一种超声响应性聚合物PFH纳米液滴及其制备和应用

一种超声响应性聚合物pfh纳米液滴及其制备和应用
技术领域
1.本发明属于纳米药物技术领域。更具体地，涉及一种超声响应性聚合物pfh纳米液滴及其制备和应用。


背景技术：

2.药物分子难以在肿瘤组织中有效渗透是多种肿瘤临床治疗失败的重要原因，例如，胰腺导管腺癌(pdac)作为胃肠道中最恶性的肿瘤之一，其致密的胞外基质包裹着胰腺癌细胞，挤压肿瘤血管，形成病理性屏障，限制了化疗药物进入胰腺癌细胞，可见，提高化疗药物在肿瘤组织中的渗透性对于高效治疗基质致密的肿瘤而言至关重要。且胞外基质成分如胶原蛋白、纤维连接蛋白、糖蛋白、基质金属蛋白酶和细胞因子等，是由存在于肿瘤组织中的基质细胞(如肿瘤相关成纤维细胞等)产生的，因此，基质细胞是调控胞外基质的理想靶标。然而，药物如何跨越肿瘤组织已经建立的致密胞外基质屏障，进而作用于基质细胞是肿瘤治疗领域必须解决的难题。
3.利用外源性机械力的刺激，比如超声，是提高药物渗透性最直接的手段，并具有操作简单、重复性高、成本低、临床转化前景好等优点。因此，首先利用外源性超声刺激来促进作用于基质细胞的药物跨越肿瘤组织已经建立的致密胞外基质屏障，再利用该药物进行内源性胞外基质调控，结合外源性超声刺激和内源性胞外基质调控的策略是实现肿瘤高效治疗的创新性手段。全氟己烷(pfh)是一种具有良好生物相容性的惰性化学物质，具有超声响应性，在超声作用下会急速气化产生空化效应，所产生的机械力可有效促进药物的肿瘤渗透。同时，pfh对o2具有高亲和力，在o2递送方面具有天然的优势，可以输送o2缓解肿瘤组织的乏氧状态(biomaterials 175(2018)61-71)。但pfh的疏水疏油特性直接导致了其在血液中的稳定性较差，进而导致pfh的体内循环时间较短，无法有效输送至肿瘤部位，且pfh的药物负载率低，无法与化疗药物进行共同递送。
4.因此，开发一种能克服pfh体内稳定性差和载药率低等问题的药物递送载体，对于肿瘤治疗，尤其是基质致密的肿瘤治疗而言十分必要。


技术实现要素：

5.本发明针对现有技术的不足，旨在提供一种可降解两亲性嵌段聚合物，作为pfh输送的药物递送载体，可克服pfh体内稳定性差和载药率低等问题，实现pfh与化疗药物的共同递送，提高药物在肿瘤组织中的渗透性，进而实现对肿瘤的高效治疗，尤其是对基质致密肿瘤的治疗。
6.本发明的第一目的是提供一种可降解两亲性嵌段聚合物。
7.本发明的第二目的是提供上述聚合物的制备方法。
8.本发明的第三目的是提供上述聚合物在制备超声响应性聚合物全氟己烷(pfh)纳米液滴的应用。
9.本发明的第四目的是提供一种超声响应性聚合物pfh纳米液滴。
10.本发明的第五目的是提供上述超声响应性聚合物pfh纳米液滴在制备抗肿瘤药物中的应用。
11.本发明上述目的通过以下技术方案实现：
12.本发明提供了一种可降解两亲性嵌段聚合物(聚乙二醇-聚(天冬氨酰(苄胺-co-巯基乙胺))-十三氟己烷，mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
113
)，具有如下式所示的结构式：
[0013][0014]
其中，m为30～100，n为40～50，0＜k＜1。
[0015]
本发明的可降解两亲性嵌段聚合物由fda批准的聚乙二醇和可生物降解的聚氨基酸材料为主链，具有良好的生物相容性，有利于该纳米材料在体内的应用。同时，超声作为临床广泛使用的疾病诊断与治疗的手段，有利于实现本发明可降解两亲性嵌段聚合物的临床转化。
[0016]
本发明还提供了上述聚合物的制备方法，包括如下步骤：
[0017]
s1.聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯与全氟庚酸反应得到氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷；
[0018]
s2.s1所得氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷依次与巯基乙胺、苄胺反应，得到所述聚合物。
