贝莱斯芽孢杆菌OUC-BV1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用的制作方法

贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用
技术领域
1.本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用，属于微生物技术领域。


背景技术：

2.水产养殖业是世界上重要的产业之一。在水产养殖过程中经常会发生水产养殖病害，造成巨大损失。引发水产养殖病害的主要原因有细菌、真菌、寄生虫等，其中，水产病原菌因其种类繁多，繁殖速度快，传播范围广，成为危害水产养殖业的主要原因。
3.目前，由于抗生素的抑菌谱广且治疗效果明显，抗生素被广泛使用甚至滥用，产生了多种抗生素耐药性菌株，危害动物及人类健康，成为21世纪全球最紧迫的公共健康问题之一，急需更加安全、绿色的物质来替代抗生素。天然抗生素的来源主要有微生物、动物和植物，由于微生物源的抗生素更加安全和高效，因此微生物成为替代抗生素的理想材料。
4.贝莱斯芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，它种分类地位的确定较晚，最早在1999年被分离到，直到2005年被首次报道和命名。近年来，对贝莱斯芽孢杆菌的研究越来越多，贝莱斯芽孢杆菌可以处理和预防偶氮染料废水污染，增加风味物质的种类，具有广谱抑菌活性和促生长作用等优点，在食品、医疗、农业、工业环境等领域具有广泛应用。现有技术中有关于贝莱斯芽孢杆菌抑制水产病原菌的报道，比如：cn 108676756 a公开了一种贝莱斯芽孢杆菌，保藏编号为gdmcc no.60344，该菌具有广谱拮抗水产常见病原菌功能，能有效抑制无乳链球菌、海豚链球菌、鰤鱼诺卡氏菌、嗜水气单胞菌、舒氏气单胞菌和迟缓爱德华氏菌等病原菌的生长。cn 110438044 a公开了一种贝莱斯芽孢杆菌yfi-4，保藏编号为cctcc no：m2019653，对水产病原菌：维氏气单胞菌、嗜水气气单胞菌、荧光假单胞菌、鲁氏耶尔森菌、脑膜败血伊丽莎白菌、恶臭假单胞菌具有良好的抑制作用。但这些菌均不能同时对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌有抑制活性(尤其是哈维氏弧菌)，且在特定使用环境(比如高温)下有局限性。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术，本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1。本发明还提供了其在制备水产病原菌抑制剂中的应用。本发明还提供了一种水产病原菌抑制剂。
6.本发明是通过以下技术方案实现的：
7.一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.26580，保藏日期：2023年02月20日。
8.所述贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的生物学特征为：革兰氏阳性菌，菌体短杆状，单个排列，不运动；菌落3～4mm，圆形，凸起，乳白色，较粘稠，边缘整齐，表面凸起有褶皱。
9.所述贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1在制备水产病原菌抑制剂中的应用。
10.进一步地，所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。更进一步地，所述水产病原菌为大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌。
11.进一步地，具体应用时，培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1得发酵液，离心得发酵上清液，该发酵上清液即可作为水产病原菌抑制剂进行应用，可进行适当浓缩或稀释，可添加常见的辅料、载体等制成各种常见剂型，比如水剂、片剂。
12.更进一步地，所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1所采用的培养基的组分组成为：碳源1～30g/l，氮源5～30g/l，nacl 1～10g/l，谷氨酸钠1～7g/l，培养基初始ph为4～9；所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、玉米粉、马铃薯淀粉中的任意一种或两种以上；所述氮源选自蛋白胨、牛肉膏、玉米浆粉、工业用酵母粉中的任意一种或两种以上。优选的，培养基的组分组成为：玉米粉5g/l，工业酵母粉15g/l，nacl 7g/l，谷氨酸钠5g/l，培养基初始ph为7。
13.更进一步地，所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的培养条件为：接种量1％～6％，培养温度20～42℃，发酵时间12～72h。优选的，培养条件为：接种量2％，培养温度30℃，发酵时间48h。
14.更进一步地，所述离心的条件为：在4℃、11000rpm条件下离心20min。
15.一种水产病原菌抑制剂，是通过以下方法制备得到的：培养上述贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1得发酵液，离心得发酵上清液，即为水产病原菌抑制剂；所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。所述培养条件同上。该水产病原菌抑制剂中含有脂肽类物质c14iturina，c15iturina，c16mycosubtilin和bacilysin，对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌均具有抑菌活性，且温度稳定性高，能耐高温，试验表明，在20℃下76h内可保持95％以上的抑菌活性，在40℃下96h内可保持65％的抑菌活性，在60℃下6h内可保持85％以上的抑菌活性，在80℃下6h内可保持50％的抑菌活性，即使在100℃的高温下1h时仍可保留70％的抑菌活性。
