一种活化因子精华素及其制备工艺与应用的制作方法

1.本发明属于化妆品技术领域，涉及一种活化因子精华素及其制备工艺与应用。


背景技术：

2.活化因子，也称生长因子，活性生长因子，活性细胞因子，是一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合，调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的多肽类物质。它们在生物体内含量极低，但具有非常高的生物活性，能通过与受体结合对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用，影响细胞增殖、细胞迁移、血管发生、色素形成和蛋白质合成及调控等多种过程，并在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中发挥重要作用，对医疗和美容行业有重大意义。
3.活化因子具有优越的生物活性，但是其作为成分加入化妆品中时容易在生产及使用过程中受到各种因素如微生物、温度、酸碱等影响快速失活，严重影响使用效果。目前较好的活化因子活性保存方法是采用冷冻干燥方法通过-20℃及以下的低温保持其活性，却不方便作为化妆品成分日常使用，也不利于保存和运输。同时，活化因子生物活性过高，在较短时间内以极低的含量即可完全发挥效果，难以持久维持美容作用。
4.因此，开发一种能有效持久维持活化因子活性，便于生产、储存和日常使用的活化因子精华素及其制备工艺与应用具有重要意义。
5.中国专利公开号cn108904318a《一种具有协同egf修复且保湿并保护egf的精华液及其制备方法》公开了一种含有egf(表皮细胞生长因子，活化因子之一)的精华液，通过成分中的大小分子透明质酸钠和燕麦β-葡聚糖和工艺上的灌装冲入氮气保护egf活性，工艺复杂，且对活化因子的活性维持效果仍需进一步提升。


