一种骨再生胶原肽缓释水凝胶及其制备方法

1.本发明涉及医学技术领域，特别涉及一种骨再生胶原肽缓释水凝胶及其制备方法。


背景技术：

2.在过去的几十年中，与骨骼有关的疾病不断增加。在所有病理状况中，骨质疏松症是最常见的疾病之一，通常会导致骨折。这是一个沉重的负担.此外，随着人口的老龄化，人数将增加。目前复杂骨折的治疗方案包括使用自体/同种异体移植物或惰性金属/陶瓷植入物。但是自体骨移植成本较高、从供体部位移取的可用组织有限；同种异体骨膜移植又易感染、传播病原体；惰性金属/陶瓷植入物不具有生物活性或生物可吸收性，限制了他们的应用。
3.在这种情况下，用于骨折再生的新型生物材料正在不断开发中。通常，这些材料旨在促进支架中最佳的骨整合，直至完成骨再生。这种再生医学的方法也称为组织工程(te)。水凝胶是te应用中最有前途的生物材料之一：它们是非常灵活的材料，通过适当的化学修饰，可以针对不同的应用开发许多不同的特性。水凝胶可以设计为骨组织工程中的支架，以更有效地治愈骨缺损。骨再生水凝胶因其良好的生物相容性和优异的促进骨再生能力而受到广泛关注。它可以促进成骨细胞的分化和增殖，促进血管生成，调节免疫反应，促进矿化。
4.显微镜下，骨可以分为三个主要成分：基质、细胞和生物活性因子。钙化骨基质由富含有机蛋白质的基质(干重的20％)、矿物质(65％)和水(约10％)形成。有机相在决定骨的形态中起作用，并提供抗张力。有机基质的主要成分是i型胶原(90％)，其余10％是由非胶原蛋白，蛋白多糖和磷脂组成。此外，基质还含有生长因子和酶，如磷酸酶和金属蛋白酶。胶原纤维是由三条螺旋状的丝状多肽链形成的，这些多肽链通过分子内和分子间的交联而稳定，从而增强了胶原纤维的拉伸强度。成骨细胞是骨骼中最普遍的细胞类型，其功能是响应机械刺激分泌基质成分，如胶原蛋白，并促进骨基质矿化。以上均说明骨胶原蛋白在成骨过程中的重要作用。此外，由于其膳食补充剂，它已被广泛用作生物材料(例如，作为细胞和组织再生相关蛋白的支架、伤口敷料或生物相容性)。特别是从明胶酶解的胶原肽，因为它们易于消化，通常口服给药，据报道对皮肤，软骨和骨有积极作用。
5.我国有着较为丰富的鱼类资源，但是由于许多加工淡水鱼的企业规模小，对淡水鱼的加工能力有限，使得加工过程中产生的大量下脚料，如鱼鳞、鱼骨、鱼内脏等很难得到合理利用，不仅浪费资源而且污染生态环境。鱼鳞中含有丰富的胶原蛋白，可以通过进一步加工制成胶原蛋白肽，提升其附加值。鱼鳞是一种具有高机械强度的多层天然胶原复合材料，但由于鱼胶原蛋白变性温度低，其生物医学应用受到限制。而从鱼鳞中提取胶原肽，并对其加以修饰，结合水凝胶，使得鱼鳞胶原肽制备的水凝胶具有良好的缓释性、机械性能、细胞相容性和成骨活性，具有骨组织工程应用的潜力。目前，关于骨再生胶原肽水凝胶的研究未见报道，提取和制备工艺相对原始，而且对于鲤鱼鱼鳞的研究相对较少。


技术实现要素：

6.鉴于此，本发明的目的在于提供一种骨再生胶原肽缓释水凝胶及其制备方法。本发明提供的缓释水凝胶具有良好的生物相容性和生物活性，体外能有效促进成骨相关细胞的黏附、增殖和成骨分化以及内皮细胞的血管形成，体内结果表明可以促进骨缺损修复。
7.技术方案，为实现以上目的，本发明采用的技术步骤如下：
8.步骤1：以鱼鳞为原料，提取鱼胶原蛋白；
9.步骤2：以鱼胶原蛋白为原料，酶解法制备胶原肽；
10.步骤3：将胶原肽负载于基质水凝胶中，即得所述骨再生胶原肽缓释水凝胶。
11.本发明中，在具体实施例及效果实验考察中，步骤1所述胶原蛋白的提取方法为：
12.将鱼鳞风干、粉碎，经浸碱液浸泡、纯水清洗，酸液浸泡、纯水清洗，蒸馏水稀释后水浴过夜，离心、透析后即得所述鱼胶原蛋白。
