一种响应面法优化肉豆蔻多糖提取方法

1.本发明涉及生物科技技术领域，具体是一种响应面法优化肉豆蔻多糖提取方法。


背景技术：

2.肉豆蔻(myristica fragrans houtt.)为肉豆蔻科肉豆蔻属常绿乔木植物，是一种药食同源的植物，其种仁入药，可治虚泻冷痢、脘腹冷痛、呕吐等；外用可作寄生虫驱除剂，治疗风湿痛等。此外，还可作调味品、工业用油原料等。肉豆蔲是一种重要的香料、药用植物。
3.天然产物多糖的常用提取方法有水提法、酶解法、超声提取法以及微波提取法等。肉豆蔻是含有较多脂质的植物，因此在多糖提取过程中，需要先进行脱脂，以提高多糖的提取率及纯度。
4.通过检索，现有技术报道了：
5.一种利用响应面法优化山药多糖提取条件的方法(cn112266423a)，包括如下步骤：(1)将山药洗净去皮切片，于冻干机过夜冻干，用粉碎机粉碎过30-50目筛；定量称取过筛的山药粉末，加入3-4倍体积无水石油醚脱脂，再加入4-5倍体积乙醇溶液脱除80％-100％的色素及低聚糖；将上述脱脂脱色素的粉末以1:10-1:11的料液比溶于蒸馏水中，于70℃浸提三次，每次浸提2-2.5小时；合并提取液，真空浓缩至原体积的1/5-1/6体积；加入3-4倍体积的乙醇4℃过夜醇沉，将醇沉液离心，取沉淀物加入水进行溶解，用酶+sevage法除去溶液中的蛋白，用透析法去除盐与小分子物质，冷冻干燥得到山药粗多糖；(2)采用响应面法确定山药多糖提取的变量参数，设置三因素三水平的试验方式进行重复试验获得实验结果，计算出山药多糖的提取率，再采用软件进行多元回归分析，得出试验因素对响应值影响的回归方程为：r(％)＝12.00+0.24a+0.34b+0.34c-0.65ab-0.064ac-0.26bc-1.55a
2-1.18b
2-1.60c2式中r为山药多糖的提取率，变量参数a为提取温度，变量参数b为提取时间，变量参数c为料液比；最终确定取率条件为：温度为70.51℃、时间为2.06h、料液比为1:10.48，多糖提取率为12.04％。
6.目前关于肉豆蔻挥发油的研究较多，但关于肉豆蔻多糖的提取和活性研究甚少，本研究采用单因素初筛，响应面实验优化，考察了脱脂次数、提取时间、提取温度、料液比对多糖提取率的影响，并对比最优提取工艺下肉豆蔻和未脱脂肉豆蔻的多糖提取率、油脂含量、多糖纯度、颜色、抗氧化及降糖活性。


技术实现要素：

7.本发明目的在于最大程度提取肉豆蔻多糖，提供一种响应面法优化肉豆蔻多糖的提取工艺，步骤如下：
8.(1)脱脂工序：取肉豆蔻原药材，洗净，干燥至恒重，粉碎机粉碎，过筛；称取定量的肉豆蔻粉末，加入石油醚脱脂，抽滤，得到脱脂肉豆蔻粉末；
9.(2)脱色工序：加入无水乙醇，去除残留石油醚及色素，抽滤后挥干乙醇，得到脱脂
脱色的肉豆蔻粉末；
10.(3)水提工序：精密量取脱脂脱色的肉豆蔻粉末，加水热提取，得到肉豆蔻多糖水提液；将水提液浓缩，加入适量无水乙醇，醇沉过夜，抽滤，挥干乙醇，将滤渣冷冻干燥，得到肉豆蔻多糖。
11.本发明采用固定三个因素，改变一个因素进行单因素实验，探究脱脂次数(0、1、2、3、4次)、和水提步骤中的提取温度(60、70、80、90、100℃)、提取时间(1.5、2、2.5、3、3.5h)、料液比(1:10、1:15、1:20、1:25、1:30g:ml)的变化对肉豆蔻多糖提取率的影响。
12.优选地，步骤(1)中针对肉豆蔻粉末重复进行1-4次脱脂，进一步优选为3次。
13.优选地，步骤(3)中加水热提取的提取温度为60-100℃，进一步优选为75-85℃。
14.优选地，步骤(3)中水热提取时间为1.5-3.5h，进一步优选为2.5h。
15.优选地，步骤(3)中脱脂肉豆蔻粉末和水的料液比为1:10-30g:ml，进一步优选为1:15g:ml。
16.优选地，所述提取工艺具体步骤为
17.(1)脱脂工序：取肉豆蔻原药材，洗净，置于60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎机粉碎，过40目筛；称取定量的肉豆蔻粉末，按料液比1:5(g:ml)加入石油醚，加热微沸脱脂，抽滤，得到脱脂肉豆蔻粉末；
18.(2)按料液比1:3(g:ml)加入无水乙醇，去除残留石油醚及色素，抽滤后置于水浴上挥干乙醇，得到脱脂脱色的肉豆蔻粉末；