16.所述水产病原菌抑制剂在抑制水产病原菌中的应用。
17.本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，是从海洋中分离获得的，具有较强抑菌活性，具有普遍抑菌活性，对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌(这4种病原菌是常见的病原菌，它们的存在常常给水产养殖带来麻烦)均具有抑菌活性，且能耐高温，在100℃条件下仍有较高的抑菌活性，可以在特定环境下应用。本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，与现有技术中的用于抑制水产病原菌的贝莱斯芽孢杆菌相比，抑菌谱更广，比如：贝莱斯芽孢杆菌dh82仅能抑制哈维氏弧菌和嗜水气单胞菌，贝莱斯芽孢杆菌wlys39仅能抑制嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌，贝莱斯芽孢杆菌rs6-14仅能抑制大肠杆菌。
18.贝莱斯芽孢杆菌通过合成具有抑菌活性的次级代谢产物来抑制病原菌的生长，次级代谢产物主要包括细菌素、抑菌蛋白、脂肽类和聚酮类物质。它们发挥作用的方式主要有破坏细胞壁、控制关键的dna和rna以及抑制酶活性。其中抗菌脂肽发挥了重要作用，贝莱斯芽孢杆菌产生的脂肽类物质包括表面活性素、伊枯草菌素、丰原素、杆菌霉素等。
19.本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，抑菌谱广，抑菌效果显著，有望开发成天然抗生素产品，在水产养殖及饲料替抗领域有潜在的应用价值和巨大的市场需求。
20.本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。
附图说明
21.本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.26580，保藏日期：2023年02月20日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
22.图1：不同碳源条件下的抑菌圈直径测定结果示意图。
23.图2：不同玉米粉浓度下的抑菌圈直径测定结果示意图。
24.图3：不同氮源条件下的抑菌圈直径测定结果示意图。
25.图4：不同工业酵母粉浓度下的抑菌圈直径测定结果示意图。
26.图5：不同nacl浓度下的抑菌圈直径测定结果示意图。
27.图6：不同谷氨酸钠浓度下的抑菌圈直径测定结果示意图。
28.图7：不同接种量下的抑菌圈直径测定结果示意图。
29.图8：不同初始ph下的抑菌圈直径测定结果示意图。
30.图9：不同温度下的抑菌圈直径测定结果示意图。
31.图10：不同发酵时间下的抑菌圈直径测定结果示意图。
32.图11：不同温度处理后的抑菌活性测定结果示意图。
33.图12：抗菌脂肽提取物c14iturina的质谱图。
34.图13：抗菌脂肽提取物c15iturina的质谱图。
35.图14：抗菌脂肽提取物c16mycosubtilin的质谱图。
36.图15：抗菌脂肽提取物bacilysin的质谱图。
具体实施方式
37.下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域技术人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
38.下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法、检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法、检测方法。
39.本发明中所涉及的百分数，若无特别说明，均指重量百分数。
40.本发明实施例中所采用的培养基的组分组成如下：
41.lb培养基：0.5％(w/v，g/ml)酵母提取物，1％蛋白胨，1％nacl，2％琼脂粉(固体培养基时加入)，余量为水。
42.nb培养基：0.5％(w/v，g/ml)牛肉膏，1％蛋白胨，0.5％nacl，2％葡萄糖，余量为水。
43.10
×
种子培养基：7％蛋白胨，2％酵母粉，2％葡萄糖，6％nacl，0.06％kcl，0.5％mgcl2
·
6h2o，余量为水。
44.实施例1贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的获得
45.采集深海海水样品(采集地点是山东省青岛市黄海海域，采集时间2021年9月，采集人董格菲，联系方式15650172996)，取100μl样品均匀涂布于lb固体平板，于30℃倒置培
养24h，挑取形态不一致的菌落进行四区划线，得到单菌落。挑取单菌落，接种在lb液体培养基(每份5ml)，在30℃下培养48h。在含有大肠杆菌的lb平板上打孔，每个孔洞里加入80μl的菌液，将平板置于37℃下过夜培养，观察是否产生透明圈。经过比较，得到了一株编号为ouc-bv1的菌株，其对大肠杆菌具有良好的抑菌活性，透明圈清晰可见。经检测，其为革兰氏阳性菌，菌体短杆状，单个排列，不运动；菌落3～4mm，圆形，凸起，乳白色，较粘稠，边缘整齐，表面凸起有褶皱。经鉴定，该菌为贝莱斯芽孢杆菌，本发明将该菌株命名为贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，并进行了保藏，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.26580，保藏日期：2023年02月20日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
