间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及间充质细胞技术领域，尤其涉及ipc c12n5，更具体地涉及，间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用。


背景技术：

2.宫腔粘连(intrauterine adhesion,iua)又被称为asherman综合征，其病理进程为子宫内膜被损害后，内膜细胞进行修复时发生修复障碍和过度纤维化，从而导致子宫内膜组织被纤维化瘢痕所取代，严重影响女性生育能力。
3.现有专利cn202011568877.2使用干细胞治疗宫腔粘连的方法，该方法中涉及到一种细胞制剂，其中包含羊膜间充质干细胞和药用溶媒。所述药用溶媒是水；该细胞制剂是供注射方式使用的制剂。该间充质干细胞具有一定的治疗宫腔粘连。
4.近年来，国内外初步研究结果显示，间充质干细胞能修复受损子宫内膜，改善其功能，并恢复部分生育能力。不同来源的间充质干细胞具有异质性，其的作用效果不同，推进的程度不同，为了开发出更多的间充质干细胞在宫颈粘连的应用，需要验证不同的间充质干细胞在动物模型中的作用，使干细胞应用更加的向临床推进，制备得到有治疗效果的干细胞药物。


技术实现要素：

5.为了解决现有技术中的问题，本发明第一方面提供了间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。
6.优选的，所述脐带间充质干细胞的制备方法为将脐带从保存液中取出，置于150mm平皿中，用手术剪刀将脐带剪成2～3cm的小段；用止血钳挑出脐带的2根动脉；手术剪刀剪开脐带静脉，用止血钳刮去静脉膜；去除动脉和静脉膜的脐带组织置于50ml离心管中，加25～35ml含1％双抗的生理盐水清洗，反复清洗10～15次；清洗后的脐带组织放入新的50ml离心管中，用新的手术剪刀剪10～15分钟；加入30～50ml含1％双抗的生理盐水，摇匀；将组织混合液依次过8目滤网和16目滤网，吸取中间层1-2mm大小的组织块，置于50ml离心管中，加20～30ml新鲜培养液重悬；300～500g离心3～5分钟，倒去上清；用一次性吸管吸取0.3～0.7ml的组织沉淀放入100mm培养皿中，用吸管分摊均匀，一共铺10个平皿；放入37度培养箱2～3个小时；
7.取出培养皿，每个皿加入5～8ml含20％胎牛血清的a-mem培养液，置于37度co2培养箱中培养；培养第三天，每皿补加5～8ml含20％胎牛血清的a-mem培养液；培养第六天观察到有细胞从组织块周围游离出；培养第七天换液，每皿加10～15ml含20％胎牛血清的a-mem培养液；培养第10天，组织块周围形成中等大小集落，轻轻敲击平皿，促使大部分组织块从皿底脱离；
8.培养第13～15天，镜下观察细胞已经形成较大集落，集落中心细胞开始老化，开始收获原代细胞；用一次性吸管轻轻剔除剩余贴壁的组织块；倒去皿中培养液，每皿加10～
15ml生理盐水清洗，倒去清洗液；每皿加3～5ml tryple消化液，于37度培养箱中消化3～5分钟；每皿加入3～5ml生理盐水终止消化；吹打后装入50ml离心管，取样计数；细胞连续培养传代至p5代，消化细胞，检测克隆率和表面标记，得到脐带间充质干细胞。
9.优选的，所述脐带间充质干细胞来源于华夏源(上海)有限公司。
10.优选的，所述脐带间充质干细胞的处理步骤为：将脐带间充质干细胞悬液离心，弃去上清，加入5～15ml 0.9％氯化钠注射液将细胞重悬，待用。
11.优选的，所述离心的离心力为300～500g，时间为3～8分钟。
12.优选的，所述间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用的评价方法步骤包括以下步骤：
13.(1)大鼠宫腔粘连模型制备；
14.(2)模型大鼠给药治疗；
15.(3)子宫修复评价。
16.优选的，所述大鼠宫腔粘连模型的制备方法，包括以下步骤：
17.s1：对同批次的雌性sd大鼠进行分组，分为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组，对模型对照组、干细胞给药组中的雌性sd大鼠分别进行腹腔注射，腹腔注射5％水合氯醛溶液麻醉，剂量为0.3ml/100g体重，3分钟后将雌性sd大鼠固定在手术板上；