[0019]
优选地，s1所述聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯由苄氧羰基天冬氨酸酸酐开环聚合得到。
[0020]
进一步优选地，所述开环聚合所用的引发剂为氨基聚乙二醇单甲醚。
[0021]
进一步优选地，所述苄氧羰基天冬氨酸酸酐由l-天冬氨酸-β-苄酯与双(三氯甲基)碳酸酯反应得到。
[0022]
优选地，s2为：先采用巯基乙胺氨解20wt％～50wt％的氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷，再采用苄胺氨解余下的氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷。
[0023]
上述聚合物负载pfh后自组装得到的超声响应性聚合物全氟己烷纳米液滴，可克服pfh体内稳定性差和载药率低等问题，且可同时负载多种药物，进而实现外源性超声刺激与内源性胞外基质调控的有机结合，通过多机制克服致密基质肿瘤的生理屏障对药物渗透的限制，实现基质致密的肿瘤组织内药物的高渗透性递送，发挥协同抗肿瘤的作用，因此，上述聚合物在制备超声响应性聚合物pfh纳米液滴的应用，由上述聚合物负载pfh后自组装得到的一种超声响应性聚合物pfh纳米液滴，以及上述超声响应性聚合物全氟己烷纳米液滴在制备抗肿瘤药物中的应用均应在本发明的保护范围之内。
[0024]
优选地，所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴还负载有抗肿瘤药物，更优选为疏水性抗肿瘤药物。上述超声响应性聚合物pfh纳米液滴将pfh负载于内核，抗肿瘤药物负载于
中间层。
[0025]
进一步优选地，所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴还负载有声敏剂，如锰络合原卟啉等。
[0026]
进一步优选地，所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴还负载有氧气。
[0027]
所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴具有良好的超声响应性，在超声照射下，pfh纳米液滴迅速气化并产生空化力，使负载的药物快速释放，并促进药物深入渗透至肿瘤组织内部；同时，在超声刺激下，声敏剂会产生大量ros，发挥声动力治疗效应杀伤癌细胞；此外，pfh携带的氧气可显著缓解肿瘤的乏氧状态，增加了ros产率，进而增强了声动力治疗作用。
[0028]
优选地，所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴的水合粒径为100～300nm。
[0029]
优选地，所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴通过乳化法自组装得到。
[0030]
进一步优选地，所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴的制备方法为：将上述聚合物、抗肿瘤药物与pfh在有机溶液中依次进行超声、氧气鼓泡、蒸发，即得到所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴。
[0031]
进一步优选地，所述超声为在冰浴中超声。
[0032]
进一步优选地，所述氧气鼓泡的温度为3～5℃，最优选为4℃。所述氧气鼓泡是为了促进二硫键交联和负载氧气。
[0033]
进一步优选地，所述蒸发为蒸发有机溶剂。
[0034]
优选地，所述肿瘤为基质致密的肿瘤，如胰腺癌、乳腺癌等肿瘤。
[0035]
本发明具有以下有益效果：
[0036]
