一种用于皮肤紧致的制剂及其制备方法、应用与流程

1.本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于皮肤紧致的制剂及其制备方法、应用。


背景技术：

2.随着年龄增长，作为皮肤的老化现象之一，皱纹也随之增加，但从美容等的观点出发，特别是女性、对皱纹的防止和改善的热情非常高。皱纹是指皮肤受到外界环境影响，形成游离自由基，自由基会破坏正常细胞膜组织内的胶原蛋白及活性物质，导致皮肤真皮层胶原蛋白含量逐渐减少，网状支撑体亦会变厚变硬、失去弹性，当真皮层的弹性与保水度降低时，皮肤便会失去弹性并变薄老化，表皮即形成松垮的皱纹。
3.皱纹渐渐出现，无论是皱纹、鱼尾纹、细纹、眼尾纹都是因为皮肤表皮层不均一的塌陷引起的。皱纹大致可分为由于包含角质层的表皮的功能降低而产生的小皱纹和由于比表皮更深的真皮的功能降低而产生的大皱纹（或表情皱纹）。由于包含角质层的表皮的功能降低而产生的皱纹，主要是由于表皮的水分保持功能受年龄增长、紫外线、低温、低湿等的影响而降低，从而产生的。另一方面，一般认为，由于真皮的功能降低而产生的皱纹，是由于基质金属蛋白酶（mmps ）受老化、紫外线、以及机械性压力的影响而发生增减，导致含有胶原蛋白、弹性蛋白（ elastin ）的皮肤的弹力结构状态崩演而产生的。已经知道了，皮肤上产生的小皱纹的沟变深，会向大皱纹转变，小皱纹和大皱纹紧密相关。
4.在非常干澡的冬季容易产生小皱纹，这是许多人的共识，大家都认为，为了预防和改善小皱纹，用化妆品、特别是化妆水、乳液、软膏、美容液等进行保湿、并且使用加湿器进行加湿这些很重要。以保湿为目的的化妆品，特别是含有甘油、透明质酸等保湿剂的化妆品一直都在被人们使用着。
5.已有研究报道，干细胞培养基（cm）主要来源于间充质干细胞/间充质细胞（msc）的培养，对皮肤有抗衰老、抗皱、抗色素沉着等有益作用。msc培养基中的分泌物质含有可溶性蛋白和胞外囊泡。外泌体是细胞质膜和包含腔内小泡的多泡体融合而成，通过内吞途径由细胞产生。外泌体被直径为30 ~ 200 nm的脂质双层包裹，包含蛋白质、遗传物质、micrornas (mirnas)，以及其他代谢物。干细胞外泌体强大的生物活性和细胞功能，现在被作为一种细胞治疗方案受到研究者的广泛关注。与传统护肤相比，它是直接作用于肌肤细胞，因此效果也更加明确。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于皮肤紧致的制剂及其制备方法、应用。
7.为了达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
8.一种用于皮肤紧致的制剂，该制剂包含以下重量份的原料：
9.水 80-90%，
10.丙二醇 5-10%，
11.积雪草苷 0.13-0.15%，
12.羟基积雪草酸 0.2-0.22%，
13.积雪草酸 0.2-0.22%，
14.阿拉伯树胶 1.5-3%，
15.水解根瘤菌胶 0.3-0.74%
16.干细胞外泌体 0.02-0.05%，
17.苯氧乙醇 0.28-0.34%。
18.优选地，所述制剂包含以下重量份的原料：
19.水 85-90%，
20.丙二醇 5-8%，
21.积雪草苷 0.13-0.15%，
22.羟基积雪草酸 0.2-0.22%，
23.积雪草酸 0.2-0.22%，
24.阿拉伯树胶 2-3%，
25.水解根瘤菌胶 0.5-0.74%
26.干细胞外泌体 0.03-0.05%，
27.苯氧乙醇 0.30-0.34%。
28.优选地，所述制剂包含以下重量份的原料：
29.水 87.4%，
30.丙二醇 8%，
31.积雪草苷 0.15%，
32.羟基积雪草酸 0.22%，
33.积雪草酸 0.22%，
34.阿拉伯树胶 3%，
35.水解根瘤菌胶 0.62%
36.干细胞外泌体 0.05%，
37.苯氧乙醇 0.34%。
38.优选地，所述干细胞外泌体为间充质干细胞外泌体。
39.本发明还提供了一种用于皮肤紧致的制剂的制备方法，具体包含以下步骤：
