一种抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物及其药物组合物和用途的制作方法

1.本发明涉及但不限于药物化学技术领域，尤其涉及一种抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物其药物组合物和用途。


背景技术：

2.冠状病毒病-19(covid-19，又名sars-cov-2)。
3.冠状病毒属于单正链rna病毒，冠状病毒家族主要包括新型冠状病毒(sars-cov-2)，sars冠状病毒(sars-cov)，中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)，hcov-229e，hcov-oc43，hcov-nl63、hcov-hku。冠状病毒通常导致呼吸道和肠道疾病、神经系统症状和心肌炎。
4.考虑到sars-cov-2感染的严重性、高度变异性以及大流行性，且出于对耐药株的出现或副作用的问题，为了减少sars-cov-2感染的发病率、严重程度和死亡率，开发各种具有不同作用机制的特异性抑制剂来治疗新冠病毒的药物迫在眉睫。因此，本领域仍渴望开发新型结构的抗病毒药物。


技术实现要素：

5.本发明人开发了一种抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物，该化合物可用于制备抗病毒类的药物。
6.本发明一方面提供一种如(i0)所示的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐：
[0007][0008]
式(i0)中，
[0009]rx1
和r
x2
分别独立地选自氢、羟基、c1-c8烷基、卤素；
[0010]rx3
选自氢、或叠氮基；
[0011]rx4
选自氢、或氰基；
[0012]r1a
和r
1b
分别独立的选自氢、-or5、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；其中，
[0013]
上述r5选自氢、其中，
[0014]
上述n1选自0、1、2或3，当n1为0时，羰基直接和氧相连成酯键；
[0015]
n2选自1、2或3；
[0016]
ra选自或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基、c3-c8环烷氧基、c2-c8烯基、c6-c18芳基、c6-c18芳基氧基；其中，
[0017]
rb选自氢或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基、c3-c8环烷氧基、c2-c8烯基、c6-c18芳基、c6-c18芳基氧基；
[0018]rc1
和r c2
分别独立地选自氢、被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8的烷基；
[0019]
r2选自氢或氨基；
[0020]
r3和r4分别独立地选自氢、
[0021][0022]
其中，r3和r4不能同时为氢；
[0023]
上述ra、r
c1
、r
c2
、n1和n2如上述所定义的；
[0024]
n3和n4分别独立地选自0、1、2、3或4；
[0025]r6a
和r
6b
分别独立地选自氢、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；或者r
6a
和r
6b
与其相连的碳成环烷基；
[0026]
r7选自氢、卤素、氨基、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；
[0027]
z选自氢、羟基、卤素、其中，
[0028]
上述n5选自0、1、2、3或4；
[0029]
r8选自h、羟基、卤素、被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：氨基、c1-c8的烷基、c6-c18的芳基、c1-c8的烷基氧基、氨基c1-c8的烷基、c1-c8的烷基芳基、c6-c18的芳基羰基、c1-c8的烷基羰基氧基；
[0030]
x选自o、s、或nh；
[0031]rd1
和r
d2
分别独立地选自氢、卤素、被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c1-c8烷胺基、或r
d1
和r
d2
与其相连的碳成3-7元环，此3-7元环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代；
[0032]
re选自被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c1-c8烷胺基；
[0033]rf1
和r
f2
分别独立地选自氢、卤素或被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8烷基；
[0034]
rg、rh分别独立地选自被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基，或rg、rh以及与其相连的碳相连成3-7元环，此3-7元环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代；
[0035]ri1
和r
i2
分别独立地选自氢、氰基、或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c2-c8烯基、c2-c8炔基；其中，ra为上述所定义的；
[0036]
所述基团a为：c1-c8的烷基、c1-c8的烷氧基、c8的烷氧基、氨基、巯基、巯基c1-c8烷基、卤素、氰基、醛基、硝基、三氟甲基、氯苯羰基、c3-c8的环烷基、c3-c8的环烷氧基、c6-c18的芳基、c6-c18的芳基氧基；其中，ra、rb如上述所定义的；m选自1或2。
[0037]
在一些实施方案中，本发明提供一种如式(i)所示的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐：
[0038][0039]
式(i)中取代基的定义如式(i0)所述。
[0040]
在一些实施方案中，本发明提供一种如式(ii)所示的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐：
[0041]
[0042]
式(ii)中取代基的定义如式(i0)所述。
[0043]
在一些实施方案中，本发明提供一种如式(ⅲ)的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐：
[0044][0045]
式(ⅲ)中取代基的定义如式(i0)所述。
[0046]
在一些实施方案中，本发明提供一种如式(iv)的多抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐：
[0047][0048]
式(iv)中取代基的定义如式(i0)所述。
[0049]
在一些实施方案中，上述式(i0)中，r
x1
和r
x2
分别独立地选自氢、c1-c8烷基、卤素；优选地，r
x1
和r
x2
分别独立地选自氢、羟基、甲基、氟原子。
[0050]
在一些实施方案中，上述式(i0)中，r
x3
为氢、或叠氮基；
[0051]
在一些实施方案中，上述式(i0)中，r
x4
为氢、或氰基；
[0052]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(iv)中，r
1a
和r
2b
分别独立的选自氢、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；
[0053]
在一些更具体的实施方案中，上述式(i0)-(iv)中，r
1a
和r
2b
分别独立的选自氢、c1-c6烷基。
[0054]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(iv)中，r2为氢；
[0055]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(iv)中，r2为氨基。
[0056]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)中，r3选自氢、
[0057]
其中，当r3为氢时，r4不为氢；
[0058]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，r3为其中，
[0059]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述n1选自0、1或2；
[0060]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述n1为0；
[0061]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述n1为1。
[0062]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述n2为1；
[0063]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述n2为2。
[0064]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述ra选自或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c2-c8烯基、c3-c8环烷基、c6-c18芳基；
[0065]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述ra选自其中，
[0066]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述rb选自氢或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c3-c8环烷基、c2-c8烯基、c6-c18芳基；
[0067]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述ra选自被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c3-c8环烷基、c6-c18芳基。
[0068]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述r
c1
和r c2
均为氢；
[0069]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述r
c1
和r c2
其中一个氢，另一个为被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8的烷基；
[0070]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(ii)中，上述r
c1
和r c2
均为被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8的烷基。
[0071]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，r3选自其中，
[0072]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n1、n2、r
c1
和r
c2
分别如上述所定义的。
[0073]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n3选自0、1、2、3；
[0074]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n3为0；
[0075]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n3为2；
[0076]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n3为3。
[0077]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n4选自0、1或2；
[0078]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n4为0；
[0079]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n4为1；
[0080]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述n4为2。
