一种发酵产金霉素的金色链霉菌株及其应用的制作方法

1.本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种发酵产金霉素的金色链霉菌株，并进一步公开其发酵产金霉素的应用。


背景技术：

2.金霉素(chlortetracyclin，氯四环素)是一种四环素类的广谱抗生素，通常由金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)发酵产生，其抗菌谱与四环素相似，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、螺旋体、衣原体、支原体、立克次体等均具有抗菌作用。因其具有抑菌、促生长、饲料利用率高及在肌体内残留量低等优点，作为药物饲料添加剂广泛应用于畜牧业，是目前药物饲料添加剂中使用量最大的品种。尤其是近年来，随着禽畜养殖规模的扩大和集约化、舍饲化程度的提高，国内外市场对药物饲料添加剂产品的需求日益增加，目前我国已经成为世界上最大的金霉素生产国，目前，国内金霉素工业生产发酵水平维持在22000μg/ml左右。
3.针对金霉素菌株改良，目前主要采用传统选育方法紫外诱变结合不同诱变剂等育种手段，同时结合发酵工艺优化进一步提高金霉素的发酵水平，并取得了一定的效果。如孙菲等通过uv诱变、
60
co诱变结合自身抗性筛选及优化发酵培养基，使金霉素发酵水平达到23000μg/ml，发酵周期为96h；轩海连通过紫外线、氯化锂和金霉素抗性实验等手段获得高产菌株m14-2，并在60t罐生产中采用优化发酵培养基，效价达到23200μg/m l，比原菌株提高15％，发酵周期166h；孙菲等在中国专利cn107177661a中公开了利用米渣替代部分玉米浆干粉的金霉素发酵培养基，金霉素发酵效价最高可达25768μg/ml，发酵周期120h-144h；谢昌贤等在中国专利cn113388556a中公开了利用金色链霉菌生产金霉素的方法，其摇瓶发酵6d金霉素产量达26.88g/l。可见，传统复合诱变选育结合发酵工艺优化提高菌株产金霉素能力已取得一定的效果，但国内金霉素放罐效价与国外生产企业相比偏低，导致整体发酵生产效能偏低影响了市场的竞争力，因此提高金霉素发酵水平对于提高该产品的生产效能具有重要的作用。
4.常压室温等离子体(artp)育种技术是一种微生物基因组快速突变技术，其产生的等离子体富含各种化学活性粒子，对菌株细胞产生遗传物质的损伤、引起细胞膜通透性和蛋白质结构的改变等多重作用，细胞启动sos修复机制，在修复过程中产生种类丰富的错配位点，突变率高；且微生物的抗性基因与产物合成基因呈紧密连锁分布，并可通过诱导表达，在很大程度上克服了诱变随机筛选的盲目性和不定向性，具有广谱性、正突变率和增产率高等特点，微生物经
60
co与artp复合诱变可使菌株诱变损伤更多样化，获得比单一诱变更多的突变类型，从而丰富诱变株的多样性，大大提高获得高产突变株的概率。
5.因此，通过采用
60
co+artp诱变结合抗自身产物的抗性突变有望选择性提高菌株产物产量的阳性突变率，从而筛选到符合工业化生产金霉素的高效菌株。


技术实现要素：

6.为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种发酵产金霉素的金色链霉菌株，以解决现有技术中金霉素的发酵菌株性能不够理想的问题；
7.本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述金色链霉菌株发酵生产金霉素的应用。
8.为解决上述技术问题，本发明所述的一种金色链霉菌株，其分类命名为金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)fim-ctc-z23-94，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院院实验大楼5楼，保藏编号为gdmcc no.63321，保藏日期为2023年04月04日。
9.本发明还公开了所述金色链霉菌株在发酵生产金霉素中的应用。
10.本发明还公开了一种发酵生产金霉素的方法，包括将所述金色链霉菌株接种于适宜发酵培养基中进行发酵培养的步骤。
11.具体的，所述发酵培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉5.5-10.5wt％、酵母粉3.5-7.0wt％、葡萄糖0.5-2.0wt％、蛋白胨0.3-1.5wt％、氯化钠0.15-0.6wt％、硫酸镁0.015-0.08wt％、磷酸二氢钾0.005-0.05wt％、碳酸钙0.2-0.5wt％、淀粉酶0.01-0.05wt％，余量为水，ph5.8-7.5。