本发明的可降解两亲性嵌段聚合物中，氟烷烃链段可以嵌入pfh液滴，使聚合物可有效负载pfh；其还原敏感嵌段段能有效负载疏水性抗肿瘤药物，且其巯基能发生氧化，在pfh液滴表面形成二硫键交联，从而稳定pfh液滴结构，提高pfh液滴的负载效率；其疏水性嵌段聚天冬氨酰(苄胺)提供了负载疏水性抗肿瘤药物的中间层。并且，pfh具有良好的氧气溶解性能，可作为氧气存储媒介。因此，由可降解两亲性嵌段聚合物通过乳化法自组装得到的超声响应性聚合物pfh纳米液滴不仅可有效负载pfh和药物，还可通过有效负载/输送氧气用于缓解肿瘤组织的乏氧状态，进而实现肿瘤药物的超声响应性释放，并通过多机制促进药物渗透，发挥协同抗肿瘤的作用。
附图说明
[0037]
图1a为mpeg-pbla-c6f
13
的核磁图谱，图1b为mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
的核磁图谱。
[0038]
图2a为超声响应性聚合物pfh纳米液滴的粒径分布结果，图2b为超声响应性聚合物pfh纳米液滴的电镜图。
[0039]
图3为超声响应性聚合物pfh纳米液滴的血清稳定性检测结果。
[0040]
图4为超声响应性聚合物pfh纳米液滴促进药物在肿瘤组织内扩散和渗透的结果图。
[0041]
图5为肿瘤大小的统计结果。
[0042]
图6为肿瘤乏氧缓解情况。
具体实施方式
[0043]
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0044]
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0045]
锰络合原卟啉的制备：将10mg氯化锰(mncl2·
h2o)加入30ml溶解有100mg原卟啉(ppix)的dmf溶液中，在140℃下回流1h后，用去离子水洗涤两次，离心即得到声敏剂锰络合原卟啉(mnppix)。冻干后的固体粉末在4℃避光中保存。
[0046]
实施例1可降解两亲性嵌段聚合物的制备
[0047]
s1.苄氧羰基天冬氨酸酸酐(bla-nca)的合成，反应机理及过程如下：
[0048][0049]
称取5g冻干后的l-天冬氨酸-β-苄酯，加入到250ml两口瓶中，加入100ml新蒸的乙酸乙酯，在n2保护下，90℃加热回流0.5h；称取2.7g三光气(双(三氯甲基)碳酸酯)溶解在50ml新蒸乙酸乙酯中，缓慢滴加到l-天冬氨酸-β-苄酯反应液中，待反应溶液变澄清后继续反应0.5h；将两口瓶瓶口密封后，置于-20℃冰箱快速冷却2h，将反应液转移至预冷的500ml分液漏斗中，分别用100ml预冷的饱和nahco3溶液和饱和nacl溶液先后洗涤3次，有机相加入无水mgso4干燥除水后，滤纸过滤除去固体；将溶液旋蒸浓缩至50ml，加入400ml新蒸石油醚析出沉淀固体，抽滤收集沉淀，使用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到针状结晶固体，即为bla-nca。
[0050]
s2.聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯(mpeg-pbla)的合成，反应机理及过程如下：
[0051][0052]
将0.4g氨基聚乙二醇单甲醚(mpeg-nh2)加入50ml的反应瓶中，70℃加热抽真空除水2h，冷却至25℃后，在氮气保护下加入50ml ch2cl2；再将2.0g bla-nca溶于5ml无水dmf后，滴加到反应瓶中，在35℃下反应72h；反向滴加沉淀到300ml无水乙醚中，-20℃冰箱冷藏12h，离心收集沉淀，真空干燥，反复用无水乙醚沉淀2次，干燥得白色固体，即为mpeg-pbla。
[0053]
s3.氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷(mpeg-pbla-c6f
13
)的合成，反应机理及过程如下：
[0054][0055]
将15.7μl全氟庚酸、0.10g nhs、0.18g edc
·
hcl溶于10ml ch2cl2中，置于50ml反应瓶中，25℃搅拌1h后，在烧瓶中加入0.50g mpeg-pbla，25℃搅拌48h，反向滴加沉淀到300ml无水乙醚中，-20℃冷藏12h后，离心收集沉淀，真空干燥，用无水乙醚沉淀2次，干燥得白色固体mpeg-pbla-c6f
13
。
[0056]