13.一些实施例中，所述碱液为氢氧化钠或氢氧化钾溶液，浓度为0.1～2mol/l；所述酸液为硫酸或盐酸溶液，浓度为0.1～2mol/l；所述浸泡温度为15～50℃，所述水浴温度为25～80℃，所述离心的转速为10000～30000r/min，所述透析的醋酸溶液浓度为0.1～2mol/l。
14.一些实施例中，以g/ml计，所述鱼鳞与碱液按质量/体积比为1:1～1:20，所述鱼鳞与酸液按质量/体积比为1:1～1:20，所述浸泡清洗之后的鱼鳞与蒸馏水按质量/体积比为1：6进行稀释。
15.本发明中，步骤2所述胶原肽的制备方法为：
16.用缓冲溶液配制胶原蛋白溶液，酶和底物按一定的比例混合，酶解一定时间后，加热灭活，冷却到室温，离心并提取上清液，即得所述胶原肽。
17.一些实施例中，所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液，所述缓冲溶液的ph为3～11，浓度为0.1mmol/l，所述胶原蛋白溶液的浓度为1～10％，所述酶为碱性蛋白酶或复合蛋白酶，所述碱性蛋白酶和底物的比例为1:100～1:10，所述酶解时间为10分钟～24小时。
18.一些实施例中，所述灭活温度为100℃，所述离心的转速为10000～30000r/min
19.本发明中，步骤3所述胶原肽负载于基质水凝胶的方法为：
20.步骤3.1制备海藻酸钠溶液，在完全溶胀后加入一定量的碳酸钙，将胶原肽溶液按一定比例加入，搅拌并充分分散；
21.步骤3.2加入一定量的交联剂，固化。
22.一些实施方案中，步骤3.1所述海藻酸钠溶液浓度为1～10％(质量/体积)，所述碳酸钙与海藻酸钠溶液的质量/体积比为0.1％～5％，所述胶原蛋白肽溶液与海藻酸钠溶液的比例为1：10～10：1，所述搅拌时间为5分钟～1小时。
23.一些实施方案中，步骤3.2所述交联剂为碳二亚胺盐酸盐(edc)和n-羟基丁二酰亚胺(nhs)，edc的浓度为0.1～1mol/l，nhs的浓度为0.1～3mol/l。
24.有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
25.本发明将从鱼鳞中提取胶原蛋白，酶解得到胶原蛋白肽，创造性的与海藻酸钠、碳酸钙、交联剂edc/nhs双交联实现胶原肽可控释放，从而制备得到具有缓释功能的胶原多肽海藻酸钠水凝胶，可拓展鱼鳞的医疗用途，提高鱼鳞的利用度。所制备的胶原多肽海藻酸钠水凝胶具有良好的生物安全性与促成骨活性，具有重要的应用价值。
附图说明
26.图1示(a)不同类型水凝胶的扫描电镜图像，(b-e)不同类型水凝胶的孔隙率。
27.图2示(a-d)在37℃固定应变为1％时1-100rad/s的水凝胶的频率扫描；(e-j)在37℃时不同水凝胶的溶胀比；
28.图3示sa、cp和sa-cp/ca的红外光谱；
29.图4示各组水凝胶的释放曲线；
30.图5示(a)与水凝胶共培养1天和3天的mc3t3-e1细胞的活/死染色的代表性荧光图像。活细胞染色为绿色，死亡细胞染色为红色；(b)用水凝胶孵育14天和21天后，用碱性磷酸酶染色和von kossa染色检测mc3t3-e1细胞的活力。未加水凝胶培养的细胞作为阴性对照；(c)western印迹法检测成骨相关蛋白runx2和opn的表达。定量分析：(d)活死染色统计分析；(e)碱性磷酸酶(alp)活性；(f)von kossa染色和(g)蛋白质印迹。
31.图6示尾鳍切断后第5天和第10天斑马鱼尾鳍生长，红色荧光代表骨骼生长。
32.图7示量化斑马鱼尾鳍的相对修复率即尾鳍生长长度与尾鳍宽度的比值。
具体实施方式