18.s2：将大鼠腹部剃毛后，沿腹中线，在第一对乳头附近，用无菌刀片或剪刀切割一个1.5cm的纵向切口。用手术镊将左右的两边子宫腔挑出，用4个动脉止血夹分别固定宫腔上下两侧；
19.s3：用注射器向子宫内注射0.2～0.8ml 95v/v％乙醇，使子宫微微膨胀，保持此状态3～10min，待子宫表面发白变硬后，吸出95v/v％乙醇；然后用0.9％氯化钠冲洗宫腔内的残余乙醇，将子宫放回腹部；
20.s4：手术缝合后，肌肉注射兽用青霉素，放回笼中，1小时后大鼠苏醒，观察状态，7天后开腹检查子宫形态，若同时出现以下形态学改变，视为模型成功：子宫肌壁出现粘连肿胀、子宫与周围组织出现粘连、宫腔内有积液。
21.本发明中，向子宫内注射95v/v％乙醇体积进行，并且保持此状态3～10min，能造成子宫粘连的状态。本发明人意外发现，若使用的乙醇浓度过低，时间过短，则无法形成子宫粘连的状态，无法验证特定来源的脐带间充质干细胞的状态。若乙醇浓度过高，时间过长，则容易造成磁性sd大鼠死亡。
22.优选的，所述s4步骤中兽用青霉素肌肉注射量为8～9万单位。
23.优选的，所述模型大鼠给药治疗的具体步骤为：向干细胞给药组大鼠进行给药，注射脐带间充质干细胞，模型对照组尾静脉注射相同体积的0.9％氯化钠注射液，正常对照组做假手术处理，不注射任何试剂；从模型构建成功后开始给药，每周1～3次，共给药1～6周。
24.优选的，所述给药方式为包括尾静脉给药、子宫基底层给药、尾静脉及子宫基底层联合给药。
25.优选的，所述脐带间充质干细胞的注射量为1.0
×
105～1.0
×
107cells/只；进一步优选的，为5.0
×
106cells/只。
26.本发明中，通过控制脐带间充质干细胞的注射量，验证了脐带间充质干细胞有一定的治疗宫腔粘连的作用，为后续进一步应用到人体奠定的基础。本发明中，意外发现1.0
×
105～1.0
×
107cells/只的注射量对大鼠的宫腔粘连有治疗作用，过高和过低的注射量都无法得到治疗效果。
27.本发明中，通过特定的脐带间充质干细胞，能更好的治疗大鼠的宫腔粘连，来源于华夏源的间充质干细胞的细胞生物学活性更好，免疫调节能力和抗纤维化能力更强。
28.优选的，所述的子宫修复评价的具体步骤包括：在给药期间，对各组所有存活动物进行临床观察，包括但不限于大鼠的死亡、精神状态、行为活动情况；在实验结束后，处死所有大鼠，大体解剖观察子宫形态学特征并拍照，取子宫组织进行he染色观察和统计内膜厚度和腺体数量，masson染色分析纤维化程度。
29.有益效果
30.1、本发明中的方案一方面验证了来源于华夏源的脐带间充质干细胞具有治疗大鼠宫腔疾病的能力，能够使发生粘连的宫腔在脐带干细胞治疗后，其子宫的形态恢复、子宫的质地改善，无出血或瘀血状态。另一方面，本发明中通过构建了一个干细胞治疗大鼠宫腔粘连模型，可清晰清楚的观察到宫腔情况，经he染色分析、masson染色分析后能观察到干细胞治疗的效果。
31.2、本发明中，向子宫内注射95v/v％乙醇体积进行，并且保持此状态3～10min，能造成子宫粘连的状态。
32.3、本发明中，通过控制脐带间充质干细胞的注射量，验证了脐带间充质干细胞有一定的治疗宫腔粘连的作用，为后续进一步应用到人体奠定的基础。
33.4、本发明中，通过脐带间充质干细胞的治疗效果可以得到特定的来自华夏源的脐带间充质干细胞起到有效治疗效果时的每周给药次数，给药的周数，为进一步推进到人体实验打下了基础。通过控制每周给药次数，给药的周数，使最终的试验结果能清楚明了显示正常对照组、模型对照组和干细胞给药组中宫腔的形态和染色后细胞的形态。
34.5、本发明，将乙醇破坏的宫腔放回体内后，控制兽用青霉素肌肉注射量为8～9万单位，提高了大鼠的成活率，从而提高了造模的成功率。此外，本发明还采用了不同的给药方式，对宫腔粘连的动物模型进行治疗，证明了三种给药方式均能对大鼠模型起到一定的治疗效果。
附图说明
35.图1为实施例1中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的子宫形态学特征图；从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组；