技术实现要素：

6.为了解决现有活化因子化妆品中活化因子容易失活，活性效果持续时间短的问题，本发明提供一种活化因子精华素及其制备工艺与应用，通过丝素蛋白和水凝胶-脂质体双层包埋结构互相协同配合保护活化因子，所得活化因子精华素活化因子保护效果好，活性效果持续时间长，制备简单，易于生产和保存。
7.本发明的目的在于提供一种活化因子精华素的制备工艺。
8.本发明的另一目的在于提供一种活化因子精华素。
9.本发明的另一目的在于提供上述活化因子精华素的应用。
10.本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
11.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
12.s1.将活化因子、丝素蛋白、卡波姆和去离子水混合均匀，超声搅拌，冷冻，解冻至室温，得到水相，待用；
13.s2.将氢化卵磷脂、水解胶原、透明质酸钠、甘油加热搅拌，混合均匀，得到油相，待用；
14.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，加热，高速条件下均质，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡，降温，即得所述活化因子精华素。
15.本技术通过先将活化因子、丝素蛋白、卡波姆和去离子水混合均匀，超声搅拌，冷冻，解冻至室温使水相混合物中卡波姆溶胀，利用冷冻再解冻产生的空隙将活化因子和丝素蛋白紧紧包裹在卡波姆中形成稳定的水凝胶。丝素蛋白具有独特的调控活化因子释放的性质，而卡波姆形成的水凝胶对活性组分有着良好的控释效果，通过水凝胶包埋活化因子和丝素蛋白可以进一步控制活化因子缓释效果，使得活化因子精华素具有持久的活性效果时间。而利用氢化卵磷脂、水解胶原、透明质酸钠、甘油等油相混合物预先混合再与水凝胶混合，形成含水凝胶的双分子层结构脂质体，通过水凝胶-双分子层结构脂质体双层包埋有效保护了活化因子的活性，具有优异的稳定性，还可以实现活性成分的持久释放，制备简单，易于生产和保存。
16.作为本发明的一种优选技术方案，s1中所述活化因子为afgf、bfgf、egf、vegf和kgf中的一种或多种。
17.优选地，s1中所述活化因子、丝素蛋白、卡波姆和去离子水的质量比为1:30～40:60～70:120～140。
18.优选地，s1中所述超声搅拌温度为0～4℃，时间为3～4h；所述冷冻温度为零下20～30℃，时间为2h。
19.优选地，s2中所述氢化卵磷脂、水解胶原、透明质酸钠、甘油质量比为25～30:12～16:5～8:7～11，所述氢化卵磷脂与s1中所述卡波姆质量比为4:1。
20.优选地，s2中所述加热搅拌温度为75～80℃，搅拌时间为20～25min。
21.优选地，s3中所述加热温度为80～90℃，搅拌时间为20～30min；所述高速条件下均质转速为1500～2000r/min，均质时间为4～6min。
22.一种活化因子精华素，通过上述任一项所述的制备工艺制备得到。
23.上述活化因子精华素应用于制造化妆品。
24.本发明的有益效果：
25.(1)本技术通过水凝胶和双分子结构脂质体对活化因子进行双层包埋，隔绝了外部环境因素的干扰，为活化因子维持了温和稳定的环境，有效地保护了活化因子的活性，使得所得活化因子精华素具有优异的修护抗皱效果。
26.(2)本技术利用丝素蛋白独特的调控活化因子释放的性质与水凝胶-脂质体双层包埋结构互相协同配合，实现活化因子的持续稳定缓释，使得活化因子精华素具有持久的活性效果时间，效果持久，可长期使用。
27.(3)本技术制备工艺简单，无需复杂的灌装充气维持低温即可保证活化因子的活性，没有添加防腐剂或香精，所用材料均对人体皮肤具有亲和性，温和无刺激，便于吸收，易于作为化妆品生产和保存。
具体实施方式
28.为更进一步阐述本发明为实现预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合实施例，对依据本发明的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如下。
29.实施例中的原料均可通过市售得到；除非特别说明，本发明所采用的试剂、方法和
设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
30.实施例1
31.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
32.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf)、32份丝素蛋白、67份卡波姆和130份去离子水混合均匀，2℃超声搅拌3h，-20℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
33.s2.按重量份将268份氢化卵磷脂、130份水解胶原、75份透明质酸钠、103份甘油75℃加热搅拌22min，混合均匀，得到油相，待用；
34.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，85℃搅拌30min，1500r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
35.实施例2
36.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
37.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括egf、vegf、kgf)、39份丝素蛋白、65份卡波姆和135份去离子水混合均匀，4℃超声搅拌4h，-25℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
38.s2.按重量份将260份氢化卵磷脂、148份水解胶原、54份透明质酸钠、74份甘油80℃加热搅拌21min，混合均匀，得到油相，待用；
39.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，88℃搅拌25min，1800r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
40.实施例3
41.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
42.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf、vegf)、36份丝素蛋白、64份卡波姆和129份去离子水混合均匀，4℃超声搅拌3h，-30℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
43.s2.按重量份将256份氢化卵磷脂、153份水解胶原、65份透明质酸钠、89份甘油78℃加热搅拌20min，混合均匀，得到油相，待用；
44.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，85℃搅拌30min，2000r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
45.实施例4
46.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
47.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf、vegf)、32份丝素蛋白、66份卡波姆和125份去离子水混合均匀，4℃超声搅拌3h，-20℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
48.s2.按重量份将264份氢化卵磷脂、145份水解胶原、61份透明质酸钠、84份甘油75℃加热搅拌25min，混合均匀，得到油相，待用；
49.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，90℃搅拌23min，1600r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
50.实施例5
51.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
52.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf、kgf)、35份丝素蛋白、65份卡波姆和139份去离子水混合均匀，4℃超声搅拌3h，-30℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，
待用；
53.s2.按重量份将260份氢化卵磷脂、155份水解胶原、64份透明质酸钠、93份甘油80℃加热搅拌25min，混合均匀，得到油相，待用；
54.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，90℃搅拌23min，2000r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
55.实施例6
56.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
57.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf、vegf、kgf)、37份丝素蛋白、65份卡波姆和130份去离子水混合均匀，4℃超声搅拌3h，-25℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
58.s2.按重量份将260份氢化卵磷脂、157份水解胶原、62份透明质酸钠、72份甘油77℃加热搅拌24min，混合均匀，得到油相，待用；
59.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，90℃搅拌28min，2000r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
60.对比例1
61.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
62.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf)、67份卡波姆和130份去离子水混合均匀，2℃超声搅拌3h，-20℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
63.s2.按重量份将268份氢化卵磷脂、130份水解胶原、75份透明质酸钠、103份甘油75℃加热搅拌22min，混合均匀，得到油相，待用；
64.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，85℃搅拌30min，1500r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
65.对比例2
66.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
67.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf)、32份丝素蛋白、67份海藻酸钠和130份去离子水混合均匀，2℃超声搅拌3h，-20℃冷冻2h，解冻至室温，得到水相，待用；
68.s2.按重量份将268份氢化卵磷脂、130份水解胶原、75份透明质酸钠、103份甘油75℃加热搅拌22min，混合均匀，得到油相，待用；
69.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，85℃搅拌30min，1500r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
70.对比例3
71.一种活化因子精华素的制备工艺，包括以下步骤：
72.s1.按重量份将1份活化因子(成分包括afgf、bfgf、egf)、32份丝素蛋白、67份卡波姆和130份去离子水混合均匀，2℃超声搅拌3h，得到水相，待用；
73.s2.按重量份将268份氢化卵磷脂、130份水解胶原、75份透明质酸钠、103份甘油75℃加热搅拌22min，混合均匀，得到油相，待用；
74.s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，85℃搅拌30min，1500r/min高速条件下均质5min，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡降温，即得所述活化因子精华素。
75.对以上实施例1～6和对比例1～3制备的活化因子精华素进行性能测试，具体如下：
76.(1)制备标准溶液：
77.将0.14g磷酸氢钠、0.88g氯化钠、0.5mg活化因子(afgf、bfgf、egf)溶于适量去离子水中，用20wt.％磷酸溶液调节ph值至6.5～7，灭菌，用同样灭菌后的去离子水补足至100g，得到标准溶液。
78.(2)使用elisa法检测25℃恒温恒湿条件下实施例1～6和对比例1～3制备的活化因子精华素的活化因子含量变化，具体结果如表1。
79.表1实施例1～6和对比例1～3的活化因子浓度测试结果
[0080][0081]
(3)将处于对数生长期的3t3细胞培养至80～90％汇合，用0.25％胰蛋白酶消化，以2.0
×
105个/ml的细胞数目接种于96孔板，培养24h后，更换培养基，按照1％的稀释比例进行加样，实施例1～6和对比例1～3样品分别设3个复孔，每板都设置3个复孔的对照组。给药后将96孔板放入培养箱继续培养24h，之后加入10μl噻唑蓝，培养箱中培养4h，吸出孔中溶液并加入100μl二甲基亚砜，振荡后于570nm波长下检测样品吸光度值，计算得到实施例1～6和对比例1～3制备的活化因子精华素的活化因子活性变化，最终活性结果如表2。
[0082]
表2实施例1～6和对比例1～3的活化因子活性测试结果
[0083][0084]
综合表1和表2测试结果可知，本技术各实施例在经过16周的长时间储存后活化因子浓度仍在85％以上，活性也在85％以上，说明本技术通过丝素蛋白与水凝胶-脂质体双层包埋结构互相协同配合，有效隔绝了外部环境因素干扰，为活化因子维持了温和稳定的环境，保证了活化因子优异的存活率，同时有效控制了活化因子缓释效果，使得活化因子精华素具有持久的活性效果时间。
[0085]
而同样综合表1和表2测试结果可知，对比例1不添加丝素蛋白，缺少丝素蛋白独特的调控活化因子释放的性质，活化因子缓释效果差，储存16周后活化因子测试活性已经降到了70％以下；对比例2使用海藻酸钠替代卡波姆，形成的水凝胶包埋效果不足，缓释效果较差，活化因子初始浓度低于95％，储存16周后的浓度不足75％，储存16周后的测试活性低于75％；对比例3舍去了s1中冷冻解冻的操作，活化因子初始浓度不足90％，储存16周后活化因子的活性效果也无法与各实施例相比。
[0086]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简介修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

