一株防治稻飞虱的生防菌及其应用

1.本发明属于生物农药领域，具体涉及一株防治稻飞虱的生防菌及其应用。


背景技术：

2.稻飞虱是水稻上的重大害虫，常因其迁飞习性暴发成灾。由于化学杀虫剂的大量持续、不合理施用等原因，稻飞虱已对各类杀虫剂产生抗药性。目前稻飞虱对常用的主打药剂如扑虱灵、毒死蜱、噻虫嗪、吡蚜酮、吡虫啉、噻嗪酮等均已产生百倍至千倍的高水平抗性，致使农药使用效果下降，使用剂量及频次逐年上升，陷入恶性循环。以菌治虫是一项有效的生物防治技术，虫生真菌能在农作物害虫间引起广泛流行病，且具有高度选择性、多数对人畜安全、对害虫天敌无危害、也不会对环境造成污染，对推动农业绿色发展具有重大作用。目前，中国农药信息网上登记的防治稻飞虱的虫生真菌仅金龟子绿僵菌cqma421一种，种类单一。


技术实现要素：

3.有鉴于此，本发明的目的在于提供一株防治稻飞虱的生防菌及其应用。
4.本发明目的是通过如下技术方案实现的：一株防治稻飞虱的生防菌，所述生防菌分类命名为草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc，已于2022年12月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmccno.40461，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
5.上述一株生防菌在防治稻飞虱中的应用。
6.一种生防菌剂，其包含上述的生防菌草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc的分生孢子粉。
7.上述一种生防菌剂在防治稻飞虱中的应用。
8.一种防治水稻稻飞虱的方法，其是将上述的生防菌剂喷施到水稻上。
9.本发明的显著优点在于：本发明生防菌草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc能够有效侵染稻飞虱，田间试验测定防治效果表明，生防菌草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc的孢子悬浮液对稻飞虱有较明显的防治效果，防效可达66％。
附图说明
10.图1：草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc在cya培养基上的菌落特征。左为菌落正面，右为菌落背面。
11.图2：草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc的显微结构特征。左为分生孢子梗，右为分生孢子。
12.图3：草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc对褐飞虱的侵染。左为褐飞虱若虫感病症状，右为褐飞虱成虫感病症状。
具体实施方式
13.为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
14.实施例1：fs-pnc的分离用胶水将褐飞虱罹病虫体粘附于锡纸上，装于垫有滤纸的培养皿中，28℃保湿培养，待褐飞虱虫体长满分生孢子后，用该粘附有褐飞虱虫体的锡纸对装有pda培养基的三角瓶进行封口、粘附有褐飞虱虫体的一面朝向三角瓶内部，12小时后移走锡纸，用硅胶塞塞住三角瓶瓶口，继续培养3天后，挑取菌落接种于pda平板上继续培养，7天后从平板上收集孢子用0.05％吐温80配制成孢子悬浮液，转移到装有玻璃珠的三角瓶中120rpm振荡2～3小时，以使分生孢子充分分散，然后稀释成不同梯度浓度进行单孢分离，所得菌株喷雾接种于活的褐飞虱上，挑选出对褐飞虱致病力最强的菌株，命名为fs-pnc。
15.实施例2：fs-pnc的鉴定1、菌株形态鉴定菌株fs-pnc在不同培养基上的形态特征如下所示：在查氏酵母精琼脂培养基(cya)上25℃培养7d，菌落直径53～55mm，较厚，表面具少数辐射状隆起条纹，边缘整齐；质地绒状；分生孢子结构灰绿色；菌落边缘呈白色；具无色渗出液；可溶性色素无；无特殊气味，背面亮象牙色(ral1015)；在查氏酵母精琼脂培养基(cya)上30℃培养7d，菌落直径62～65mm，平坦，中央分生孢子结构灰色；无渗出物；在查氏酵母精琼脂培养基(cya)上37℃培养7d，菌落直径35～41mm，表面具不规则辐射状沟纹，无渗出物；在查氏酵母精琼脂培养基(cya)上5℃培养7d，未生长。
16.在麦芽精琼脂(mea)培养基上25℃培养7d，菌落直径47～52mm，较厚，质地绒状；菌落具不明显轮纹，中央具粒状白色菌体，边缘的菌丝体白色，分生孢子灰绿色，渗出物无色，无可溶性色素，背面浅黄色(ral1001)。
17.在yes平板上25℃培养7d，菌落直径51～54mm，较厚，表面具规则辐射状沟纹(18-22条)，边缘整齐；质地绒状；分生孢子灰绿色；菌落中央具棉絮状白色菌体，菌落边缘整齐，呈白色；具无色渗出液；可溶性色素无；背面浅黄色(ral1001)。
