CORMs在制备抗心肌纤维化药物中的应用

corms在制备抗心肌纤维化药物中的应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及corms在制备抗心肌纤维化药物中的应用。


背景技术：

2.心肌纤维化是多种心血管疾病发生发展的终末病理改变，由中～重度的冠状动脉粥样硬化性狭窄引起心肌纤维持续性和反复加重的心肌缺血缺氧所产生的结果，导致逐渐发展为心力衰竭的慢性缺血性心脏病。临床上治疗心肌纤维化较常用的是g蛋白偶联受体抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂和利尿剂，此外还可适当搭配钙通道阻滞剂和血管紧张素受体阻滞剂。这些药物联合应用可达到短期显著的治疗效果，但长期服用存在严重的毒副作用，如肾毒性、肝毒性、血糖和血脂升高以及电解质紊乱等。因此，寻找高效低毒的药物用于心肌纤维化的治疗越来越被人们重视。
3.低剂量外源性co具有抗氧化、抗炎症、抗凋亡、抗衰老及抗增殖等多种有益生物学效应、可应用于治疗急性肺损伤、药源性肝损伤、非酒精性脂肪肝、阿尔兹海默症、帕金森症和器官移植等领域。然而，co及其供体用于治疗心肌纤维化的相关研究还未见报道。