19.(3)水提工序：精密量取脱脂脱色的肉豆蔻粉末，按料液比1:15(g:ml)加水热回流提取，提取温度80℃，提取时间2.5h，得到肉豆蔻多糖水提液；将水提液浓缩至1/3体积，加入适量无水乙醇至酒精浓度为80v％，醇沉过夜，抽滤，将滤渣置于水浴上挥干乙醇，冷冻干燥，得到肉豆蔻多糖。
20.本发明采用响应面法，在单因素实验的基础上，以脱脂次数、提取温度、提取时间、料液比为考察因素，设计四因素三水平的响应面分析实验，以多糖提取率为考察指标，得到最优提取工艺为：脱脂3.11次，提取温度82.37℃，提取时间2.86h(171.6min)，料液比1:14.99(g:ml)。为了便于实际中操作，将得到的提取工艺进行修正为：脱脂3次，提取温度82℃，提取时间170min，料液比1:15(g:ml)。
21.本发明对比脱脂3次的最优工艺与未脱脂肉豆蔻的油脂含量、提取得到多糖的提取率、纯度、颜色及抗氧化活性；油脂含量分别为0.7％和30.0％、多糖的提取率：9.13％和3.35％、多糖纯度：50.4％和43.8％、颜色分别为乳白色和棕色，对比最优工艺、脱脂2次、脱脂1次与未脱脂肉豆蔻提取多糖的抗氧化活性abts清除能力的ic
50
分别为1.26、1.42、1.51和1.63mg/ml；dpph清除能力的ic
50
分别为1.49、1.71、1.90、2.40mg/ml；α-葡萄糖苷酶抑制率的ic
50
分别为4.74、5.57、7.23、8.91mg/ml，可以看出最优提取工艺对多糖的提取率，抗氧化和降糖活性有明显提高。
22.本发明与现有技术相比，其显著优点为：
23.(1)本技术针对现有需要进行设计，以水作为提取剂，将脱脂次数、提取温度、提取时间、料液比作为考察因素，考察不同参数对肉豆蔻多糖提取率的影响，并采用响应面法优化肉豆蔻多糖提取工艺；
24.(2)本发明采用乙醇脱色，方法简便易操作，脱色效果明显；
25.(3)本发明通过单因素结合响应面实验考察了脱脂次数对肉豆蔻多糖提取率的影响，发现了在脱脂3次时脱脂效果最好，肉豆蔻多糖的提取率最高；
26.(4)本发明对提取的肉豆蔻多糖进行抗氧化活性的测定，发现最优工艺提取的肉豆蔻多糖抗氧化活性优于未脱脂提取；
27.(5)本发明对提取的肉豆蔻多糖进行降糖活性的测定，发现最优工艺提取的肉豆蔻多糖抗氧化活性优于未脱脂提取。
附图说明
28.图1是脱脂次数对肉豆蔻多糖提取率影响的示意图；
29.图2是提取温度对肉豆蔻多糖提取率影响的示意图；
30.图3是提取时间对肉豆蔻多糖提取率影响的示意图；
31.图4是料液比对肉豆蔻多糖提取率影响的示意图；
32.图5是脱脂次数与提取温度对多糖提取率影响的响应面及等高线图；
33.图6是脱脂次数与料液比对多糖提取率影响的响应面及等高线图；
34.图7是提取温度与料液比对多糖提取率影响的响应面及等高线图；
35.图8是实际值与预测值的散点图；
36.图9是实际值与残差的散点图；
37.图10是预测值与残差的散点图；
38.图11是最优提取工艺肉豆蔻多糖和未脱脂肉豆蔻多糖的示意图；
39.图12是最优提取工艺肉豆蔻多糖、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖abts清除能力图；
40.图13是最优提取工艺肉豆蔻多糖、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖dpph清除能力图；
41.图14是最优提取工艺肉豆蔻多糖、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖α-葡萄糖苷酶抑制能力图。
具体实施方式
42.实施例1：
43.本实施例提供一种肉豆蔻脱脂脱色的方法，步骤如下：
44.取肉豆蔻原药材，洗净，置于60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎机粉碎，过40目筛；称取100g肉豆蔻粉末，置于圆底烧瓶中，加入500ml无水石油醚，水浴加热至微沸开始计时，回流脱脂1.5h；抽滤，取滤渣及滤饼，继续加入500ml无水石油醚回流脱脂。将得到的脱脂石油醚粉末(石油醚分别脱脂处理1次、2次、3次和4次)，加入300ml无水乙醇脱色，抽滤，取滤渣置于蒸发皿中，于60℃水浴加热挥干乙醇，60℃下干燥至恒重，得到脱脂脱色肉豆蔻粉末。
