一种桑黄多糖的提取方法

1.本发明属于食药用菌多糖技术领域，特别涉及一种桑黄多糖的提取方法。


背景技术：

2.桑黄是一种颇具药用价值的多年生大型真菌，因多生长于桑属植物上，且子实体多为黄褐色而得名，又名火木层孔菌、桑臣、桑耳，桑黄成分复杂，含有多糖、黄酮、三萜、甾醇、香豆素类化合物等多种活性成分。在我国民间桑黄用于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、脐腹涩痛、闭经和脾虚泄泻等。现代药理学研究证明，桑黄多糖具有抗肿瘤、抑制肝纤维化、提高免疫力、降低血糖和抗病毒等功效，且抗肿瘤活性优于多种真菌类药物。因此，近年来越来越受到人们的重视，对桑树桑黄多糖的研究也逐渐增多。现有技术中，对于桑树桑黄多糖的提取通常利用超声萃取法等，上述方法存在多糖得率低的问题，且其提取时间不稳定，提取时间过短导致多糖提取不完全，提取时间过长不仅会增加能耗，同时多糖物质的稳定性将变差，从而降低多糖得率。因此，提供一种桑树桑黄多糖的提取方法，提高桑树桑黄多糖产率是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

3.针对现有提取方法提取的多糖得率低的问题，本发明提供一种桑黄多糖的提取方法。
4.为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
5.本发明提供一种桑黄多糖的提取方法，包括如下步骤：
6.步骤a、将桑黄子实体粉碎，加入到乙醇溶液中，浸泡，固液分离，干燥，粉碎，过筛，得桑黄粉；
7.步骤b、将所述桑黄粉加入水中，于95℃-100℃下浸泡，抽滤，将所得滤液浓缩后，加入62％-67％乙醇溶液进行醇沉，固液分离，干燥，得桑黄粗多糖；
8.步骤c、将所述桑黄粗多糖加入水中，得桑黄粗多糖溶液，对所述桑黄粗多糖溶液进行聚酰胺柱层析，用去离子水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得初级桑黄多糖；
9.步骤d、将所述初级桑黄多糖加入水中，得初级桑黄多糖溶液，对所述初级桑黄多糖溶液进行deae-52纤维素阴离子交换柱层析纯化，依次用去离子水、0.08mol/ml-0.12mol/ml氯化钠溶液、0.28mol/ml-0.32mol/ml氯化钠溶液和0.48mol/ml-0.52mol/ml氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱液，透析脱盐，浓缩，干燥，得桑黄多糖。
10.相对于现有技术，本发明提供的桑黄多糖的提取方法，将桑黄子实体在特定的乙醇溶液中浸泡能够达到脱脂效果，进一步，将桑黄粉于特定温度下浸泡处理，能够提升多糖向外扩散的能力达到最佳，有效提高多糖的得率；通过确定特定浓度的乙醇溶液进行醇沉，可以最大程度地使多糖沉淀出来；选择聚酰胺进行柱层析在提高对桑黄粗多糖中蛋白质和色素的去除率的同时，还能提高桑黄多糖的保持率；deae-52纤维素作为填料进行柱层析纯化，能够吸附离子型物质如蛋白质等，从而去粗取精、达到分离的目的，进而提高桑黄多糖
的得率。
11.本发明提供的桑黄多糖的提取方法，提取率高，提取时间短，操作方便，获得的桑黄多糖得率高，具有极大的药用价值。
12.优选的，步骤a中，所述桑黄子实体和乙醇溶液的质量体积比为1:8-10，质量的单位为g，体积的单位为ml。
13.优选的，步骤a中，步骤a中，所述乙醇溶液的体积浓度为92％-95％。
14.优选的，步骤b中，所述桑黄粉和水的质量体积比为1:105-110，质量的单位为g，体积的单位为ml。
15.优选的比例能进一步提高桑黄多糖的得率。
16.优选的，步骤b中，桑黄粉在水中浸泡提取的次数为2次。
17.优选的，步骤b中，所述浸泡的时间为10h-13h。
18.浸泡时间过长容易导致多糖得率下降，浸泡时间过短导致多糖提取不充分，优选的浸泡时间能够最大程度地提高桑黄多糖的得率。
19.优选的，步骤b中，所述醇沉的时间为24h-28h。
20.优选的，步骤b中，所述醇沉的温度为4℃-6℃。
21.优选的，步骤c中，所述桑黄粗多糖溶液的浓度为100mg/ml-110mg/ml。
22.优选的，步骤c中，所述桑黄粗多糖溶液与去离子的水体积比为1-2:300-330。
23.优选的，步骤d中，所述初级桑黄多糖溶液的浓度为20mg/ml-25mg/ml。
24.优选的，步骤d中，所述初级桑黄多糖溶液与去离子水的体积比为2-5:150-180。
25.优选的，所述去离子水、0.08mol/ml-0.12mol/ml氯化钠溶液、0.28mol/ml-0.32mol/ml氯化钠溶液和0.48mol/ml-0.52mol/ml氯化钠溶液的体积比1-1.2:1-1.2:1-1.2:1-1.2。
26.优选的洗脱液及其用量能进一步提高多糖得率。
27.优选的，步骤d中，所述透析脱盐时截留分子量为3500da-3700da。
28.优选的截留分子量能够去除氯化钠，减少桑黄多糖中杂质的含量。
