用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法

1.本发明涉及实验室材料制备，具体涉及一种用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法。


背景技术：

2.电子顺磁共振epr是利用物质中未成对电子的自旋和外加磁场之间的相互作用来研究物质的结构和性质。而核磁共振nmr是利用原子核的自旋和外加磁场之间的相互作用来研究物质的结构和性质的技术。这两种技术的共性在于需要样品被置于一个强磁场中，然后通过辐射能量来激发未成对电子或原子核的自旋状态，使其从低自旋态到高自旋态跃迁，从而产生共振信号。
3.在实际运用中，电子顺磁共振epr是波谱技术其检测灵敏度和精确度很高，能够检测未成对电子样品的波谱。核磁共振成像mri具有成像精度高、无电离辐射、无成像深度限制、提供精确解剖学图像的技术优势。使用时，epr波谱扫描需要自由基捕获剂的参与，mri成像也通常需要借助造影剂来实现。由于当前研究表明活性氧ros参与了众多疾病的发生和发展过程，并且起到了非常重要的作用，因此，考虑到电子顺磁共振技术可以实现对ros的定量，核磁共振成像技术可以提供精确的解剖学信息，因此，如何研发一款能同时用于epr扫描和mri成像的双模探针，充分结合两种技术的优势，稳定的实现对生物体ros的精准定位和定量是值得深究的。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，以期望改善在当前实验过程中，目前使用探针不易于在电子顺磁共振和核磁共振上进行混用的问题。
5.为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，该方法用于制备同时适配电子顺磁共振和核磁共振成像的探针，取氟化石墨烯放入乙醇中分散并进行超声处理得到a试剂；取2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基分散在乙醇溶液中得到b试剂；取三羟甲基氨基甲烷分散在乙醇溶液中得到c试剂；将a试剂、b试剂和c试剂分别在氩气流条件下分别脱气得到a溶液、b溶液和c溶液；将a溶液冷却至零下45摄氏度以下加入b溶液，待a溶液和b溶液搅拌混合后加入c溶液得到混合液，将混合液高速离心分离得到双模探针。
6.作为优选，上述双模探针通过酒精中进行多次清洗，每次清洗后收集清洗后的上清液，并对收集的上清液进行检测，直至上清液在紫外可见吸收光谱中没有明显的at和tham的特征吸收峰。
7.作为优选，上述a试剂为氟化石墨烯乙醇溶液经过30分钟以上超声处理得到的均
匀溶液，上述氟化石墨烯乙醇溶液为氟化石墨烯与乙醇按照1.6毫克/毫升的比例进行混合得到的。
8.进一步的技术方案是，上述氟化石墨烯为氧化石墨烯氟化后获得，将上述氧化石墨烯放置在封闭的反应釜中，并将反应釜中调整为真空状态，在真空状态下对氧化石墨烯进行水分交换直至除去反应釜中的空气和水分；向反应釜加入氟气和氮气组成的混合气体充分反应后得到氟化石墨烯。
9.更进一步的，上述水分交换为向真空状态的反应釜中注入氮气，且注入次数至少三次，由氮气交换反应釜中内部空气和水分，上述反应釜中混合气体的合成压力为80kpa；上述混合气体与氧化石墨烯反应时间大于60分钟。
10.作为优选，上述c试剂中三羟甲基氨基甲烷与乙醇溶液用量比为1比1。
11.作为优选，上述a试剂、b试剂和c试剂分别在氩气流条件下脱气时间不低于20分钟。
12.作为优选，上述b溶液采用滴加的方式加入到a溶液中，待b溶液滴加到a溶液后以1500转/分钟的转速进行搅拌，搅拌60分钟以上得到ab混合溶液；待a溶液和b溶液混合均匀后再加入c溶液。
13.进一步的技术方案是，将c溶液加入到ab混合溶液中，加入过程中维持ab混合溶液处于零下45摄氏度，待c溶液滴加到ab混合溶液后，以1500转/分钟的转速进行搅拌，搅拌60分钟以上得到abc混合溶液，将abc混合溶液投入到离心机进行离心分离得到双模探针。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果至少是如下之一：本发明制备的双模探针能够满足电子-核双共振的需求，探针支持同时在电子顺磁共振epr和核磁共振成像nmr谱仪中加入适当的微波和射频辐射来实现双共振需求。
