一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法与流程

1.本发明涉及多糖提取物制备技术领域，具体涉及一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法。


背景技术：

2.葛仙米，学名拟球状念珠藻，湖北珍稀特产，是一种药食两用的特色低等藻类植物，由许多念珠状藻丝包埋于凝胶状多糖基质中，形成球形或椭球形原植体，呈墨绿色，直径可达2厘米。据《本草纲目拾遗》和《药性考》记载，葛仙米可食用，亦可入药。近些年，因为农药化肥的施用，自然生态环境遭到破坏，葛仙米野生资源锐减，并于2021年3月被《中华人民共和国长江保护法》列为珍贵濒危物种实行重点保护。虽然葛仙米在2018年被国家卫生健康委批准为新食品原料，但是作为保健食品很难与大众食品竞争，开辟葛仙米资源化利用新渠道是振兴葛仙米产业发展的关键。
3.葛仙米富含多糖，具有独特的生物活性和药理作用。有研究报道指出，葛仙米多糖在水中具有较好的溶解性，但是葛仙米多糖在酒精类产品中溶解性较差，导致其应用范围受到制约。cn114181326a公开了一种制备葛仙米多糖的方法，主要步骤为粉碎、水提取、酶解、多次有机溶剂萃取，最后得到水溶性葛仙米多糖，其制备过程需要使用大量有机溶剂，且得到的葛仙米多糖为水溶性多糖。cn105622775a公开了一种葛仙米多糖及其提取方法，主要通过备料、浸泡、水提、酶解、超滤、浓缩、灭菌以及干燥等步骤制备葛仙米多糖，该发明以纯水为提取溶剂，得到的葛仙米多糖分子量分布范围在1万道尔顿～100万道尔顿，其产品分子量具有特异性，且该产品在酒精性饮料中的溶解性未作说明。cn110713555a公开了一种提取葛仙米多糖的方法，主要步骤为预粉碎、水提取、酸解脱色、离心过滤、一次醇沉、重溶、二次醇沉和干燥，其得到的葛仙米多糖醇溶性未知，葛仙米原料本身的腥味没有去除，且制备过程加酸脱色会破坏多糖本身的结构。可见，上述现有技术在制备工艺和产品性质上均有不足。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，采用该方法得到的葛仙米多糖在酒精性饮料中具有较好的溶解性。
5.本发明采用的技术方案是：
6.一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，包括以下步骤：
7.步骤一、乙醇提取：将葛仙米粗粉碎后过筛网并收集筛下物，然后用浓度为20-50％的乙醇溶液进行多次冷凝回流提取，固液分离后收集葛仙米提取液；
8.步骤二、脱腥：在所述葛仙米提取液中加入干燥后的紫苏叶，紫苏叶与葛仙米的使用量质量比为0.05-0.1：1，低温搅拌一段时间，固液分离得到脱腥后的葛仙米提取液；
9.步骤三、脱色：将步骤二得到的葛仙米提取液过脱色用大孔树脂，收集透过液；
10.步骤四、酶解除蛋白：在步骤三得到的葛仙米透过液中加入0.8-1.5％的胰蛋白
酶，除去葛仙米蛋白；
11.步骤五、醇沉纯化：将除去蛋白的葛仙米透过液进行浓缩，使用95％乙醇调节浓缩液酒精度进行醇沉，离心分离收集沉淀得到葛仙米多糖；
12.步骤六、干燥：将得到的葛仙米多糖干燥后即为醇溶性葛仙米多糖提取物。
13.优选地，所述步骤一中，筛网的目数为30-50目。
14.优选地，所述步骤一中，提取温度为80-95℃，提取次数为1-3次，提取溶剂倍数为15-25倍，提取时间为1.5-2.5h。
15.优选地，所述步骤二中，脱腥温度为30-45℃，搅拌转速为150-250r/min，脱腥搅拌时间为0.5-1.5h。
16.优选地，所述步骤三中，脱色用大孔树脂为ads-17型大孔树脂或d941型大孔树脂，透过液流速为1-3bv/h。
17.优选地，所述步骤四中，酶解温度为45-60℃，酶解时间为1-3h。
18.优选地，所述步骤五中，将除去蛋白的葛仙米透过液浓缩至原体积的1/45-1/55。
19.优选地，所述步骤五中使用95％乙醇调节浓缩液酒精度至60-80％，离心转速5000-7000r/min，离心时间10-30min。
20.优选地，所述步骤六中，干燥方式为真空冷冻干燥或低温真空干燥。
21.本发明产生的有益效果是：
22.1.使用本发明方法制备得到的葛仙米多糖在酒精性饮料中具有良好的溶解性，且产品性质稳定。
23.2.使用本发明方法制备得到的葛仙米多糖本身颜色浅，无葛仙米自身所带的腥味。
24.3.本发明醇溶性葛仙米多糖制备过程简单，未使用有毒性的有机溶剂，工艺绿色无污染。
附图说明
25.图1为不同实施例和对比例中样品在38％vol基酒中的溶解量示意图。
具体实施方式
26.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明确，以下结合实例对其进行具体描述。有必要指出的是，以下实例仅用于本发明进行解释和说明，并不用于限定本发明。本领域技术人员根据上述发明内容所做的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
27.实施例1
28.一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其方法步骤具体如下：
