一种构建IGHV基因文库的引物组合及其应用

一种构建ighv基因文库的引物组合及其应用
技术领域
1.本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种构建ighv基因文库的引物组合及其应用。


背景技术：

2.慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，cll)是最常见的一种恶性淋巴细胞增殖性疾病。cll患者的临床病程和转归呈高度异质性，部分患者生存时间同同年龄的正常人相同，而部分患者的疾病进程发展很快短时间内就会死亡。有些病人患有惰性疾病，多年来不需要治疗，而另一些则需要早期治疗干预。因此，预后相关因素研究对临床策略的决定具有重要的指导意义。与cll预后密切相关的因素有：疾病分期、血清β2微球蛋白、乳酸脱氢酶(ldh)、zap-70、cd38等，而免疫球蛋白重链可变区(ighv)基因突变是cll最重要的独立预后因素之一。
3.以表达免疫球蛋白重链多肽的igh基因为例，在未分化的淋巴细胞中，igh基因主要由可变区(variabl v)、多样区(diversity d)、连接区(joining j)组成，每个基因区域均由多个基因片段组成。随着淋巴细胞从母细胞分化到成熟淋巴细胞，原始的igh基因在重组酶的作用下，剪切各个基因区域中的某一片段，并重新连接，形成新的具有表达功能的基因。
4.近年来，重新排列的免疫球蛋白重链可变区(ighv)基因在大部分慢性淋巴细胞白血病(cll)患者中的突变状态的测定显示出具有较强的独立预后价值。因此，ighv突变状态被认为是临床试验中最重要的预后指标之一。目前ighv突变状态检测的方法主要是依赖于一代测序平台，但是由于技术的局限性，一代测序检测ighv还存在着以下缺点：（1）检测灵敏度低；（2）只适应相对较少的病例；（3）每一工作流程最终得到结果只有ighv突变单一结果；（4）无法检测亚克隆结果及克隆多样性信息；（5）测序前端和后端测序质量差，导致ighv突变结果不准确。
5.综上所述，开发高效、稳定的检测ighv基因突变的方法，对于igh基因研究领域具有重要意义。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种构建ighv基因文库的引物组合及其应用，采用高通量测序的手段检测ighv基因突变，显著提高检测灵敏度及准确性，并且可以准确地得到序列信息。
7.为达上述目的，本发明采用以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种构建ighv基因文库的引物组合，所述引物组合包括leader引物和/或fr1引物，所述leader引物包括6条前置引物和3条后置引物，所述前置引物的核酸序列包括seq id no.1~seq id no.6所示的序列，所述后置引物的核酸序列包括seq id no.7~seq id no.9所示的序列，所述fr1引物包括15条前置引物和2条后置引物，所
no.39所示的序列。
41.seq id no.27：
42.ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagccgcatggaacgatgtaaaacgacggccag。
43.seq id no.28：
44.ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagctggcaatcctcgatgtaaaacgacggccag。
45.seq id no.29：
46.ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagccggagaatcgcgatgtaaaacgacggccag。
47.seq id no.30：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagtccacctcctcgatgtaaaacgacggccag。
48.seq id no.31：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagcagcattaattcgatgtaaaacgacggccag。
49.seq id no.32：
50.ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagtctggcaacggcgatgtaaaacgacggccag。
51.seq id no.33：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagtcctagaacacgatgtaaaacgacggccag。
52.seq id no.34：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagtccttgatgttcgatgtaaaacgacggccag。