s4.聚乙二醇-聚(天冬氨酰(苄胺-co-巯基乙胺))-十三氟己烷(mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
)的合成，反应机理及过程如下：
[0057][0058]
将0.30g mpeg-pbla-c6f
13
溶于10ml dmf中，在n2保护下加入57mg巯基乙胺盐酸盐，25℃下放置12h后；再加入0.35g苄胺(bza)，在25℃下反应12h。反应液用mwco为7.0kda的透析袋在无水甲醇中透析2天，再旋转蒸发浓缩，得到目标聚合物mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
。
[0059]
实施例2可降解两亲性嵌段聚合物的制备
[0060]
s1.称取5g冻干后的l-天冬氨酸-β-苄酯，加入到250ml两口瓶中，加入100ml新蒸的乙酸乙酯，在n2保护下，80℃加热回流2h；称取2.7g三光气(双(三氯甲基)碳酸酯)溶解在50ml新蒸乙酸乙酯中，缓慢滴加到l-天冬氨酸-β-苄酯反应液中，待反应溶液变澄清后继续反应0.5h；将两口瓶瓶口密封后，置于-20℃冰箱快速冷却2h，将反应液转移至预冷的500ml分液漏斗中，分别用100ml预冷的饱和nahco3溶液和饱和nacl溶液先后洗涤5次，有机相加入无水mgso4干燥除水后，滤纸过滤除去固体；将溶液旋蒸浓缩至20ml，加入300ml新蒸石油醚析出沉淀固体，抽滤收集沉淀，使用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到针状结晶固体，即为bla-nca。
[0061]
s2.将0.4g氨基聚乙二醇单甲醚(mpeg-nh2)加入50ml的反应瓶中，70℃加热抽真空除水4h，冷却至25℃后，在氮气保护下加入50ml ch2cl2；再将2.0g bla-nca溶于10ml无水dmf后，滴加到反应瓶中，在35℃下反应48h；反向滴加沉淀到500ml无水乙醚中，-20℃冷藏12h，离心收集沉淀，真空干燥，反复用无水乙醚沉淀2次，干燥得白色固体，即为mpeg-pbla。
[0062]
s3.将15.7μl全氟庚酸、0.10g nhs、0.18g edc
·
hcl溶于10ml ch2cl2中，置于50ml反应瓶中，25℃搅拌2h后，在烧瓶中加入0.50g mpeg-pbla，25℃搅拌72h，反向滴加沉淀到
300ml无水乙醚中，-20℃冷藏12h后，离心收集沉淀，真空干燥，用无水乙醚沉淀2次，干燥得白色固体mpeg-pbla-c6f
13
。
[0063]
s4.将0.30g mpeg-pbla-c6f
13
溶于5ml dmf中，在n2保护下加入57mg mea
·
hcl，25℃下放置24h后，加入0.35g苄胺(bza)。反应在25℃下再进行12h。反应液用mwco为7.0kda的透析袋在无水甲醇中透析2天，再旋转蒸发浓缩，得到目标聚合物mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
。
[0064]
实施例3可降解两亲性嵌段聚合物的制备
[0065]
s1.称取5g冻干后的l-天冬氨酸-β-苄酯，加入到250ml两口瓶中，加入100ml新蒸的乙酸乙酯，在n2保护下，100℃加热回流0.5h；称取2.7g三光气(双(三氯甲基)碳酸酯)溶解在50ml新蒸乙酸乙酯中，缓慢滴加到l-天冬氨酸-β-苄酯反应液中，待反应溶液变澄清后继续反应2h；将两口瓶瓶口密封后，置于-20℃冰箱快速冷却4h，将反应液转移至预冷的500ml分液漏斗中，分别用100ml预冷的饱和nahco3溶液和饱和nacl溶液先后洗涤3次，有机相加入无水mgso4干燥除水后，滤纸过滤除去固体；将溶液旋蒸浓缩至50ml，加入400ml新蒸石油醚析出沉淀固体，抽滤收集沉淀，使用乙酸乙酯/石油醚混合溶剂重结晶，得到针状结晶固体，即为bla-nca。
[0066]