[0081]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述r
6a
和r
6b
均为氢；
[0082]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述r
6a
和r
6b
其中一个氢，另一个为被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8的烷基，优选地，为c1-c4烷基；
[0083]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述r
6a
和r
6b
均为被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8的烷基。
[0084]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述r
6a
和r
6b
与其相连的c成3-7元环烷基，此3-7元环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代。
[0085]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述r7为氢；或被基团a取代或未取代的c1-c8烷基。
[0086]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述z选自为氢、f、cl、br、其中，
[0087]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(ⅲ)中，上述r8选自氢、羟基或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：氨基、c1-c8的烷基、c6-c18的芳基、c1-c8的烷基氧基、c1-c8的烷基芳基。
[0088]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，r3选自其中，
[0089]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述n1、n2、r
c1
和r
c2
分别如上述所定义的。
[0090]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述x选自o；
[0091]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述x选自s；
[0092]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述x选自nh。
[0093]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
d1
和r
d2
分别独立地选自氢、卤素或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷胺基、或r
d1
和r
d2
与其相连的碳成3-7元环；
[0094]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
d1
和r
d2
分别独立地选自氢、f、cl或br。
[0095]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
f1
为氢，r
f2
为卤素或被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8烷基；
[0096]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
f1
为卤素或被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8烷基，r
f2
为氢；
[0097]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
f1
和r
f2
均为氢。
[0098]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述rg和rh分别独立地选自下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基，或rg、rh以及与其相连的碳相连成3-7元环，此环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代；
[0099]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述rg、rh以及与其相连的碳相连成3-7元环，此环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代；
[0100]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述rg、rh以及与其相连的碳相连成3-7元环，此3-7元环上的原子可被下列原则或基团取代：c1-c8的烷基、c1-c8的烷氧基、卤素、氰基、硝基、三氟甲基、c3-c8的环烷基、c3-c8的环烷氧基、c6-c18的芳基、c6-c18的芳基氧基。
[0101]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
i1
和r
i2
分别独立地选自氢、氰基、或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基；
[0102]
在一些更具体地实施方案中，上述式(i0)-(i)和/或(iv)中，上述r
i1
和r
i2
分别独立地选自氰基或被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8烷基。
[0103]
在一些实施方案中，上述式(i0)-(iv)中，r4选自氢、
[0104]
[0105]
并规定，当r4为氢时，r3不为氢；
[0106]
上述ra、r
c1
、r
c2
、r
d1
、r
d2
、re、r
f1
、r
f2
、rg、rh、r
i1
、r
i2
、r
6a
、r
6b
、r7、z、n1、n2、n3和n4如上述所定义的。
[0107]
所述基团a为：c1-c8的烷基、c1-c8的烷氧基、c8的烷氧基、氨基、巯基、巯基c1-c8烷基、卤素、氰基、醛基、硝基、三氟甲基、氯苯羰基、c3-c8的环烷基、c3-c8的环烷氧基、c6-c18的芳基、c6-c18的芳基氧基；其中，ra、rb如上述所定义的；m选自1或2。
[0108]
在一些实施方案中，本发明提供的上述抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物，选自下列化合物：
[0109]
[0110]
[0111][0112]
另一方面，在一些实施方案中，本发明提供了包含上述抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐的药物组合物。
[0113]
在一些实施方案中，本发明公开了一种药物组合物，其以本发明所述的化合物、异构体或其药学上可接受的盐为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体组成。
[0114]
在一些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物可用于治疗和预防与抗病毒相关病症的疾病。
[0115]
在一些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物可用于在制备抗病毒药物中的用途。
[0116]
再一方面，在一些实施方案中，本发明提供了含有上述药物组合物，用于治疗人或动物的任何由病毒引起的疾病；上述病毒包括但不限于：沙粒病毒科、丝状病毒科和冠状病毒科病毒等，包括但不限于腺病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乙型肺炎病毒、丙型肺炎病毒、hiv病毒、脊髓灰质病毒、麻疹病毒、埃博拉病毒、柯萨奇病毒、西尼罗病毒、
天花病毒、黄热病毒、登革热病毒、流感病毒、拉沙病毒、呼吸道合胞病毒、严重急性呼吸综合症病毒、副流感病毒、冠状病毒等。
[0117]
进一步的，上述流感病毒包括但不限于甲型流感病毒、乙型流感病毒等；
[0118]
进一步的，上述冠状病毒包括但不限于sars病毒、mers病毒、covid-19病毒等；
[0119]
在一些实施方案中，本发明所述抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物可以被制备为药用组合物，按照多种合适选择的给予方式给患者用药，这些途径包括全身例如口服、吸入或胃肠外，通过静脉内、肌肉、透皮或皮下等。
[0120]
在一些实施方案中，本发明所述抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物可以被制备为药用组合物的制剂包括但不限于口服的片剂、胶囊或溶液等，或用于透皮给药的溶液、喷剂、乳液、软膏、乳胶或凝胶。
[0121]
本发明公开化合物具有光谱抗病毒作用，并且在抗流感病毒、抗冠状病毒方面相较化合物a有更好的活性，且心脏毒性更低；
[0122]
本发明公开化合物在新冠病毒感染的k18-ace2转基因小鼠感染模型中比化合物a能够更有效的保护小鼠免于致死剂量感染引起的死亡，并且出乎意外的在病程缩短方面表现出了显著效果。
[0123]
本发明公开化合物在omicron突变株感染的研究中，显示了很好的预防新冠病毒感染的作用，并在设定剂量下呈现剂量依赖趋势。
[0124]
本发明所述的这类化合物可作为新型结构的抗病毒药物。
[0125]
化合物a的结构如下：
[0126][0127]
定义：
[0128]
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
[0129]
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，例如水合物、乙醇合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
[0130]
术语“取代”，是指其上一个、两个或三个或更多个氢原子被取代基独立地取代，当被一个以上取代基取代时，此取代基可以相同或不相同。
[0131]
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0132]
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代
基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括铝、钠、钾、钙、锰、铁、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
[0133]
术语“烷基”表示饱和的脂烃基，包括直链和支链基团烷基可以是取代的或未取代的。当是取代的烷基时，该取代基优选是一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个取代基。
[0134]
术语“烯基”表示含不饱和的碳碳双键的脂烃基，包括直链和支链基团烷基可以是取代的或未取代的。碳碳双键可以是一或多个。
[0135]
术语“环烷基”表示全部为碳的单环或稠合的环(“稠合”环意味着系统中的每个环与系统中的其它环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多个环不具有完全连接的π电子系统，环烷基的实例(不局限于)为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。环烷基可为取代的和未取代的。
[0136]
术语“芳基”表示1至12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。芳基的非限制性实例有苯基、萘基和蒽基。芳基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个，更优选为一个、两个或三个，进而更优选为一个或两个。
[0137]
术语“芳基烷基”表示被芳基取代的烷基。
[0138]
术语“杂芳基”表示多个原子的单环或稠合环基团，含有一个、两个、三个或四个选自n、o或s的环杂原子，其余环原子是c，另外具有完全共轭的π电子系统。未取代的杂芳基地非限制性实例有吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、嘧啶、喹啉、异喹啉、嘌呤、四唑、三嗪和咔唑。
[0139]
术语“烷氧基”表示烷基与氧相连的基团，这里的烷基可以直链、支链或环烷基。
[0140]
术语“羟基”表示-oh基团.