53.seq id no.35：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagtctagctcttcgatgtaaaacgacggccag。
54.seq id no.36：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagtcactcggatcgatgtaaaacgacggccag。
55.seq id no.37：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagttcctgcttcacgatgtaaaacgacggccag。
56.seq id no.38：ccatctcatccctgcgtgtctccgactcagccttagagttcgatgtaaaacgacggccag。
57.seq id no.39：ccactacgcctccgctttcctctctatgggcagtcggtgattaatacgactcactataggg。
58.第二方面，本发明提供第一方面所述的构建ighv基因文库的引物组合在制备检测ighv基因的产品中的应用。
59.第三方面，本发明提供一种检测ighv基因突变的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的构建ighv基因文库的引物组合。
60.优选地，所述试剂盒还包括多重pcr扩增试剂和/或测序接头扩增试剂；
61.优选地，所述多重pcr扩增试剂包括dna聚合酶和扩增缓冲液；
62.优选地，所述测序接头扩增试剂包括dna聚合酶和扩增缓冲液。
63.第四方面，本发明提供第一方面所述的构建ighv基因文库的引物组合在检测ighv基因中的应用。
64.第五方面，本发明提供一种构建ighv基因文库的方法，所述方法包括：
65.以待测样本的核酸为模板，利用第一方面所述的构建ighv基因文库的引物组合进行多重pcr扩增，将多重pcr扩增产物与所述接头引物混合，进行接头pcr扩增反应，得到所
述ighv基因文库。
66.优选地，所述待测样本包括外周血、骨髓或ffpe样本中任意一种。
67.优选地，所述多重pcr扩增的条件为：（1）93~96℃预变性8~12 min；（2）93~95℃变性1~3 min、60~65℃退火1~3 min、70~73℃延伸25~35 s，30~40个循环；（3）70~73℃延伸8~12 min；优选为（1）94℃预变性10 min；（2）94℃变性1 min、63℃退火1 min、72℃延伸30 s，35个循环；（3）72℃延伸10 min。
68.优选地，所述接头pcr扩增反应的条件为：（1）94~96℃预变性10~14 min；（2）93~95℃变性25~35 s、60~65℃退火25~35 s、70~73℃延伸25~35 s，18~23个循环；（3）70~73℃延伸3~6 min；优选为95℃预变性12 min；（2）94℃变性30 s、63℃退火30 s、72℃延伸30 s，20个循环；（3）72℃延伸5 min。
69.第六方面，本发明提供一种以非疾病诊断为目的的检测ighv基因突变的方法，所述方法包括：
70.利用第五方面所述的构建ighv基因文库的方法构建ighv基因文库，对所述ighv基因文库进行纯化，将纯化后ighv基因文库进行上机测序及数据分析，判断ighv基因突变情况。
71.优选地，所述纯化的方法包括磁珠纯化法。
72.本发明设计特定的引物组合，保证准确、稳定扩增得到ighv基因序列，得到基因文库，同时结合高通量测序技术，可以极大的提高检测灵敏度及准确性，具有广泛的应用前景，例如得到的受体识别区序列可以应用在细胞免疫研究领域等。
73.第七方面，本发明提供一种检测ighv基因突变的装置，所述装置包括文库构建单元和测序单元；
74.所述文库构建单元用于执行包括：
75.利用第五方面所述的构建ighv基因文库的方法构建ighv基因文库，对所述ighv基因文库进行纯化；
76.所述测序单元用于执行包括：
77.将文库构建单元纯化后ighv基因文库进行上机测序及数据分析，判断ighv基因突变情况。
78.第八方面，本发明提供一种用于ighv基因突变的高通量测序检测的系统，所述系统包括第三方面所述的检测ighv基因突变的试剂盒和高通量测序平台。
79.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
80.本发明巧妙设计多组引物组合，leader引物的前置引物位于igh基因前导区，其能够扩增全长的ighv基因序列，能够全方面的分析ighv突变状态；fr1引物的前置引物位于igh基因的fr1区，能够配合leader引物使用，保证准确、稳定扩增得到ighv基因序列，得到基因文库，便于进行高通量测序分析，实现了ighv基因突变的稳定检测。
附图说明
81.图1为ighv基因组成及引物分布图；
82.图2a为leader引物扩增产物分析结果图；