46.实施例2贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的培养
47.(1)贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1种子液的制备：
48.用无菌枪头挑取lb固体培养基上的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1单菌落至种子培养基，37℃，220rpm液体培养12h，得到种子液。
49.(2)贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1发酵液的制备：
50.将种子液以2％(体积比)的接种量接种至nb培养基，37℃，摇床220rpm培养48h，得发酵液；发酵液在4℃、11000rpm条件下离心20min，得发酵上清液，发酵上清液过0.22μm滤膜，得无菌发酵滤液。
51.实施例3贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的抑菌功能测定
52.取4份lb液体培养基(每份5ml)，分别接入大肠杆菌(escherichia coli，由北京英惠尔生物技术有限公司提供)、嗜水气单胞菌(aeromonas hydrophila，由北京英惠尔生物技术有限公司提供)、维氏气单胞菌(aeromonas veronii，由北京英惠尔生物技术有限公司提供)、哈维氏弧菌(vibrioharveyi，由北京英惠尔生物技术有限公司提供)，37℃、220rpm培养至od
600
为0.4。
53.分别取100μl菌液涂布于不同的固体lb平板上，在每个平板上用蓝枪头打两个孔，其中一个孔中加入100μl贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1无菌发酵滤液(实施例2制备)，另一个孔中加入100μl无菌水作为对照。平板在4℃正放12h以使滤液扩散，然后在37℃培养9h。观察抑菌效果，测抑菌圈直径，结果如表1所示。
54.表1
[0055][0056]
由表1可见，贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、哈维氏弧菌具有抑制效果，且其对大肠杆菌的抑菌效果高于现已公开的贝莱斯芽孢杆菌wr8(wr8对大肠杆菌的抑菌圈直径平均为13mm)、贝莱斯芽孢杆菌t-d-1(t-d-1对大肠杆菌的抑菌圈直径平均为14.57mm)，对哈维氏弧菌的抑菌效果高于现已公开的贝莱斯芽孢杆菌
dh82(dh82对哈维氏弧菌的抑菌圈直径平均为11.53mm)。
[0057]
实施例4培养条件的优化
[0058]
将贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1种子液接种至发酵培养基中，采用单因素试验对培养基组分、培养条件进行优化，以发酵上清液对大肠杆菌的抑菌圈直径大小(每组重复3次，取平均值)为指标。
[0059]
初始的条件为：
[0060]
发酵培养基(以葡萄糖为碳源，以蛋白胨为氮源，以nacl为无机盐，并加入牛肉膏)组分组成：葡萄糖20g/l，蛋白胨10g/l，nacl 5g/l，牛肉膏5g/l，培养基初始ph为7。
[0061]
初始的培养条件为：接种量2％，培养温度37℃，发酵时间48h。
[0062]
(一)培养基组分的优化
[0063]
(1)最优碳源及浓度的筛选
[0064]
将初始的“葡萄糖20g/l”分别替换为20g/l的葡萄糖、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、玉米粉、马铃薯淀粉。抑菌圈直径测定结果如图1所示。由图可见，玉米粉为最优碳源。
[0065]
将“玉米粉20g/l”分别替换为浓度梯度1g/l、2.5g/l、5g/l、10g/l、15g/l、20g/l、25g/l、30g/l的玉米粉。抑菌圈直径测定结果如图2所示。由图可见，玉米粉的最优浓度是5g/l，按此条件抑菌圈直径可达16.25
±
0.29mm。
[0066]
(2)最优氮源及浓度的筛选
[0067]
将初始的“蛋白胨10g/l”分别替换为10g/l的蛋白胨、牛肉膏、玉米浆粉、工业用酵母粉。抑菌圈直径测定结果如图3所示。由图可见，工业酵母粉为最优氮源。
[0068]
将“工业酵母粉10g/l”分别替换为5g/l、10g/l、15g/l、20g/l、25g/l、30g/l的工业酵母粉。抑菌圈直径测定结果如图4所示。由图可见，工业酵母粉的最优浓度是15g/l，按此条件抑菌圈直径可达17.17
±
0.29mm。
[0069]
(3)最优nacl浓度的筛选
[0070]
将初始的“nacl 5g/l”分别替换为1g/l、3g/l、5g/l、7g/l、9g/l、10g/l的nacl。抑菌圈直径测定结果如图5所示。由图可见，nacl的最优浓度是7g/l，按此条件抑菌圈直径可达17.5
±
0.5mm。
[0071]
(4)最优谷氨酸钠浓度的筛选
[0072]
将初始的“牛肉膏5g/l”分别替换为1g/l、3g/l、5g/l、7g/l的谷氨酸钠。抑菌圈直径测定结果如图6所示。由图可见，谷氨酸钠的最优浓度是5g/l，按此条件抑菌圈直径可达18.33
±
0.58mm。
[0073]
(二)培养条件的优化
[0074]
(1)最优种子液接种量的筛选
[0075]
将初始的“接种量2％”分别替换为接种量为1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％的接种量。抑菌圈直径测定结果如图7所示。由图可见，最优接种量为2％，按此培养条件抑菌圈直径可达18.33