36.图2为实施例1中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的子宫组织进行he染色结果图；从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组；
37.图3为实施例1中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的masson染色结果图，从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组。
38.图4为实施例2中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的子宫形态学特征图；从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组；
39.图5为实施例2中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的子宫组织进行he染色结果图；从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组；
40.图6为实施例2中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的masson染色结果图，
从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组。
41.图7为实施例3中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的子宫形态学特征图；从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组；
42.图8为实施例3中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的子宫组织进行he染色结果图；从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组；
43.图9为实施例3中正常对照组、模型对照组、干细胞给药组中的masson染色结果图，从左向右分别为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组。
44.图10为对比例2中干细胞给药组中的子宫形态学特征图；
45.图11为对比例2中干细胞给药组中的he染色结果图；
46.图12为对比例2中干细胞给药组中的masson染色结果图。
具体实施方式
47.实施例1
48.本实施例第一方面提供了间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。
49.所述脐带间充质干细胞的制备方法包括以下步骤：
50.1、将脐带从保存液中取出，置于150mm平皿中，用手术剪刀将脐带剪成2cm的小段；用止血钳挑出脐带的2根动脉；手术剪刀剪开脐带静脉，用止血钳刮去静脉膜；去除动脉和静脉膜的脐带组织置于50ml离心管中，加30ml含1％双抗的生理盐水清洗，反复清洗10次；清洗后的脐带组织放入新的50ml离心管中，用新的手术剪刀剪10分钟；加入30ml含1％双抗的生理盐水，摇匀；将组织混合液依次过8目滤网和16目滤网，吸取中间层1-2mm大小的组织块，置于50ml离心管中，加20ml新鲜培养液重悬；400g离心3分钟，倒去上清；用一次性吸管吸取0.5ml的组织沉淀放入100mm培养皿中，用吸管分摊均匀，一共铺10个平皿；放入37度培养箱2个小时；
51.2、取出培养皿，每个皿加入5ml含20％胎牛血清的a-mem培养液，置于37度co2培养箱中培养；培养第三天，每皿补加5ml含20％胎牛血清的a-mem培养液；培养第六天观察到有细胞从组织块周围游离出；培养第七天换液，每皿加10ml含20％胎牛血清的a-mem培养液；培养第10天，组织块周围形成中等大小集落，轻轻敲击平皿，促使大部分组织块从皿底脱离；
52.3、培养第13天，镜下观察细胞已经形成较大集落，集落中心细胞开始老化，开始收获原代细胞；用一次性吸管轻轻剔除剩余贴壁的组织块；倒去皿中培养液，每皿加10ml生理盐水清洗，倒去清洗液；每皿加3ml tryple消化液，于37度培养箱中消化3分钟；每皿加入3ml生理盐水终止消化；吹打后装入50ml离心管，取样计数；细胞连续培养传代至p5代，消化细胞，检测克隆率和表面标记。