83.图2b为leader引物对照组1扩增产物分析结果图；
84.图2c为leader引物对照组2扩增产物分析结果图；
85.图2d为fr1引物扩增产物分析结果图；
86.图2e为fr1引物对照组1扩增产物分析结果图；
87.图2f为fr1引物对照组2扩增产物分析结果图；
88.图3a为leader引物扩增文库分析结果图；
89.图3b为leader引物对照组1扩增文库分析结果图；
90.图3c为leader引物对照组2扩增文库分析结果图；
91.图3d为fr1引物扩增文库分析结果图；
92.图3e为fr1引物对照组1扩增文库分析结果图；
93.图3f为fr1引物对照组2扩增文库分析结果图。
具体实施方式
94.为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
95.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买获得的常规产品。
96.实施例1
97.本实施例提供一种ighv基因检测试剂盒，所述试剂盒包括leader引物（前置引物seq id no.1~seq id no.6；后置引物seq id no.7~seq id no.9）、fr1引物（前置引物seq id no.10~seq id no.24；后置引物seq id no.25~seq id no.26）和接头引物（前置引物seq id no.27~seq id no.38；后置引物seq id no.39），ighv基因组成及引物分布如图1所示。
98.实施例2
99.本实施例提取样本dna。
100.提取dna所用试剂盒为天根生化公司的血液/细胞/组织基因组dna提取试剂盒（货号dp304-02），具体实验步骤如下：
101.注意事项：
102.（b1）第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液gd和漂洗液pw中加入无水乙醇；
103.（b2）样品应避免反复冻融，否则会导致提取的dna片段较小且提取量也下降；
104.（b3）若缓冲液ga或gb中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用；
105.（b4）所有离心步骤均为使用台式离心机，25℃下离心。
106.操作步骤（以外周血为例）：
107.（c1）处理材料，如提取材料为血液，可直接使用200 μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200 μl可加缓冲液ga补足；
108.（c2）加入20 μl proteinase k溶液，混匀；
109.（c3）加入200 μl缓冲液gb，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短
离心以去除管盖内壁的水珠；
110.（c4）加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 s，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
111.（c5）将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱cb3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400
×
g)离心30 s，倒掉废液，将吸附柱cb3放回收集管中；
112.（c6）向吸附柱cb3中加入500 μl缓冲液gd （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400
×
g)离心30 s，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；
113.（c7）向吸附柱cb3中加入600 μl 漂洗液pw（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400
×
g)离心30 s，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；
114.（c8）重复操作步骤c7；
115.（c9）将吸附柱cb3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400
×
g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱cb3置于25℃放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；
116.（c10）将吸附柱cb3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液te，25℃放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400