±
0.73mm。
[0076]
(2)最优初始ph的筛选
[0077]
将初始的“培养基初始ph为7”分别替换为ph为4、5、6、7、8、9。抑菌圈直径测定结果如图8所示。由图可见，最优初始ph为7，按此培养条件抑菌圈直径可达18.5
±
0.2mm。
[0078]
(3)最优发酵温度的筛选
[0079]
将初始的“培养温度37℃”分别替换为20℃、25℃、30℃、37℃、42℃。抑菌圈直径测定结果如图9所示。由图可见，最优发酵温度为30℃，按此培养条件抑菌圈直径可达24
±
1mm。
[0080]
(4)最优发酵时间的筛选
[0081]
将初始的“发酵时间48h”分别替换为12、24、36、48、60、72h。抑菌圈直径测定结果如图10所示。由图可见，最优发酵时间为48h，按此培养条件抑菌圈直径可达24
±
0.2mm。
[0082]
通过上述单因素试验结果可知，最优培养基组分为玉米粉5g/l，工业酵母粉15g/l，nacl7g/l，谷氨酸钠5g/l；最优培养条件是接种量2％，初始ph为7，培养温度30℃、发酵时间48h。在最优组分和最优培养条件下，抑菌圈直径可达24mm。
[0083]
实施例5不同温度对贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1及其发酵上清液抑菌效果的影响
[0084]
(1)不同温度对贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1生长情况的影响
[0085]
取贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的发酵液(按实施例4的最优条件培养得到的发酵液)1ml，装入2ml灭菌离心管中，分别置于60℃、80℃、100℃条件下培养60min，采用平板划线法判断不同温度对贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1生长的影响情况，每组处理重复3次。结果表明，在100℃条件下培养60min的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1仍有活性，保持较高的抑菌活性。
[0086]
(2)不同温度对贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1发酵上清液抑菌效果的影响
[0087]
将发酵上清液(发酵液在4℃、11000rpm条件下离心20min，得发酵上清液)置于不同的温度梯度20℃、40℃、60℃、80℃及100℃水浴中，分别在0、1、2、4、8、16、32、48、60、72、84、96、108、120h后取样，以大肠杆菌为受试菌，琼脂扩散法测定抑菌活性，记录抑菌圈直径以0h样品的抑菌圈直径为100％，各温度在不同时间段的样品对应的抑菌圈直径/0h的抑菌圈直径*100％即为某一时刻的抑菌活性。
[0088]
结果如图11所示。实验结果表明，贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1发酵上清液具有很好的温度稳定性，贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1发酵上清液在20℃下76h内可保持95％以上的抑菌活性，在40℃下96h内可保持65％的抑菌活性，在60℃下6h内可保持85％以上的抑菌活性。80℃下6h内可保持50％的抑菌活性。即使在100℃的高温下1h时仍可保留70％的抑菌活性。
[0089]
结论：贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1可耐100℃高温，贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1发酵上清液具有很好的温度稳定性。
[0090]
实施例6贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1抗菌脂肽的制备及鉴定
[0091]
(1)贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1抗菌脂肽的制备
[0092]
取贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的发酵液(按实施例4的最优条件培养得到的发酵液)，在4℃、11000rpm条件下离心20min，得发酵上清液。取发酵上清液，用1mol/l的盐酸调节ph至2.0，4℃静置12h。8000r/min离心20min，弃上清液，得沉淀。向所得沉淀中加入甲醇，甲醇的量是上清液的1/10，用naoh溶液调节ph至7.0，室温抽提8h。抽提液在4℃、4000r/min条件下离心10min，取上清液，旋转蒸发仪浓缩，即得到抗菌脂肽粗提物。
[0093]
(2)抗菌脂肽提取物的hplc-ms分析
[0094]
样品制备：称取3mg干燥的抗菌脂肽粗提物，溶解于300μl色谱级甲醇中，旋涡混匀，取200μl上清并用50％甲醇溶液(体积比)稀释到1.2ml，用0.22μm的针孔式有机滤膜进行过滤。
[0095]
液相色谱条件：c18色谱柱，进样量20μl，流动相为乙腈:水＝40:60(v/v)，流速
1ml/min，检测波长210nm，分析时间14min，柱温30℃。
[0096]
质谱条件：正离子模式检测，检测范围为100～2000amu。
[0097]
结果如图12、13、14、15所示。结合质谱图中物质的分子离子峰的m/z值，对应数据库和文献中列出的常见脂肽的质荷比，分析确定脂肽中抑菌组分的种类。
[0098]
