
×
g离心20min，沉淀用纯甲醇溶解后过0.22μm有机滤膜除去杂质，45℃旋转蒸发浓缩，并于45℃进行真空离心干燥，收集黄色沉淀，即获得脂肽粗品。
14.本发明的bacillus amyloliquefaciens pm415菌株是从鸽粪中分离出来，此前的研究未有该菌株含有脂肽类抗生素基因以及抑制真菌活性的报道。全基因组测序结果表明该菌株具有表面活性素和芬芥素合成基因，并不含致病性基因。黑曲霉双培养实验表明该菌株对黑曲霉具有显著的抑制效果。对脂肽粗提物进行maldi-tof分析发现其主要成分为c13～c15 surfactin a,c14～c15 surfactin b,c14～c15 surfactin c,c15～c18 fengycin a,c15～c16 fengycin b。该结果表明利用bacillus amyloliquefaciens pm415菌株可以发酵生产含有表面活性素、芬芥素的复合抗菌肽。
15.本发明的bacillus amyloliquefaciens pm415菌株经过了初步的安全性实验，发现其无dnase酶活性，无溶血毒性。另外，该菌株对多种抗生素敏感。该结果表明该菌株符合无抗饲料、生物防治和抗真菌药物研发中的安全性要求。
16.本发明的bacillus amyloliquefaciens pm415菌株经过了耐酸、耐胆汁、耐模拟胃液和肠液实验，具有较高的存活率，该结果表明该菌株可作为益生菌发挥作用。
17.本发明的bacillus amyloliquefaciens pm415菌株经过饲料防霉测试，添加该菌种发酵液的饲料与不添加的饲料相比，具有优越的防霉性能，进一步支持该菌株在无抗饲料以及湿饲料防霉变中的应用。
18.因此，本发明的第四个目的是提供bacillus amyloliquefaciens pm415作为益生菌添加到饲料中作为无抗饲料添加剂的应用。
19.本发明的解淀粉芽孢杆菌菌株可以应用于无抗饲料、生物防治和抗真菌药物研发，而且该菌株在发酵生产脂肽类抗生素领域具有广阔的应用前景。
20.bacillus amyloliquefaciens pm415保藏于北京微生物菌种保藏中心(cgmcc)，保藏号为cgmcc no:26918。
附图说明
21.图1是对菌株pm415进行系统发育分析结果；
22.图2是黑曲霉抑制实验结果；
23.图3是电镜观察pm415菌株以及黑曲霉的形貌；
24.图4是菌株pm415全基因组测序的结果；
25.图5是菌株pm415编码的抗菌物质基因簇以及在对峙实验中的转录水平变化；
26.图6是对菌株pm415进行有参转录组分析的结果；
27.图7是脂肽粗品的maldi-tof结果；
28.图8是菌株pm415初步安全性实验的结果；
29.图9是表征菌株pm415的益生菌特性的实验结果；
具体实施方式
30.以下实施例是对本发明的进一步解释和说明，而不是对本发明的限制。
31.实施例1bacillus amyloliquefaciens pm415的分离纯化和鉴定过程
32.菌株分离自广东省兴宁市肉鸽养殖基地的鸽粪。取鸽粪样品1g溶解于100ml无菌生理盐水，梯度稀释涂布肉汤培养基平板，37℃恒温培养箱培养至菌落出现，挑取单菌落纯化。提取菌株的总dna作为基因扩增模板，以细菌16s rrna通用引物，27f：5’－agagtttgatcctggctcag－3’，1492r：5’－tacggttaccttgttacgactt－3’进行pcr反应。反应程序为：95℃变性1min、55℃退火1min、72℃延伸1.5min，共30个循环。dna测序由北京擎科生物科技有限公司完成并通过dnaman软件进行序列拼接。拼接好的16s rrna序列通过美国国家生物技术信息中心(ncbi)数据库在线比对，相似性最高的结果为bacillus amyloliquefaciens strain b.amy ss的16s核糖体rna。全基因组测序后，通过automlst工具选取84个管家基因与其他微生物的基因序列进行比对，将比对结果导入mega11软件绘制系统发育树，结果如图1所示，与菌株pm415亲缘关系最近的是解淀粉芽孢杆菌lfb112。由此可知分离出的菌株为解淀粉芽孢杆菌。
33.16s rrna编码基因的测序结果为：
34.gctatacatgcaagtcgagcggacagatgggagcttgctccctgatgttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctgtaagactgggataactccgggaaaccggggctaataccggatggttgtctgaaccgcatggttcagacataaaaggtggcttcggctaccacttacagatggacccgcggcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgaagtgatgaaggttttcggatcgtaaagctctgttgttagggaagaacaagtgccgttcaaatagggcggcaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagggctcgcaggcggtttcttaagtctgatgtgaaagcccccggctcaaccggggagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagaggagagtggaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcgactctctggtctgtaactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagggggtttccgccccttagtgctgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgacaatcctagagataggacgtccccttc
gggggcagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccagcattcagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacagaacaaagggcagcgaaaccgcgaggttaagccaatcccacaaatctgttctcagttcggatcgcagtctgcaactcgactgcgtgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtgaggtaacctttatggagccagccgccgaaggtgac
35.实施例1bacillus amyloliquefaciens pm415发酵液制备方法
36.将bacillus amyloliquefaciens pm415菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基(每升含有蛋白胨10g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，ph为7.2
±
0.2)中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，ph 7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料得发酵液。所述的发酵培养基为：每升含有谷氨酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，酵母提取物1.0g,kh2po
4 1.0g，feso
4 0.15mg,mnso
4 0.5mg
,
cuso
4 0.16mg 0.15mg,mgso
4 0.5g，kcl 0.5g，余量为水。发酵液离心10000g30min后取上清即获得bacillus amyloliquefaciens pm415的菌株代谢产物。
37.实施例2脂肽粗品制备方法
38.bacillus amyloliquefaciens pm415的菌株代谢产物用6mol/l hcl调ph＝4，4℃静置12h，8000
×
g离心20min，沉淀用纯甲醇溶解后过0.22μm有机滤膜除去杂质，45℃旋转蒸发浓缩，并于45℃进行真空离心干燥，收集黄色沉淀，即为脂肽粗提物。
39.实施例3黑曲霉双培养实验
40.改良马丁培养基(每升含有蛋白胨5g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，酵母浸出粉2.0g，葡萄糖20g，ph为6.4
±
0.2)平板中央位置放置于28℃培养了7d的黑曲霉菌块。28℃培养2d后，在距菌块中央3.5cm处放置牛津杯并滴加100μl bacillus amyloliquefaciens pm415菌液。菌液制备方法如下：将bacillus amyloliquefaciens pm415菌种液按以体积比2％的接种量接种于5ml肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养至对数期使用。28℃继续培养3d后，比较黑曲霉的生长直径计算黑曲霉的抑制率为37％。如图2所示，左图为对照组，牛津杯中加无菌水对照；右图为实验组，左侧牛津杯中有bacillus amyloliquefaciens pm415菌液。
41.运用电镜观察发现，如图3所示，bacillus amyloliquefaciens pm415在无黑曲霉存在(a)和有黑曲霉存在(b)时形态未发生明显变化。而黑曲霉菌丝在不加bacillus amyloliquefaciens pm415菌液(c)和加bacillus amyloliquefaciens pm415菌液(d)时发生显著变化，加入的pm415破坏了菌丝的结构，使其发生皱缩和坍塌，从而抑制了黑曲霉的生长。
42.实施例4bacillus amyloliquefaciens pm415的全基因组测序结果
43.将bacillus amyloliquefaciens pm415基因组抽提后进行二代和三代测序并进行基因组组装。基因组圈图见图4，总基因组大小约4.1mbp，平均g+c含量约46.5％。使用预测工具bagel4预测出编码的核糖体产生的翻译后修饰肽有环状细菌素类、lci，uvib和羊毛硫肽类化合物(图5a)。使用预测工具antismash预测出11个非核糖体产生肽(图5b)，包括含有具有抑制真菌作用的表面活性素(surfactin)和芬芥素(fengycin)。
44.实施例5bacillus amyloliquefaciens pm415的转录组测序结果
