一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用

1.本发明涉及邻氨基苯甲酸甲酯的药理用途，特别涉及邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物(妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素)的抑菌应用。


背景技术：

2.氨基糖苷类药物是一种广谱抗菌、抑菌活性强的抗生素，但随着氨基糖苷类药物的广泛使用，猪链球菌对氨基糖苷类药物的耐药率逐年增高，这意味着临床使用氨基糖苷类药物治疗猪链球菌感染的效率大幅下降。
3.猪链球菌(streptococcus suis，s.suis)是世界范围内重要的人畜共患病原体，2型血清型的猪链球菌因其强毒力，已被世界动物卫生组织归为b群动物疫病。猪链球菌自然栖息于猪的上呼吸道，可随空气或从伤口介入而感染人类，导致败血症、中毒、性休克综合征。
4.邻氨基苯甲酸甲酯(ma)是一种带有芳香气味的植物提取物，天然存在于葡萄和草莓中，已被食品加工业广泛用于制备香精和食品添加剂，目前已被发现可以通过该群体感应抑制细菌的生物被膜感染。
5.目前，治疗猪链球菌生物被膜感染的常用氨基糖苷类药物有妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素。但抗生素的长期使用已引起了细菌耐药的产生，减少抗生素的滥用刻不容缓，因此寻找一种能够显著抑制猪链球菌生长的方法十分必要。


技术实现要素：

6.本发明的主要目的是提供一种能够有效抑制猪链球菌的联合药物，有望为耐药猪链球菌感染的治疗提供新的途径。
7.本发明所要解决的上述技术问题是通过以下技术方案达成的：本发明人经过实验发现邻氨基苯甲酸甲酯可联合氨基糖苷类药物抑制猪链球菌的生长，并且对猪链球菌有显著杀伤效果。
8.本发明人基于国际标准推行的标准微量稀释法测定的结果显示，邻氨基苯甲酸甲酯对猪链球菌的mic值为4μl/ml，妥布霉素对猪链球菌的mic值为8μg/ml，阿米卡星对猪链球菌的mic值为40μg/ml，庆大霉素对猪链球菌的mic值为8μg/ml，新霉素对猪链球菌的mic值为40μg/ml，卡那霉素对猪链球菌的mic值为40μg/ml。
9.本发明进一步测量了邻氨基苯甲酸甲酯和妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素对猪链球菌的联合抑菌指数(fractional inhibitory concentration index,fici)，本技术采用如下技术方案：一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用，包括妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素在治疗猪链球菌感染的药物的用途。
10.进一步，所述邻氨基苯甲酸甲酯在猪链球菌感染中用于联合氨基糖苷类药物的给药治疗。
11.进一步，所述联合用药组合物为邻氨基苯甲酸甲酯和氨基糖苷类药物两种单独药物的组合施用，在猪链球菌感染中用于联合氨基糖苷类药物的给药治疗。
12.进一步，所述联合用药组合物为邻氨基苯甲酸甲酯和氨基糖苷类药物两种单独药物的同时施用，在猪链球菌感染中用于联合氨基糖苷类药物的给药治疗。
13.并通过活菌技术，测定邻氨基苯甲酸甲酯联合妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素情况下，发现邻氨基苯甲酸甲酯与妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素有良好的协同效果，对猪链球菌的杀伤情况，结果显示，1/4mic及1/8mic的邻氨基苯甲酸甲酯与妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素有良好的联合效果，对猪链球菌杀伤效果显著。
附图说明
14.附图1是邻氨基苯甲酸甲酯联合妥布霉素对猪链球菌的杀伤；
15.附图2是邻氨基苯甲酸甲酯联合阿米卡星对猪链球菌的杀伤；
16.附图3是邻氨基苯甲酸甲酯联合庆大霉素对猪链球菌的杀伤；
17.附图4是邻氨基苯甲酸甲酯联合新霉素对猪链球菌的杀伤；
18.附图5是邻氨基苯甲酸甲酯联合卡那霉素对猪链球菌的杀伤。
具体实施方式
19.下面通过具体实施方案对本发明进行进一步的说明，但应该理解的是下所述实例仅属范例，不对本发明的保护范围构成限制。
20.实施例1
21.邻氨基苯甲酸甲酯、妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素对猪链球菌最小抑菌浓度(mic)的实验；
22.在超净台中进行实验操作，每块96孔板，每孔加100μl的tsb，在第2列分别加入100μl邻氨基苯甲酸甲酯、妥布霉素(1280μg/ml)、阿米卡星(1280μg/ml)、庆大霉素(1280μg/ml)、卡那霉素(1280μg/ml)、新霉素(1280μg/ml)，采用微量倍比稀释法，一直稀释到第12列，最后一个孔弃去100μl。每孔加入100μl猪链球菌菌液，将96孔板盖好，用保鲜膜包裹，放入37℃恒温培养箱中培养，24h后观察结果，无菌的药物浓度即为药物对猪链球菌的mic。测定结果见表1，结果表明邻氨基苯甲酸甲酯、妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素对猪链球菌的mic分别为4μl/ml、8μg/ml、40μg/ml、8μg/ml、40μg/ml、40μg/ml。
23.表1药物对猪链球菌的最小抑菌浓度结果：
[0024][0025]
实施例2
[0026]
邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类对猪链球菌的联合抑菌指数(fici)测定
[0027]
使用96孔板测定fici，于每块96孔板中加入100μl的tsb，分别于第二列加入妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素使其终浓度分别为32μg/ml、160μg/ml、32μg/ml、160μg/ml、160μg/ml，倍比稀释至第12列，弃去100μl。每孔加入100μl倍比稀释过的猪链球菌菌液，最后于b～g行分别加入邻氨基苯甲酸甲酯使其终浓度分别为4μl/ml、2μl/ml、1μl/ml、0.5μl/ml、0.25μl/ml、0.125μl/ml、0.06μl/ml，h行不添加邻氨基苯甲酸甲酯。37℃恒温培养箱内培养24h，取无细菌生长的孔进行分析。fici＝药a联用mic/药a单用mic+药b联用mic/药b单用mic。fic≤0.5为有协同作用；0.5《fic≤4为无关作用；fic》4为拮抗作用。
[0028]
结果如表2～6所示，1/4mic和1/8mic的邻氨基苯甲酸甲酯与妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素均有显著的协同效果。
[0029]
表2邻氨基苯甲酸甲酯与妥布霉素的联合抑菌指数：
[0030][0031]
表3邻氨基苯甲酸甲酯与阿米卡星的联合抑菌指数：
[0032][0033]
表4邻氨基苯甲酸甲酯与庆大霉素的联合抑菌指数：
[0034][0035]
表5邻氨基苯甲酸甲酯与新霉素的联合抑菌指数：
[0036][0037]
表6邻氨基苯甲酸甲酯与卡那霉素的联合抑菌指数：
[0038][0039]
实施例3
[0040]
邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物对猪链球菌的杀伤
[0041]
取装有3mltsb的试管若干，分别于试管中加入不同浓度的邻氨基苯甲酸甲酯，使
其终浓度分别为1/4mic、1/8mic，再分别加入妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素。每个试管内加入30μl猪链球菌菌液(od＝0.8)，无药物添加的为对照组，一式三份，放于180rpm37℃的摇床中培养，每隔2h取出各药物浓度的试管三支，取出100μl加入装有900μlpbs的ep管内，进行倍比稀释，最后取稀释过的菌液100μl，于tsa固体平板进行涂布，放于37℃恒温培养箱，培养24h，取30-300个菌落数的结果作为最终数据；
[0042]
测定结果如图1所示，1/4mic、1/8mic浓度的邻氨基苯甲酸甲酯分别联合0.5μg/ml、1μg/ml和2μg/ml妥布霉素均显著抑制了猪链球菌的正常生长。
[0043]
如图2所示，1/4mic、1/8mic浓度的邻氨基苯甲酸甲酯分别联合2.5μg/ml、5μg/ml阿米卡星对猪链球菌的杀伤效果显著。
[0044]
如图3所示，1/4mic浓度的邻氨基苯甲酸甲酯联合2μg/ml的庆大霉素显著抑制了猪链球菌的正常生长。
[0045]
如图4所示，1/4mic、1/8mic浓度的邻氨基苯甲酸甲酯分别联合2.5μg/ml、5μg/ml新霉素对猪链球菌的杀伤效果显著。
[0046]
如图5所示，1/4mic、1/8mic浓度的邻氨基苯甲酸甲酯分别联合5μg/ml、10μg/ml卡那霉素对猪链球菌的杀伤效果显著。
[0047]
综上所述，邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物(妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素)对猪链球菌有显著的抑制效果，可以大幅提高妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素的药物效果，且大幅度减少了妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、新霉素、卡那霉素的药物用量，能够作为一种联合用药方法在预防和治疗猪链球菌感染疾病中得到应用。