[0141]
术语“氨基”表示-nh2基团。
[0142]
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
[0143]
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。
[0144]
术语“立体异构体”指具有同一化学构成，但是原子或基团在空间的排列不同的化合物。
[0145]
属于“溶剂化物”指某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
[0146]
本技术书中提到的数字范围，例如“c1-c8”，是指该基团可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括8个碳原子。
[0147]
本技术书中的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
附图说明：
[0148]
图1表示实施例17中小鼠体重变化示意图。
[0149]
图2表示实施例18中小鼠肺组织病毒滴度示意图。
具体实施方式
[0150]
下面的实施例中提供了本发明的化合物的许多示例性制备方法。下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。本发明的某些化合物能够用作制备本发明的其它化合物用的中间体，所有化合物的结构均经ms确定。
[0151]
本技术的实施例中的原料、溶试剂、催化剂均通过商业途径购买。
[0152]
实施例1：化合物zjt1的合成
[0153]
反应式：
[0154][0155]
制备方法：
[0156]
步骤1：化合物zjt1-03的制备：
[0157]
氮气保护下，将化合物zjt1-sm1(37.2g，100mmol)加入到无水四氢呋喃(370ml)中，冷却至-25～-35℃，在此温度下滴加溶有三叔丁基氢化铝锂(25.4g，100mmol)的无水四氢呋喃溶液(35ml)；加入完毕后，反应2h，tlc检测反应完毕。升温至-15℃，向体系加入饱和氯化铵水溶液，搅拌猝灭反应后，硅藻土过滤，滤液减压浓缩除去四氢呋喃，剩余物加入乙
酸乙酯萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物为化合物zjt1-03，不做进一步处理，直接进行下一步。
[0158]
步骤2：化合物zjt1-02的制备：
[0159]
上述剩余物加入二氯甲烷(280ml)，充氮气保护，冷却至-25左右，加入三苯基磷(28.9g，110mmol)，加入完毕，搅拌20分钟，体系加入四溴化碳(cbr4，39.8g，120mmol)，加入完毕，体系缓慢升温至0℃左右；tlc监测反应完毕，过硅胶垫，滤液体系浓缩至干，剩余物用石油醚/正己烷重结晶，所得固体再硅胶柱纯化，洗脱，得化合物zjt1-02(18.6g)，两步总收率42.5％。esi-ms(+):m/z＝437.03。
[0160]
步骤3：化合物zjt1-01的制备：
[0161]
氩气保护下，将2-氨基-6-氯嘌呤(8.5g，50mmol)溶于叔丁醇(120ml)中，然后加入叔丁醇钾(5.6g，50mmol)。室温搅拌1小时，向体系缓慢加入溶有化合物zjt1-02(18.6g，42.5mmol)的无水乙腈溶液(25ml)，并将体系加热至65℃，反应20小时，tlc检测反应完毕，冷却至室温，饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭反应，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析，得化合物zjt1-01(9.8g)，收率43.8％。esi-ms(+):m/z＝526.17。
[0162]
步骤4：化合物zjt1的制备：
[0163]
氩气保护下，将化合物zjt1-01(5.26g，10mmol)溶于无水乙醇(100ml)中，加入33％的一甲胺无水乙醇溶液(1.4g，15mmol)，体系加热至80℃反应24小时。反应结束后，浓缩至干，柱层析得到化合物zjt1(2.14g)，收率68.6％。esi-ms(+):m/z＝313.13。
[0164]
实施例2：化合物zjt2的合成
[0165]
反应式：
[0166][0167]
制备方法：
[0168]
步骤1：化合物zjt2-07的制备：
[0169]
氩气保护下将zjt2-sm1(27.2g，0.1mol)加入300ml二氯甲烷中，加入三乙胺
(30.4g，0.3mol)，冰浴下缓慢加入氯甲酸异丁酯(13.7g，0.1mol)，室温搅拌反应3小时，冰浴下加入氨气的甲醇溶液(2.0m，50ml)，室温下继续反应5小时，减压浓缩，所得残留物加入dmf(500ml)，冰浴下缓慢加入2,4,6-可力丁(36.4g，0.3mol)与氰尿酰氯(55.3g，0.3mol)，室温反应20小时，减压蒸馏除去dmf，剩余物加入水，用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用乙醇/水重结晶得化合物zjt2-07(13.2g，52.1％)，esi-ms(+):m/z＝254.14。
[0170]
步骤2：化合物zjt2-06制备：
[0171]
氩气保护下，将zjt2-07(2.5g，10.0mmol)加入10ml乙酸乙酯中，加入5ml盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌1.5小时，用三乙胺中和至碱性，为化合物zjt2-06乙酸乙酯备用液。
[0172]
步骤3：化合物zjt2-05制备：
[0173]
将zjt2-sm2(11.1g，0.1mol)加入水(1000ml)中，加入过硫酸钠(71.4g，0.3mol)与硝酸银(1.7g，0.01mol)，加热至回流反应8小时，降温，浓缩，剩余物加入乙醇(200ml)，搅拌2小时，过滤，滤液浓缩，剩余物柱层析纯化得化合物zjt2-05(5.93g，54.3％)，esi-ms(+):m/z＝110.10。
[0174]
步骤4：化合物zjt2-04制备：
[0175]
氮气保护下将zjt2-05(5.5g，50mmol)加入甲苯(100ml)中，加入二羰基乙酰丙酮化铑(5.2g，20mmol)与n-bn-yanphos配体(1.2g)的甲苯溶液20ml，加入苯甲酸(2.4g，20mmol)，将反应液转移至高压釜中，通入一氧化碳(3.0bar)与氢气(3.0bar)，保持压力回流反应48小时，冷却至室温，冰浴下加入单过氧邻苯二甲酸镁六水合物(40.4g，0.1mol)的甲醇(50ml)、磷酸缓冲溶液(ph＝6.5，50ml)，继续加热反应2小时，冷却，分出有机相，浓缩，柱层析分离得化合物zjt2-04(1.5g，22.0％)，esi-ms(+):m/z＝137.10。
[0176]
步骤5：化合物zjt2-03制备：
[0177]
将zjt2-04(1.4g，10.0mol)加入甲醇(20ml)中，依次加入水(2ml)、氢氧化钠(0.8g，20.0mol)，加热至回流反应2小时，用盐酸(0.1m)调节ph至5～6，浓缩，制备液相分离得化合物zjt2-03(0.38g，24.5％)，esi-ms(-):m/z＝154.09。
[0178]
步骤6：化合物zjt2-02制备：
[0179]
将zjt2-03(1.5g，10.0mmol)加入四氢呋喃(50ml)中，加入1-羟基苯并三唑(hobt，1.6g，12.0mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci，2.3g，12.0mmol)，三乙胺(3.0g，30.0mmol)，室温搅拌2小时，加入上述的zjt2-06乙酸乙酯备用液，室温继续反应4小时，浓缩，所得残留物加入水，用乙酸乙酯萃取两次，分出有机相，饱和食盐水洗涤两次，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物zjt2-02(1.13g，38.9％)，esi-ms(+):m/z＝291.17。