12.优选的，所述发酵培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉8.5wt％、酵母粉4.5wt％、葡萄糖1.0wt％、蛋白胨0.8wt％、氯化钠0.3wt％、硫酸镁0.03wt％、磷酸二氢钾0.01wt％、碳酸钙0.6wt％、淀粉酶0.02wt％，余量为水，ph5.8-7.5。
13.具体的，所述发酵培养步骤的条件包括：控制转速180-280rpm，于29-35℃进行发酵培养84-144h。
14.作为优选的方案，本发明所述发酵过程中，发酵罐规模培养采用变温培养，即控制发酵0-48h，温度为32-35℃，48h后温度控制在29-32℃，罐压0.05mpa、空气流量1：0.8-1.5vvm、搅拌速度为180-250r/min，过程控制溶氧不低于30％，发酵培养84-144h。
15.具体的，所述发酵生产金霉素的方法，还包括将所述金色链霉菌株接种于种子培养基中进行种子液培养的步骤；
16.所述种子培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉2.0-6.5wt％、酵母粉1.5-4.0wt％、葡萄糖0.3-1.5wt％、蛋白胨0.3-1.5wt％、氯化钠0.1-0.5wt％，磷酸二氢钾0.01-0.05wt％、硫酸镁0.01-0.05wt％、淀粉酶0.005-0.05wt％，碳酸钙0.2-0.5wt％、余量为水，ph5.8-7.5。
17.优选的，所述种子培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉4.5wt％、酵母粉2.0wt％、葡萄糖0.5wt％、蛋白胨0.5wt％、氯化钠0.2wt％，磷酸二氢钾0.025wt％、硫酸镁0.025wt％、淀粉酶0.01wt％，碳酸钙0.4wt％，余量为水，ph5.8-7.5。
18.具体的，所述种子液培养步骤的条件包括：控制转速180-280rpm，优选200-250rpm，于29-35℃进行种子液培养16-24h。
19.具体的，所述发酵生产金霉素的方法，还包括将所述金色链霉菌株接种于斜面培养基中进行活化的步骤；
20.所述斜面培养基包括如下质量含量的组分：麸皮4.0-6.5wt％、磷酸二氢钾0.01-0.05wt％、硫酸镁0.01-0.08wt％、磷酸氢二铵0.01-0.05wt％、琼脂1.8-2.0wt％、余量为
水，ph5.8-7.5。
21.优选的，所述斜面培养基包括如下质量含量的组分：麸皮5.0wt％、磷酸二氢钾0.02wt％、硫酸镁0.03wt％、磷酸氢二铵0.02wt％、琼脂1.8-2.0wt％、余量为水，ph5.8-7.5。
22.具体的，所述斜面培养基活化步骤的条件包括：于29-35℃进行恒温培养7-10d。
23.本发明通过
60
co与artp复合诱变技术筛选得到一株高产金霉素的金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)fim-ctc-z23-94，其能够发酵高产金霉素。在1t罐发酵实验中，所述金色链霉菌fim-ctc-z23-94发酵产金霉素的效价高达30259μg/ml，且发酵周期仅为90h，更加适宜于工业化发酵生产。而且，本发明筛选的菌株fim-ctc-z23-94稳定性良好，连续传代五代其产金霉素效价基本稳定，维持在同一较高水平，能够作为进一步研究和开发的生产菌株。
附图说明
24.为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，
25.图1为诱变实验中artp射流时间与致死率的关系曲线；
26.图2本发明所述菌株fim-ctc-z23-94的进化树。
具体实施方式
27.本发明下述实施例中，涉及的培养基包括：
28.分离平板培养基及斜面培养基包括如下质量含量的组分：麸皮5.0wt％、磷酸二氢钾0.02wt％、硫酸镁0.03wt％、磷酸氢二铵0.02wt％、琼脂1.8-2.0wt％、余量为水，ph5.8-7.5，121℃高压蒸汽灭菌30min；
29.种子培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉4.5wt％、酵母粉2.0wt％、葡萄糖0.5wt％、蛋白胨0.5wt％、氯化钠0.2wt％，磷酸二氢钾0.025wt％、硫酸镁0.025wt％、淀粉酶0.01wt％，碳酸钙0.4wt％，余量为水，ph5.8-7.5，121℃高压蒸汽灭菌30min；
30.发酵培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉8.5wt％、酵母粉4.5wt％、葡萄糖1.0wt％、蛋白胨0.8wt％、氯化钠0.3wt％、硫酸镁0.03wt％、磷酸二氢钾0.01wt％、碳酸钙0.6wt％、淀粉酶0.02wt％，余量为水，ph5.8-7.5，121℃高压蒸汽灭菌30min。