技术特征：
1.一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括以下步骤：s1.将活化因子、丝素蛋白、卡波姆和去离子水混合均匀，超声搅拌，冷冻，解冻至室温，得到水相，待用；s2.将氢化卵磷脂、水解胶原、透明质酸钠、甘油加热搅拌，混合均匀，得到油相，待用；s3.将s1中所得水相加入到s2油相中，加热，高速条件下均质，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡，降温，即得所述活化因子精华素。2.根据权利要求1所述的一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，s1中所述活化因子为afgf、bfgf、egf、vegf和kgf中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，s1中所述活化因子、丝素蛋白、卡波姆和去离子水的质量比为1:30～40:60～70:120～140。4.根据权利要求1所述的一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，s1中所述超声搅拌温度为0～4℃，时间为3～4h；所述冷冻温度为零下20～30℃，时间为2h。5.根据权利要求1所述的一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，s2中所述氢化卵磷脂、水解胶原、透明质酸钠、甘油质量比为25～30:12～16:5～8:7～11；所述氢化卵磷脂与s1中所述卡波姆质量比为4:1。6.根据权利要求1所述的一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，s2中所述加热搅拌温度为75～80℃，搅拌时间为20～25min。7.根据权利要求1所述的一种活化因子精华素的制备工艺，其特征在于，s3中所述加热温度为80～90℃，搅拌时间为20～30min；所述高速条件下均质转速为1500～2000r/min，均质时间为4～6min。8.一种活化因子精华素，其特征在于，所述活化因子精华素由权利要求1～7任一项所述的制备工艺制备得到。9.一种如权利要求8所述的活化因子精华素在制造化妆品中的应用。

技术总结
本发明涉及一种活化因子精华素及其制备工艺与应用，属于化妆品技术领域。该活化因子精华素的制备工艺包括以下步骤：S1.将活化因子、丝素蛋白、卡波姆和去离子水混合均匀，超声搅拌，冷冻，解冻至室温，得到水相，待用；S2.将氢化卵磷脂、水解胶原、透明质酸钠、甘油加热搅拌，混合均匀，得到油相，待用；S3.将S1中所得水相加入到S2油相中，加热，高速条件下均质，搅拌均匀，保温30min抽真空消泡，降温，即得所述活化因子精华素。通过该制备工艺得到的活化因子精华素活化因子保护效果好，活性效果持续时间长，制备简单，易于生产和保存。易于生产和保存。


技术研发人员：陈剑英 陈伟杰 赖东煌 罗夫
受保护的技术使用者：广州腾麟生物科技有限公司
技术研发日：2023.05.10
技术公布日：2023/7/7