技术实现要素：

4.鉴于此，本发明的目的是提供了corms在制备抗心肌纤维化药物中的应用。
5.本发明目的是通过以下方式实现：
6.本发明提供corms在制备抗心肌纤维化药物中的应用。
7.基于上述技术方案，进一步地，所述的corms包括corm2和corm3。
8.基于上述技术方案，进一步地，所述的药物包括有效量的corms和药学上可接受的载体。
9.基于上述技术方案，进一步地，所述的药学上可接受的载体包括填充剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂、乳化剂和无毒副作用的载药载体。
10.基于上述技术方案，进一步地，所述的药物被制备成药学上允许的剂型。
11.基于上述技术方案，进一步地，所述的剂型包括片剂、颗粒剂、口服液体制剂、滴剂、注射制剂和胶囊制剂。
12.基于上述技术方案，进一步地，所述的药物以单剂量药物形式制备。
13.基于上述技术方案，进一步地，所述的单剂量药物包含1-1000mg corms。
14.基于上述技术方案，进一步地，所述的药物能够下调心肌纤维化受试者α-sma、tgf-β、胶原蛋白ⅰ和胶原蛋白ⅲ的mrna表达水平。
15.基于上述技术方案，进一步地，所述的药物能够降低心肌纤维化受试者ros的生成。
16.本发明相对于现有技术具有的有益效果如下：
17.本发明首次发现corm2能够下调心肌纤维化受试者α-sma、tgf-β、胶原蛋白ⅰ和胶原蛋白ⅲ的mrna表达水平，降低心肌纤维化受试者ros的生成，具有减缓心肌纤维化的功
能，对治疗心肌纤维化具有重要的临床指导意义，为探索低毒、高效的减缓心肌纤维化药物的开发提供了新途径。
附图说明
18.为了更清楚地说明本发明实施例，下面将对实施例涉及的附图进行简单地介绍。
19.图1为不同实验组小鼠心脏重量与体重的比值图。
20.图2为不同实验组小鼠心肌切片的masson胶原染色图，其中，a:con组，b:iso组，c:iso+corm2组，d:iso+pro组，e:corm2组。
21.图3为不同实验组小鼠心肌切片的ros染色图，其中，a:con组，b:iso组，c:iso+corm2组，d:iso+pro组，e:corm2组。
22.图4为不同实验组小鼠心肌组织纤维化相关基因tgf-β的mrna表达水平图。
23.图5为不同实验组小鼠心肌组织纤维化相关基因α-sma(a)、胶原蛋白ⅰ(b)和胶原蛋白ⅲ(c)的mrna表达水平。
具体实施方式
24.下面结合实施例对本发明进行详细的说明，但本发明的实施方式不限于此，显而易见地，下面描述中的实施例仅是本发明的部分实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，获得其他的类似的实施例均落入本发明的保护范围。
25.实施例1
26.将70只雄性8周龄c57bl/6小鼠随机分为5组：(1)实验对照组(con)：自由饮水饮食；(2)心肌纤维化模型组(iso)：腹腔注射iso(10mg/kg.day)诱导心肌纤维化；(3)药物处理组(iso+corm2)：给小鼠腹腔注射corm2(10mg/kg/day)，5天后腹腔注射iso(10mg/kg.day)，在诱导心肌纤维化期间每隔一天腹腔注射corm2(10mg/kg)，持续14天；(4)阳性对照组(iso+普萘洛尔，pro)：对小鼠腹腔注射iso(10mg/kg.day)，在诱导心肌纤维化期间每隔一天腹腔注射普萘洛尔pro(40mg/kg)，持续14天；(5)单独给药组(corm2)：与给药组同步，每隔一天腹腔注射corm2(10mg/kg)，持续14天；14天后处死小鼠。
27.上述实验组小鼠分别在处死前和处死后称量体重和心脏重量，计算心脏重量与体重的比值作为肥大指数。
28.不同实验组小鼠心脏重量与体重的比值的实验结果见图1，可以看出，与con组相比，iso组腹腔注射iso(10mg/kg.day)后小鼠心脏重量与体重的比值明显增加，而iso+corm2组的比值明显降低，为了验证corm2降低的心脏重量与体重比值是否与corm2本身相关，本实施例还做了阳性药物iso+pro组和单独corm2组，结果显示，单独corm2对心脏重量与体重的比值无明显影响(图1)。
29.masson染色：取上述实验组处死小鼠的心肌组织进行masson三色染色，具体操作步骤为：(1)切片常规脱蜡水化，用配制好的weigert铁苏木素染色5～10min；(2)用酸性乙醇分化液分化，水洗；(3)用masson蓝化液返蓝，水洗；(4)蒸馏水洗1min；(5)丽春红品红染色液染色5～10min；(6)在上述操作过程中按蒸馏水:弱酸溶液＝2:1比例配制弱酸工作液，用弱酸工作液洗1min；(7)磷钼酸溶液洗1～2min；(8)用配制好的弱酸工作液洗1min；(9)直接入苯胺蓝染色液中染色1～2min；(10)用配制好的弱酸工作液洗1min；(11)95％乙醇快速
脱水。无水乙醇脱水3次，每次5～10s；(12)二甲苯透明3次，每次1～2min。中性树胶封固。
30.不同实验组小鼠心肌切片的masson染色实验结果见图2，可以看出，与con组相比，iso组腹腔注射iso(10mg/kg.day)显示大量胶原沉积(图2a，b)，corm2(10mg/kg.day)缓解了iso所致胶原沉积(图2c)；为了验证corm2缓解胶原沉积效果是否与corm2本身相关，本实施例还做了阳性药物iso+pro组和单独corm2组，结果显示，单独corm2对心肌胶原沉积无明显影响(图2d,e)。
31.通过dcfh-da荧光探针检测上述实验组处死小鼠的心肌组织中ros含量，具体操作步骤为：(1)将低温保存的dcfh-da荧光探针冻干粉取出回至室温，低速离心使粉末落到瓶底。之后加入适量无水dmso或其他有机溶剂配制成1-10mm储存液(未用完的dmso储存液需分装并避光冻存在-20℃，避免反复冻融)；(2)于正式实验前，用生理盐缓冲液(比如：pbs，hbss，hepes)将储存液稀释到工作浓度1-10μm(需根据具体应用来调整合适的工作浓度)；(3)吸走心肌组织切片的培养液，加入步骤(2)配制的染色工作液到组织切片内，室温或30℃孵育5～60min；(4)吸走染色工作液，用预热的生理缓冲液或细胞培养液清洗一遍，滴加适量抗荧光淬灭剂后封片，荧光显微镜下观察组织ros含量。
32.不同实验组小鼠心肌切片的ros染色结果如图3所示，可以看出，与con组相比，iso组腹腔注射iso(10mg/kg.day)显示有大量ros生成(图2a，b)，corm2(10mg/kg.day)减少了ros的生成(图2c)；为了验证corm2减少ros的生成是否与corm2本身相关，本实施例还做了阳性药物iso+pro组和单独corm2组，结果显示，单独corm2对ros的生成无明显影响(图2d,e)。
33.采用实时荧光定量qrt-pcr技术检测上述实验组处死小鼠的心肌组织中tgf-β、α-sma、胶原蛋白ⅰ、胶原蛋白ⅲ的mrna表达水平，具体操作步骤为：(1)引物设计：遵循一般的引物设计原则；(2)提取rna：按照试剂盒说明书操作即可；(3)反转录：1.去除基因组dna反应：按试剂盒说明书将试剂置于冰上配制反应混合液；2.反转录反应：反应液配制在冰上进行，试剂轻柔混匀后立即进行反转录反应；(4)加样：根据试剂盒以及样品数量配制tgf-β、α-sma、胶原蛋白ⅰ、胶原蛋白ⅲ预混液，随后按照体系将样本及预混液按顺序加入96孔pcr板中，封口离心；(5)上机测定：打开软件，将pcr板放入bio-rad real-time system机器检测区，设置相应温度时间循环模板、样本名称及检测因子，点击开始等待结果数据并制图。
34.不同实验组小鼠心肌组织纤维化相关基因tgf-β的mrna表达水平如图4所示，可以看出，与对照组相比，iso组小鼠心肌组织中tgf-β的mrna水平显著升高，corm2(10mg/kg.day)对iso所致的tgf-βmrna水平升高有缓解作用(图3a)，结果显示，corm2可能会减轻iso诱导的小鼠心肌纤维化。
35.不同实验组小鼠心肌组织纤维化相关基因α-sma、胶原蛋白ⅰ和胶原蛋白ⅲ的mrna表达水平如图5所示，可以看出，与对照组相比，iso组小鼠心肌组织中α-sma、col-i和col-iii的mrna水平显著升高，corm2(10mg/kg.day)10mg/kg.day对iso所致的α-sma、col-i和col-iii mrna水平升高有缓解作用(图5a-c)。结果表明，corm2可减轻iso诱导的小鼠心肌纤维化。
36.最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进
行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