45.收集实施例3黑曲霉双培养实验中的细菌样本为实验组，以无黑曲霉存在时的细菌样本为对照组，每组三次平行实验，提取总rna进行有参转录组分析。如图6a所示，与对照组相比，实验组中的660个基因的转录水平发生变化，包括367个上调基因和293个下调基因，占全部蛋白质编码基因的15.07％。如图6b所示，kegg富集图显示，显著富集的基因主要分布于以下几个kegg通路中：转运，氨基酸代谢，鞭毛组装，非核糖体产生肽合成，病原感染和糖代谢。如图6c所示，发生显著上调和下调的基因主要分布以下三个类别中，细胞组分(例如细胞膜。细菌鞭毛)，生物过程(例如碳水化合物代谢)和分子功能(例如维生素识别、酶水解活性)。如图5所示，编码抗菌物质的基因lanm,surfactin,fengycin,bacillomycin d,bacilysin,macrolactin h,bacillaene,hopene的转录水平上调，意味着这些抗菌物质可能在具有抑制黑曲霉的作用。
46.实施例6bacillus amyloliquefaciens pm415发酵生产的脂肽粗品的maldi-tof分析结果
47.将实施例2中所制备的脂肽粗提物溶解于甲醇中使终浓度为1mg/ml，与dhb基质1:1混合，在mtp384 polished steel靶板上点样，使用ultraflextreme maldi-tof质谱仪(bruker daltonics)分析。分析条件为，反射正离子分析模式，质量范围为100-1700da，第一离子源电压为20kv，第二离子源电压为17.65kv，照射频率为1000hz,pie＝120ns，透镜电压为7kv。使用flexanalysis软件(version 3.3,bruker)处理质谱图。采用m/z对脂肽进行分类，m/z在1045～1062属于surfactin族，1464～1530属于fengycin族(图7)。
48.实施例7bacillus amyloliquefaciens pm415的安全性实验
49.运用在线工具pathogenfinder对bacillus amyloliquefaciens pm415的基因组分析发现，该菌株是非致病微生物。通过与毒力因子数据库vfdb比对得到多聚谷氨酸荚膜这一潜在毒性物质，但芽孢杆菌都是有荚膜的，且很多芽孢杆菌都已经成为商品化的益生菌，所以这一点不影响该菌株的安全使用。另外，我们对该菌株进行了dna酶水解实验(图8a)和溶血实验(图8b)，实验结果皆为阴性(左为pm415菌株，右为质控菌株大肠杆菌atcc25922)，证明该菌是安全的。
50.抗生素抗性基因的查找发现该菌株含有clba基因，可能对大环内酯类和氯霉素类抗生素具有抗性。我们以大肠杆菌atcc25922为质控菌株，测定了其和pm415的最小抑菌浓度(mic)，结果显示，pm415的mic值小于或等于判定值，表明菌株对庆大霉素，卡那霉素，万古霉素，红霉素和四环素敏感，进一步验证了该菌株的安全性(表1)。
51.表1pm415菌株和大肠杆菌atcc25922的最小抑菌浓度
52.53.n.r.,not required
54.实施例8bacillus amyloliquefaciens pm415的益生菌特性实验
55.益生菌的使用需要具有耐酸，耐胆汁，耐胃液和耐肠液的能力。pm415在肉汤培养基中过夜培养，离心收集菌体，用无菌磷酸盐缓冲液(pbs,ph7.4)洗涤两次，并接种在无菌胰蛋白酶大豆肉汤(tsb)液体培养基(每升含有胰蛋白胨17.0g，大豆蛋白胨3.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.5g)中，初始ph调节至ph2.0(实验组)和ph7.4(实验组)，使得初始细菌数量约为107cfu/ml。37℃，180rpm培养90min后通过稀释平板计数法计算有效菌落数，所使用得平板为无菌tsb基加15g/l琼脂。对于胆汁耐受性，将pbs洗涤后的菌液接种在含0％(对照组)，0.1％，0.2％和0.4％的胆盐的tsb培养基中，初始细菌数量约为107cfu/ml，然后在37℃，180rpm培养24h后计数，计数方法同上。耐酸耐胆汁的存活率的计算方法为log
10
(实验组细菌数量)/log
10
(对照组细菌数量)。
56.耐胃液和肠液实验所使用的模拟胃液配方为：每100ml含胃蛋白酶0.3g，0.1mol/l盐酸1.01ml，余量为生理盐水；模拟肠液配方为：每100ml含胰蛋白酶0.1g，0.1mol/l氢氧化钠1.01ml，余量为生理盐水。模拟胃液处理实验中，将pbs洗涤后的菌液接种在模拟胃液中，初始细菌数量约为109cfu/ml 37℃，180rpm培养90min后计数，计数方法同上。模拟肠液处理实验中，将pbs洗涤后的菌液接种在模拟肠液中，初始细菌数量约为109cfu/ml 37℃，180rpm培养4h后计数，计数方法同上。模拟胃液肠液联合处理实验中，将pbs洗涤后的菌液接种在模拟胃液中，初始细菌数量约为109cfu/ml 37℃，180rpm培养90min后，离心8000g10min收集菌体并重悬于模拟肠液中，37℃，180rpm培养4h后计数，计数方法同上。耐胃液和肠液实验的存活率计算方法为log
10
(处理后细菌数量)/log
10
(处理前细菌数量)。
57.如图9a所示，pm415在ph2的溶液中孵育90min后仍保留69.8％的活力。如图9b所示，pm415在0.1％，0.2％，0.4％胆盐中的存活率分别为25.5％，28.4％和24.5％，证明其具有耐受胆盐能力。如图9c所示，pm415可在模拟胃液和肠液中具有66.1％和82.6％的存活率，并且pm415在模拟胃液中孵育90min和在模拟肠液中孵育240min后仍有59.5％的存活率。