33.本发明公开了骨再生胶原肽缓释水凝胶及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
34.对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
35.本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
36.以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
37.实施例1胶原及胶原肽的制备及表征
38.步骤1：鱼鳞来源胶原蛋白的提取，包括以下步骤：
39.将从市场得到的鲤鱼鳞片风干，粉碎鱼鳞，使其呈现棉絮状，便于充分提取其中的胶原蛋白。随后，在40℃下用2m氢氧化钠以1：10(m/v)的比例浸泡2h。然后用蒸馏水彻底清洗氢氧化钠处理过的鱼鳞。在40℃下将鱼鳞在1：10(m/v)的2％硫酸(m/v)溶液中浸泡消化鱼鳞2h，然后用蒸馏水彻底清洗硫酸处理过的鱼鳞。然后用蒸馏水稀释1：6(m/v)，60℃水浴过夜，然后在10000g下离心45min，从混合物中分离胶原蛋白，然后用0.1m醋酸进行透析，得到鱼胶原蛋白，-80℃冷藏备用。
40.步骤2：胶原蛋白碱性蛋白酶酶解，包括以下步骤：
41.用ph＝8的0.1mmol/l磷酸缓冲溶液配制5％步骤1的鱼胶原蛋白溶液，碱性蛋白酶和底物的比例为1:10(w/w)。120分钟后得到胶原蛋白肽，在100℃加热10分钟使酶失活，然
后进一步冷却到室温，离心并提取上清液。样品密封，包装，得鱼胶原蛋白肽，在-20℃保存。
42.实施例2骨再生胶原肽缓释水凝胶的制备与表征
43.1、骨再生胶原肽缓释水凝胶的制备
44.采用一锅法制备骨再生胶原肽缓释水凝胶水凝胶。首先，制备2％(m/v)海藻酸钠溶液(sa)，在完全膨胀后加入一定量的碳酸钙，然后将实施例1的鱼胶原蛋白肽(cp)按一定比例加入，搅拌30分钟，充分分散后加入edc和nhs(edc:0.1mol/l,nhs:0.3mol/l)。为了制备具有适当机械强度的水凝胶，通过改变水凝胶的制备条件，获得了不同的水凝胶，如下表1所示，并对其理化性质进行了表征。
45.表1
[0046][0047]
2、扫描电镜
[0048]
用扫描电子显微镜(sem)观察了不同水凝胶的表面形貌，并计算了孔隙率(图1)。在低倍率下，所有支架的特征是典型的海绵状结构，由整个支架上高度相互连接的毛孔组成。这些3d多孔和相互连接的结构是显著促进新骨组织的重要结构特征。sa-cp/ca组水凝胶的孔径和孔隙率明显小于sa/cp/ca组(图1a)，水凝胶的孔变得更细，表明胶原肽与海藻酸钠的偶联形成了-coo—ca
2+
‑‑
ooc-网络结构中的第二网络结构，从而使水凝胶更加致密。随着海藻酸钠分子量的增加，海藻酸钠分子链的长度增加，分子间的缠结也增加了粘度，水凝胶网络变得更加致密，孔隙率和孔径减小(图1a)。cp含量的增加对孔隙率的影响不大，可能是由于cp的浓度增大，cp与cp的偶联增加，而与sa的偶联减少，同时减少了nhs与caco3的反应，导致孔隙率和孔径没有明显变化。(图1a)。最后，碳酸钙含量增加，释放的钙离子增加，同时大量的钙离子会与海藻酸钠的羧基螯合，形成更致密的交联网络，减少孔隙率和孔径(图1a)。由于交联方式、cp含量、碳酸钙含量和sa相对分子质量对凝胶的交联度和孔隙率
均有影响，孔隙率越小能够为血管生长的路径越少，越大会影响机械强度，因此在流变学实验中进一步考察了凝胶的机械强度。
[0049]
3、膨胀率测定
[0050]
凝胶被冻干并称量为w0。将水凝胶置于pbs溶液中使其膨胀，24小时后，用滤纸从表面排出，称重，记录为w。凝胶膨胀率按公式计算。