31.本发明下述实施例中，所述金霉素及杂质组分的含量检测采用高效液相色谱法(hplc)。其色谱分离条件为：c8分离柱(250*4.6mm)；检测波长：360nm；流动相：0.01mol/l草酸/乙腈/甲醇(71/16/13，v/v/v)溶液；流速：1.0ml/min；柱温：30℃。发酵液经草酸酸化至ph1.5-2.0，4000r/min离心后，取0.1ml上清液至100毫升容量瓶并以蒸馏水定容，以0.22μm的微孔滤膜对定容后溶液进行过滤，滤液经hplc检测其目标产物金霉素(ctc)的含量及杂质四环素(tc)和去甲基金霉素(dmctc)的含量。
32.实施例1诱变菌株fim-f-z23-94的获得
33.以保存的遗传性状相对稳定的金色链霉菌fim-ctc-z23行自然分纯得fim-ctc-z23单菌落，并转接至斜面培养基上，于恒温培养箱中培养8d，且培养温度为32℃；之后用生理盐水洗下斜面培养基上的孢子，并移到内置5个φ5mm玻璃珠的灭菌试管中振荡，经纱布
过滤，制成单孢子悬液(其od
600
值0.6-0.8)。
34.用移液枪吸取10μl孢子悬液于直径为1cm的圆形铁片上，置于以氦气作为工作气体、电源功率为110w、工作气流量10l/min的常压室温等离子体诱变系统中，且处理距离为2mm，分别处理10s、20s、30s、45s、60s、75s，将处理后的孢子悬液进行梯度稀释涂平板，制作致死率曲线，如图1所示。从图1中可以看出，诱变处理剂量与菌株fim-ctc-z23菌株致死率之间存在明显的剂量效应关系，随着处理时间的延长，致死率逐渐升高。
35.将上述所得孢子悬液分别涂布于含金霉素的平板培养基中，其中，平板培养基中金霉素浓度分别为0.25g/l、0.5g/l、1.0g/l、1.25g/l、1.5g/l、2.0g/l；于32℃培养8-10d后，观察不同平板上的菌落生长情况，结果如表1所示，未长出菌落的平板培养基中对金霉素最低作用浓度为抗自身代谢产物金霉素最小抑菌浓度，则由表1确定抗金霉素最小抑菌浓度为2.0g/l。
36.表1金霉素浓度对菌株fim-ctc-z23孢子生长的影响
37.金霉素(μg/ml)02505001000125015002000菌落生长情况+++++++++++
‑‑
38.注:+有菌落生长,-无菌落生长。
39.将上述所得的fim-ctc-z23孢子悬液以剂量500gy，剂量率900rad/min进行
60
co辐射；根据上述致死率曲线，选择30s、45s二个不同致死剂量的照射时间，对经
60
co处理后的菌株fim-ctc-z23孢子悬液进行artp诱变，并将该二个不同artp处理时间的孢子悬液混合于装有生理盐水的试管中，混合均匀，得fim-ctc-z23复合诱变孢子悬液，备用。
40.将上述所得的fim-ctc-z23复合诱变孢子悬液进行梯度稀释，稀释度分别为10-1
、10-2
、10-3
、10-4
、10-5
、10-6
，选取10-4
、10-5
、10-6
三个稀释度的孢子悬液，分别涂布于含自身代谢产物金霉素2.0g/l的抗性分离平板上，于32℃避光培养6-10d。
41.将抗性平板上长出的单菌落转接斜面培养基中培养8d后，以0.5-1％的接种量接种于种子培养基中，于32℃、230r/min条件下培养16-24h后得种子液；以10％的接种量将种子液接种于发酵培养基中，并于32℃、230r/min条件下培养84-144h，得发酵液，采用化学测定法检测发酵液中金霉素含量。
42.通过此方法即筛选出产金霉素量最大的菌株，为了方便描述，将筛选所得的菌株命名为菌株fim-ctc-z23-94，且菌株fim-ctc-z23-94于甘油中保存。
43.实施例2菌株fim-ctc-z23-94的鉴定
44.生理生化特性鉴定
45.将获得的菌株fim-ctc-z23-94在分离培养基平板上划线涂菌并插入盖玻片，32℃培养5-15d，用光学显微镜、透射和扫描电子显微镜观察单菌落的形态特征及其菌丝。
46.得到该菌株fim-ctc-z23-94的主要形态及生理生化特性如下：孢子丝柔曲，初旋至松敞螺旋形。孢子卵圆形至柱形，表面光滑。在分离平板上菌落圆形，气丝灰褐色，在葡萄糖琼脂上和马铃薯块上产生金黄色色素。可利用d-葡萄糖、l-阿拉伯糖、d-木糖、d-果糖、蔗糖；不利用鼠李糖、棉子糖、肌醇、d-甘露醇；此菌株为高耗氧菌，发酵过程中溶氧对金霉素的产生具有显著作用。最适生长温度为28-36℃，最适生长ph为5.7-8.2；在摇床转速180-250r/min，培养60-144h，金霉素产量最高。
47.分子生物学鉴定