45.实施例2：
46.本实施例提供一种肉豆蔻多糖含量测定方法，步骤如下：
47.(1)对照品溶液的制备
48.精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33mg，置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1m中含无水葡萄糖0.33mg)。
49.(2)蒽酮-硫酸的制备
50.精密称取0.2g蒽酮，加入80％的硫酸溶液，溶解后，定容在100ml棕色容量瓶中，摇匀，即得。
51.(3)标准曲线的制备
52.精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分别置10ml具塞刻度试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2％蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10min，取出，立即置冰水浴中冷却10min，取出，以蒸馏水代替蒽酮-硫酸溶液为空白。在635nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
53.(4)多糖含量测定
54.精密称取脱脂肉豆蔻粉末4g，于150ml圆底烧瓶中，加入60ml水，置于80℃水浴中，回流提取2.5h，抽滤，将滤液补足至60ml，得到供试品溶液。将水提液浓缩至1/4体积，加入适量无水乙醇至酒精浓度为80％，醇沉过夜，抽滤，将滤渣冷冻干燥，得到肉豆蔻多糖。
55.通过蒽酮-硫酸显色法测定肉豆蔻中多糖含量，将测得肉豆蔻多糖的吸光度带入到标准曲线中，计算得到多糖的含量及提取率。
[0056][0057]
式中：c——多糖浓度(mg/ml)；n——稀释倍数；v——水提液体积(ml)；m——肉豆蔻粉末的质量(g)。
[0058]
实施例3：
[0059]
本实施例提供一种响应面法优化肉豆蔻多糖提取工艺的方法，步骤如下：
[0060]
1.单因素实验
[0061]
选取脱脂次数、水提步骤中提取温度、提取时间及料液比四个因素对肉豆蔻水提取液的多糖提取率进行测定。
[0062]
(1)固定提取温度80℃、提取时间2h、料液比1:15(g:ml)，改变脱脂次数0、1、2、3、4次，测定肉豆蔻多糖提取率，实验结果如附图1所示，脱脂次数为3次时，多糖提取率较高，因此选择脱脂3次。
[0063]
(2)固定脱脂次数3次、提取时间2h、料液比1:15(g:ml)，改变提取温度60、70、80、90、100℃,测定肉豆蔻多糖提取率，实验结果如附图2所示，在提取温度60-100℃范围内，提取温度80℃时多糖提取率较高。因此选择提取温度为80℃。
[0064]
(3)固定脱脂次数3次、提取温度80℃、料液比1:15(g:ml)，改变提取时间1.5、2、2.5、3、3.5h,测定肉豆蔻多糖提取率，实验结果如附图3所示，在提取时间1.5-3.5h范围内，提取时间2.5h时多糖提取率较高。因此选择提取时间为2.5h。
[0065]
(4)固定脱脂次数3次、提取时间2h、提取温度80℃，改变料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30(g:ml)，测定肉豆蔻多糖提取率，实验结果如附图4所示，料液比为1:15时多糖提取率较高。因此选择料液比为1:15(g:ml)。
[0066]
2.响应面实验
[0067]
(1)响应面实验设计及结果
[0068]
以单因素实验为基础，建立四因素三水平的响应面实验，因素水平表如表1所示。
[0069]
表1响应面实验因素水平表
[0070][0071]
共响应29组实验，以脱脂次数(次)﹑提取温度(℃)、提取时间(h)和料液比(g:ml)为影响因素，多糖提取率为考察指标，设计组合与其对应实验结果如表2所示。
[0072]
表2响应面设计及实验结果
[0073]
[0074][0075]
(2)回归方程拟合及方差分析
[0076]
以脱脂次数(a)﹑提取温度(b)、提取时间(c)和料液比(d)为自变量对肉豆蔻多糖提取率y进行数据拟合建立回归方程：
[0077]
y＝+9.00+1.03
×
a+1.40
×
b+0.13