53.所述脐带间充质干细胞来源于华夏源(上海)有限公司。
54.所述脐带间充质干细胞的处理步骤为：将脐带间充质干细胞悬液400g离心5分钟，弃去上清，加入10ml 0.9％氯化钠注射液将细胞重悬，待用。
55.所述间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用的评价方法步骤包括以下步骤：
56.(1)大鼠宫腔粘连模型制备；
57.(2)模型大鼠给药治疗；
58.(3)子宫修复评价。
59.所述大鼠宫腔粘连模型的制备方法，包括以下步骤：
60.s1：对同批次的雌性sd大鼠进行分组，分为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组，每组10只，对模型对照组、干细胞给药组中的雌性sd大鼠分别进行腹腔注射，腹腔注射5％水合氯醛溶液麻醉，剂量为0.3ml/100g体重，3分钟后将雌性sd大鼠固定在手术板上；
61.s2：将大鼠腹部剃毛后，沿腹中线，在第一对乳头中间，用无菌刀片或剪刀切割一个1.5cm的纵向切口。用手术镊将左右的两边子宫腔挑出，用4个动脉止血夹分别固定宫腔上下两侧；
62.s3：用注射器向子宫内注射0.4ml 95v/v％乙醇，使子宫微微膨胀，保持此状态6min，待子宫表面发白变硬后，吸出95v/v％乙醇；然后用0.9％氯化钠冲洗宫腔内的残余乙醇，将子宫放回腹部；
63.s4：手术缝合后，肌肉注射9万单位的兽用青霉素，放回笼中，1小时后大鼠苏醒，观察状态，7天后开腹检查子宫形态，若同时出现以下形态学改变，视为模型成功：子宫肌壁出现粘连肿胀、子宫与周围组织出现粘连、宫腔内有积液。
64.所述模型大鼠给药治疗的具体步骤为：向干细胞给药组大鼠进行尾静脉注射脐带间充质干细胞1.0
×
106cells/只，模型对照组尾静脉注射相同体积的0.9％氯化钠注射液，正常对照组做假手术处理，不注射任何试剂；从模型构建成功后开始给药，每周2次，共给药3周。
65.所述的子宫修复评价的具体步骤包括：在给药期间，对各组所有存活动物进行临床观察，观察大鼠的死亡、精神状态、行为活动情况；在实验结束后，处死所有大鼠，大体解剖观察子宫形态学特征并拍照，取子宫组织进行he染色观察和统计内膜厚度和腺体数量，masson染色分析纤维化程度。
66.结果：无大鼠死亡，各组大鼠精神状态正常，正常活动。子宫形态学、he染色、masson染色结果见图1～3。
67.图1中正常对照组：正常对照组子宫形态完整，粗细均匀，质地柔软，充盈且无出血或淤血，与肌壁、腹腔脏器组织无粘连，子宫宫腔无明显积液。模型对照组子宫呈节段性粗大，质地坚硬处粘连堵塞严重，可见散状出血灶，远端膨大呈暗红色且宫腔内有明显积液。与模型对照组相比，干细胞给药组经过治疗后，子宫形态、质地等方面均有极大的改善，且无出血灶，子宫与组织均无粘连。
68.图2中经he染色分析发现，正常对照组子宫呈现正常的宫腔形态，组织结构完整，由内向外可见清晰的内膜层-肌层-外膜层。其中内膜层暴露面可见单层柱状上皮，同时内膜间质层细胞丰富，单管状腺体数量多且分布均匀，内膜厚度大。模型对照组子宫结构被破坏严重，内膜层仅存在少许，宫腔近乎闭锁，子宫内膜间质细胞缺失，可见大量纤维组织增生。与模型对照组相比，干细胞给药组经过治疗后，子宫恢复正常形态，可见三层结构，内膜层-肌层-外膜形态凸显，暴露面可见单层柱状上皮，腺体数量和子宫内膜厚度均明显增加。
69.图3中经masson染色分析，正常对照组在内膜层和肌层有正常的分布，呈浅蓝色，无沉积情况。模型对照组宫腔的内膜层已经被纤维化沉积所取代，原内膜层几乎消失，由此
导致了宫腔粘连和闭锁。与模型对照组相比，干细胞给药组经过治疗后子宫内膜纤维化程度得到了明显改善。
70.实施例2
71.实施例2的具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述s3中用注射器向子宫内注射0.2ml 95v/v％乙醇，使子宫微微膨胀，保持此状态10min。
72.所述s4中手术缝合后，肌肉注射8万单位的兽用青霉素，放回笼中。
73.模型大鼠给药治疗的具体步骤为：向干细胞给药组大鼠进行子宫基底层注射脐带间充质干细胞1.0
×