48.对菌株fim-ctc-z23-94的16srdna序列进行测序，测序结果如seq id no.1所示，并将所测的菌株的16s rdna序列与genbank数据库中已有序列进行比对，及进行同源性分析；在lpsn(http://www.bacterio.cict.fr)网站上选取相应的模式株16s rrna基因序列，系统进化分析用clustal-x软件进行比对，生成的比对文件用treecon软件邻接法进行系统进化分析，拓扑分析为1000次重复取样的结果，结果见附图2；通过16srdna序列分析表明，菌株fim-ctc-z23-94与金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)的序列同源性为99.78％。
49.seq id no.1：
50.acggtgaagcccttcggggtggatcagtggcgaacgggtgagtaacacgtgggcaatctgccctgcactctgggacaagccctggaaacggggtctaataccggatatgaccttcctccgcatgggggttggtggaaagctccggcggtgcaggatgagcccgcggcctatcagcttgttggtggggtaatggcctaccaaggcgacgacgggtagccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgcaagtgacggtacctgcagaagaagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggtgcgagcgttgtccggaattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcctgtcgcgtcggatgtgaaagcccggggcttaaccccgggtctgcattcgatacgggcaggctagagtgtggtaggggagatcggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcgaaggcggatctctgggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagatactctggtagtccacgctgtaaacgttgggaactaggtgttggcgacattccacgtcgtcggtgccgcagctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcagcggagcatgtggcttaattcgacgcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatatgccggaaacacccagagatgggtgcccccttgtggtcggtatacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgttctgtgttgccagcgagtaatgtcggggactcacaggagactgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaaatcatcatgccccttatgtcttgggctgcacacgtgctacaatggtcggtacaaagggctgcgatgccgtgaggcggagcgaatcccaaaaagccggcctcagttcggattggggtctgcaactcgaccccatgaagttggagttgctagtaatcgcagatcagcatgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaag。
51.综合上述形态、生理生化特征与分子生物学鉴定，最终确定菌株fim-ctc-z23-94为金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)菌属，其分类命名为金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)fim-ctc-z23-94，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院院实验大楼5楼，保藏编号为gdmcc no.63321，保藏日期为2023年04月04日。
52.实施例3诱变菌株fim-f-z23-94的遗传稳定性验证
53.菌种传代：将上述筛选的高产金霉素的菌株fim-ctc-z23-94转接至斜面培养基上，于湿度为30-50％的条件下32℃恒温培养8d，获得生长良好的fim-ctc-z23-94原代斜面(f0)，并对该菌株连续培养传代，于32℃恒温培养8d，分别获得生长良好的f1、f2、f3、f4、f5、f6斜面。