[0180]
步骤7：化合物zjt2-01制备：
[0181]
将boc-l-叔亮氨酸(1.2g，5.0mmol)加入40ml四氢呋喃中，加入hobt(0.81g，6.0mmol)，edci(1.15g，6.0mmol)，三乙胺(1.5g，15.0mmol)，室温搅拌1小时，加入zjt2-02(1.45g，5.0mmol)的四氢呋喃溶液(20ml)，室温继续反应3小时，浓缩，加入水和乙酸乙酯振摇，分液，有机相加入1m的盐酸乙酸乙酯溶液，继续搅拌1小时，冰浴下用三乙胺调节至碱性，体系水洗两遍，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物zjt2-01(0.65g，32.4％)，esi-ms(+):m/z＝404.26。
[0182]
步骤8：化合物zjt2制备：
[0183]
将2,2-二氟-2-羟基乙酸(0.6g，5.0mmol)加入四氢呋喃(40ml)中，加入hobt(0.81g，6.0mmol)，edci(1.15g，6.0mmol)，三乙胺(1.5g，15.0mmol)，室温搅拌1小时，加入zjt2-01(2.0g，5.0mmol)的四氢呋喃溶液(20ml)，室温继续反应3小时，浓缩，剩余物加入水和乙酸乙酯振摇，分液，有机相水洗两遍，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物zjt2(0.78g，31.2％)，esi-ms(+):m/z＝498.24。
[0184]
实施例3：化合物viz98-01的合成
[0185]
反应式：
[0186][0187]
制备方法：
[0188]
反应瓶中依次加入四氢呋喃(30ml)、化合物zjt1(3.12g，10mmol)、异丁酸-2,2,2-三氟乙酯(1.7g，10mmol)，加入磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲溶液(ph～6.8，30ml)，震荡溶解后加入酯化酶蛋白酶proteinase n(1.0g)，升温至35～40℃震荡反应36-40小时。反应结束冷却至室温，过滤，混合液用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相水洗2次，浓缩，剩余物过柱纯化，得产物viz98-01(0.83g)，收率21.7％。esi-ms(+):m/z＝383.18。
[0189]
实施例4：化合物viz98-02的合成
[0190]
反应式：
[0191][0192]
制备方法：
[0193]
反应瓶中依次加入四氢呋喃(30ml)、化合物zjt1(3.12g，10mmol)、异丁酸(1.76g，20mmol)，4-二甲氨基吡啶(dmap，2.44g，20mmol)，溶解后加入edci(3.82g，20mmol)，升温至70℃，搅拌反应，tlc监控反应完毕，体系降温，浓缩，剩余物，加入乙酸乙酯和水，分出有机相，再次水洗两次，干燥，减压蒸干，剩余物过柱纯化，得产物viz98-02(2.24g)，收率49.5％。esi-ms(+):m/z＝453.22。
[0194]
实施例5：化合物viz98-03的合成
[0195]
反应式：
[0196][0197]
制备方法：
[0198]
步骤1：化合物viz98-0301的合成
[0199]
将异丁酸(26.4g，0.3mol)、水(300ml)、二氯甲烷(300ml)、四丁基硫酸氢铵(10.2g，0.03mol)和碳酸氢钠(100.g，1.2mol)装入三口瓶中。室温下，滴加氯甲基氯磺酸酯(59.4g，0.36mol)，并在室温下搅拌反应过夜。分离有机层和水层，并用二氯甲烷(300ml)萃取水层。合并有机相，干燥、浓缩，过柱纯化，得化合物viz98-0301(29.3g)，收率71.5％。esi-ms(+):m/z＝137.03。
[0200]
步骤2：化合物viz98-03的合成
[0201]
反应瓶中加入化合物zjt1(15.6g，50.0mmol)，三乙胺(75.9g，75.0mmol)和viz98-0301(6.8g，50.0mmol)，加入100ml的n,n-二甲基甲酰胺，体系加热至50℃，搅拌24小时。降温至室温，加水搅拌，过滤，得到粗品，过硅胶柱纯化得到化合物viz98-03(4.7g)，收率22.8％，esi-ms(+):m/z＝413.19。
[0202]
实施例6：化合物viz98-04的合成
[0203]
反应式：
[0204][0205]
制备方法：
[0206]
反应瓶中加入化合物zjt1(7.8g，25.0mmol)，三乙胺(63.3g，62.5mmol)和viz98-0301(6.8g，50.0mmol)，加入100ml的n,n-二甲基甲酰胺，体系加热至50℃，搅拌24小时。降温至室温，加水搅拌，过滤，得到粗品，过硅胶柱纯化得到化合物viz98-04(6.1g)，收率47.6％，esi-ms(+):m/z＝513.24。
[0207]
实施例7：化合物viz98-21的合成
[0208]
反应式：
[0209][0210]
制备方法：
[0211]
氩气氛围下，将三光气(1.2g，4.0mmol)加入无水四氢呋喃(50ml)中，加入三乙胺(1.6g，16.0mmol)，冰浴下缓慢加入zjt2(2.0g，4.0mmol)的四氢呋喃溶液(10ml)，室温下搅拌反应2小时，冰浴下缓慢加入zjt1(1.25g，4.0mmol)的四氢呋喃溶液(10ml)，回流反应3小时，降温，浓缩，加入冰水淬灭反应，搅拌2小时，过滤，所得固体柱层析分离得化合物viz98-21(0.62g，18.6％)，esi-ms(+):m/z＝836.36。
[0212]
实施例8：化合物viz98-22的合成
[0213]
反应式：
[0214][0215]
制备方法：
[0216]
氩气氛围下，将三光气(0.3g，1.0mmol)加入无水四氢呋喃(30ml)中，加入三乙胺(0.8g，8.0mmol)，冰浴下缓慢加入zjt2(0.5g，1.0mmol)的四氢呋喃溶液(10ml)，室温下搅拌反应2小时，冰浴下缓慢加入zjt1(0.16g，0.5mmol)的四氢呋喃溶液(5ml)，回流反应3小时，降温，浓缩，加入冰水淬灭反应，搅拌2小时，过滤，所得固体柱层析分离得化合物viz98-22(0.32g，47.1％)，esi-ms(+):m/z＝1359.58。
[0217]
实施例9：化合物viz98-26的合成
[0218]
反应式：
[0219][0220]
制备方法：
[0221]
反应瓶中依次加入四氢呋喃(100ml)、化合物zjt1(3.12g，10mmol)、dmap(1.34g，11mmol)，溶解后依次加入edci(2.11g，11mmol)和viz98-26-sm(3.2g，10mmol)，升温至70℃，搅拌反应，tlc监控反应完毕，体系降温，蒸干，加入乙酸乙酯和水，分出有机相，再次水洗两次，干燥，减压蒸干，剩余物过柱纯化，得产物viz98-26(0.75g)，收率12.2％。esi-ms(+):m/z＝613.19。
[0222]
实施例10：化合物viz98-27的合成
[0223]
反应式：
[0224][0225]
制备方法：
[0226]
反应瓶中依次加入四氢呋喃(100ml)、化合物zjt1(3.12g，10mmol)、dmap(2.57g，21mmol)，溶解后依次加入edci(4.02g，21mmol)和viz98-26-sm(6.4g，20mmol)，升温至70℃，搅拌反应，tlc监控反应完毕，体系降温，蒸干，加入乙酸乙酯和水，分出有机相，再次水洗两次，干燥，减压蒸干，剩余物过柱纯化，得产物viz98-27(3.28g)，收率35.9％。esi-ms(+):m/z＝913.25。