由图12、13可知，在质荷比1043.6、1065.6、1081.5处和1057.6、1079.6、1095.5处有准碎片离子峰，与文献中c14iturina和c15iturina的[m+h]+、[m+na]+和[m+k]+质荷比相符合，从而确定脂类提取物中含有c14iturina和c15iturina。
[0099]
由图14可知，在质荷比1071.6处有准碎片离子峰，与文献中c16mycosubtilin的[m+h]+质荷比相符合，从而初步鉴定脂类提取物中含有c16mycosubtilin。
[0100]
由图15可知，在质荷比415.2、437.2、453.2处有准碎片离子峰，与文献中bacilysin的[m+h]+、[m+na]+和[m+k]+质荷比相符合，从而确定脂类提取物中含有bacilysin。
[0101]
结论：贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1发挥抑菌作用的主要脂肽类物质为c14iturina，c15iturina，c16mycosubtilin和bacilysin。本实施例为该菌株的后续进一步利用提供了理论依据。
[0102]
给本领域技术人员提供上述实施例，以完全公开和描述如何实施和使用所主张的实施方案，而不是用于限制本文公开的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的修饰将在所附权利要求的范围内。

技术特征：
1.一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，其特征在于：分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.26580，保藏日期：2023年02月20日。2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1在制备水产病原菌抑制剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述水产病原菌为大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：具体应用时，培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1得发酵液，离心得发酵上清液。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1所采用的培养基的组分组成为：碳源1～30g/l，氮源5～30g/l，nacl1～10g/l，谷氨酸钠1～7g/l，培养基初始ph为4～9；所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、玉米粉、马铃薯淀粉中的任意一种或两种以上；所述氮源选自蛋白胨、牛肉膏、玉米浆粉、工业用酵母粉中的任意一种或两种以上；所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的培养条件为：培养温度20～42℃，发酵时间12～72h。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述培养基的组分组成为：玉米粉5g/l，工业酵母粉15g/l，nacl7g/l，谷氨酸钠5g/l，培养基初始ph为7；所述培养条件为：培养温度30℃，发酵时间48h；所述离心的条件为：在4℃、11000rpm条件下离心20min。8.一种水产病原菌抑制剂，其特征在于，是通过以下方法制备得到的：培养权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，得发酵液，离心得发酵上清液，即为水产病原菌抑制剂。9.根据权利要求8所述的水产病原菌抑制剂，其特征在于：所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。10.根据权利要求8所述的水产病原菌抑制剂，其特征在于：所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1所采用的培养基的组分组成为：碳源1～30g/l，氮源5～30g/l，nacl1～10g/l，谷氨酸钠1～7g/l，培养基初始ph为4～9；所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、玉米粉、马铃薯淀粉中的任意一种或两种以上；所述氮源选自蛋白胨、牛肉膏、玉米浆粉、工业用酵母粉中的任意一种或两种以上；所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的培养条件为：培养温度20～42℃，发酵时间12～72h。

技术总结
本发明公开了一种贝莱斯芽孢杆菌OUC-BV1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用，属于微生物技术领域。所述贝莱斯芽孢杆菌OUC-BV1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.26580，保藏日期：2023年02月20日。所述贝莱斯芽孢杆菌OUC-BV1在制备水产病原菌抑制剂中的应用。本发明还公开了一种水产病原菌抑制剂。本发明的贝莱斯芽孢杆菌OUC-BV1具有较强抑菌活性，具有普遍抑菌活性，且能耐高温，有望开发成天然抗生素产品，在水产养殖及饲料替抗领域有潜在的应用价值和巨大的市场需求。替抗领域有潜在的应用价值和巨大的市场需求。替抗领域有潜在的应用价值和巨大的市场需求。


技术研发人员：姜宏 董格菲 毛相朝 司先懂 陈鹏 王鲁保 任泽林
受保护的技术使用者：北京英惠尔生物技术有限公司
技术研发日：2023.03.30
技术公布日：2023/7/25