×
g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。
117.实施例3
118.本实施例利用实施例1中引物进行ighv基因目的片段扩增，包括如下步骤
119.（d1）本实施例中所用扩增试剂为thermofisher的amplitaq gold
tm dna polymerase（货号：n8080259）；
120.（d2）ighv基因片段扩增体系：pcr buffer ii（10
×
）加入5 μl，mgcl2（25mm）加入3 μl，dntp-mix(10 mm)加入1 μl，amplitaq gold(5u/ μl)加入0.2 μl，leader引物或fr1引物加入量为终浓度0.2 μm，dna加入量为100 ng，补水至总体积50 μl；
121.（d3）将上述体系加入到pcr管中，转移pcr管至pcr仪中开始扩增反应体系；
122.（d4）根据pcr热循环程序完成扩增反应，扩增程序为：(1) 94℃预变性10min；(2) 94℃变性1min，63℃退火1min，72℃延伸30s，35个循环；(3) 72℃延伸10min，4℃ ∞；
123.（d5）反应结束后如不立刻进行后续实验将扩增产物放在4℃（短时）或-20℃（长时）；
124.（d6）扩增产物进行qubit浓度质检及安捷伦4200仪器片段化分析，确保其扩增产物出现，leader引物和fr1引物扩增结果分别如图2a和图2d所示，正常样本扩增产物4200质检中有目的片段大小的条带。
125.（d7）本实施例同时设计了三组引物，经过对比实验，筛选出合适的引物。另外两组引物序列如下：
126.对照组1
127.（1）gtaaaacgacggccagtccatggactggacctgga。
128.（2）gtaaaacgacggccagtatggacatactttgttccac。
129.（3）gtaaaacgacggccagtccatggagtttgggctgagc。
130.（4）gtaaaacgacggccagtatgaaacacctgtggttctt。
131.（5）gtaaaacgacggccagtatggggtcaaccgccatcct。
132.（6）gtaaaacgacggccagtatgtctgtctccttcctcat。
133.（7）gtaaaacgacggccagtggcctcagtgaaggtctcctgcaag。
134.（8）gtaaaacgacggccagtgtctggtcctacgctggtgaaaccc。
135.（9）gtaaaacgacggccagtctggggggtccctgagactctcctg。
136.（10）gtaaaacgacggccagtcttcggagaccctgtccctcacctg。
137.（11）gtaaaacgacggccagtcggggagtctctgaagatctcctgt。
138.（12）gtaaaacgacggccagttcgcagaccctctcactcacctgtg。
139.（13）taatacgactcactatagggttggggcggatgcact。
140.（14）taatacgactcactatagggaagtagtccttgaccagg。
141.（15）taatacgactcactataggggaggctcagcgggaagacctt。
142.对照组2
143.（1）gtaaaacgacggccagtctcaccatggactggacctggag。
144.（2）gtaaaacgacggccagtatggacatactttgttccacgctc。
145.（3）gtaaaacgacggccagtccatggagtttgggctgagctgg。
146.（4）gtaaaacgacggccagtacatgaaacayctgtggttcttcc。
147.（5）gtaaaacgacggccagtatggggtcaaccgccatcctccg。
148.（6）gtaaaacgacggccagtatgtctgtctccttcctcatcttc。
149.（7）gtaaaacgacggccagtgagaccctgtccctcacctg。
150.（8）gtaaaacgacggccagtggagtctctgatgatctcctgtaagg。
151.（9）gtaaaacgacggccagtggtccctcagactctcctgtg。
152.（10）gtaaaacgacggccagttcgcagaccctctcactcacc。
153.（11）gtaaaacgacggccagttcgctggtgaaacccacagagac。
154.（12）gtaaaacgacggccagttctcagtgaaggtatcctgcaagg。
155.（13）taatacgactcactatagggttggggcggatgcact。