40.1）将积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸混合均匀，得到组合物a；
41.2）将阿拉伯树胶和水解根瘤菌胶混合均匀，得到组合物b；
42.3）将水称量好，边搅拌边将组合物a缓慢加入，待加完后搅拌至全溶，得到组合物c；
43.4）边搅拌边将丙二醇、组合物b、干细胞外泌体和苯氧乙醇依次缓慢加入组合物c中，混合均匀，即得。
44.优选地，所述步骤3）在加入组合物a时，需预留部分水，用于将盛装组合物a的容器中残留的原料冲洗干净，回收冲洗液并入组合物c中。
45.优选地，所述干细胞外泌体的制备方法如下：
[0046] 将间充质干细胞接种至msc生长培养基培养后，4℃条件下，300
×
g离心10 min，去除间充质干细胞，2000
×
g离心10 min，去除死细胞，16000
×
g离心30 min，去除细胞碎片，收集上清液；于4℃条件下，140000
×
g离心上清液90 min，弃上清液，收集沉淀；加入pbs洗涤重悬，14000
×
ｇ 离心70 min，弃上清液；加入适量pbs将离心管底部的沉淀吹打混匀，0.22μｍ滤器过滤获得人脐带间充质干细胞的外泌体，置于-80℃保存备用。
[0047]
本发明还提供了一种用于皮肤紧致的制剂在制备化妆品方面的应用。
[0048]
本发明的有益效果为：
[0049]
积雪草其中有效成分十分丰富，包括积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸等，其可以增加真皮层厚度和保水度，胶原蛋白的生成，粘多糖的分泌（比如透明质酸的合成），活化作用能作用在成纤维细胞基因上，实现增强肌肤基底层细胞的活力，能够达到抗衰抗氧的效果，不仅能减少表皮失，水增加皮肤的保水度，还能活化更新皮肤细胞，改善粗糙，使肌肤舒缓、紧致，富有光泽。
[0050]
水解根瘤菌胶是通过发酵而来的天然多聚糖，其特殊糖膜的吸附和渗透作用会产生舒缓皮肤、减轻红血丝、抗炎及清凉肤感的功效。阿拉伯树胶，来源于豆科的金合欢树属的树干渗出物，因此也称金合欢胶，阿拉伯胶主要成分为高分子多糖类及其钙、镁和钾盐，高分子多糖类主要包括有树胶醛糖、半乳糖、葡萄糖醛酸等。现有技术中常常将水解根瘤菌胶和阿拉伯树胶联合使用，具有即时紧致肌肤的作用，但水解根瘤菌胶和阿拉伯树胶是否具有长期紧致肌肤的功效还未可知。
[0051]
本发明创造性的将积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸与干细胞外泌体、阿拉伯树胶、水解根瘤菌胶复配得到制剂，水解根瘤菌胶和阿拉伯树胶能够即时紧致皮肤，积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸能够长期抑制细纹生长，干细胞外泌体也能促进积雪草提取物的吸收，相较于省略干细胞外泌体或省略阿拉伯树胶、水解根瘤菌胶或省略积雪草组分而言，本发明的复合制剂具有更显著的改善皮肤细纹生长、紧致提拉效果，使皮肤平滑有光泽，使用14天后，受试者对细纹改善、紧致提拉和肌肤光滑评分总分分别为42、48和44，皱纹减少率达到33.98%，且该制剂在清除自由基的方面表现出优异的能力，自由基清除率可达79.23%。说明该制剂能够有效清除自由基，抑制皱纹的生长，淡化已有的皱纹，使肌肤平整度提高，长期使用可使皮肤平滑有光泽，延缓皮肤衰老。
附图说明
[0052]
图1：制剂1的紧致功效使用感评分。
[0053]
图2：制剂2的紧致功效使用感评分。
[0054]
图3：制剂3的紧致功效使用感评分。
[0055]
图4：制剂4的紧致功效使用感评分。
[0056]
图5：制剂5的紧致功效使用感评分。
[0057]
图6：制剂6的紧致功效使用感评分。
[0058]
图7：制剂7的紧致功效使用感评分。
[0059]
图8：制剂8的紧致功效使用感评分。
[0060]
图9：制剂9的紧致功效使用感评分。
[0061]
图10：制剂10的紧致功效使用感评分。
[0062]
图11：制剂11的紧致功效使用感评分。