技术特征：
1.corms在制备抗心肌纤维化药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的corms包括corm2和corm3。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物包括有效量的corms和药学上可接受的载体。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的药学上可接受的载体包括填充剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂、乳化剂和无毒副作用的载药载体。5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述的药物被制备成药学上允许的剂型。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的剂型包括片剂、颗粒剂、口服液体制剂、滴剂、注射制剂和胶囊制剂。7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物以单剂量药物形式制备。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的单剂量药物包含1-1000mg corms。9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物能够下调心肌纤维化受试者α-sma、tgf-β、胶原蛋白ⅰ和胶原蛋白ⅲ的mrna表达水平。10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物能够降低心肌纤维化受试者ros的生成。

技术总结
本发明公开了CORMs在制备抗心肌纤维化药物中的应用，属于医药技术领域。本发明所述的药物包括有效量的CORMs和药学上可接受的载体，所述的CORMs包括CORM2和CORM3，包含CORMs的药物能够下调心肌纤维化受试者α-SMA、TGF-β、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的mRNA表达水平，降低心肌纤维化受试者ROS的生成，具有减缓心肌纤维化的功能，对治疗心肌纤维化具有重要的临床指导意义，为探索低毒、高效的减缓心肌纤维化药物的开发提供了新途径。化药物的开发提供了新途径。化药物的开发提供了新途径。


技术研发人员：陈颖卿 王茜茜 李佳欣 李傲寒
受保护的技术使用者：大连大学
技术研发日：2023.03.01
技术公布日：2023/7/21