一种水稻秸秆腐熟剂及其制备方法与流程

15亿cfu/g，更优选为2.0-10亿cfu/g，更优选为2.0-5亿cfu/g。
11.其中，木霉包括绿色木霉、康宁木霉、里氏木霉、哈茨木霉等。
12.芽孢菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌等。
13.优选地，所述纤维酶制剂为绿色木霉、里氏木霉和地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中两种或两种以上的混合固体发酵物。
14.优选地，所述秸秆腐熟剂为粉状剂型。
15.本发明还提供了一种上述秸秆腐熟剂的制备方法，包括以下步骤：
16.步骤1，制备黑曲霉菌粉：
17.将黑曲酶菌经固体培养基发酵后，添加吸附剂，吸附剂的重量为培养底物的10-15倍，干燥粉碎制得黑曲霉菌粉末，既得黑曲霉菌粉；
18.步骤2，制备纤维酶制剂
19.将木霉和芽孢菌中两种或多种混合固体发酵，发酵物干燥粉碎制得纤维酶制剂；
20.步骤3，制备秸秆腐熟剂
21.将制得的黑曲霉菌粉和纤维酶制剂按重量比(40-50):(20-30)混合，制得水稻秸秆发酵有机肥微生物制剂。
22.优选地，步骤1中，黑曲霉菌经两次固体培养基发酵后，制成黑曲霉菌粉末。
23.优选地，步骤1中，黑曲霉菌第一发酵条件为：20-50℃(优选为30-40℃，更优选为30-35℃)下培养3-5天，每天搅拌2-3次。
24.优选地，步骤1中，黑曲霉菌第二发酵条件为：20-50℃(优选为30-40℃，更优选为30-35℃)下培养8-10天，每天搅拌5-10次。
25.优选地，步骤1中，黑曲霉菌第一次发酵物按重量比1:(5-10)加入到第二次发酵培养基中。
26.优选地，步骤1中黑曲霉菌发酵用固体培养基包含棉籽粕10-30wt％、砻糠粉10-30wt％、花生壳35-55wt％、豆粕粉1-5wt％、尿素0.1-2wt％、磷酸氢二钠0.1-0.5wt％、硫酸镁0.1-0.5wt％和余量水。
27.优选地，步骤1中所述吸附剂选自玉米芯粉、米糠粉和轻质碳酸钙中的一种或多种。
28.其中，步骤2中所述木霉包括绿色木霉、康宁木霉、里氏木霉、哈茨木霉等。
29.其中，步骤2中所述芽孢菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌等。
30.优选地，步骤2中，将绿色木霉、里氏木霉和地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中两种或多种混合固体发酵，发酵物干燥粉碎制得纤维酶制剂。
31.优选地，步骤2中，固体发酵使用的固体发酵培养基包含麸皮50-80wt％、砻糠粉25-40wt％、硫酸铵1-5wt％、磷酸二氢钾1-5wt％、碳酸钙1-5wt％、硫酸镁0.1-1wt％、氯化钙0.1-1wt％、氯化钠0.1-1wt％。
32.本发明还提供了一种水稻秸秆腐熟剂的应用。
33.本发明提供的生物制剂中的黑曲霉菌能够快速破坏秸秆中的木质素成分，使水稻秸秆中的纤维素、半纤维素暴露出来，大大缩短了秸秆的降解时间；纤维酶制剂由绿色木霉、里氏木霉、枯草芽孢杆菌及地衣芽孢杆菌等混合培养而来，生产效率高、成本低，且产生的纤维素酶系种类多样，适用性好；本发明提供的水稻秸秆腐熟剂中细菌、真菌活菌与酶制
剂复配，腐熟过程多组分协同发挥效能，比单一菌种效果稳定、快速。
具体实施方式
34.下面结合具体的实施例对本发明提供的腐熟剂作进一步详细描述，以更好地理解本发明。
35.实施例1
36.第一步：制备黑曲霉菌粉
37.1)黑曲霉菌的原始菌种按0.5-1.0wt％接种到经120℃高温灭菌的固体培养基，30-35℃培养3-5天，ph6.3-7.0，含水率50-60％，每天均匀搅动2-3次。