[0063]
图12：制剂12的紧致功效使用感评分。
具体实施方式
[0064]
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0065]
实施例
[0066]
将间充质干细胞接种至msc生长培养基进行培养，每隔2-3天换液，当细胞浓度融合至80-90%时，用胰蛋白酶消化后传代培养，当传代后的培养基细胞融合至80-90%，将细胞培养液于4℃条件下，300
×
g离心10 min，去除间充质干细胞，2000
×
g离心10 min，去除死细胞，16000
×
g离心30 min，去除细胞碎片，收集上清液；于4℃条件下，140000
×
g离心上清液90 min，弃上清液，收集沉淀；加入pbs洗涤重悬，14000
×
ｇ 离心70 min，弃上清液；加入适量pbs将离心管底部的沉淀吹打混匀，０.22μｍ滤器过滤获得人脐带间充质干细胞的外泌体，置于-80℃保存备用。
[0067]
将积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸混合均匀，得到组合物a；将阿拉伯树胶和水解根瘤菌胶混合均匀，得到组合物b；将水称量好，边搅拌边将组合物a缓慢加入，待加完后搅拌至全溶，得到组合物c，在加入组合物a时，需预留部分水，用于将盛装组合物a的容器中残留的原料冲洗干净，回收冲洗液并入组合物c中；边搅拌边将丙二醇、组合物b、干细胞外泌体和苯氧乙醇依次缓慢加入组合物c中，混合均匀，即得。
[0068]
各制剂的成分配比按照表1所示进行称量并配制。
[0069]
表1：各制剂的成分配比（重量百分比）
[0070]
水丙二醇积雪草苷羟基积雪草酸积雪草酸阿拉伯树胶水解根瘤菌胶干细胞外泌体苯氧乙醇制剂187.408.000.150.220.223.000.620.050.34制剂285.878.000.150.220.225.000.100.100.34制剂389.068.000.150.220.221.001.000.010.34制剂486.498.000.500.500.503.000.620.050.34制剂587.458.000.150.220.223.000.6200.34制剂688.028.000.150.220.223.0000.050.34制剂790.408.000.150.220.2200.620.050.34制剂887.628.000.150.2203.000.620.050.34制剂987.628.000.1500.223.000.620.050.34制剂1087.558.0000.220.223.000.620.050.34制剂1191.028.000.150.220.22000.050.34制剂1287.998.000003.000.620.050.34
[0071]
1、紧致功效使用感评分
[0072]
测试人群：年龄：20-60岁之间，无过敏历史、有护肤品使用经验的试用者120名，每组10名试用者，分别试用制剂1-12，每天早晚各使用一次，每次使用量为2 ml，涂抹于脸部。
[0073]
测试方法：
[0074]
请试用者依使用时长（0，7，14 天），根据试用结果打分。
[0075]
问卷题目：使用产品后，细纹改善；紧致提拉；肌肤光滑的效果评分。
[0076]
评分标准：5分，非常显着；3分，普通；1分，无效果。
[0077]
取试用者的打分结果，将每组内每个评分项的10名试用者打分相加得到总分，总分越高，则效果越好，最终得到如图1-12所示的评价结果。
[0078]
从图1可以看出，受试者对制剂1的紧致效果给予高度评价，使用14天后，对制剂1的细纹改善、紧致提拉和肌肤光滑评分总分分别为42、48和44，人均评分分别为4.2、4.8和4.4，说明制剂1能够显著紧致皮肤，并淡化已有的细纹，提拉松弛的表皮，且受试者均未反应有过敏、不适现象。
[0079]