[0051][0052]
溶胀比是水凝胶的一个重要性质，与凝胶结构高度相关。较低的溶胀比可能会导致水较慢地渗透到水凝胶中，从而较长时间地保持水凝胶的形态和载药量。用溶胀称重法测定了不同水凝胶的溶胀性能。(图2)。sa-cp/ca的溶胀度比sa/cp/ca小一半(图3)，这是由于化学交联剂的作用。胶原肽通过酰胺键接枝到海藻酸钠上，在水凝胶中构建了一个更复杂的网络，溶胀比越大能吸收较多伤口的组织液，但会加快药物的释放和水凝胶的降解。
[0053]
4、红外表征
[0054]
使用傅里叶变换红外光谱法来表征水凝胶支架的化学成分。波数设置为4000-400cm-1
。在图3中分别观察到cp的特征酰胺a(3300cm-1
)和b(3079cm-1
)条带。sa-cp/ca在3300和2929cm-1
处有明显的特征吸收峰，表面cp已成功包覆到水凝胶中。酰胺键和胶原蛋白短链与海藻酸钠之间的非共价相互作用限制了多糖分子链的伸长，从而降低了水凝胶的溶胀性。致密的网络结构不仅减缓了cp的扩散，而且防止了水的渗透对水凝胶结构的破坏。sa相对分子质量、cp含量和caco3含量对溶胀度的影响趋势与流变学实验和孔隙率图1，2的变化趋势一致。
[0055]
5、凝胶流变性质
[0056]
所有样品均采用间隙为0.9mm，直径25mm的平行板。将0.6ml样品加载到载物台上，并将上板缓慢降低，直到达到板之间的所需间隙。动态模量的频率依赖性是在一个固定的应变振幅下使用振荡剪切变形模式获得的，对应于材料的线性粘弹性行为区域。频率范围：0.1-100rad/s，固定应变动态剪切幅值：1％，所有测量均在37℃下进行。如图2a-d所示，水凝胶在角频率范围内表现出特定的流变性，储能模数(g’)高于相应的损耗模数(g”)。通常，储存模数被认为是指示水凝胶强度的参数。与sa/cp/ca相比，sa-cp/ca的g
‘
值较高，且sa-cp/ca水凝胶的g”/g’值高于sa/cp/ca水凝胶的g”/g’值，说明cp和sa的共价键可以提高水凝胶的力学性能(图2a)。同时，sa相对分子质量的增加和caco3含量的增加都使胶原肽的储能模数迅速增加，而当cp比从2：1降到1：1时，储能模数变化不大，而当cp比进一步降低到1：2时，储能模数急剧增加，说明胶原肽在水凝胶中的负载量有限。综合选择同时具有适中孔隙率、溶胀率、释放速率以及机械性能的sa-cp/ca为最佳工艺。
[0057]
6、fitc标记的胶原蛋白肽的释放
[0058]
为了更好地比较胶原蛋白肽在两种交联水凝胶中的释放过程，使用了fitc标记的胶原蛋白肽(fitc-cp)，通过测量其在488nm激发波长、525nm发射波长的荧光强度来检测其释放率。如图4所示，sa/cp/ca和sa-cp/ca的两种不同的释放曲线显示了两种不同的药物释放模式。在sa/cp/ca曲线上，前34h出现快速释药行为。由于水凝胶内外浓度差的渗透驱动力，fitc-cp由内向外迅速扩散。在下一阶段(34～242h)，sa/cp/ca能维持较长时间的多肽释放，直到系统达到平衡，这可能归因于fitc-cp浓度差的减小。而sa-cp/ca的释药时间相
对较长，释药速率在0～242小时内较为均匀。在0～42h内，sa/cp/ca的药物释放速率约为sa-cp/ca的5.23倍。结果表明，海藻酸钠与胶原肽的edc/nhs偶联能有效地减缓fitc-cp在溶液中的扩散。由于酰胺键的逐渐断裂和水凝胶的降解，sa-cp/ca是一种潜在的胶原肽释放水凝胶体系。
[0059]
实施例2各组水凝胶的性能评分
[0060]