15.简言之，本发明的探针同时加入微波和射频辐射，可以将电子自旋和核自旋之间的相互作用最大化，从而增强信号强度和分辨率。并且制备的探针能够有效的避免微波和射频辐射对样品造成损伤或破坏风险。
附图说明
16.图1为本发明氧化石墨烯工艺示意图。
17.图2为本发明氟化石墨烯工艺示意图。
18.图3为本发明双模探针在扫描电镜下粒径分布图。
19.图4为本发明双模探针在粒径分布范围图。
20.图5为本发明双模探针粒径放大图。
21.图6为本发明水合粒径波动的曲线图。
22.图7为本发明双模探针连接前后电动势变化图。
23.图8为本发明双模探针的弛豫性能图。
24.图9为本发明双模探针的信号与浓度变化曲线图。
25.图10为本发明双模探针特征峰对比参考曲线图。
26.图11为本发明持续实验记录双模探针弛豫率变化图。
27.图12为本发明持续实验记录双模探针电动势变化图。
28.图13为本发明持续实验记录双模探针粒径变化图。
29.图14为本发明双模探针细胞摄取实验图。
30.图15为本发明活性和生物安全性检测。
具体实施方式
31.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
32.参考图1到图15所示，本发明的一个实施例是，一种用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，该方法用于制备同时适配电子顺磁共振和核磁共振成像的探针；取氟化石墨烯放入乙醇中分散并进行超声处理得到a试剂；取2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基分散在乙醇溶液中得到b试剂；取三羟甲基氨基甲烷分散在乙醇溶液中得到c试剂。其中2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基是常用的自由基，具有强氧化性，可以进行选择性氧化反应。
33.其中，乙醇是一种常用的极性溶剂，可以有效地分散氟化石墨烯和另外两种有机分子，有利于后续的反应进行。
34.将a试剂、b试剂和c试剂分别在氩气流条件下分别脱气得到a溶液、b溶液和c溶液；将a溶液冷却至零下45摄氏度以下加入b溶液，待a溶液和b溶液搅拌混合后加入c溶液得到混合液，将混合液高速离心分离得到双模探针。
35.其中使用连续氩气流进脱气，从而脱除反应体系中的氧气和水分，有利于保证反应的纯度和稳定性。在零下45摄氏度的低温下进行反应，有助于控制反应的速率和选择性，可以避免产生不必要的副反应或者分解的出现。而使用高速离心可以有效地分离出目标产物，提高了产物的纯度和收率。
36.具体操作说明：a溶液：选用一个反应瓶，称取80毫克氟化石墨烯，将其分散在50毫升乙醇中，然后超声处理30分钟。
37.b溶液：选用一个反应瓶，称取25毫克的2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基，简称at,其at分散在15毫升的乙醇溶液中；c溶液：选用一个反应瓶，称取15毫克的三羟甲基氨基甲烷，简称tham，tham分散在15毫升的乙醇溶液中。
38.在连续的氩气流中对三个反应瓶中的溶液分别脱气20分钟。接下来，反应瓶1被冷却到约-45℃，并滴加反应瓶2中的溶液，设置1500转/分钟的转速搅拌1小时后，将反应瓶3中的混合溶液逐滴加入反应瓶1中，并再次在-45℃下搅拌1500转/分钟，且反应1小时。之后，通过高速离心分离出最终的双模探针。
39.本发明制备的双模探针由两个模块组成：一个是光学模块，即荧光探针，用于检测目标生物分子的浓度和位置；另一个是化学模块，即可逆共价修饰分子，用于调控荧光探针的光学性质。
40.检验实施例：利用扫描电镜对本发明的制备的双模探针进行观察，得到图3至图6的图形，其中，