29.(1)首先，将干燥后的1kg葛仙米粗粉碎后过30目筛网并收集筛下物，然后用15倍酒精度20％乙醇溶液在80℃条件下进行冷凝回流提取，提取次数2次，每次提取1.5h，合并得到葛仙米提取液。在得到的葛仙米提取液中加入干燥葛仙米质量50g的紫苏叶，30℃条件下以150r/min的转速搅拌0.5h，固液分离得到脱腥后的葛仙米提取液。将得到的葛仙米提取液过d941型大孔树脂脱色，透过液流速为1bv/h，收集透过液。
30.(2)在葛仙米透过液中加入8g质量分数的胰蛋白酶，酶解温度45℃条件下酶解1h除去葛仙米透过液中的蛋白质。然后将除去蛋白质的葛仙米透过液浓缩至原体积的1/45，再使用95％乙醇调节葛仙米浓缩液酒精度至60％，在离心转速5000r/min条件下离心10min，收集沉淀得到葛仙米多糖。最后，将得到的葛仙米多糖进行真空冷冻干燥得到201g醇溶性葛仙米多糖提取物。
31.实施例2
32.一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其方法步骤具体如下：
33.(1)首先，将干燥后的1kg葛仙米粗粉碎后过50目筛网并收集筛下物，然后用25倍酒精度50％乙醇溶液在95℃条件下进行冷凝回流提取，提取次数2次，每次提取2.5h，合并得到葛仙米提取液。在得到的葛仙米提取液中加入干燥葛仙米质量100g的紫苏叶，45℃条件下以250r/min的转速搅拌1.5h，固液分离得到脱腥后的葛仙米提取液。将得到的葛仙米提取液过d941型大孔树脂脱色，透过液流速为3bv/h，收集透过液。
34.(2)在葛仙米透过液中加入1.5g质量分数的胰蛋白酶，酶解温度60℃条件下酶解3h除去葛仙米透过液中的蛋白质。然后将除去蛋白质的葛仙米透过液浓缩至原体积的1/55，再使用95％乙醇调节葛仙米浓缩液酒精度至80％，在离心转速7000r/min条件下离心30min，收集沉淀得到葛仙米多糖。最后，将得到的葛仙米多糖进行真空冷冻干燥得到176g醇溶性葛仙米多糖提取物。
35.对比例1
36.不使用步骤二中的脱腥工艺，在使用乙醇提取葛仙米后直接进行脱色及后序步骤，其余步骤与实施例1相同，得到204g醇溶性葛仙米多糖提取物。
37.对比例2
38.不使用步骤三中的脱色工艺，在使用乙醇提取、脱腥后直接进行酶解除蛋白，其余步骤与实施例1相同，得到206g醇溶性葛仙米多糖提取物。
39.对比例3
40.根据发明专利cn105622775a中实施例1中的方法制备葛仙米多糖提取物，步骤如下：
41.(1)首先，将葛仙米在60℃下烘干2h，然后粉碎过80目筛，收集筛下物，用30倍量的纯化水浸泡24h，得到浸泡后的葛仙米。在浸泡后的葛仙米中加入15倍量的纯化水，升温至90℃后提取2h，静置至室温后离心，收集提取液。
42.(2)将提取液加热至55℃后向提取液中加入占提取液体积0.5％的木瓜蛋白酶(104u/g)(w/v)酶解2h，然后将酶解液冷却至室温后离心并收集料液，料液在100℃条件下灭酶10min，然后过滤除杂，得到酶解液。再使用分子量1万道尔顿的超滤膜对酶解液进行一次分离，收集截留液，使用反渗透膜将截留液进行反渗透(反渗透料液温度＜40℃，压力2.0mpa)浓缩至原体积的0.3倍，得到浓缩液。最后将浓缩液在80℃下保温20min灭菌，真空冷冻干燥得到212g葛仙米多糖提取物。
43.试验例1
44.品评实验：采用多人品评的方式检验各实施例和对比例中样品的腥味情况，不同实施例和对比例中样品的腥味情况如表1所示。
45.表1不同实施例和对比例中样品的腥味情况
[0046][0047]
试验例2
[0048]
溶解量试验：取过量各实施例和对比例中的样品，分别置于100ml38％基酒中，震荡搅拌后在10000r/min转速下离心20min，取离心上清液检测其中的葛仙米多糖含量，并计算出样品的溶解量。不同实施例和对比例中样品的溶解量如图1所示。
[0049]
从图1可以看出，使用本发明方法制备的样品在38％vol基酒中的溶解量远远高于对比例3，这表明使用本发明得到的醇溶性葛仙米多糖提取物在酒精性溶剂中具有较好的溶解性。另外，对比例1和对比例2中样品的溶解量明显低于实施例1，这表明本发明使用的脱腥和脱色步骤对葛仙米提取物的溶解性均有显著的提升作用，若将脱腥和脱色步骤去除，则会破坏本发明工艺的整体性，导致醇溶性葛仙米提取物溶解性下降。
[0050]
试验例3
[0051]
色度稳定性实验：采用色度仪检验各实施例和对比例中样品的色度稳定性，不同实施例和对比例中样品的色度值和色度稳定性情况如表2所示。
[0052]
表2不同实施例和对比例中样品不同时期的色度值情况
[0053][0054]
由表2可知，对比例2和对比例3中样品的色度值明显高于实施例1和实施例2，而色度稳定性显著低于实施例1和实施例2，这表明本发明使用的脱色步骤能显著降低样品的色度值并增加其色度稳定性，使用本发明制备的醇溶性葛仙米提取物具有颜色浅、色度稳定性高的特点。
[0055]
基于上述数据分析结果，本发明实施例中所制得的醇溶性葛仙米多糖提取物具有醇溶性好、颜色浅且无腥味的特点。综上所述，上述实施例仅是对本发明的优选方式进行举例说明，并不包括所有的发明实施范围。本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与润饰，因此本发明的保护范围以权利要求界定的范围为准。