s2.将0.4g氨基聚乙二醇单甲醚(mpeg-nh2)加入50ml的反应瓶中，90℃加热抽真空除水2h，冷却至25℃后，在氮气保护下加入100ml ch2cl2；再将2.0g bla-nca溶于5ml无水dmf后，滴加到反应瓶中，在35℃下反应48h；反向滴加沉淀到300ml无水乙醚中，-20℃冷藏24h，离心收集沉淀，真空干燥，反复用无水乙醚沉淀5次，干燥得白色固体，即为mpeg-pbla。
[0067]
s3.将15.7μl全氟庚酸、0.10g nhs、0.18g edc
·
hcl溶于30ml ch2cl2中，置于50ml反应瓶中，25℃搅拌1h后，在烧瓶中加入0.50g mpeg-pbla，25℃搅拌48h，反向滴加沉淀到500ml无水乙醚中，-20℃冷藏24h后，离心收集沉淀，真空干燥，用无水乙醚沉淀5次，干燥得白色固体mpeg-pbla-c6f
13
。
[0068]
s4.将0.30g mpeg-pbla-c6f
13
溶于10ml dmf中，在n2保护下加入57mg mea
·
hcl，25℃下放置12h后，加入0.35g苄胺(bza)。反应在25℃下再进行24h。反应液用mwco为7.0kda的透析袋在无水甲醇中透析3天，再旋转蒸发浓缩，得到目标聚合物mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
。
[0069]
实施例4超声响应性聚合物pfh纳米液滴的制备
[0070]
将20mg实施例1所得可降解两亲性嵌段聚合物(mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
)与1mg全反式维甲酸(atra)、0.5mg锰络合原卟啉(mnppix)溶于二氯甲烷(ch2cl2)溶液中，再加入60μl pfh，涡旋共匀；将混合溶液加入50ml去离子水中，冰浴中超声处理5min后，于4℃下用o2起泡30min，以促进二硫键交联和负载氧气；再在25℃下，敞开搅拌溶液4h，以蒸发残留的二氯甲烷；最后使用超滤浓缩溶液，通过0.22μm滤头进行过滤，得到mnppix和atra共载交联的超声响应性聚合物pfh纳米液滴(ma-cppnds@o2)。
[0071]
实施例5超声响应性聚合物pfh纳米液滴的制备
[0072]
同实施例4，区别在于未添加atra、mnppix，得到cppnds@o2。
[0073]
实施例6超声响应性聚合物pfh纳米液滴的制备
[0074]
同实施例4，区别在于未添加mnppix，得到a-cppnds@o2。
[0075]
实施例7超声响应性聚合物pfh纳米液滴的制备
[0076]
同实施例4，区别在于未添加atra，得到m-cppnds@o2。
[0077]
测试例1
[0078]
使用1h nmr对实施例1所得mpeg-pbla-c6f
13
和可降解两亲性嵌段聚合物(mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
)进行表征，1h nmr谱如图1所示，其中，图1a为mpeg-pbla-c6f
13
的核磁图谱，图1b为mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
的核磁图谱。
[0079]
根据图1a中peg在3.56ppm(-ch2ch
2-)和pbla在7.23ppm(-ch2c6h5)的峰积分比，可计算出pbla的聚合度为40。
[0080]
根据图1b中pasp(bza)嵌段苯基在7.23ppm处的残存峰，可计算出pasp(bza)聚合度为20；且图谱中，5.03ppm(c6h5ch2o℃-)的特征信号消失，1.24ppm(-nhch2ch2sh)出现，表明氨解反应完成。
[0081]
再使用1h nmr对实施例2、3所得mpeg-pbla-c6f
13
和可降解两亲性嵌段聚合物(mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
)进行表征，得到的谱图与实施例1类似。
[0082]
测试例2
[0083]
用动态光散射法测定实施例4所得超声响应性聚合物pfh纳米液滴的水力学直径，并用透射电镜观测其形貌结构，结果如图2所示，其中，图2a为超声响应性聚合物pfh纳米液滴的粒径分布结果，图2b为超声响应性聚合物pfh纳米液滴的电镜图。