[0227]
实施例11：化合物viz98-28的合成
[0228]
反应式：
[0229][0230]
制备方法：
[0231]
步骤1：化合物viz98-2801的制备
[0232]
将化合物viz98-26-sm(9.6g，30mmol)、水(100ml)、二氯甲烷(100ml)、四丁基硫酸氢铵(1.02g，3mmol)和碳酸氢钠(10.1g，120mmol)加入三口瓶中。室温下，滴加氯甲基氯磺酸酯(5.95g，36mmol)，并在室温下搅拌反应过夜。分离有机层和水层，并用二氯甲烷萃取水层。合并有机相，干燥、浓缩，过柱纯化，得化合物viz98-2801(7.92g)，收率71.9％。esi-ms(+):m/z＝367.04。
[0233]
步骤2：化合物viz98-28的制备
[0234]
反应瓶中加入化合物zjt1(3.12g，10mmol)，叔丁醇钾(1.68g，15mmol)和viz98-2801(3.67g，10mmol)，加入100ml的n,n-二甲基甲酰胺，体系加热至50℃，搅拌24小时。降温至室温，加水搅拌，过滤，得到粗品，过硅胶柱纯化得到化合物viz98-28(1.82g)，收率28.3％，esi-ms(+):m/z＝643.20。
[0235]
实施例12：化合物viz98-29的合成
[0236]
反应式：
[0237][0238]
制备方法：
[0239]
反应瓶中加入化合物zjt1(1.56g，5mmol)，叔丁醇钾(1.35g，12mmol)和viz98-2801(3.67g，10mmol)，加入50ml的n,n-二甲基甲酰胺，体系加热至50℃，搅拌24小时。降温至室温，加水搅拌，过滤，得到粗品，过硅胶柱纯化得到化合物viz98-29(3.35g)，收率68.8％，esi-ms(+):m/z＝973.27。
[0240]
实施例13：化合物viz98-40的合成
[0241]
反应式：
[0242][0243]
制备方法：
[0244]
步骤1-步骤4：化合物viz98-4008的制备
[0245]
参考实施例1的各步操作工序，用viz98-40-sm和替换zjt1-sm1，得到化合物viz98-4008(3.66g)，四步收率13.2％。esi-ms(+):m/z＝299.14。
[0246]
步骤5：化合物viz98-4007的制备
[0247]
将化合物viz98-4008(3.5g，11.73mmol)溶于乙腈(100ml)和吡啶(5ml)的混合溶剂，依次向反应液中加入三苯基膦(4.30g，16.4mmol)和碘单质(3.92g，15.4mmol)。室温搅拌18h，薄层检测显示原料基本反应完全。加入水(50ml)，减压蒸干有机溶剂，用二氯甲烷：异丙醇(3:1)萃取(70ml
×
5)。无水硫酸钠干燥，柱层析得化合物viz98-4007(2.08g)，收率43.4％。esi-ms(+):m/z＝409.04。
[0248]
步骤6：化合物viz98-4006的制备
[0249]
将化合物viz98-4007(2.00g，4.90mmol)(1.65g，4.04mmol)溶于0.4n的甲醇钠甲醇溶液，65℃反应4小时，薄层显示原料消失(二氯甲烷：甲醇＝15:1展开两次)。冷却到室温，用醋酸调节ph值至中性，减压浓缩，残余物柱层析，得化合物viz98-4006(1.14g)，收率83.2％。esi-ms(+):m/z＝281.15。
[0250]
步骤7：化合物viz98-4005的制备
[0251]
将叠氮化钠(0.66g，10.17mmol)溶于10ml无水四氢呋喃(30ml)中，冷却到0℃加入氯化碘(1.1g，6.78mmol)搅拌10分钟。将化合物viz98-4006(0.95g，3.39mmol)的无水四氢呋喃溶液(15ml)滴加入上述反应液中，0℃反应5h。乙酸乙酯萃取干燥、浓缩、柱层析分离得化合物viz98-4005(1.03g)，收率67.7％。esi-ms(+):m/z＝450.11。
[0252]
步骤8：化合物viz98-4004的制备
[0253]
将化合物viz98-4005(0.90g，2.11mmol)溶于无水二氯甲烷(40ml)中，冰水浴加入n,n-二异丙基乙胺(1.10g，8.44mmol)和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(tbsotf，1.95g，7.38mmol)，室温搅拌过夜。加入二氯甲烷(200ml)，依次用饱和碳酸氢钠、饱和氯化铵、饱和食盐水各(80ml)洗涤。无水硫酸钠干燥、浓缩柱层析得化合物viz98-4004(1.03g)，收率86.6％。esi-ms(+):m/z＝564.15。
[0254]
步骤9：化合物viz98-4003的制备
[0255]
将化合物viz98-4004(1.0g，1.77mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，加入水(10ml)和磷酸氢二钾(0.49g，3.54mmol)、四丁基硫酸氢铵(0.66g，1.95mmol)和间氯苯甲酸(0.31g，2.00mmol)，冷却到0℃，加入间氯过氧苯甲酸(0.92g，5.33mmol)室温搅拌过夜，液质检测显示原料产物比例约为3：7，加入乙酸乙酯30ml，饱和亚硫酸钠(20ml)洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物viz98-4003粗品，未经处理，直接用于下一步。
[0256]
步骤10：化合物viz98-4002的制备
[0257]
将上一步所得化合物viz98-4003粗品溶于氨气甲醇溶液(6n，50ml)，室温搅拌15h，反应完全，蒸干溶剂、柱层析得化合物viz98-4002(0.61g)，步骤9和步骤10两步总收率76.0％。esi-ms(+):m/z＝454.28。
[0258]
步骤11：化合物viz98-4001的制备
[0259]
反应瓶中依次加入四氢呋喃(300ml)、化合物viz98-3802(0.55g，1.21mmol)、4-二甲氨基吡啶(dmap，0.18g，1.47mmol)，溶解后依次加入edci(0.28g，1.46mmol)和viz98-26-sm(0.46g，1.44mmol)，升温至70℃，搅拌反应，tlc监控反应完毕，体系降温，蒸干，加入乙酸乙酯和水，分出有机相，再次水洗两次，干燥，减压蒸干，剩余物过柱纯化，得产物viz98-4001(0.43g)，收率47.1％。esi-ms(+):m/z＝754.28。
[0260]
步骤12：化合物viz98-40的制备
[0261]
将化合物viz98-4001(0.36g，0.48mmol)溶于无水四氢呋喃(10ml)中，0℃加入氟化氢吡啶溶液(65％，8ml)，室温搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠，乙酸乙酯萃取30ml
×
4次，合并有机相，无水硫酸钠干燥浓缩柱层析得化合物viz98-40(0.22g)，收率71.7％。esi-ms(+):m/z＝640.21。
[0262]
实施例14：化合物viz98-46的合成
[0263]
反应式：
[0264][0265]
制备方法：
[0266]
参考实施例9操作工序，制备得化合物viz98-46(0.24g)，收率16.3％。esi-ms(+):m/z＝687.45。
[0267]
实施例15：化合物viz98-47的合成
[0268]
反应式：
[0269][0270]
制备方法：
[0271]