外观的均一性、溶胀比、流变性质及胶原肽的缓释性能都将影响胶原肽水凝胶体系的应用，因此，对各组水凝胶进行综合性能评分(表2)。根据每项性能是否满足应用需求进行0～5分的打分，完全满足为5分，完全不满足为0分，满分总和为20分。评价后发现sa-cp/ca具有最高得分，因此后续活性评价将基于sa-cp/ca进行考察。
[0061]
表2
[0062]
组别均一性溶胀比流变性质缓释性能总评sa/cp/ca450110sa60-cp/ca554014sa5000-cp/ca234514sa-cp2/ca550414sa-cp3/ca550111sa-cp/ca1550010sa-cp/ca3224513sa-cp/ca545519。
[0063]
实施例3生物相容性与成骨评价
[0064]
1、生物相容性评价
[0065]
为了研究水凝胶的生物相容性，将mc3t3-e1细胞培养在装有sa-cp/ca的transwell小室中。1天后，水凝胶的活细胞百分率与对照组相比略有下降，但无显著差异。同样，在培养3天后，所有接触水凝胶的样品的活细胞百分比都增加了，与对照组相比没有显著差异。这些观察表明，水凝胶是无细胞毒性的，进一步证实了海藻酸钠接枝胶原肽是生物相容性的，不会引起明显的细胞毒性的观点。
[0066]
2、体外成骨分化评估
[0067]
碱性磷酸酶(alp)活性和von-kossa染色检测sa-cp/ca能否诱导mc3t3-e1细胞向成骨细胞分化。碱性磷酸酶通常被认为是成骨分化的早期生化标志物，而细胞外基质钙沉积被认为是成骨分化的晚期生化标志物。如图5b所示，sa-cp/ca组较对照组有更多的alp阳性细胞，说明sa-cp/ca具有最好的成骨能力。定量分析进一步证明sa-cp/ca能显著提高alp活性(图5b)。在von kossa染色试验中也观察到了类似的趋势(图5b)。sa-cp/ca有大量的诱导矿化结节，表明其显著的矿化能力(图5f)。早期和晚期成骨分化的增强主要归因于胶原肽的释放和水凝胶中适中的钙离子浓度，这可能是刺激细胞行为的关键生化信号。
[0068]
3、成骨相关蛋白的表达检测
[0069]
如图5c所示，通过免疫印迹进一步验证所获得的结果。sa-cp/ca组opn和runx2蛋白表达最丰富，提示mc3t3-e1细胞成骨分化增强。这些有利的结果应该归因于胶原肽和钙离子从水凝胶中的持续释放，这反过来又通过促进内源性成骨因子的产生来刺激体外细胞
的矿化和分化。研究表明，钙离子以浓度依赖的方式促进间充质干细胞的增殖、迁移和成骨相关蛋白如alp、runx2和opn的表达，并在细胞外基质的形成和矿化中发挥重要作用。
[0070]
实施例4斑马鱼的饲养和手术
[0071]
采用斑马鱼尾鳍再生模型验证sa-cp/ca的成骨活性。低剂量组斑马鱼尾鳍修复长度与尾鳍宽度的比值在5dpa时比对照组高42.4％，在10dpa时比对照组高42.8％。高剂量组在5dpa时比对照组高69.4％，10dpa时比对照组高86.3％。(图6，7)。这些结果表明，sa-cp/ca对斑马鱼尾鳍切断后的再生有显著的促进作用，这主要归因于cp的持续释放。
[0072]
综上所述，本发明提供的胶原肽缓释水凝胶具有显著地促进骨损伤修复的能力。