156.（14）taatacgactcactatagggaagtagtccttgaccagg。
157.（15）taatacgactcactataggggaggctcagcgggaagacctt。
158.实验流程同本实施例中实验流程，第二步连接接头所需pcr引物同本实施例中引物。
159.leader引物对照组结果分别如图2b和图2c所示，多处非特异性扩增产物，fr1引物对照组结果分别如图2e和图2f所示，目的片段峰值较低或者无目的片段，表明本发明设计的特定的引物组合扩增产物的特异性最好。
160.实施例4
161.本实施例将实施例3中ighv扩增产物连接接头，包括以下步骤：
162.（e1）ighv扩增产物链接接头体系使用的试剂为罗氏的faststart high fidelity pcr system试剂（货号：4738292001）；
163.（e2）将实施例3中的扩增产物吸取2 μl至新的pcr管中，补水至100 μl，扩增产物50倍稀释；
164.（e3）ighv扩增产物链接接头体系为：pcr buffer with mgcl2（10
×
）加入5 μl，dntp-mix(10 mm)加入1 μl，接头前置引物（10 μm）加入1 μl，接头后置引物（10 μm）加入1 μl，扩增产物（稀释50倍后）加入1 μl，fast start high fidelity polymerase（5u/ μl）加
入0.5 μl，补水至50 μl；
165.（e4）将上述体系加入到pcr管中，转移pcr管至pcr仪中开始扩增反应体系；
166.（e5）根据pcr热循环程序完成扩增反应，扩增程序为： (1) 95℃预变性12min；(2) 94℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸30s，20个循环；(3)72℃延伸5min，4℃ ∞；
167.（e6）连接反应完成后获得的产物即为人ighv文库。
168.实施例5
169.本实施例进行ighv文库纯化。
170.纯化所用磁珠为amp xp磁珠，磁珠在使用前提前半小时25℃孵育。
171.（f1）向链接产物中加入50 μl 25℃孵育完全的amp磁珠，涡旋混匀，25℃放置5 min；
172.（f2）将反应管转移至磁力架吸附至溶液澄清，去除上清液；
173.（f3）向反应管中加入200 μl新配置的80%乙醇，上下轻轻吹打4次，去除上清液；
174.（f4）重复步骤（f3）；
175.（f5）瞬时离心反应管，然后将反应管重新放回磁力架吸附，去除残留80%乙醇，反应管继续放置在磁力架上；
176.（f6）25℃放置5 min，磁珠晾干；
177.（f7）向反应管中加35 μl无rna酶的水，将反应管从磁力架去下，涡旋混匀，25℃放置5 min；
178.（f8）将反应管重新转移至磁力架吸附3 min至溶液澄清；
179.（f9）吸取上清至新的ep管中，管中既为纯化好的文库。
180.实施例6
181.本实施例对实施例5纯化的ighv文库进行定量。
182.（g1）文库定量试剂选用的是kapa library quantification kit ion torrent
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platforms试剂盒；定量仪器为abi 7500
183.（g2）使用安捷伦4200仪器对文库片段大小质控。
184.leader引物和fr1引物扩增结果分别如图3a和图3d所示，leader文库最终大小在650 bp左右，fr1文库最终大小在430 bp左右，leader引物对照组结果分别如图3b和图3c所示，除650 bp左右目的文库之外存在多个非特异性扩增文库，fr1引物对照组结果分别如图3e和图3f所示，目的大小文库不明显且非特异性扩增文库明显，表明本发明设计特定引物组合特异性最好。
185.实施例7
186.本实施例进行ighv文库上机测试。
187.（h1）根据实施例6定量结果及上机要求，将构建好的文库polling到一起；
188.（h2）上机仪器选用的是thermofisher的ion torrent s5平台。
189.实施例8
190.本实施例进行ighv文库下机数据生物信息分析。
191.（i1）ighv文库上机完成后先确定此次上机数据质量符合下机数据要求；
192.（i2）利用imgt数据库及igblast分析下机数据。
193.分析结果如表1所示。
194.表1
[0195][0196]
表1展示出前十位克隆信息，首先确定第一位是否为克隆性重排，判定依据为第一位克隆百分比大于5%且第一位克隆百分比与第三位克隆百分比大于2倍，因此表1 排名第一位克隆为克隆性重排；满足第一位克隆为克隆性重排的条件下，第一位克隆的v区突变比例即为最终的检测结果，因此表1 ighv突变比例为7.72%。
[0197]