参考实施例13中步骤11和步骤12的操作工序，制备得化合物viz98-47(0.63g)，总收率36.1％。esi-ms(+):m/z＝714.44。
[0272]
按照与上述实施例同样的方法，使用市售化合物或由市售化合物适当合成的中间体化合物，合成了下列实施例化合物。
[0273]
[0274]
[0275][0276]
[0277]
实施例16：抗流感病毒活性测定
[0278]
病毒株：流感病毒a/fm/1/47(h1n1)和a/汉防/359/95(h3n2)。
[0279]
细胞：犬肾细胞系mdck，来源于atcc。
[0280]
受试化合物和阳性对照化合物配置：将化合物viz98-01、viz98-05、viz98-07、viz98-21、viz98-26、viz98-30、viz98-32、viz98-34、viz98-36、viz98-38、viz98-40、viz98-42、viz98-44、viz98-46和化合物a(阳性对照化合物)用dmem培养基分别稀释成8个不同浓度。
[0281]
测试方法：
[0282]
(1)将5
×
104个/ml的犬肾细胞(mdck)悬液100μl接种于96孔培养板中，于37℃、5％co2培养箱中培养，分别用于各化合物的细胞半数毒性浓度(cc
50
)实验和细胞病变效应半数有效浓度(ec
50
)；
[0283]
(2)上述mdck细胞接种24h，弃除培养基，加入梯度稀释的8种浓度的含受试化合物及阳性对照化合物的维持液，同时设细胞对照孔，每种浓度设3个平行孔，继续培养48h进行细胞半数毒性浓度(cc
50
)测定；
[0284]
(3)上述mdck细胞接种24h，弃除培养基，加入100μl含有上述流感病毒(moi＝0.04)的培养基感染细胞，吸附2h后弃含病毒培养基，加入梯度稀释的8种浓度的含受试化合物及阳性对照化合物的维持液，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，每种浓度设3个平行孔，继续培养48h进行细胞病变效应半数有效浓度(ec
50
)测定；
[0285]
(4)分别向(2)和(3)培养48h的96孔版中每孔加入100μl celltiter-glo荧光细胞活性检测试剂，具体操作方法按celltiter-glo细胞活力检测试剂盒(promega公司)说明书进行。利用graphpad5.0软件计算细胞半数毒性浓度(cc
50
)和胞病变效应半数有效浓度(ec
50
)，并计算选择指数(si＝cc
50
/ec
50
)。结果见表1。
[0286]
表1抗流感病毒活性测定
[0287][0288]
由以上结果可知，本发明公开的化合物对流感病毒a/fm/1/47(h1n1)和a/汉防/359/95(h3n2)均具有很好的活性，并且比阳性对照化合物活性更为优异，其中化合物viz98-26对a/fm/1/47(h1n1)和a/汉防/359/95(h3n2)的选择指数甚至达到了阳性对照化合物的156倍和126倍。因此，本发明公开的化合物可以用作制备预防/治疗由流感病毒感染所诱发的疾病的药物。优异的抗流感病毒活性，以及更高的选择性，预示本发明公开化合物临床给药剂量可以更小、副作用更低。
[0289]
实施例17：抗冠状病毒活性测定
[0290]
受试化合物和阳性对照化合物：viz98-01、viz98-05、viz98-07、viz98-21、viz98-26、viz98-30、viz98-32、viz98-34、viz98-36、viz98-38、viz98-40、viz98-42、viz98-44、viz98-46和化合物a(阳性对照化合物)。
[0291]
方法1：细胞活性实验
[0292]
(1)按每孔5
×
104个vero e6细胞接种到96孔板中，于37℃、5％co2培养箱中培养过夜用于实验；
[0293]
(2)药物与细胞孵育：用含dmem-2％胎牛血清培养基稀释受试化合物和阳性对照化合物。三倍倍比稀释药物，共8个药物梯度，每个浓度设置3个复孔；dmso作为对照组，对照组采用含总体积dmem-2％胎牛血清的培养基稀释，给予药物同体积的dmso；去除细胞上清后，在1.2的48孔板中加入100μl稀释后的化合物，对照组加入同等体积稀释后的dmso，置37℃孵育1h。
[0294]
(3)sars-cov-2感染细胞：在48孔板每孔加入5μl的sars-cov-2，病毒稀释液(moi＝0.01vero e6)37℃继续孵育lh，去除感染物上清，用200μlpbs(磷酸盐缓冲液)洗一遍。重新在孔中加入200μl对应浓度含药物的培养基，继续培养24h，收取150μl上清待测；
[0295]
(4)病毒rna提取采用试剂盒takara minibest viral rna/dna extraction kit：病毒裂解，在150μl细胞培养上清中加入50μl pbs溶液使总体积为200μl。依次加入200μl的buffer vgb缓冲液、20μl的proteinase k、1μl的carrier rna，振荡混匀，置于56℃水浴10min充分裂解。再加入200μl无水乙醇，振荡混匀。再经过过柱、洗涤、洗脱获得病毒rna；
[0296]
(5)病毒rna逆转录：操作方法参见takaraprimescript
tm rt reagent kit with gdna eraser试剂盒。去除洗脱液中的dna，再进行逆转录反应备用；
[0297]
(6)采用标准曲线法获得病毒拷贝数：参照试剂盒takara tbpremix ex taq
tm
ii，用已知拷贝数的rbd质粒做标准品，特异性引物靶向rbd，计算出每个样品的拷贝数。以空白dmso组拷贝数作为参照，获得化合物处理组抑制率。根据不同浓度化合物处理组抑制率，运用prism6.0.1软件，拟合出抑制率曲线，并计算出半数有效浓度ec
50
。结果见表2。
[0298]
方法2：细胞毒性试验
[0299]
(1)获得处于对数生长期的vero e6细胞(长沙艾碧维生物科技有限公司)，调整细胞密度至5
×
104个/孔，分别以100μl/孔接种于96孔板，培养过夜；
[0300]
(2)给药前采用含总体积2％胎牛血清的dmem培养基倍比将受试化合物和阳性对照化合物稀释8个浓度梯度，取每孔此稀释后的化合物分别加入96孔板中的vero e6细胞中，终体积200μl。设置3个复孔，dmso溶剂处理组为空白对照；
[0301]
(3)培养箱中培养48h后，弃除含化合物的培养液，通过cck8试剂盒(上海沪震实业有限公司)测定受试化合物的细胞毒性并确定对vero e6细胞半数毒性浓度cc50。结果见表2。
[0302]
选择指数(si＝cc
50
/ec
50
)。
[0303]
表2抗冠状病毒活性测定
[0304]
[0305][0306]
由以上结果可知，所有测试化合物均具有比阳性对照化合物(化合物a)更强的抗sars-cov-2病毒的活性和更高的选择性。其中化合物viz98-01、viz98-05、viz98-26、viz98-40和viz98-44抗sars-cov-2病毒活性是化合物a的7倍以上，化合物viz98-01、viz98-05和viz98-26的抗sars-cov-2病毒选择性指数分别是化合物a的9倍、11倍和22倍。因此，本发明公开化合物可以制备用作由冠状病毒感染所诱发的症状/疾病的预防/治疗药物。本发明公开化合物的更高的抗冠状病毒活性，以及更高的选择性特点，预示本发明公开化合物治疗冠状病毒科感染的疾病，给药剂量更小、副作用更低。
[0307]
实施例18：herg试验
[0308]
对受试化合物viz98-01、viz98-05、viz98-07、viz98-21、viz98-26、viz98-30、viz98-32、viz98-34、viz98-36、viz98-38、viz98-40、viz98-42、viz98-44、viz98-46和阳性对照化合物(化合物a)进行体外herg钾离子抑制实验，以考本发明公开化合物的潜在心脏毒性。