×
c-0.31
×
d-0.24
×a×
b+0.037
×a×
c+0.25
×a×
d-0.053
×b×
c+1.05
×b×
d+0.034
×c×
d-4.08
×a2-2.39
×
b2+0.35
×c2-2.16
×
d2[0078]
方差分析如表3所示，根据表3可知，该回归方程模型p值为极显著，说明该模型有较好的拟合度，实验方法可行；失拟项p值为不显著，说明该模型误差较小；因素的f值越大、p值越小，说明该因素对结果的影响越大，所以各因素对肉豆蔻多糖提取率的影响大小顺序为：提取时间》脱脂次数》料液比》提取时间。
[0079]
表3响应面实验方差结果
[0080]
[0081][0082]
注：**:p《0.01为极显著；*:p《0.05为显著
[0083]
(3)响应面曲面图分析
[0084]
响应面曲面图被用于分析某些响应目标值和自变量。它们共同构成了一个三维空间图，通过分析三维响应曲面图，可以显著反映不同因素对响应目标值的影响。以达到获得反应过程中每个因素的相应交互因子的作用。可以通过不同条件下的响应值参数来确定影响的有效性并找到极值。响应面实验曲面图及等高线如图5-7所示，可见交互项ab、ad、bd曲线较为陡峭、对结果的影响较大。图8为本实验中预测与实际值的散点图，图9为残差的正态概率分布图，图10为残差与预测值的散点图，可以看出数据分布的线性关系较好。
[0085]
(4)预测模型验证实验
[0086]
通过响应面软件计算得到最优提取工艺为：脱脂3.11次，提取温度82.37℃，提取时间2.86h，料液比1:14.99(g:ml)，为了便于实际中操作，将得到的提取工艺进行修正为：脱脂3次，提取温度82℃，提取时间170min，料液比1:15(g:ml)，进行三次验证实验，得到的平均多糖提取率为9.13％，与理论值的相对偏差为5.38％，证明响应面实验得到的提取工艺有较高的可信度。
[0087]
实施例4
[0088]
本实验将最优提取工艺下(脱脂3次)肉豆蔻和未脱脂肉豆蔻的多糖提取率、油脂含量、多糖纯度、颜色、抗氧化及降糖活性进行对比，步骤如下：
[0089]
(1)提取率
[0090]
精密称取最优工艺下肉豆蔻粉末和未脱脂肉豆蔻粉末4g，置于150ml圆底烧瓶中，加入60ml水，置于82℃水浴中，回流提取170min，抽滤，将滤液补足至60ml，通过蒽酮-硫酸法测定多糖含量并计算提取率，提取率分别为：9.13％和3.35％。
[0091]
(2)油脂含量
[0092]
精密称取最优工艺下肉豆蔻粉末和未脱脂肉豆蔻粉末10g，分别加入50ml无水石油醚，按照实施例1提供的方法进行脱脂；精密称量两个干燥至恒重的圆底烧瓶，质量分别
为59.4279g和58.7095g；将抽滤得到的滤液趁热倒入圆底烧瓶中，使用旋转蒸发仪回收石油醚，将装有油脂的圆底烧瓶置于烘箱中干燥至恒重，精密称量，质量分别为：59.4983g和61.7120g，代入公式：
[0093][0094]
式中：m1——圆底烧瓶质量；m2——圆底烧瓶与油脂总质量；m——肉豆蔻粉末质量。
[0095]
计算得到脱脂肉豆蔻油脂含量为0.7％，未脱脂肉豆蔻油脂含量为30％。
[0096]
(3)多糖纯度
[0097]
按照实施例2(4)多糖含量测定的方法对最优工艺下肉豆蔻粉末和未脱脂肉豆蔻粉末提取多糖，精密称取5mg脱脂肉豆蔻提取的多糖和未脱脂肉豆蔻提取的多糖，加蒸馏水溶解，分别定溶于10ml容量瓶中，配置成0.5mg/ml的供试品溶液，通过蒽酮-硫酸法测定多糖含量。脱脂和未脱脂的肉豆蔻多糖浓度分别为0.252mg/ml和0.219mg/ml，计算纯度分别为50.4％和43.8％。
[0098]
(4)多糖颜色
[0099]
按照实施例2(4)多糖含量测定的方法，分别对最优工艺下肉豆蔻粉末和未脱脂肉豆蔻粉末进行提取，结果如图11所示，最优提取工艺肉豆蔻多糖为纯白色(左侧)，未脱脂肉豆蔻多糖为棕色(右侧)。
[0100]
(5)抗氧化活性实验
[0101]
1.abts清除能力测定
[0102]
abts测定液的配制：
①
精密称取0.189g k2s2o4，定容于5ml容量瓶；
②
精密称取0.0192g abts，定容于5ml容量瓶；精密移取88μl的溶液
①
加入到溶液
②
中，避光隔夜12h，得到abts测定液。
[0103]