18.在dg18平板上25℃培养7d，菌落直径23～24mm，较厚，边缘整齐；质地绒状；分生孢子灰绿色；菌落边缘整齐，呈白色；渗出物和可溶性色素无；背面亮象牙色(ral1015)。
19.在crea平板上25℃培养7d，菌落直径18～19mm，薄，产酸能力差。
20.在燕麦琼脂(oa)培养基上25℃培养30d，未见有菌核产生。
21.产孢结构帚状枝双轮生，偶尔单轮生；分生孢子椭球形，链状排列，壁光滑。
22.2、菌株its序列测定将从菌株fs-pnc中扩增的its序列数据(seq id no.1)提交genbank，利用ncbi网站上的在线软件blast进行同源性比对，fs-pnc菌株与草酸青霉(penicillium oxalicum)a28的同源性最高，超过99％，初步鉴定fs-pnc菌株为草酸青霉(penicillium oxalicum)。于2022年12月26日将fs-pnc菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类命名为草酸青霉(penicillium oxalicum)fs-pnc，保藏编号为cgmcc no.40461，保藏地址为北京市
朝阳区北辰西路1号院3号。
23.实施例3：fs-pnc的应用fs-pnc产孢培养基配方及培养方法：产孢平板培养基配方：麦麸20g，米糠20g，琼脂20g，水1000ml；121℃灭菌20min。
24.固相发酵培养基配方：以重量计麦麸﹕米糠﹕玉米粉﹕稻壳＝1﹕1﹕1﹕1，加水至含水量为65％；121℃灭菌45min。
25.孢子种子液的制备：将fs-pnc在产孢平板培养基上28℃培养7天以产生大量分生孢子，从平板上收集分生孢子并用0.1％吐温-80配制成悬浮液，振荡以使分生孢子充分分散，而后调整分生孢子浓度至108孢子/ml，得到孢子种子液，备用。
26.接种及培养方法：将固相发酵培养基平铺于不锈钢托盘里，厚度100mg/cm2，然后用上述得到的孢子种子液喷雾接种，接种量100ml/m2，接种后用保鲜膜封面保湿培养，28℃黑暗培养5d后揭去保鲜膜，换成报纸覆盖继续培养2d，培养结束后转移至34士1℃下通风干燥24h，过150目过筛，得到fs-pnc分生孢子粉，加水配制成均匀的混悬液，用喷雾器于田间喷雾用于防治稻飞虱。
27.水稻品种为宜优673，每小区种植面积66.7m2，设5个处理1个清水对照，每处理3个重复，随机区组排列。施药时间为夜晚20点后。药剂与亩用量如下：处理药剂药量(ml)t1fs-pnc70亿孢子/ml90t2fs-pnc80亿孢子/ml90t3fs-pnc90亿孢子/ml90t4金龟子绿僵菌80亿孢子/ml90t50.3％苦参碱150ck清水150计算公式：虫口减退率＝(药前活虫数-药后活虫数)/药前活虫数
×
100％；校正防效＝[1-(对照区处理前虫口基数
×
处理区药后虫口数)/(对照区处理后虫口数
×
处理区药前虫口基数)]
×
100。
[0028]
结果如下表所示，fs-pnc对稻飞虱防治效果明显。
[0029]
注：表中数据为3次重复的平均值,同一列中小写字母表示5％差异显著性，**表示各处理与对照相比达极显著水平。
[0030]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

技术特征：
1.一株防治稻飞虱的生防菌，其特征在于：所述生防菌分类命名为草酸青霉（penicillium oxalicum）fs-pnc，已于2022年12月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc no.40461，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.如权利要求1所述的生防菌在防治稻飞虱中的应用。3.一种生防菌剂，其特征在于：所述生防菌剂包含权利要求1所述的生防菌的分生孢子粉。4.如权利要求3所述的生防菌剂在防治稻飞虱中的应用。5.一种防治水稻稻飞虱的方法，其特征在于：将权利要求3所述的生防菌剂喷施到水稻上。

技术总结
本发明提供一株防治稻飞虱的生防菌及其应用。所述生防菌分类命名为草酸青霉（Penicillium oxalicum）FS-PNC，已于2022年12月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.40461。采用本发明生防菌草酸青霉（Penicillium oxalicum）FS-PNC的孢子悬浮液喷施到水稻上，对稻飞虱的田间防效可达到66%，表明该生防菌在防治稻飞虱中具有良好的应用前景。有良好的应用前景。


技术研发人员：张居念
受保护的技术使用者：福建省农业科学院水稻研究所
技术研发日：2023.05.06
技术公布日：2023/7/25