54.制备fim-ctc-z23-94种子液：将上述菌株fim-ctc-z23-94所得的新鲜菌苔用生理盐水洗下制备孢子悬液，按0.5％接种量接种于种子培养基(500ml三角瓶内装60ml种子培养基)中，于32℃、230r/min条件下培养20h，得fim-ctc-z23-94种子液。
55.发酵培养：将制得的种子液以10％(v/v)接种量接种于发酵培养基(500ml三角瓶内装60ml发酵培养基)中，于32℃、230r/min条件下发酵培养120h，之后将所得发酵液进行检测。
56.以生长良好的原代菌株(f0)为对照，其发酵相对效价为100％，结果如表2所示。
57.表2传代对菌株fim-ctc-z23-94产金霉素的影响
58.菌株代数f1f2f3f4f5f6相对效价(％)100.9101.399.398.096.794.7
59.由表2可知，本发明筛选的菌株fim-ctc-z23-94传五代发酵水平无明显影响，其产金霉素效价基本稳定，维持在同一较高水平，从而表明菌株fim-ctc-z23-94具有较好的遗传稳定特性。
60.实施例4出发菌株fim-ctc-z23的摇瓶发酵
61.制备fim-ctc-z23斜面：将出发菌株fim-ctc-z23转接至斜面培养基上，于湿度为30-50％的条件下32℃恒温培养8d，获得生长良好的fim-ctc-z23新鲜斜面。
62.制备fim-ctc-z23种子液：将上述菌株fim-ctc-z23所得的新鲜菌苔用生理盐水洗下制备孢子悬液，按0.5％接种量接种于种子培养基(500ml三角瓶内装60ml种子培养基)中，于32℃、230r/min条件下培养20h，得fim-ctc-z23种子液。
63.发酵培养：将制得的种子液以10％(v/v)接种量接种于发酵培养基(500ml三角瓶内装60ml发酵培养基)中，于32℃、230r/min条件下发酵培养120h，之后将所得发酵液进行检测。
64.检测结果显示，本实施例中ctc产量为22162μg/ml，其日产率为4432μg/ml.d；主杂tc含量2216μg/ml，dmctc含量266μg/ml。
65.实施例5诱变菌株fim-ctc-z23-94发酵生产金霉素
66.摇瓶种子培养：将上述菌株fim-ctc-z23-94新鲜菌苔用生理盐水洗下制备孢子悬液，按0.5％接种量接种于种子培养基(1000ml三角瓶内装150ml种子培养基)中，于32℃、230r/min条件下培养20h，得摇瓶种子液。
67.种子罐种子培养：将摇瓶种子液按0.5％量接种于种子培养基(100l罐内装60l种子培养基)中，于培养温度32℃、罐压0.05mpa、空气流量1：1vvm、搅拌速度为100-200r/min条件下培养18h，得种子罐种子液。
68.发酵罐发酵培养：将制得的种子液以10％(v/v)接种量接种于发酵培养基(1吨罐内装600l发酵培养基)中，采用变温培养，发酵0-48h温度为33.5℃,48h后温度控制在30.5℃，罐压0.05mpa、空气流量1：0.8-1.5vvm、搅拌速度为180-250r/min，过程控制溶氧不低于30％，发酵培养90h，放罐将所得发酵液进行检测。
69.检测结果显示，本实施例中ctc产量为30259μg/ml，日产7894μg/ml.d，其日产率较出发菌株提高78.1％，主杂tc含量1915μg/ml，较出发菌株减少13.6％，dmctc含量60.5μg/ml，较出发菌株减少77.3％。
70.实施例6诱变菌株fim-ctc-z23-94发酵生产金霉素
71.摇瓶种子培养：将上述菌株fim-ctc-z23-94新鲜菌苔用生理盐水洗下制备孢子悬液，按0.5％0种量接种于种子培养基(1000ml三角瓶内装150ml种子培养基)中，于32℃、230r/min条件下培养20h，得摇瓶种子液。
72.种子罐种子培养：将摇瓶种子液按0.5％量接种于种子培养基(100l罐内装60l种子培养基)中，于培养温度32℃、罐压0.05mpa、空气流量1：1vvm、搅拌速度为100-200r/min条件下培养18h，得种子罐种子液。
73.发酵罐发酵培养：将制得的种子液以10％(v/v)接种量接种于发酵培养基(1吨罐内装600l发酵培养基)中，采用变温培养，发酵0-48h温度为33.5℃,48h后温度控制在30.5℃，罐压0.01-0.05mpa、空气流量1：0.8-1.5vvm、搅拌速度为180-250r/min，过程控制溶氧不低于30％，发酵培养90h，放罐将所得发酵液进行检测。
74.检测结果显示，本实施例中ctc产量为30303μg/ml，日产7905μg/ml.d，其日产率较出发菌株提高78.4％，主杂tc含量1818μg/ml，较出发菌株减少18.0％，dmctc含量69.7μg/ml，较出发菌株减少73.8％。