综上所述，本发明巧妙设计多组引物组合，leader引物的前置引物位于igh基因前导区，其能够扩增全长的ighv基因序列，能够全方面的分析ighv突变状态；fr1引物的前置引物位于igh基因的fr1区，能够配合leader引物使用，保证准确、稳定扩增得到ighv基因序列，得到基因文库，便于进行高通量测序分析，实现了ighv基因突变的稳定检测。
[0198]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.一种构建ighv基因文库的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括leader引物和/或fr1引物；所述leader引物包括6条前置引物和3条后置引物，所述前置引物的核酸序列包括seq id no.1~seq id no.6所示的序列，所述后置引物的核酸序列包括seq id no.7~seq id no.9所示的序列；所述fr1引物包括15条前置引物和2条后置引物，所述前置引物的核酸序列包括seq id no.10~seq id no.24所示的序列，所述后置引物的核酸序列包括seq id no.25~seq id no.26所示的序列。2.根据权利要求1所述的构建ighv基因文库的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括接头引物；所述接头引物包括iontorrent平台接头引物；所述接头引物包括12条前置引物和1条后置引物，所述前置引物的核酸序列包括seq id no.27~seq id no.38所示的序列，所述后置引物的核酸序列包括seq id no.39所示的序列。3.权利要求1或2所述的构建ighv基因文库的引物组合在制备检测ighv基因的产品中的应用。4.一种检测ighv基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的构建ighv基因文库的引物组合；所述试剂盒还包括多重pcr扩增试剂和/或测序接头扩增试剂；所述多重pcr扩增试剂包括dna聚合酶和扩增缓冲液；所述测序接头扩增试剂包括dna聚合酶和扩增缓冲液。5.权利要求1或2所述的构建ighv基因文库的引物组合在检测ighv基因中的应用。6.一种构建ighv基因文库的方法，其特征在于，所述方法包括：以待测样本的核酸为模板，利用权利要求1或2所述的构建ighv基因文库的引物组合进行多重pcr扩增，将多重pcr扩增产物与所述接头引物混合，进行接头pcr扩增反应，得到所述ighv基因文库。7.根据权利要求6所述的构建ighv基因文库的方法，其特征在于，所述待测样本包括外周血、骨髓或ffpe样本中任意一种；所述多重pcr扩增的条件为：（1）93~96℃预变性8~12 min；（2）93~95℃变性1~3 min、60~65℃退火1~3 min、70~73℃延伸25~35 s，30~40个循环；（3）70~73℃延伸8~12 min；所述接头pcr扩增反应的条件为：（1）94~96℃预变性10~14 min；（2）93~95℃变性25~35 s、60~65℃退火25~35 s、70~73℃延伸25~35 s，18~23个循环；（3）70~73℃延伸3~6 min。8.一种以非疾病诊断为目的的检测ighv基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括：利用权利要求6或7所述的构建ighv基因文库的方法构建ighv基因文库，对所述ighv基因文库进行纯化，将纯化后ighv基因文库进行上机测序及数据分析，判断ighv基因突变情况；所述纯化的方法包括磁珠纯化法。9.一种检测ighv基因突变的装置，其特征在于，所述装置包括文库构建单元和测序单元；
所述文库构建单元用于执行包括：利用权利要求6或7所述的构建ighv基因文库的方法构建ighv基因文库，对所述ighv基因文库进行纯化；所述测序单元用于执行包括：将文库构建单元纯化后ighv基因文库进行上机测序及数据分析，判断ighv基因突变情况。10.一种用于ighv基因突变的高通量测序检测的系统，其特征在于，所述系统包括权利要求4所述的检测ighv基因突变的试剂盒和高通量测序平台。

技术总结
本发明公开了一种构建IGHV基因文库的引物组合及其应用。所述引物组合包括Leader引物和/或FR1引物；所述Leader引物包括6条前置引物和3条后置引物；所述FR1引物包括15条前置引物和2条后置引物。本发明巧妙设计多组引物组合，Leader引物的前置引物位于IGH基因前导区，其能够扩增全长的IGHV基因序列，能够全方面的分析IGHV突变状态；FR1引物的前置引物位于IGH基因的FR1区，能够配合Leader引物使用，保证准确、稳定扩增得到IGHV基因序列，得到基因文库，便于进行高通量测序分析，实现了IGHV基因突变的稳定检测。的稳定检测。的稳定检测。


技术研发人员：张林 白海齐 肖敏 刘明坤 叶锋
受保护的技术使用者：华中科技大学同济医学院附属同济医院
技术研发日：2023.06.12
技术公布日：2023/7/20