[0084]
可见，实施例4所得超声响应性聚合物pfh纳米液滴呈粒径146.1
±
10.9nm的球形粒子结构。
[0085]
测试例3
[0086]
样品1(sample 1)由氟烷烃修饰聚合物mpeg-pasp(bza-co-mea)-c6f
13
制备得到(即实施例4所得超声响应性聚合物pfh纳米液滴)，样品2(sample2)则由普通聚合物mpeg-pasp(bza-co-mea)制备得到(制备方法参照实施例4)。
[0087]
将样品1和样品2分别置于含有10％胎牛血清的pbs中，使用马尔文粒径电位仪检测其血清稳定性。结果如图3所示，样品1在血清环境中可以保持粒径稳定，而样品2的粒径尺寸在24h内会增加到600nm左右，表明氟烷烃改性聚合物可以提高纳米液滴的血清稳定性。
[0088]
测试例4
[0089]
将1
×
106的胰腺癌pan02细胞(购自中国科学院细胞库)皮下植入6～8周的雌性c57bl/6小鼠右后肢，构建得到胰腺癌皮下肿瘤模型。当肿瘤的平均体积达到100mm3时，将荷瘤小鼠随机平分为三组，命名为m-cppnds@o2组，m-cppnds@o2+us组和m-cppnds@o2+a-cppnds@o2组。最后一组先每两天静脉注射一次实施例6所得a-cppnds@o2(剂量为每只100μl)，共计注射三次。再将实施例7所得超声响应性聚合物pfh纳米液滴(m-cppnds@o2)静脉注射到三组的荷瘤小鼠体内(剂量为每只100μl)。当药物聚集肿瘤部位后，超声照射(us)5min，分别解剖取出两组小鼠的肿瘤制成冰冻切片，观察mnppix在肿瘤组织内的荧光分布和距血管的距离，研究超声响应性聚合物pfh纳米液滴促进药物在肿瘤组织内扩散和渗透的效果。
[0090]
结果如图4所示，可见，超声照射后，m-cppnds@o2+us组的mnppix荧光扩散到了远离血管的地方，表明超声响应性聚合物pfh纳米液滴可在超声照射下促进药物在肿瘤组织中的有效释放和渗透；而m-cppnds@o2+a-cppnds@o2组经a-cppnds@o2三次治疗后，肿瘤胞外
基质得到重构后的pdac肿瘤也表现出了优异的药物渗透效果。这些结果表明，本发明的超声响应性聚合物pfh纳米液滴在超声照射作用下，促进了药物在几乎无法穿透的pdac胞外基质中的有效渗透。
[0091]
测试例5
[0092]
将1
×
106的胰腺癌pan02细胞(购自中国科学院细胞库)皮下植入6～8周的雌性c57bl/6小鼠右后肢，构建得到胰腺癌皮下肿瘤模型，再随机平分为pbs组、cppnds@o2+us组、m-cppnds@o2+us组、ma-cppnds@o2+us组。
[0093]
当肿瘤体积达到50mm3时，每两天给每只小鼠尾静脉注射超声响应性聚合物pfh纳米液滴/pbs溶液(pbs组注射pbs溶液，cppnds@o2+us组注射实施例5所得cppnds@o2，m-cppnds@o2+us组注射实施例7所得m-cppnds@o2，ma-cppnds@o2+us组注射实施例4所得ma-cppnds@o2)，共注射5次。其中，后三组在每次注射12h后均接受us照射5min。
[0094]
分别测量肿瘤大小，以评价各组超声响应性聚合物pfh纳米液滴对胰腺癌的治疗效果，统计结果如图5所示。可见，在超声照射下，cppnds@o2+us组无明显肿瘤抑制效果，而m-cppnds@o2+us组和ma-cppnds@o2+us组均具有明显的肿瘤抑制效果。表明cppnds@o2作为药物载体具有良好的生物相容性以及单纯的us具有很好的安全性；m-cppnds@o2+us组产生的明显肿瘤抑制效果说明us刺激声敏剂产生了显著的声动力作用，有效杀伤了肿瘤细胞；而ma-cppnds@o2+us组得以联合声动力治疗和胞外基质调控，发挥了最有效的抗肿瘤效果。
[0095]
测试例6
[0096]
将测试例5治疗结束后的各组小鼠肿瘤取出进行石蜡切片的荧光染色，验证超声响应性聚合物pfh纳米液滴对胰腺癌肿瘤组织乏氧状态的改善情况。缺氧诱导因子1α(hif-1α)是一种典型的缺氧指标，通过免疫荧光检测肿瘤组织中hif-1α的表达水平。