技术特征：
1.一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、乙醇提取：将葛仙米粗粉碎后过筛网并收集筛下物，然后用浓度为20-50％的乙醇溶液进行多次冷凝回流提取，固液分离后收集葛仙米提取液；步骤二、脱腥：在所述葛仙米提取液中加入干燥后的紫苏叶，紫苏叶与葛仙米的使用量质量比为0.05-0.1：1，低温搅拌一段时间，固液分离得到脱腥后的葛仙米提取液；步骤三、脱色：将步骤二得到的葛仙米提取液过脱色用大孔树脂，收集透过液；步骤四、酶解除蛋白：在步骤三得到的葛仙米透过液中加入0.8-1.5％的胰蛋白酶，除去葛仙米蛋白；步骤五、醇沉纯化：将除去蛋白的葛仙米透过液进行浓缩，使用95％乙醇调节浓缩液酒精度进行醇沉，离心分离收集沉淀得到葛仙米多糖；步骤六、干燥：将得到的葛仙米多糖干燥后即为醇溶性葛仙米多糖提取物。2.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，筛网的目数为30-50目。3.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，提取温度为80-95℃，提取次数为1-3次，提取溶剂倍数为15-25倍，提取时间为1.5-2.5h。4.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，脱腥温度为30-45℃，搅拌转速为150-250r/min，脱腥搅拌时间为0.5-1.5h。5.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，脱色用大孔树脂为ads-17型大孔树脂或d941型大孔树脂，透过液流速为1-3bv/h。6.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，酶解温度为45-60℃，酶解时间为1-3h。7.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤五中，将除去蛋白的葛仙米透过液浓缩至原体积的1/45-1/55。8.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤五中使用95％乙醇调节浓缩液酒精度至60-80％，离心转速5000-7000r/min，离心时间10-30min。9.根据权利要求1所述一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤六中，干燥方式为真空冷冻干燥或低温真空干燥。

技术总结
本发明公开了一种醇溶性葛仙米多糖提取物的制备方法，包括提取、脱腥、脱色、酶解除蛋白、醇沉纯化、干燥等步骤。本发明制备工艺简单、绿色，获得的醇溶性葛仙米多糖醇溶性好、颜色浅且无腥味，有利于工业化生产和产品应用。有利于工业化生产和产品应用。有利于工业化生产和产品应用。


技术研发人员：潘凯进 王喆 徐剑 陈阳 石万银
受保护的技术使用者：劲牌有限公司
技术研发日：2023.04.07
技术公布日：2023/7/13