图像表明双模探针的的粒径分布相对比较均匀。随机在局部进行取样扫描，其扫描电镜观察的分布状态的结果一致，通过图4的曲线图进行分析，其中曲线图呈现单峰分布，则说明颗粒物的粒径主要集中在相应范围内。实验中记录的水合物粒子的粒径变化，图6曲线图呈现单峰分布，从而可以确定不同范围下，水合粒径在200nm在左右波动。
41.对双模探针的电动势能得进行检测得到图7，其参考图7所示，将双模探针与实验前的石墨烯探针进行比对，其连接后的材料的电动势能达到-30mv，使得材料带负电荷，在使用中更容易被细胞摄取，为后续的生物研究奠定良好的基础。
42.对双模探针的弛豫性能进行检测，得到图8和图9，其图像表明，双模探针的t2信号随着浓度的变化呈现出优异的线性改变，因此，双模探针作为一款非金属的无机mri造影剂进行使用时，双模探针的弛豫率可以很好的用于mri成像。
43.为了确定双模探针的基本性质，将双模探针和连接tempo后进行吸收峰对比得到图10，其中tempo是一种氧化剂，可以将石墨烯表面的碳原子氧化为羧酸或羟基等官能团，从而改变石墨烯的化学性质和表面性质。由于empo和氟化石墨烯可以结合使用，形成tempo氧化和氟化石墨烯的复合材料，因此需要进行对比。
44.参考图10 所示，虽然tempo利用氧化性与其他化合物的性质相结合，但是双模探针的特征峰对比曲线图表明，双模探针在连接了tempo之后仍然保留了tempo的epr特征峰，说明石墨烯本身基本不会影响tempo的epr特性。
45.为了确定优化的双模探针性能，分析双模探针的性能，利用荧光探针的染色和标记，可以观察并分析细胞内不同结构和生物分子的分布和位置， 选取需要研究的目标细胞，并制备细胞培养物。用荧光染料标记方法对双模探针和细胞物质进行标记，使用荧光显微镜观察并拍摄细胞摄取双模探针的情况，如有荧光信号则表示细胞已摄取双模探针，其图像参考图14所示。图14中，蓝色荧光是dapi染色的细胞核，红色荧光是鬼笔环肽染色的细胞膜骨架，绿色荧光是连接了fitc荧光素的双模探针，图14表明，双模探针均匀的分布在细胞质中，表明双模探针可以被细胞有效摄取。其次，还说明了双模探针具有较好的生物相容性和生物可降解性，除了可以被细胞摄取，还能在细胞内部分布均匀，不会对细胞造成不良影响。
46.值得注意的是，该情况说明，蓝色荧光和红色荧光的染色结果也可以用于研究细胞的形态、结构和功能等方面的问题。例如，蓝色荧光可以用于检测细胞核状况，红色荧光可以用于观察细胞膜骨架的形态和组成。进而双模探针可以在细胞的生理和病理过程等方面的研究提供重要的线索和参考。
47.参考图11至图13所示，为了确定本发明的双模探针的可靠性，固进行持续性实验，通过对双模探针持续半个月以上的粒径检测、弛豫率分析和电动势测量，并分别记录粒径变化、弛豫率变化和电动势变化得到图11至图13。分析图11至图13，可以确定双模探针的粒径、弛豫率和电动势数据都没有明显的改变，从而可以证明双模探针的材料具有良好的稳定性。
48.为了安全性，还进行了cck-8和细胞流式实验，并得到图15，其中，cck-8可以用于测定细胞数量、细胞增殖率和细胞毒性等指标。其原理是利用细胞代谢作用中酶类对还原产生的黄色产物的吸光度变化来反映细胞数量和活性。通过检测细胞的吸光度变化，可以快速准确地评价细胞增殖和毒性等指标。而细胞流式是细胞分析，用于分析单个细胞的各
种性质和特征。其原理是利用激光将细胞单个分开，并测量细胞在不同荧光波长下的反射和发射光强度，从而获得细胞的形态、大小、染色体数量、荧光探针标记等信息。根据图15分析，可以确定材料不会影响细胞的增殖和活性，具有良好的生物安全性。
49.实验运用时，可以将制备的双模探针经由尾静脉注射分别到糖尿病小鼠和正常小鼠体内，打药后半小时进行mri成像，获得了小鼠心脏部位图像，糖尿病小鼠的心脏部位有更多的探针聚集。随后，将小鼠安乐死，取材心脏，加入双模探针研磨充分后，进行epr扫描，可得出糖尿病小鼠的心脏部位有更多的ros。综合mri和epr的结果，对小鼠心脏部位的ros实现了定位和定量。