[0309]
细胞准备：
[0310]
(1)cho-herg细胞(上海慧颖生物科技有限公司)培养于175cm2培养瓶中，待细胞密度生长到60～80％，移走培养液，用7mlpbs洗涤一遍，然后加入3ml detachin消化(北京华泰昕生物医疗技术有限公司)；
[0311]
(2)待消化完全后加入7ml培养液中和，然后离心，吸走上清液，再加入5ml培养液重悬，以确保细胞密度为2～5
×
106/ml。
[0312]
电生理记录过程：
[0313]
单细胞高阻抗封接和全细胞模式形成过程全部由qpatch仪器自动完成，在获得全细胞记录模式后，细胞钳制在-80毫伏，在给予一个5秒的+40毫伏去极化刺激前，先给予个50毫秒的-50毫伏前置电压，然后复极化到-50毫伏维持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此电压刺激，记录2分钟后给予细胞外液记录1分钟，在产生的电流稳定后，施以含受试化合物和阳性对照化合物(受试化合物和阳性对照化合物的浓度均为15μmol/l)的细胞外液(nacl:145mmol/l、kcl:4mmol/l、cacl2:2.0mmol/l，mgcl2-6h2o:1mmol/l、葡萄糖:10mmol/l、hepes:10mmol/l、ph 7.4)，在室温条件下适用于细胞1分钟。每个化合物至少测试3个细胞(n≥3)。
[0314]
数据分析：实验数据用xlfit软件进行分析。结构见表3。
[0315]
表3化合物在15μmol/l条件下心脏hegr钾电流检测结果
[0316][0317][0318]
结果表明，本发明公开的化合物在15μmol/l下对ikr抑制率均显著小于化合物a，抑制率与化合物a相比显著下降。表明所有测试化合物较化合物化合物a心脏毒性更低。说明本发明公开化合物大大降低了心脏毒性。
[0319]
实施例19：小鼠存活率及体重保护试验
[0320]
实验天数定义：将病毒接种当天定义为实验第0天，往后一天为第1天，依此类推。
[0321]
实验动物和分组：无特定病原体级别的雄性k18-ace2转基因小鼠(b6.cg-tg(k18-ace2)2primn/j mice)40只，6-8周龄，购于美国杰克森实验室，按照体重平均分成5组，每组8只，分别为溶媒感染组、viz98-26低剂量组(44.5mpk)、viz98-26中剂量组(89.5mpk)、viz98-26高剂量组(178.5mpk)和化合物a组(143mpk)；
[0322]
病毒接种：第0天，所有小鼠通过吸入异氟烷麻醉后，经滴鼻的方式接种病毒，5个组别的每只动物接种sars-cov-2,接种量为5,000p.f.u.，接种体积为50μl。
[0323]
给药：用化合物或溶媒处理小鼠，5个组别均从第1天开始连续灌胃给药5天，每天2次。
[0324]
健康监测：实验期间，每日观察小鼠，记录小鼠体重、存活状况及临床症状。
[0325]
人道终点：根据iacuc方案规定，实验期间任何小鼠体重下降超过20％(以第0天体重为基准体重)，或/以及临床症状评分为3分及以上，或表现出濒死状态，将被执行安乐死，并在结果中记为死亡动物。
[0326]
临床症状评分:观察动物感染症状，记录竖毛，弓背，嗜睡/不活跃，及呼吸沉重，出现任一症状记1分。症状得分的加和即为临床症状评分。
[0327]
用two-way anova分析小鼠体重变化，用log-rank(mantel-cox)对小鼠进行生存分析。
[0328]
病毒接种后，各组小鼠14天的存活率见表4，体重变化如图1。
[0329]
表4小鼠14天生存率
[0330]
组别实验小鼠数量(只)存活小鼠数量(只)存活率(％)溶媒感染组800viz98-26低剂量组8450viz98-26中剂量组88100viz98-26高剂量组88100化合物a组8450
[0331]
溶媒感染组第5-6天小鼠死亡或因人道终点被安乐死，最终存活率为0％；viz98-26低剂量组第6-8天出现4只小鼠死亡或因人道终点被安乐死，最终存活率为50％；viz98-26中剂量组和viz98-26高剂量组最终存活率为100％；这表明，本发明公开化合物对动物生存状况较溶媒感染组均得到显著改善，其中低剂量组改善效果与化合物a组相当，中高剂量组改善效果最为显著。
[0332]
图1小鼠体重变化表明，受试化合物viz98-26的低、中、高剂量条件下，动物最大体重降幅分别为-9.3％、-8.7％和-8.9％，相比于溶媒感染组(最大体重降幅15.2)的体重下降得到有效保护，相比于化合物a组(最大体重降幅10.5％)的体重下降保护也更有效，并且viz98-26各剂量组在小鼠体重保护和病程缩短效果中均表现更佳。
[0333]
实施例20：病毒滴度试验
[0334]
实验天数定义：将病毒接种当天定义为实验第0天，往后一天为第1天，依此类推。
[0335]
实验动物和分组：无特定病原体级别的雄性k18-ace2转基因小鼠(b6.cg-tg(k18-ace2)2primn/j mice)40只，6-8周龄，购于美国杰克森实验室，按照体重平均分成5组，每组5只，分别为溶媒感染组、viz98-26低剂量组(31.5mpk)、viz98-26中剂量组(62.5mpk)、viz98-26高剂量组1(125mpk)和viz98-26高剂量组2(125mpk)，其中viz98-26高剂量组1和viz98-26高剂量组2给药时间不同；
[0336]
病毒接种：第0天，所有小鼠通过吸入异氟烷麻醉后，经滴鼻的方式接种病毒，5个组别的每只动物接种sars-cov-2,omicron variant(isolate hcov-19/usa/md-hp20874/2021)接种量为100,000p.f.u.，接种体积为50μl。
[0337]
给药：用化合物或溶媒处理小鼠溶媒感染组、viz98-26低剂量组(31.5mpk)、viz98-26中剂量组(62.5mpk)、viz98-26高剂量组1(125mpk)均从第-1天开始连续给药5天(共给药10次)，viz98-26高剂量组2(125mpk)从第-1天开始连续给药2天(第0天只给第一次药，共给药3次)，每天2次，给药方式为灌胃。
[0338]
样品收集：肺组织：放入含有1％ fbs的1ml emem培养基(上海语纯生物科技有限公司)中，在放入肺组织前后分别称量样品管重量计算肺组织样品的重量，样品保存于-80℃冰箱中。
[0339]
样品检测：空斑实验检测肺组织中的新冠病毒滴度：a).将培养好的calu3细胞(武汉尚恩生物技术有限公司)用含10％fbs的mem培养基(上海语纯生物科技有限公司)重悬并铺于6孔板中，细胞密度为2.5
×
105/ml，每孔细胞量为3ml。b).收集好的样品经融化后，用组织匀浆机进行研磨，随后将匀浆液进行离心，取上清用于检测。c).在96孔深孔板中将肺组织匀浆液上清原液用含1％ fbs的mem培养基进行10倍系列梯度稀释，共5个稀释度。d).将上述样品稀释液加入铺好细胞的6孔板中，每孔接种体积为0.2ml，第6孔为1％ fbs mem
培养基对照。e).接种好的细胞板置于培养箱孵育1h，孵育期间每15分钟进行一次摇晃混匀。f).孵育后，移除6孔板中细胞培养基，将1：1比例混合的含1％琼脂及含20％ fbs的mem培养基溶液加入6孔板中。待琼脂凝固后放置于co2培养箱中连续培养3天。g).轻轻移除上述含琼脂糖的培养基，用95％乙醇固定细胞10分钟，pbs清洗后，用含1％结晶紫的10％福尔马林溶液进行再固定和染色15分钟，最后用pbs冲洗3次后干燥。h).肉眼数取上述染色的6孔板中的空斑数，计算样品中的病毒滴度，病毒滴度表示为log 10(每克肺组织样品中的空斑数)＝log 10(每孔中的空斑数*稀释倍数/0.2/肺组织重量)。
[0340]
用one-way anova分析各组间肺组织病毒滴度。结果如图2.