29.优选的，步骤d中，所述透析脱盐的时间为24h-28h。
30.优选的，步骤d中，收集洗脱液为收集0.08mol/ml-0.12mol/ml氯化钠溶液洗脱后的洗脱液。
具体实施方式
31.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
32.实施例1
33.本实施例提供一种桑黄多糖的提取方法，包括如下步骤：
34.步骤a、将桑黄子实体粉碎后在95％乙醇溶液中浸泡，过滤，干燥，粉碎后过80目筛，保留筛下物，得桑黄粉，其中，桑黄子实体和乙醇溶液的质量体积比为1:10，质量的单位为g，体积的单位为ml；
35.步骤b、将所述桑黄粉加入水中，于95℃下浸泡13h，得浸泡液，浸泡提取重复2次，
将所述浸泡液抽滤，浓缩，于62％乙醇溶液下进行醇沉28h，以4500r/min离心15min，干燥，得桑黄粗多糖，其中，桑黄粉和水的质量体积比为1:110，质量的单位为g，体积的单位为ml；
36.步骤c、将所述桑黄粗多糖加入水中，配置浓度为100mg/ml桑黄粗多糖溶液，对所述桑黄粗多糖溶液进行聚酰胺柱(4cm*58cm)层析，用去离子水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得初级桑黄多糖，其中，桑黄粗多糖溶液的上样量为1ml，桑黄粗多糖溶液的流速为5ml/min，去离子水的使用量为300ml，去离子水的流速为5ml/min；
37.步骤d、将所述初级桑黄多糖加入水中，配置浓度为25mg/ml的初级桑黄多糖溶液，对所述初级桑黄多糖溶液进行deae-52纤维素阴离子交换柱(55cm*2.6cm)层析纯化，依次用去离子水、0.1mol/ml氯化钠溶液、0.3mol/ml氯化钠溶液和0.5mol/ml氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱后的0.1ml氯化钠溶液，在透析袋(截留分子量为3500da)中透析48h，浓缩，干燥，得桑黄多糖，其中，初级桑黄多糖溶液的上样量为2ml，初级桑黄多糖溶液的流速为8ml/min，去离子水、0.1mol/ml氯化钠溶液、0.3mol/ml氯化钠溶液和0.5mol/ml氯化钠溶液的流速均为1ml/min，使用量均为180ml。
38.实施例2
39.本实施例提供一种桑黄多糖的提取方法，包括如下步骤：
40.步骤a、将桑黄子实体粉碎后在92％乙醇溶液中浸泡，过滤，干燥，粉碎后过80目筛，保留筛下物，得桑黄粉，其中，桑黄子实体和乙醇溶液的质量体积比为1:8，质量的单位为g，体积的单位为ml；
41.步骤b、将所述桑黄粉加入水中，于105℃下浸泡10h，得浸泡液，浸泡提取重复2次，将所述浸泡液抽滤，浓缩，于67％乙醇溶液下进行醇沉24h，以4000r/min离心20min，干燥，得桑黄粗多糖，其中，桑黄粉和水的质量体积比为1:105，质量的单位为g，体积的单位为ml；
42.步骤c、将所述桑黄粗多糖加入水中，配置浓度为110mg/ml桑黄粗多糖溶液，对所述桑黄粗多糖溶液进行聚酰胺柱(4cm*58cm)层析，用去离子水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得初级桑黄多糖，其中，桑黄粗多糖溶液的上样量为1ml，桑黄粗多糖溶液的流速为5ml/min，去离子水的使用量为330ml，去离子水的流速为5ml/min；
43.步骤d、将所述初级桑黄多糖加入水中，配置浓度为20mg/ml的初级桑黄多糖溶液，对所述初级桑黄多糖溶液进行deae-52纤维素阴离子交换柱(55cm*2.6cm)层析纯化，依次用去离子水、0.1mol/ml氯化钠溶液、0.3mol/ml氯化钠溶液和0.5mol/ml氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱后的0.1ml氯化钠溶液，在透析袋(截留分子量为3700da)中透析24h，浓缩，干燥，得桑黄多糖，其中，初级桑黄多糖溶液的上样量为5ml，初级桑黄多糖溶液的流速为5ml/min，去离子水、0.1mol/ml氯化钠溶液、0.3mol/ml氯化钠溶液和0.5mol/ml氯化钠溶液的流速均为1ml/min，使用量均为150ml。
44.实施例3
45.本实施例提供一种桑黄多糖的提取方法，包括如下步骤：
46.步骤a、将桑黄子实体粉碎后在93％乙醇溶液中浸泡，过滤，干燥，粉碎后过80目筛，保留筛下物，得桑黄粉，其中，桑黄子实体和乙醇溶液的质量体积比为1:9，质量的单位为g，体积的单位为ml；
47.步骤b、将所述桑黄粉加入水中，于100℃下浸泡12h，得浸泡液，浸泡提取重复2次，将所述浸泡液抽滤，浓缩，于65％乙醇溶液下进行醇沉26h，以4300r/min离心18min，干燥，
得桑黄粗多糖，其中，桑黄粉和水的质量体积比为1:108，质量的单位为g，体积的单位为ml；