技术特征：
1.一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用，其特征在于：包括妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素在治疗猪链球菌感染的药物的用途。2.根据权利要求1所述的一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用，其特征在于：所述邻氨基苯甲酸甲酯在猪链球菌感染中用于联合氨基糖苷类药物的给药治疗。3.根据权利要求2所述的一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用，其特征在于，所述联合用药组合物为邻氨基苯甲酸甲酯和氨基糖苷类药物两种单独药物的组合施用，在猪链球菌感染中用于联合氨基糖苷类药物的给药治疗。4.根据权利要求2所述的一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用，其特征在于：所述联合用药组合物为邻氨基苯甲酸甲酯和氨基糖苷类药物两种单独药物的同时施用，在猪链球菌感染中用于联合氨基糖苷类药物的给药治疗。

技术总结
本申请涉及本发明涉及邻氨基苯甲酸甲酯的药理用途领域，且公开了一种邻氨基苯甲酸甲酯联合氨基糖苷类药物的抑菌应用，旨在提供邻氨基苯甲酸甲酯联合妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素在治疗猪链球菌感染的药物的用途。本发明采用通过标准微量稀释法发现邻氨基苯甲酸甲酯与氨基糖苷类联合使用对猪链球菌有显著杀伤作用，通过活菌技术，测定邻氨基苯甲酸甲酯联合妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素情况下，对猪链球菌的杀伤情况，结果发现邻氨基苯甲酸甲酯作为辅助药物，可显著减少氨基糖苷类抗生素的使用量，有利于新型、高效的抗耐药猪链球菌药物的研发。发。发。


技术研发人员：汪洋 高树基 易力 易昭宇 左静 张小玲 王少辉 张慧 王瑜欣 李金朋
受保护的技术使用者：河南科技大学
技术研发日：2023.04.21
技术公布日：2023/7/25