[0341]
图2表明，在新冠病毒omicron突变株感染模型中，本发明公开化合物预防性给药31.5，62.5，125mpk(第-1至第3天)及125mpk(第-1至第0天)剂量下，小鼠肺组织病毒滴度分别为4.10，3.52，3.35及3.87log(pfu/g lung)。与溶媒组相比，病毒滴度分别下降1.20，1.78，1.95及1.43log(pfu/g lung)，表明受试化合物viz98-26预防性给药可以显著抑制病毒在小鼠肺组织中的复制，显示了良好的预防新冠病毒感染的效果。其中，高剂量(125mpk)组连续5天(共10次)给药对病毒的抑制效果优于其2天(共3次)给药的方案。
[0342]
虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的修改和完善，因此本发明的保护范围当以权利要求书所界定的为准。

技术特征：
1.一种如(i0)所示的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐：式(i0)中，r
x1
和r
x2
分别独立地选自氢、羟基、c1-c8烷基、卤素；r
x3
选自氢、或叠氮基；r
x4
选自氢、或氰基；r
1a
和r
1b
分别独立的选自氢、-or5、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；其中，上述r5选自氢、其中，上述n1选自0、1、2或3，当n1为0时，羰基直接和氧相连成酯键；n2选自1、2或3；r
a
选自或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基、c3-c8环烷氧基、c2-c8烯基、c6-c18芳基、c6-c18芳基氧基；其中，r
b
选自氢或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基、c3-c8环烷氧基、c2-c8烯基、c6-c18芳基、c6-c18芳基氧基；r
c1
和r c2
分别独立地选自氢、被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8的烷基；r2选自氢或氨基；r3和r4分别独立地选自氢、分别独立地选自氢、
并规定，r3和r4不能同时为氢；上述r
a
、r
c1
、r
c2
、n1和n2如上述所定义的；n3和n4分别独立地选自0、1、2、3或4；r
6a
和r
6b
分别独立地选自氢、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；或者r
6a
和r
6b
与其相连的碳成环烷基；r7选自氢、卤素、氨基、被基团a取代或未取代的c1-c8烷基；z选自氢、羟基、卤素、其中，上述n5选自0、1、2、3或4；r8选自h、羟基、卤素、被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：氨基、c1-c8的烷基、c6-c18的芳基、c1-c8的烷基氧基、氨基c1-c8的烷基、c1-c8的烷基芳基、c6-c18的芳基羰基、c1-c8的烷基羰基氧基；x选自o、s、或nh；r
d1
和r
d2
分别独立地选自氢、卤素、被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c1-c8烷胺基、或r
d1
和r
d2
与其相连的碳成3-7元环，此3-7元环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代；r
e
选自被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c1-c8烷胺基；r
f1
和r
f2
分别独立地选自氢、卤素或被一个或多个基团a取代或未取代的c1-c8烷基；r
g
、r
h
分别独立地选自被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基，或r
g
、r
h
以及与其相连的碳相连成3-7元环，此3-7元环上的原子或基团可被一个或多个基团a取代或未取代；r
i1
和r
i2
分别独立地选自氢、氰基、或被一个或多个基团a取代或未取代的下列基团：c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c2-c8烯基、c2-c8炔基；其中，ra为上述所定义的；所述基团a为：c1-c8的烷基、c1-c8的烷氧基、
氨基、巯基、巯基c1-c8烷基、卤素、氰基、醛基、硝基、三氟甲基、氯苯羰基、c3-c8的环烷基、c3-c8的环烷氧基、c6-c18的芳基、c6-c18的芳基氧基；其中，r
a
、r
b
如上述所定义的；m选自1或2。2.如权利要求1所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐，其结构如式(i)：其中，式(i)中取代基的定义如权利要求1式(i0)所定义的。3.如权利要求1所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐，其结构如式(ii)：其中，式(ii)中取代基的定义如权利要求1式(i0)所定义的。4.如权利要求1所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐，其结构如式(ⅲ)：其中，式(ⅲ)中取代基的定义如权利要求1式(i0)所定义的。5.如权利要求1所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构
体、溶剂化物及其药学上可接受的盐，其结构如式(iv)：其中，式(iv)中取代基的定义如权利要求1式(i0)所定义的。6.如权利要求1至5所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐，其中该化合物包括但不限于下列化合物：
7.包含如权利要求1至6中任一项所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐的药物组合物。8.权利要求1至6中任一项所述的抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物、互变异构体、立体异构体、溶剂化物及其药学上可接受的盐，或者权利要求7所述的药物组合物在制备抗病毒药物中的应用。9.权利要求8所述的应用，被制备的所述药物按照多种合适选择的给予方式给患者用药，这些途径包括全身例如口服、吸入或胃肠外，通过静脉内、肌肉、透皮或皮下等用于预防和/或治疗由病毒引起的疾病；所述的病毒包括但不限于：沙粒病毒科、丝状病毒科和冠状病毒科病毒等，包括但不限于腺病毒、鼻病毒、甲型肝炎病毒、乙型肺炎病毒、丙型肺炎病毒、hiv病毒、脊髓灰质病毒、麻疹病毒、埃博拉病毒、柯萨奇病毒、西尼罗病毒、天花病毒、黄热病毒、登革热病毒、流感病毒、拉沙病毒、呼吸道合胞病毒、严重急性呼吸综合症病毒、副流感病毒、冠状病毒等。10.权利要求9所述的应用，所述的流感病毒和冠状病毒包括但不限于：甲型流感病毒、乙型流感病毒、sars病毒、mers病毒、covid-19病毒等。11.根据权利要求8-10中任一项所述的应用，被制备的所述药物的剂型为注射剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、黏膜给药剂、腔道给药剂型或口服剂型。

技术总结
本发明公开了一种抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物及其药物组合物和用途，所述抗病毒感染的新颖的嘌呤核苷衍生物如式(I0)所示；该化合物可用于制备抗病毒的药物。该化合物可用于制备抗病毒的药物。该化合物可用于制备抗病毒的药物。


技术研发人员：张哲峰
受保护的技术使用者：南京知和医药科技有限公司
技术研发日：2022.12.15
技术公布日：2023/7/25