当省略阿拉伯树胶和/或水解根瘤菌胶（制剂6、7、11）时，从图6、7、11可以看出，前7天的皮肤紧致效果较好，但第7-14天的紧致效果没有明显增长；当省略积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸之一或全部（制剂8、9、10、12）时，从图8、9、10、12可以看出，前7天没有明显的紧致效果，但第7-14天的紧致效果却明显增长；而制剂1是从第0-14天均呈现出较好的细纹改善作用，说明水解根瘤菌胶和阿拉伯树胶能够即时紧致皮肤，积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸能够长期抑制细纹生长，且干细胞外泌体也能促进积雪草提取物的吸收，上述活性成分的复配使得制剂1既能立竿见影的紧致肌肤，还能长期保持紧致状态。省略制剂中的任意功功效组分或调整功效成分均会导致皮肤的细纹改善、紧致拉提和平滑效果减弱。
[0080]
2、紧致功效定量分析
[0081]
visia皮肤检测仪是一种能对皮肤的特征进行定量分析的仪器。visia皮肤检测仪能对皮肤、毛孔、皱纹、、、斑和日光损伤定量评估。于使用第0、14天分别使用visia皮肤测试仪测试每位受试者面部皮肤情况，并对皱纹情况准确记录和计数，每组十名受试者测试结果取平均值得到皱纹定量测试结果如表2。
[0082]
自由基清除率（％）＝（空白对照-样品）/空白对照
×
100％
[0083]
表2：各制剂的皱纹减少情况
[0084]
第0天第14天减少率（%）制剂114.549.6033.98制剂216.2113.5416.47制剂314.2211.6817.86制剂415.4212.2620.49制剂516.3314.2312.86制剂616.3914.3612.39制剂715.9413.5614.93制剂814.3813.277.72制剂918.5517.674.74制剂1017.2816.444.86制剂1117.3216.474.91制剂1214.8714.363.43
[0085]
制剂1的细纹改善效果显著，14天的皱纹减少率达到33.98%，而制剂2-4的皱纹减少率仅为16.47%、17.86%和20.49%，说明各个组分的用量影响了制剂的紧致效果，只有特定
的用量比例才能实现最佳的紧致效果，且省略组分中任意一个或多个组分均会导致制剂的皱纹减少率下降。
[0086]
3、dpph自由基清除效果
[0087]
将dpph试药溶解于dmso配置为0.25mm dpph溶液，取 dpph溶液100μl和各样品100μl依次加入到96孔板中，暗处静置30min，490nm处测定其吸光度，以未添加样品的作为空白对照，进行10次平行实验，测试结果如表3所示。
[0088]
自由基清除率（％）＝（空白对照-样品）/空白对照
×
100％
[0089]
表3：各制剂的自由基清除率
[0090]
自由基清除率（％）制剂179.23制剂266.5制剂358.54制剂463.27制剂547.34制剂644.23制剂749.25制剂835.56制剂942.93制剂1047.25制剂1120.55制剂1238.26
[0091]
从表3可以看出，积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸与干细胞外泌体、阿拉伯树胶、水解根瘤菌胶复配能够有效清除自由基，制剂1的自由基清除率达79.23%，说明其具有紧致皮肤的功效，而省略干细胞外泌体或省略阿拉伯树胶、水解根瘤菌胶或省略积雪草组分时，自由基清除率大幅度下降，均低于50%，效果明显劣于制剂1。
[0092]
综上所述，本发明将积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸与干细胞外泌体、阿拉伯树胶、水解根瘤菌胶复配，水解根瘤菌胶和阿拉伯树胶能够即时紧致皮肤，积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸能够长期抑制细纹生长，干细胞外泌体也能促进积雪草提取物的吸收，相较于省略干细胞外泌体或省略阿拉伯树胶、水解根瘤菌胶或省略积雪草组分而言，本发明的复合制剂具有更显著的改善皮肤细纹生长，起到紧致提拉效果，使皮肤平滑有光泽，14天的皱纹减少率达到33.98%，且该制剂在清除自由基的方面表现出优异的能力，自由基清除率可达79.23%，长期使用可以使皮肤光滑平整。