38.2)将1)所得培养物底物按照重量比1:(5-10)均匀搅拌分散至灭活的固体培养基进一步培养8-10天，同时加大翻动次数，5-10次/天。
39.3)菌种培养结束，按照培养底物重量的10倍添加玉米芯粉、米糠粉和轻质碳酸钙的混合物吸附剂，干燥，粉碎，制成黑曲霉菌粉末。
40.其中，固体培养基配方如下：
41.棉籽粕20wt％、砻糠粉20wt％、花生壳45wt％、豆粕粉2wt％、尿素0.6wt％、磷酸氢二钠0.3wt％、硫酸镁0.3wt％和余量水。
42.第二步：制备纤维酶制剂
43.1)将枯草芽孢菌种接入摇瓶培养基，37℃培养12小时。摇瓶培养基配方为营养肉汤。孢子形成后冷藏备用。
44.培养基配方：玉米粉3wt％、蛋白胨1wt％、豆粕粉1wt％，尿素0.5wt％。
45.2)挑取绿色木霉和里氏木霉斜面孢子共同接入种子瓶培养基，扎好纱布，30-35℃下摇床培养48小时。
46.培养基配方：糖蜜2％、豆粕2％、蛋白胨2％、硫酸铵0.6％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸镁0.3％。
47.3)将培养结束后的液体种子和步骤1)的培养物共同接种121℃高压灭菌的浅盘固体发酵培养基，搅拌均匀。30-35℃培养8-10天。
48.固体发酵培养基配方：麸皮60％、砻糠粉32％、硫酸铵3％、磷酸二氢钾2％、碳酸钙2％、硫酸镁0.5％、氯化钙0.3％、氯化钠0.2％。
49.4)发酵结束，底物粉碎即得纤维酶系混合制剂。
50.第三步：按照重量比40:30将黑曲霉菌粉与纤维酶制剂均匀混合，制造水稻秸秆腐熟剂。
51.实施例2
52.按照实施例1所述制备黑曲霉菌粉；
53.按照实施例所述制备纤维酶制剂；
54.按照重量比50:30将黑曲霉菌粉与纤维酶制剂均匀混合，制造水稻秸秆腐熟剂。
55.实施例3
56.第一步：制备黑曲霉菌粉
57.1)将黑曲霉菌按0.5-1.0wt％接种到经120℃高温灭菌的固体培养基，30-35℃培养3-5天，ph6.3-7.0，含水率50-60％，每天均匀搅动2-3次。
58.2)将1)得到的培养物底物按照重量分1:(5-10)均匀搅拌分散至灭活的固体培养基进一步培养8-10天，同时加大翻动次数，5-10次/天。
59.3)菌种培养结束，按照培养底物重量的15倍添加玉米芯粉、米糠粉和轻质碳酸钙的混合物吸附剂，干燥，粉碎，制成黑曲霉菌粉末。
60.其中，固体培养基配方：
61.棉籽粕20wt％、砻糠粉20wt％、花生壳45wt％、豆粕粉2wt％、尿素0.6wt％、磷酸氢二钠0.3wt％、硫酸镁0.3wt％和余量水。
62.第二步：制备纤维酶制剂
63.1)将地衣芽孢菌种接入摇瓶培养基，37℃培养12小时。摇瓶培养基配方为营养肉汤。孢子形成后冷藏备用。
64.培养基配方：玉米粉4wt％、蛋白胨1wt％、豆粕粉2wt％，尿素0.5wt％。
65.2)挑取绿色木霉和里氏木霉斜面孢子共同接入种子瓶培养基，扎好纱布，30-35℃下摇床培养48小时。
66.培养基配方：糖蜜2％、豆粕2％、蛋白胨2％、硫酸铵0.6％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸镁0.3％。
67.3)将培养结束后的液体种子和步骤1)的培养物共同接种121℃高压灭菌的浅盘固体发酵培养基，搅拌均匀。30-35℃培养8-10天。
68.固体发酵培养基配方：麸皮60％、砻糠粉32％、硫酸铵3％、磷酸二氢钾2％、碳酸钙2％、硫酸镁0.5％、氯化钙0.3％、氯化钠0.2％。
69.第三步：按照重量比40:25将黑曲霉菌粉与纤维酶制剂均匀混合，制造水稻秸秆腐熟剂。