50.基于上述实施例，本发明的另一个实施例是，上述双模探针通过酒精中进行多次清洗，每次清洗后收集清洗后的上清液，并对收集的上清液进行检测，直至上清液在紫外可见吸收光谱中没有明显的at和tham的特征吸收峰。
51.由于，at和tham是化学药品中常用的缓冲剂，at是ph值在7.0附近的缓冲液，它在生化实验中常用于细胞培养、蛋白质电泳和核酸杂交等实验中。at在ph 6.0至8.0范围内可以进行有效缓冲。其次，at是无毒性的，可以对生物分子无影响，不会干扰实验结果。tham则是一种强缓冲剂，ph范围为7.0至9.0。具有较高的缓冲能力，可以在生化实验中控制酸碱度的平衡。由于tham具有一定毒性，原则上需要控制tham的使用量。
52.为了确定制备的双模探针不会吸收上述试剂，使用酒精清洗，由于at和tham在常规蒸馏水清洗过程中可能会残留在探针表面或内部，从而对实验结果产生干扰或误差，故意每次清洗后，需要收集清洗后的上清液进行检测，以确认清洗效果是否达到要求。检测方法采用紫外可见吸收光谱，通过检测at和tham的特征吸收峰来判断清洗效果。一般而言，当上清液中不再出现at和tham的特征吸收峰时，说明双模探针已经完成了彻底的清洗，可以安全使用。
53.值得注意的是，在日常使用双模探针时，也需要进行多次清洗，以确保探针表面和内部不含有残留的药品。
54.基于上述实施例，本发明的另一个实施例是，上述a试剂为氟化石墨烯乙醇溶液经过30分钟以上超声处理得到的均匀溶液，上述氟化石墨烯乙醇溶液为氟化石墨烯与乙醇按照1.6毫克/毫升的比例进行混合得到的。
55.其中，超声处理主要是利用超声波，利用超声波可以加速分散过程，使氟化石墨烯更均匀地分散在乙醇中。其中，该浓度可以使氟化石墨烯在乙醇中均匀分散，避免出现团聚现象，从而保证后续实验的稳定性和准确性，同时在该用量下，乙醇可以有效地分散氟化石墨烯，并且具有较低的毒性和易挥发的特性，有利于后续实验的操作。且具体参数的使用，有利于后续实现对溶液浓度的精确控制，有助于实验的可重复性和准确性。
56.进一步的，上述氟化石墨烯为氧化石墨烯氟化后获得，由于氧化石墨烯在一定程度上也会受到空气中的微生物、灰尘等污染物的影响，因此将上述氧化石墨烯放置在封闭的反应釜中，并将反应釜中调整为真空状态，通过真空状态降低外界影响因素。
57.其中，在真空状态下对氧化石墨烯进行水分交换直至除去反应釜中的空气和水分；向反应釜加入氟气和氮气组成的混合气体充分反应后得到氟化石墨烯。其中，氧化石墨烯在真空反应釜中水分交换直至除去反应釜中的空气和水分的目的是为了创造一个无氧、无水的反应环境，以避免氧化石墨烯与空气或水分发生反应，从而保证后续实验的稳定性
和准确性。
58.其中，氧化石墨烯中含有大量的氧原子官能团和羟基官能团，这些官能团会对氧化石墨烯的物理化学性质产生影响。而在制备石墨烯制品时，这些官能团的存在会影响石墨烯的性质和功能。因此，需要去除氧化石墨烯中的氧气和水分，制备高纯度的石墨烯。
59.通过将氧化石墨烯放置在封闭的不锈钢反应釜中，然后通过氮气交换反应釜中的内部空气和水分，可以有效地去除其中的氧气和水分，制备出高纯度的氧化石墨烯。这是因为氮气可以有效地将反应釜中的氧气和水分置换出来，从而实现氧化石墨烯的高纯度制备。
60.具体操作是，先称取300毫克氧化石墨烯被放置在一个封闭的不锈钢反应釜中，该装置配有真空管道。随后用氮气交换内部空气和水分，以排除它们对氟化过程的影响。然后，在室温下向反应器中加入80千帕的氟气/氮气混合气体，保持一定的时间以保证氧化石墨烯与氟气充分接触而发生反应。待反应1小时后，最终得到氟化石墨烯。
61.更进一步的，由于氧化石墨烯是一种具有活泼表面的材料，容易与空气中的水分和氧气发生反应，导致其表面发生氧化，从而影响实验结果的准确性；上述水分交换为向真空状态的反应釜中注入氮气，且注入次数至少三次，由氮气交换反应釜中内部空气和水分，上述反应釜中混合气体的合成压力为80kpa；上述混合气体与氧化石墨烯反应时间大于60分钟。
62.其中，单次注入氮气并不能完全将反应釜中的空气和水分去除，还可能存在一定的残留水分和气体。；利用多次注入氮气可以更好地保证反应釜中的气氛干燥且无氧，从而避免氧化石墨烯或其他实验物质与水分或氧气发生反应。