分别精密称取最优工艺、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖，配置成0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/ml五个浓度，精密移取不同浓度肉豆蔻多糖样品溶液各2.0ml于试管中，分别加入abts测定液2.0ml，震荡10s，避光静置6min，于734nm处测定吸光度a
实验
；对照组精密移取2ml蒸馏水于试管中，分别加入abts测定液2.0ml，震荡10s，避光静置6min，于734nm处测定吸光度a
对照
，计算清除率。
[0104][0105]
清除率结果如图12所示，计算最优工艺、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖abts清除能力的ic
50
分别为1.26、1.42、
[0106]
1.51和1.63mg/ml，表明最优提取工艺优化的肉豆蔻多糖抗氧化活性有明显提升。
[0107]
2.dpph清除能力测定
[0108]
dpph测定液的配制：精密称取0.0039g dpph，加入无水乙醇定容于100ml容量瓶，得到dpph测定液。
[0109]
分别精密称取最优工艺、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖，配置成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml五个浓度，精密移取不同浓度肉豆蔻多糖样品溶液各2.0ml于
试管中，分别加入dpph测定液2.0ml，震荡10s，避光静置30min，于517nm处测定吸光度a
实验
；空白对照组分别精密移取各浓度样品2ml于试管中，分别加入蒸馏水2.0ml于517nm处测定吸光度a
空白
；模型对照组精密移取dpph 2ml于试管中，加入2ml无水乙醇于517nm处测定吸光度a
模型
计算清除率。
[0110][0111]
清除率结果如图13所示，计算最优工艺、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖dpph清除能力的ic
50
分别为1.49、1.71、1.90、2.40mg/ml，表明最优提取工艺优化的肉豆蔻多糖抗氧化活性有明显提升。
[0112]
(6)降糖活性实验
[0113]
α-葡萄糖苷酶抑制能力测定
[0114]
磷酸盐缓冲溶液(pbs)的配制：精密称取k2hpo
4 15.292g，kh2po
4 9.118g，用超纯水定容至1000ml容量瓶中，混匀，即得。
[0115]
α-葡萄糖苷酶溶液的配置：用pbs定容适量α-葡萄糖苷酶于10ml容量瓶至酶活为1u/ml，混匀，即得。
[0116]
(4-硝基苯基)-a-d-吡喃葡萄糖苷(pnpg)溶液的配置：精密称取pnpg 0.0301g用pbs定容至10ml容量瓶中，混匀，即得。
[0117]
分别精密称取最优工艺、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖，用pbs溶液配置成0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/ml五个浓度，精密移取不同浓度肉豆蔻多糖样品溶液各800μl于试管中，分别加入800μl pbs溶液和400μlα-葡萄糖苷酶溶液，37℃水浴加热15min，继续加入400μl pnpg溶液，37℃水浴加热20min，于405nm波长处测定吸光度a
样品
；加入等量pbs代替α-葡萄糖苷酶溶液进行上述实验，测定吸光度a
背景
；加入等量pbs代替肉豆蔻多糖样品溶液进行上述实验，测定吸光度a
空白
，计算清除率。
[0118][0119]
清除率结果如图14所示，计算最优工艺、脱脂2次、脱脂1次和未脱脂提取的肉豆蔻多糖α-葡萄糖苷酶抑制能力的ic
50
分别为4.74、5.57、7.23、8.91mg/ml，表明最优提取工艺优化的肉豆蔻多糖降糖活性有明显提升。
[0120]
通过对比实验发现该工艺能较好的优化肉豆蔻多糖的提取及活性。
[0121]