70.实施例4
71.第一步：制备黑曲霉菌粉
72.同实施例1
73.第二步：制备纤维酶制剂
74.1)将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢菌种分别接入摇瓶培养基，37℃培养12小时。摇瓶培养基配方为营养肉汤。孢子形成后冷藏备用。
75.枯草芽孢杆菌培养基配方：玉米粉3wt％、蛋白胨1wt％、豆粕粉1wt％，尿素0.5wt％。
76.地衣芽孢杆菌培养基配方：玉米粉4wt％、蛋白胨1wt％、豆粕粉2wt％，尿素0.5wt％。
77.2)挑取绿色木霉和里氏木霉斜面孢子共同接入种子瓶培养基，扎好纱布，30-35℃下摇床培养48小时。
78.培养基配方：糖蜜2wt％、豆粕2wt％、蛋白胨2wt％、硫酸铵0.6wt％、磷酸二氢钾0.3wt％、硫酸镁0.3wt％。
79.3)将培养结束后的液体种子接种121℃高压灭菌的浅盘固体发酵培养基，搅拌均匀。30-35℃培养8-10天。
80.固体发酵培养基配方：麸皮60wt％、砻糠粉32wt％、硫酸铵3wt％、磷酸二氢钾2wt％、碳酸钙2wt％、硫酸镁0.5wt％、氯化钙0.3wt％、氯化钠0.2wt％。
81.4)发酵结束，底物粉碎即得纤维酶系混合制剂。
82.第三步：按照重量比黑曲霉菌粉(45)、纤维酶制剂(30)均匀混合，制造水稻秸秆腐熟剂。

技术特征：
1.一种水稻秸秆腐熟剂，其特征在于，按重量份数计，包括：黑曲霉菌粉40-50份；纤维素酶制剂20-30份；其中，所述纤维素酶制剂为木霉菌和芽孢杆菌中两种或多种的混合固体发酵物。2.根据权利要求1所述的水稻秸秆腐熟剂，其特征在于，所述黑曲霉菌粉≥2.0亿cfu/g。3.根据权利要求1所述的水稻秸秆腐熟剂，其特征在于，所述纤维素酶制剂为绿色木霉、里氏木霉和枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中两种或两种以上的混合固体发酵物。4.根据权利要求1所述的水稻秸秆腐熟剂，其特征在于，所述水稻秸秆腐熟剂为粉状剂型。5.一种权利要求1-6中任意一项所述水稻秸秆腐熟剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将黑曲霉经固体培养基发酵后，添加吸附剂，吸附剂的重量为培养底物的10-15倍，干燥粉碎即制得黑曲霉粉末；步骤2，将木霉和芽孢菌中两种或多种混合固体发酵，发酵物干燥粉碎制得纤维素酶制剂；步骤3，将制得的黑曲霉菌粉和纤维素酶制剂按重量比(40-50):(20-30)混合，制得水稻秸秆腐熟剂。6.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤1中所述吸附剂选自玉米芯粉、米糠粉和轻质碳酸钙中的一种或多种。7.一种如权利要求1-4中任意一项所述的水稻秸秆腐熟剂在农作物水稻秸秆还田中的应用。

技术总结
本发明提供了一种水稻秸秆腐熟剂，包括黑曲霉和纤维素酶制剂，其中，所述纤维酶制剂为木霉和芽孢菌中两种或多种的混合固体发酵物。本发明提供的腐熟剂中的黑曲霉能够快速破坏水稻秸秆中的木质素成分，使水稻秸秆中的纤维素、半纤维素暴露出来，大大缩短了水稻秸秆的降解时间；纤维酶制剂由绿色木霉、里氏木霉、枯草芽孢杆菌及地衣芽孢杆菌等混合培养而来，生产效率高、成本低，且产生的纤维素酶系种类多样，适用性好；本发明提供的腐熟剂中细菌、真菌活菌与酶制剂复配，水稻秸秆降解过程多组分协同发挥效能，比单一菌种效果稳定、快速。快速。


技术研发人员：马正驰
受保护的技术使用者：申农（上海）生态农业发展有限公司
技术研发日：2022.01.06
技术公布日：2023/7/22