[0097]
结果如图6所示，pbs组的hif-1α表达最强，表明pdac是一种明显的乏氧微环境肿瘤；相比之下，cppnds@o2+us处理组明显下调了hif-1α的表达，其荧光强度在所有治疗组中最弱，表明该纳米液滴对pdac肿瘤具有优越的乏氧缓解作用；而在m-cppnds@o2+us和ma-cppnds@o2+us处理组中，hif-1α的表达水平较cppnds@o2+us处理组略微上调，这是由于sdt激活mnppix产生ros是一个耗氧过程，从而削弱了纳米液滴的缓解乏氧作用；而ma-cppnds@o2+us治疗组的hif-1α表达水平比m-cppnds@o2+us低，这被认为是atra对ecm的调节作用降低了基质密度降低及促进了血流，从而对缺氧缓解有积极作用。
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上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种可降解两亲性嵌段聚合物，其特征在于，具有如下式所示的结构式：其中，m为30～100，n为40～50，0＜k＜1。2.权利要求1所述聚合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：s1.聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯与全氟庚酸反应得到氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷；s2.s1所得氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷依次与巯基乙胺、苄胺反应，得到所述聚合物。3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，s2为：先采用巯基乙胺氨解20wt％～50wt％的氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷，再采用苄胺氨解余下的氟烷烃修饰的聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯-十三氟己烷。4.权利要求1所述聚合物在制备超声响应性聚合物pfh纳米液滴的应用。5.一种超声响应性聚合物pfh纳米液滴，其特征在于，由权利要求1所述聚合物负载pfh后，自组装得到。6.根据权利要求5所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴，其特征在于，还负载有抗肿瘤药物。7.根据权利要求5所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴，其特征在于，还负载有声敏剂。8.根据权利要求6所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴，其特征在于，其制备方法为：将权利要求1所述聚合物、抗肿瘤药物与pfh在有机溶液中依次进行超声、氧气鼓泡、蒸发，即得到所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴。9.权利要求5所述超声响应性聚合物pfh纳米液滴在制备抗肿瘤药物中的应用。10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述肿瘤为基质致密的肿瘤。

技术总结
本发明提供了一种超声响应性聚合物PFH纳米液滴及其制备和应用。该超声响应性聚合物PFH纳米液滴不仅可有效负载PFH和药物，还可通过有效负载/输送氧气用于缓解肿瘤组织的乏氧状态，进而实现抗肿瘤药物的超声响应性释放，并通过多机制促进药物渗透，发挥协同抗肿瘤的作用。作用。作用。


技术研发人员：任杰 帅心涛 肖洪 李晓霞 秦靖雅
受保护的技术使用者：中山大学附属第三医院
技术研发日：2023.03.13
技术公布日：2023/7/25