上述实施例为本发明优选地实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种响应面法优化肉豆蔻多糖的提取工艺，步骤如下：(1)脱脂工序：取肉豆蔻原药材，洗净，干燥至恒重，粉碎机粉碎，过筛；称取定量的肉豆蔻粉末，加入石油醚脱脂，抽滤；(2)脱色工序：加入无水乙醇，去除残留石油醚及色素，抽滤后挥干乙醇，得到脱脂脱色后的肉豆蔻粉末；(3)水提工序：精密量取脱脂脱色后的肉豆蔻粉末，加水热提取，得到肉豆蔻多糖水提液；将水提液浓缩，加入适量无水乙醇，醇沉过夜，抽滤，挥干乙醇，将滤渣冷冻干燥，得到肉豆蔻多糖。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中针对肉豆蔻粉末采用石油醚进行1-4次脱脂。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中加水热提取的提取温度为60-100℃。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中脱脂肉豆蔻粉末和水的料液比为1:10-30g:ml。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中水热提取时间为1.5-3.5h。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取工艺具体步骤为：(1)脱脂工序：取肉豆蔻原药材，洗净，置于60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎机粉碎，过40目筛；称取定量的肉豆蔻粉末，按料液比1:5(g:ml)加入石油醚，加热微沸脱脂，抽滤，得到脱脂肉豆蔻粉末；(2)脱色工序：将脱脂肉豆蔻粉末按料液比1:3(g:ml)加入无水乙醇，去除残留石油醚及色素，抽滤后置于水浴上挥干乙醇，得到脱脂脱色的肉豆蔻粉末；(3)水提工序：精密量取脱脂脱色的肉豆蔻粉末，按料液比1:15(g:ml)加水热回流提取，提取温度82℃，提取时间170min，得到肉豆蔻多糖水提液；将水提液浓缩至1/3体积，加入适量无水乙醇至酒精浓度为80v％，醇沉过夜，抽滤，将滤渣冷冻干燥，得到肉豆蔻多糖。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(1)中针对肉豆蔻粉末采用石油醚进行3次脱脂。8.一种提高肉豆蔻提取物抗氧化和降糖活性的方法，包括如下步骤：(1)脱脂工序：取肉豆蔻原药材，洗净，置于60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎机粉碎，过40目筛；称取定量的肉豆蔻粉末，按料液比1:5(g:ml)加入石油醚，加热微沸脱脂，抽滤，得到脱脂肉豆蔻粉末；(2)脱色工序：将脱脂肉豆蔻粉末按料液比1:3(g:ml)加入无水乙醇，去除残留石油醚及色素，抽滤后置于水浴上挥干乙醇，得到脱脂脱色的肉豆蔻粉末；(3)水提工序：精密量取脱脂脱色的肉豆蔻粉末，按料液比1:15(g:ml)加水热回流提取，提取温度82℃，提取时间170min，得到肉豆蔻多糖水提液；将水提液浓缩至1/3体积，加入适量无水乙醇至酒精浓度为80v％，醇沉过夜，抽滤，将滤渣冷冻干燥，得到肉豆蔻多糖。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中针对肉豆蔻粉末采用石油醚进行3次脱脂；所述得到肉豆蔻多糖的抗氧化活性abts清除能力的ic
50
为1.26；dpph清除能力的ic
50
为1.49；α-葡萄糖苷酶抑制率的ic
50
为4.74。

技术总结
本发明公开了一种响应面法优化肉豆蔻多糖提取工艺，步骤如下：将净肉豆蔻粉碎，过筛，脱脂，热水回流提取，浓缩，醇沉，抽滤，冷冻干燥；本发明采用石油醚脱脂-热水提取法进行提取，通过单因素结合响应面试验对多糖提取工艺进行优化，对比最优提取工艺下肉豆蔻和未脱脂肉豆蔻的多糖提取率、油脂含量、多糖纯度、颜色、抗氧化及降糖活性，最优提取工艺得到的肉豆蔻多糖颜色白、提取率高，活性提高，为肉豆蔻多糖研究提供理论依据。多糖研究提供理论依据。多糖研究提供理论依据。


技术研发人员：王振磊 王亚红 孙嘉祺 程文淇 朱琪 周鸿立 张扬
受保护的技术使用者：吉林化工学院
技术研发日：2023.04.26
技术公布日：2023/7/21