[0093]
以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

技术特征：
1.一种用于皮肤紧致的制剂，其特征在于，所述制剂包含以下重量份的原料：水 80-90%，丙二醇 5-10%，积雪草苷 0.13-0.15%，羟基积雪草酸 0.2-0.22%，积雪草酸 0.2-0.22%，阿拉伯树胶 1.5-3%，水解根瘤菌胶 0.3-0.74%干细胞外泌体 0.02-0.05%，苯氧乙醇 0.28-0.34%。2.如权利要求1所述的一种用于皮肤紧致的制剂，其特征在于，所述制剂包含以下重量份的原料：水 85-90%，丙二醇 5-8%，积雪草苷 0.13-0.15%，羟基积雪草酸 0.2-0.22%，积雪草酸 0.2-0.22%，阿拉伯树胶 2-3%，水解根瘤菌胶 0.5-0.74%干细胞外泌体 0.03-0.05%，苯氧乙醇 0.30-0.34%。3.如权利要求1所述的一种用于皮肤紧致的制剂，其特征在于，所述制剂包含以下重量份的原料：水 87.4%，丙二醇 8%，积雪草苷 0.15%，羟基积雪草酸 0.22%，积雪草酸 0.22%，阿拉伯树胶 3%，水解根瘤菌胶 0.62%干细胞外泌体 0.05%，苯氧乙醇 0.34%。4.如权利要求1-3任一所述的一种用于皮肤紧致的制剂，其特征在于，所述干细胞外泌体为间充质干细胞外泌体。5.如权利要求1-4任一所述的一种用于皮肤紧致的制剂的制备方法，其特征在于，具体包含以下步骤：1）将积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸混合均匀，得到组合物a；2）将阿拉伯树胶和水解根瘤菌胶混合均匀，得到组合物b；3）将水称量好，边搅拌边将组合物a缓慢加入，待加完后搅拌至全溶，得到组合物c；
4）边搅拌边将丙二醇、组合物b、干细胞外泌体和苯氧乙醇依次缓慢加入组合物c中，混合均匀，即得。6.如权利要求5所述的一种用于皮肤紧致的制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3）在加入组合物a时，需预留部分水，用于将盛装组合物a的容器中残留的原料冲洗干净，回收冲洗液并入组合物c中。7.如权利要求5或6所述的一种用于皮肤紧致的制剂的制备方法，其特征在于，所述干细胞外泌体的制备方法如下：将间充质干细胞接种至msc生长培养基培养后，4℃条件下，300
×
g离心10 min，去除间充质干细胞，2000
×
g离心10 min，去除死细胞，16000
×
g离心30 min，去除细胞碎片，收集上清液；于4℃条件下，140000
×
g离心上清液90 min，弃上清液，收集沉淀；加入pbs洗涤重悬，14000
×
ｇ离心70 min，弃上清液；加入适量pbs将离心管底部的沉淀吹打混匀，0.22μｍ滤器过滤获得人脐带间充质干细胞的外泌体，置于-80℃保存备用。8.如权利要求1-4任一所述的一种用于皮肤紧致的制剂在制备化妆品方面的应用。

技术总结
本发明提供了一种用于皮肤紧致的制剂及其制备方法、应用，涉及生物技术领域，该制剂包含以下重量份的原料：水80-90%，丙二醇5-10%，积雪草苷0.13-0.15%，羟基积雪草酸0.2-0.22%，积雪草酸0.2-0.22%，阿拉伯树胶1.5-3%，水解根瘤菌胶0.3-0.74%，干细胞外泌体0.02-0.05%，苯氧乙醇0.28-0.34%；该制剂使用14天的皱纹减少率达到33.98%，自由基清除率可达79.23%，说明该制剂能够有效清除自由基，既能立竿见影的紧致肌肤，还能长时间保持紧致状态，使肌肤平整度提高，长期使用可使皮肤平滑有光泽。长期使用可使皮肤平滑有光泽。长期使用可使皮肤平滑有光泽。


技术研发人员：郭晶耀
受保护的技术使用者：广东欣会铝制品有限公司
技术研发日：2023.07.12
技术公布日：2023/10/15