105cells/只，模型对照组尾静脉注射相同体积的0.9％氯化钠注射液，正常对照组做假手术处理，不注射任何试剂；从模型构建成功后开始给药，每周1次，共给药6周。
74.结果：无大鼠死亡，各组大鼠精神状态正常，正常活动。子宫形态学、he染色、masson染色结果见图4～6。
75.实施例3
76.实施例3的具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述s3中用注射器向子宫内注射0.8ml 95v/v％乙醇，使子宫微微膨胀，保持此状态3min。
77.所述s4中手术缝合后，肌肉注射9万单位的兽用青霉素，放回笼中。
78.模型大鼠给药治疗的具体步骤为：向干细胞给药组大鼠进行尾静脉及子宫基底层联和注射脐带间充质干细胞1.0
×
107cells/只，尾静脉及子宫基底层注射的脐带间充质干细胞的个数相同，模型对照组尾静脉注射相同体积的0.9％氯化钠注射液，正常对照组做假手术处理，不注射任何试剂；从模型构建成功后开始给药，每周3次，共给药1周。
79.结果：无大鼠死亡，各组大鼠精神状态正常，正常活动。子宫形态学、he染色、masson染色结果见图7～9。
80.对比例1
81.对比例1的具体实施方式同实施例1，不同之处在于，s3：用注射器向子宫内注射1ml 95v/v％乙醇，使子宫微微膨胀，保持此状态10min，待子宫表面发白变硬后，吸出95v/v％乙醇；然后用0.9％氯化钠冲洗宫腔内的残余乙醇，将子宫放回腹部；
82.结果：在大鼠宫腔粘连模型制备过程中，注射1ml 95v/v％乙醇的大鼠死亡。
83.对比例2
84.对比例2的具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述脐带间充质干细胞的注射量为1.0
×
104cells/只。
85.结果：无大鼠死亡，各组大鼠精神状态正常，正常活动。所述干细胞给药组的子宫形态学、he染色、masson染色结果见图10～12。
86.图10～12显示干细胞给药组经过治疗后，子宫仍呈节段性粗大，远端膨大；子宫结构被破坏严重，仍有大量纤维组织增生，宫腔粘连和闭锁。图片说明小剂量干细胞给药治疗后，未明显改善宫腔情况。
87.对比例3
88.对比例3的具体实施方式同实施例1，不同之处在于，所述的脐带间充质干细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司。

技术特征：
1.间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用，其特征在于，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的制备方法为将脐带从保存液中取出，置于150mm平皿中，用手术剪刀将脐带剪成2～3cm的小段；用止血钳挑出脐带的2根动脉；手术剪刀剪开脐带静脉，用止血钳刮去静脉膜；去除动脉和静脉膜的脐带组织置于50ml离心管中，加25～35ml含1％双抗的生理盐水清洗，反复清洗10～15次；清洗后的脐带组织放入新的50ml离心管中，用新的手术剪刀剪10～15分钟；加入30～50ml含1％双抗的生理盐水，摇匀；将组织混合液依次过8目滤网和16目滤网，吸取中间层1-2mm大小的组织块，置于50ml离心管中，加20～30ml新鲜培养液重悬；300～500g离心3～5分钟，倒去上清；用一次性吸管吸取0.3～0.7ml的组织沉淀放入100mm培养皿中，用吸管分摊均匀，一共铺10个平皿；放入37度培养箱2～3个小时；取出培养皿，每个皿加入5～8ml含20％胎牛血清的a-mem培养液，置于37度co2培养箱中培养；培养第三天，每皿补加5～8ml含20％胎牛血清的a-mem培养液；培养第六天观察到有细胞从组织块周围游离出；培养第七天换液，每皿加10～15ml含20％胎牛血清的a-mem培养液；培养第10天，组织块周围形成中等大小集落，轻轻敲击平皿，促使大部分组织块从皿底脱离；培养第13～15天，镜下观察细胞已经形成较大集落，集落中心细胞开始老化，开始收获原代细胞；用一次性吸管轻轻剔除剩余贴壁的组织块；倒去皿中培养液，每皿加10～15ml生理盐水清洗，倒去清洗液；每皿加3～5ml tryple消化液，于37度培养箱中消化3～5分钟；每皿加入3～5ml生理盐水终止消化；吹打后装入50ml离心管，取样计数；细胞连续培养传代至p5代，消化细胞，检测克隆率和表面标记，得到脐带间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的处理步骤为：将脐带间充质干细胞悬液离心，弃去上清，加入5～15ml 0.9％氯化钠注射液将细胞重悬，待用。