63.值得注意的是，在进行氮气注入的过程中，需要将反应釜中的氮气通入一段时间，待反应釜中的空气和水分被氮气冲刷干净后，再将氮气排出，避免将氮气中的残留水分和氧气带入反应釜中。多次注入氮气并排出，可以进一步提高反应釜中的气氛质量，其次，避免在实验过程中出现突然的氧气或水分进入反应釜中的情况，从而影响实验结果。采用反映时间大于60分钟和合成压力80 kpa的设计条件，以确保反应釜中的气氛质量稳定，从而保证实验结果的准确性和可靠性。
64.作为优选，上述c试剂中三羟甲基氨基甲烷与乙醇溶液用量比为1比1。
65.其中，三羟甲基氨基甲烷为tham，该比例喜庆可以使tham在乙醇中均匀分散，避免出现团聚现象，tham与乙醇溶液用量比为1比1具有合适的浓度和溶剂选择，有助于保证实验的稳定性和准确性，并且可以通过调整溶剂体积和tham的质量来实现对浓度的精确控制，从而提高实验的经济性和效率。
66.作为优选，上述a试剂、b试剂和c试剂分别在氩气流条件下脱气时间不低于20分钟。使用连续足够时间的氩气流进脱气，从确保脱除反应体系中的氧气和水分能够满足脱出需求，有利于保证反应的纯度和稳定性基于上述实施例，本发明的另一个实施例是，上述b溶液采用滴加的方式加入到a溶液中，待b溶液滴加到a溶液后以1500转/分钟的转速进行搅拌，搅拌60分钟以上得到ab混合溶液；待a溶液和b溶液混合均匀后再加入c溶液。
67.其中a溶液的氟化石墨烯和b溶液的at可通过氧化还原反应引入氧原子或羰基等官能团到石墨烯表面，从而改变石墨烯的表面性质，提高水溶性和生物可利用度。
68.其中，为了降低混合时间，通过稳定的搅拌速度，使得两种物质之间的摩擦力和剪切力也会增强，从而使两者更容易混合。此外，搅拌速度越快，混合时间也会缩短，也会提高反应效率。考虑到a溶液中主要是氟化石墨烯，若搅拌速度过快，可能导致会石墨烯产生过大的剪切力，从而破坏石墨烯的结构，导致后续产品性能变化。因此，在混合时，以1500转/分钟的转速控制好搅拌速度，即保证了混合效率，又避免对石墨烯造成损害。
69.进一步的，将c溶液加入到ab混合溶液中，加入过程中维持ab混合溶液处于零下45摄氏度，待c溶液滴加到ab混合溶液后，以1500转/分钟的转速进行搅拌，搅拌60分钟以上得到abc混合溶液，将abc混合溶液投入到离心机进行离心分离得到双模探针。
70.由于ab混合溶液中存在2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基，而c溶液中存在三羟甲基氨基甲烷，其二者的结合会产生化学反应，为了增加反应速度和效率， 固原则上需要搅拌，通过1500转/分钟搅拌速率，可以处境进反应物之间的混合。其原理在于，tempo/tham氧化反应中，当tempo和tham混合时，它们会形成tempo-n-tham自由基，然后进行氧化反应。由此通过1500转/分钟的搅拌，保证tempo和tham的混合效率维持较快程度，避免反应速率减慢最终会影响实验结果。
71.在本说明书中所谈到的“一个实施例”、“另一个实施例”、
ꢀ“
实施例”、“优选实施例”等，指的是结合该实施例描述的具体特征、结构或者特点包括在本技术概括性描述的至少一个实施例中。在说明书中多个地方出现同种表述不是一定指的是同一个实施例。进一步来说，结合任一实施例描述一个具体特征、结构或者特点时，所要主张的是结合其他实施例来实现这种特征、结构或者特点也落在本发明的范围内。
72.尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本技术公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本技术公开、附图和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。

技术特征：