58.如图9d所示，加入pm415发酵液的饲料与加灭菌肉汤培养基的饲料相比，pm415具有显著抑制真菌的效果。以上结果支持该菌可作为益生菌添加到饲料中作为无抗饲料添加剂使用。
59.上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的原理实质下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.解淀粉芽孢杆菌bacillus amyloliquefaciens pm415。2.权利要求1所述的bacillus amyloliquefaciens pm415在制备生物农药、无抗饲料或抗真菌药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是bacillus amyloliquefaciens pm415的发酵液、菌体、上清液或任意二者或三者的混合制剂在制备生物农药、无抗饲料抗真菌药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵液制备方法如下：将bacillus amyloliquefaciens pm415菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，ph 7.0条件下培养60h，并分别于培养10h、18h时按体积比10％加入补料得发酵液，将发酵液离心沉淀即获得bacillus amyloliquefaciens pm415菌体，上清进行0.22μm过滤除菌后即得上清液；所述的肉汤培养基为每升含有蛋白胨10g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，ph为7.2
±
0.2，所述的发酵培养基为：每升含有谷氨酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，酵母提取物1.0g,kh2po
4 1.0g，feso
4 0.15mg,mnso
4 0.5mg
,
cuso
4 0.16mg 0.15mg,mgso
4 0.5g，kcl 0.5g，余量为水。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的发酵液的上清液是将bacillus amyloliquefaciens pm415发酵液离心过滤除菌获取上清液。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的真菌包括但不局限于黑曲霉。7.权利要求1所述的bacillus amyloliquefaciens pm415在制备抗菌肽类物质中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将bacillus amyloliquefaciens pm415菌种液以体积比2％的接种量接种于肉汤培养基中，在37℃，180r/min条件下培养24h后，以体积比2％的接种量将菌种转接于发酵培养基中，在250r/min，ph 7.0条件下培养60h，发酵完成即获得bacillus amyloliquefaciens pm415发酵液；所述的发酵培养基为：每升含有谷氨酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，酵母提取物1.0g,kh2po
4 1.0g，feso
4 0.15mg,mnso
4 0.5mg
,
cuso
4 0.16mg 0.15mg,mgso
4 0.5g，kcl 0.5g，余量为水。发酵液完成离心10000
×
g，30min，除去菌体，上清液用6mol/l hcl调ph＝4，4℃静置12h，8000
×
g离心20min，沉淀用纯甲醇溶解后过0.22μm有机滤膜除去杂质，45℃旋转蒸发浓缩，并于45℃进行真空离心干燥，收集黄色沉淀，即为脂肽粗提物。9.权利要求1所述的bacillus amyloliquefaciens pm415作为益生菌添加到饲料中作为无抗饲料添加剂的应用。

技术总结
本发明提供了一种具有抑制真菌活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用。本发明的Bacillus amyloliquefaciens PM415菌株是从鸽粪中分离出来，此前的研究未有对该菌株含有脂肽类抗生素基因以及抑制真菌活性的报道。黑曲霉双培养实验表明该菌株具有显著抑制黑曲霉的作用，扫描电子显微镜观察结果显示该菌株对黑曲霉菌丝具有破坏作用。全基因组分析表明该菌株具有合成表面活性素、芬芥素等抗菌物质的编码基因，转录组分析表明编码抗真菌物质的基因表达上调。MALDI-TOF-MS从脂肽粗提物中鉴定出表面活性素和芬芥素。本研究从基因、转录、代谢水平证明了该菌株可产生表面活性素和芬芥素用于抑制真菌，因此该菌株可用于生产含表面活性素、芬芥素的复合抗菌肽。另外，微生物安全实验和益生菌特性试验表明该菌株具有生物安全性，对模拟胃肠道条件具有良好的耐受性，并且加入饲料中具有极佳的防霉效果。本发明的解淀粉芽孢杆菌菌株可以应用于无抗饲料、生物防治和抗真菌药物研发，而且该菌株在发酵生产抗菌肽领域具有广阔的应用前景。域具有广阔的应用前景。域具有广阔的应用前景。


技术研发人员：吴海洋 吴金川 李清心
受保护的技术使用者：广东省科学院生物与医学工程研究所
技术研发日：2023.07.04
技术公布日：2023/10/15