[0073]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种骨再生胶原肽缓释水凝胶，其特征在于，它是由骨再生胶原肽与基质水凝胶制备得到。2.根据权利要求1所述的骨再生胶原肽缓释水凝胶，其特征在于，所述骨再生胶原肽包括但不限于来源于鱼鳞中的胶原蛋白。3.根据权利要求1所述的骨再生胶原肽缓释水凝胶，其特征在于，所述水凝胶包括但不限于海藻酸盐水凝胶。4.权利要求1、2或3所述的骨再生胶原肽缓释水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：以鱼鳞为原料，提取鱼胶原蛋白；步骤2：以鱼胶原蛋白为原料，酶解法制备胶原肽；步骤3：将胶原肽负载于基质水凝胶中，即得所述骨再生胶原肽缓释水凝胶。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1所述胶原蛋白的提取方法为：将鱼鳞风干、粉碎，经浸碱液浸泡、纯水清洗、酸液浸泡、纯水清洗，蒸馏水稀释后水浴过夜，离心、透析后即得所述鱼胶原蛋白。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述碱液为氢氧化钠或氢氧化钾溶液，浓度为0.1～2mol/l；所述酸液为硫酸或盐酸溶液，浓度为0.1～2mol/l；所述浸泡温度为15～50℃，所述水浴温度为25～80℃，所述离心的转速为10000～30000r/min，所述透析的醋酸溶液浓度为0.1～2mol/l。7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，以g/ml计，所述鱼鳞与碱液按质量/体积比为1:1～1:20，所述鱼鳞与酸液按质量/体积比为1:1～1:20，所述浸泡清洗之后的鱼鳞与蒸馏水按质量/体积比为1：6进行稀释。8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述胶原肽的制备方法为：用缓冲溶液配制胶原蛋白溶液，酶和底物按一定的比例混合，酶解一定时间后，加热灭活，冷却到室温，离心并提取上清液，即得所述胶原肽。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液，所述缓冲溶液的ph为3～11，浓度为0.1mmol/l，所述胶原蛋白溶液的浓度为1～10％，所述酶为碱性蛋白酶或复合蛋白酶，所述碱性蛋白酶和底物的比例为1:100～1:10，所述酶解时间为10分钟～24小时；所述灭活温度为100℃，所述离心的转速为10000～30000r/min。10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3所述胶原肽负载于基质水凝胶的方法为：步骤3.1制备海藻酸钠溶液，在完全溶胀后加入一定量的碳酸钙，将胶原肽溶液按一定比例加入，搅拌并充分分散；步骤3.2加入一定量的交联剂，固化。11.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，步骤3.1所述海藻酸钠溶液质量浓度为1～10％，所述碳酸钙与海藻酸钠溶液的质量/体积比为0.1％～5％，所述胶原蛋白肽溶液与海藻酸钠溶液的体积比例为1：10～10：1，所述搅拌时间为5分钟～1小时；步骤3.2所述交联剂为碳二亚胺盐酸盐和n-羟基丁二酰亚胺，碳二亚胺盐酸盐的浓度为0.1～1mol/l，n-羟基丁二酰亚胺的浓度为0.1～3mol/l。
12.权利要求1～3任一项所述的骨再生胶原肽缓释水凝胶在制备促进骨缺损修复的药物或保健品中的应用。

技术总结
本发明涉及医学技术领域，特别涉及一种骨再生胶原肽缓释水凝胶及其制备方法。本发明提供的缓释水凝胶由鱼鳞中的骨再生胶原肽和水凝胶结合而成。本发明提供的骨再生胶原肽缓释水凝胶具有良好的缓释性能和生物活性，体外能有效促进成骨相关细胞的增殖和分化，体内结果表明可以促进骨缺损的修复。表明可以促进骨缺损的修复。表明可以促进骨缺损的修复。


技术研发人员：韦源青 刘睿 王欣之 吴皓
受保护的技术使用者：南京中医药大学
技术研发日：2023.04.04
技术公布日：2023/7/21