1.一种用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，该方法用于制备同时适配电子顺磁共振和核磁共振成像的探针；其特征在于：取氟化石墨烯放入乙醇中分散并进行超声处理得到a试剂；取2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基分散在乙醇溶液中得到b试剂；取三羟甲基氨基甲烷分散在乙醇溶液中得到c试剂；将a试剂、b试剂和c试剂分别在氩气流条件下分别脱气得到a溶液、b溶液和c溶液；将a溶液冷却至零下45摄氏度以下加入b溶液，待a溶液和b溶液搅拌混合后加入c溶液得到混合液，将混合液高速离心分离得到双模探针。2.根据权利要求1所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述双模探针通过酒精中进行多次清洗，每次清洗后收集清洗后的上清液，并对收集的上清液进行检测，直至上清液在紫外可见吸收光谱中没有明显的at和tham的特征吸收峰。3.根据权利要求1所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述a试剂为氟化石墨烯乙醇溶液经过30分钟以上超声处理得到的均匀溶液，所述氟化石墨烯乙醇溶液为氟化石墨烯与乙醇按照1.6毫克/毫升的比例进行混合得到的。4.根据权利要求3所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述氟化石墨烯为氧化石墨烯氟化后获得，将所述氧化石墨烯放置在封闭的反应釜中，并将反应釜中调整为真空状态，在真空状态下对氧化石墨烯进行水分交换直至除去反应釜中的空气和水分；向反应釜加入氟气和氮气组成的混合气体充分反应后得到氟化石墨烯。5.根据权利要求4所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述水分交换为向真空状态的反应釜中注入氮气，且注入次数至少三次，由氮气交换反应釜中内部空气和水分，所述反应釜中混合气体的合成压力为80kpa；所述混合气体与氧化石墨烯反应时间大于60分钟。6.根据权利要求1所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述c试剂中三羟甲基氨基甲烷与乙醇溶液用量比为1比1。7.根据权利要求1所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述a试剂、b试剂和c试剂分别在氩气流条件下脱气时间不低于20分钟。8.根据权利要求1所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：所述b溶液采用滴加的方式加入到a溶液中，待b溶液滴加到a溶液后以1500转/分钟的转速进行搅拌，搅拌60分钟以上得到ab混合溶液；待a溶液和b溶液混合均匀后再加入c溶液。9.根据权利要求8所述的用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，其特征在于：将c溶液加入到ab混合溶液中，加入过程中维持ab混合溶液处于零下45摄氏度，待c溶液滴加到ab混合溶液后，以1500转/分钟的转速进行搅拌，搅拌60分钟以上得到abc混合溶液，将abc混合溶液投入到离心机进行离心分离得到双模探针。

技术总结
本发明公开了一种用于电子顺磁共振和核磁共振成像双模探针的制备方法，取氟化石墨烯放入乙醇中分散并进行超声处理得到A试剂，取2,2,6,6-四甲基-4-氨基-1-哌啶氧基分散在乙醇溶液中得到B试剂；取三羟甲基氨基甲烷分散在乙醇溶液中得到C试剂；将A试剂、B试剂和C试剂分别在氩气流条件下分别脱气得到A溶液、B溶液和C溶液；将A溶液冷却至零下45摄氏度以下加入B溶液，待A溶液和B溶液搅拌混合后加入C溶液得到混合液，将混合液高速离心分离得到双模探针，以期望改善在当前实验过程中，目前使用探针不易于在电子顺磁共振和核磁共振上进行混用的问题。用的问题。用的问题。


技术研发人员：张昆
受保护的技术使用者：四川大学华西第二医院
技术研发日：2023.03.23
技术公布日：2023/7/17