4.根据权利要求3所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用，其特征在于，所述离心的离心力为300～500g，时间为3～8分钟。5.一种根据权利要求1～4任一项所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用的评价方法，其特征在于，所述间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用的步骤包括以下步骤：(1)大鼠宫腔粘连模型制备；(2)模型大鼠给药治疗；(3)子宫修复评价。6.根据权利要求5所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用的评价方法，其特征在于，所述大鼠宫腔粘连模型的制备方法，包括以下步骤：s1：对同批次的雌性sd大鼠进行分组，分为正常对照组、模型对照组、干细胞给药组，对模型对照组、干细胞给药组中的雌性sd大鼠分别进行腹腔注射，腹腔注射5％水合氯醛溶液麻醉，剂量为0.3ml/100g体重，3分钟后将雌性sd大鼠固定在手术板上；s2：将大鼠腹部剃毛后，沿腹中线，在第一对乳头附近，用无菌刀片或剪刀切割一个1.5cm的纵向切口。用手术镊将左右的两边子宫腔挑出，用4个动脉止血夹分别固定宫腔上
下两侧；s3：用注射器向子宫内注射0.2～0.8ml 95v/v％乙醇，使子宫微微膨胀，保持此状态3～10min，待子宫表面发白变硬后，吸出95v/v％乙醇；然后用0.9％氯化钠冲洗宫腔内的残余乙醇，将子宫放回腹部；s4：手术缝合后，肌肉注射兽用青霉素，放回笼中，1小时后大鼠苏醒，观察状态，7天后开腹检查子宫形态，若同时出现以下形态学改变，视为模型成功：子宫肌壁出现粘连肿胀、子宫与周围组织出现粘连、宫腔内有积液。7.根据权利要求6所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用评价方法，其特征在于，所述s4步骤中兽用青霉素肌肉注射量为8～9万单位。8.根据权利要求5所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用评价方法，其特征在于，所述模型大鼠给药治疗的具体步骤为：向干细胞给药组大鼠进行给药，注射脐带间充质干细胞，模型对照组尾静脉注射相同体积的0.9％氯化钠注射液，正常对照组做假手术处理，不注射任何试剂；从模型构建成功后开始给药，每周1～3次，共给药1～6周。9.根据权利要求8所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用评价方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的注射量为1.0
×
105～1.0
×
107cells/只。10.根据权利要求5所述的间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用评价方法，其特征在于，所述的子宫修复评价的具体步骤包括：在给药期间，对各组所有存活动物进行临床观察，包括大鼠的死亡、精神状态、行为活动情况；在实验结束后，处死所有大鼠，大体解剖观察子宫形态学特征并拍照，取子宫组织进行he染色观察和统计内膜厚度和腺体数量，masson染色分析纤维化程度。

技术总结
本发明涉及间充质细胞技术领域，尤其涉及IPC C12N5，更具体地涉及，间充质干细胞在制备治疗宫腔粘连药物中的应用。本发明中制备了鼠宫腔粘连模型制备，选用处理后的脐带间充质干细胞进行模型大鼠给药治疗，通过评价子宫修复程度，验证了脐带间充质干细胞具有治疗大鼠宫腔疾病的能力，同时，提供了一种干细胞治疗大鼠宫腔粘连模型，能够清晰清楚的分析干细胞治疗的效果。疗的效果。疗的效果。


技术研发人员：朱灏 姬厚丽 卢意
受保护的技术使用者：华夏源（上海）生物科技有限公司
技术研发日：2023.05.23
技术公布日：2023/10/15