75.实施例7诱变菌株fim-ctc-z23-94发酵生产金霉素
76.摇瓶种子培养：将上述菌株fim-ctc-z23-94新鲜菌苔用生理盐水洗下制备孢子悬液，按0.5％接种量接种于种子培养基(1000ml三角瓶内装150ml种子培养基)中，于32℃、230r/min条件下培养20h，得摇瓶种子液。
77.种子罐种子培养：将摇瓶种子液按0.5％量接种于种子培养基(100l罐内装60l种子培养基)中，于培养温度32℃、罐压0.01-0.05mpa、空气流量1：1vvm、搅拌速度为100-200r/min条件下培养18h，得种子罐种子液。
78.发酵罐发酵培养：将制得的种子液以10％(v/v)接种量接种于发酵培养基(1吨罐内装600l发酵培养基)中，采用变温培养，发酵0-48h温度为33.5℃，48h后温度控制在30.5℃，罐压0.01-0.05mpa、空气流量1：0.8-1.5vvm、搅拌速度为180-250r/min，过程控制溶氧不低于30％，发酵培养90h，放罐将所得发酵液进行检测。
79.检测结果显示，本实施例中ctc产量为30267μg/ml，日产7896μg/ml.d，其日产率较出发菌株提高78.2％，主杂tc含量1877μg/ml，较出发菌株减少15.3％，dmctc含量63.6μg/ml，较出发菌株减少76.1％。
80.综上，本发明诱变菌种fim-ctc-z23-94在1吨罐发酵产金霉素不低于30259μg/ml，发酵周期仅为90h。可见，本发明筛选的突变菌株金色链霉菌fim-ctc-z23-94(kitasatospora aureofaciens)能够作为进一步研究和开发的生产菌株。
81.显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

技术特征：
1.一种金色链霉菌株，其分类命名为金色链霉菌(kitasatospora aureofaciens)fim-ctc-z23-94，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no.63321，保藏日期为2023年04月04日。2.权利要求1所述金色链霉菌株在发酵生产金霉素中的应用。3.一种发酵生产金霉素的方法，其特征在于，包括将权利要求1所述金色链霉菌株接种于适宜发酵培养基中进行发酵培养的步骤。4.根据权利要求3所述发酵生产金霉素的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉5.5-10.5wt％、酵母粉3.5-7.0wt％、葡萄糖0.5-2.0wt％、蛋白胨0.3-1.5wt％、氯化钠0.15-0.6wt％、硫酸镁0.015-0.08wt％、磷酸二氢钾0.005-0.05wt％、碳酸钙0.2-0.5wt％、淀粉酶0.01-0.05wt％，余量为水，ph5.8-7.5。5.根据权利要求3或4所述发酵生产金霉素的方法，其特征在于，所述发酵培养步骤的条件包括：控制转速180-280rpm，于29-35℃进行发酵培养84-144h。6.根据权利要求3-5任一项所述发酵生产金霉素的方法，其特征在于，还包括将权利要求1所述金色链霉菌株接种于种子培养基中进行种子液培养的步骤；所述种子培养基包括如下质量含量的组分：玉米粉2.0-6.5wt％、酵母粉1.5-4.0wt％、葡萄糖0.3-1.5wt％、蛋白胨0.3-1.5wt％、氯化钠0.1-0.5wt％，磷酸二氢钾0.01-0.05wt％、硫酸镁0.01-0.05wt％、淀粉酶0.005-0.05wt％，碳酸钙0.2-0.5wt％、余量为水，ph5.8-7.5。7.根据权利要求6所述发酵生产金霉素的方法，其特征在于，所述种子液培养步骤的条件包括：控制转速180-280rpm，于29-35℃进行种子液培养16-24h。8.根据权利要求3-7任一项所述发酵生产金霉素的方法，其特征在于，还包括将权利要求1所述金色链霉菌株接种于斜面培养基中进行活化的步骤；所述斜面培养基包括如下质量含量的组分：麸皮4.0-6.5wt％、磷酸二氢钾0.01-0.05wt％、硫酸镁0.01-0.08wt％、磷酸氢二铵0.01-0.05wt％、琼脂1.8-2.0wt％、余量为水，ph5.8-7.5。9.根据权利要求8所述发酵生产金霉素的方法，其特征在于，所述斜面培养基活化步骤的条件包括：于29-35℃进行恒温培养6-10d。

技术总结
本发明属于微生物领域，具体涉及一种发酵产金霉素的金色链霉菌株，并进一步公开其发酵产金霉素的应用。本发明通过


技术研发人员：张祝兰 严凌斌 连云阳 林仙菊 陈洲琴 杨煌建 程贤
受保护的技术使用者：福建省微生物研究所
技术研发日：2023.05.19
技术公布日：2023/7/18