48.步骤c、将所述桑黄粗多糖加入水中，配置浓度为105mg/ml桑黄粗多糖溶液，对所述桑黄粗多糖溶液进行聚酰胺柱(4cm*58cm)层析，用去离子水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得初级桑黄多糖，其中，桑黄粗多糖溶液的上样量为1.5ml，桑黄粗多糖溶液的流速为6ml/min，去离子水的使用量为320ml，去离子水的流速为6ml/min；
49.步骤d、将所述初级桑黄多糖加入水中，配置浓度为22mg/ml的初级桑黄多糖溶液，对所述初级桑黄多糖溶液进行deae-52纤维素阴离子交换柱(55cm*2.6cm)层析纯化，依次用去离子水、0.1mol/ml氯化钠溶液、0.3mol/ml氯化钠溶液和0.5mol/ml氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱后的0.1ml氯化钠溶液，在透析袋(截留分子量为3600da)中透析25h，浓缩，干燥，得桑黄多糖，其中，初级桑黄多糖溶液的上样量为3ml，初级桑黄多糖溶液的流速为6ml/min，去离子水、0.1mol/ml氯化钠溶液、0.3mol/ml氯化钠溶液和0.5mol/ml氯化钠溶液的流速均为1ml/min，使用量均为160ml。
50.对比例1
51.本对比例提供一种桑黄多糖的提取方法，本对比例与实施例1的区别在于：将聚酰胺替换为ab-8大孔树脂，其他操作步骤和实施例1相同。
52.对比例2
53.本对比例提供一种桑黄多糖的提取方法，本对比例与实施例1的区别在于：步骤d中，将deae-52纤维素替换为deae sepharose，其他操作步骤和实施例1相同。
54.分别计算实施例1-3和对比例1-2提取的桑黄多糖得率和桑黄多糖纯度，其中，纯化多糖得率％(g/g)＝(纯化多糖质量/纯化前粗多糖质量)
×
100％；粗多糖含量、纯化多糖质量、纯化前粗多糖质量和多糖纯度均采用苯酚硫酸法检测；具体检测结果见表1：
55.表1
56.检测项目桑黄纯化多糖得率/％纯化桑黄多糖纯度/％实施例158.15％67.92％实施例259.24％71.75％实施例360.79％69.03％对比例150.24％53.24％对比例248.32％58.12％
57.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种桑黄多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤a、将桑黄子实体粉碎，加入到乙醇溶液中，浸泡，固液分离，干燥，粉碎，过筛，得桑黄粉；步骤b、将所述桑黄粉加入水中，于95℃-100℃下浸泡，抽滤，将所得滤液浓缩后，加入62％-67％乙醇溶液进行醇沉，固液分离，干燥，得桑黄粗多糖；步骤c、将所述桑黄粗多糖加入水中，得桑黄粗多糖溶液，对所述桑黄粗多糖溶液进行聚酰胺柱层析，用去离子水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得初级桑黄多糖；步骤d、将所述初级桑黄多糖加入水中，得初级桑黄多糖溶液，对所述初级桑黄多糖溶液进行deae-52纤维素阴离子交换柱层析纯化，依次用去离子水、0.08mol/ml-0.12mol/ml氯化钠溶液、0.28mol/ml-0.32mol/ml氯化钠溶液和0.48mol/ml-0.52mol/ml氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱液，透析脱盐，浓缩，干燥，得桑黄多糖。2.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤a中，所述桑黄子实体和乙醇溶液的质量体积比为1:8-10，质量的单位为g，体积的单位为ml；和/或步骤a中，所述乙醇溶液的体积浓度为92％-95％。3.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤b中，所述桑黄粉和水的质量体积比为1:105-110，质量的单位为g，体积的单位为ml；和/或步骤b中，所述浸泡的时间为10h-13h；和/或步骤b中，所述醇沉的时间为24h-28h。4.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤c中，所述桑黄粗多糖溶液的浓度为100mg/ml-110mg/ml。5.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤c中，所述桑黄粗多糖溶液与去离子水的体积比为1-2:300-330。6.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤d中，所述初级桑黄多糖溶液的浓度为20mg/ml-25mg/ml。7.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤d中，所述初级桑黄多糖溶液与去离子水的体积比为2-5:150-180。8.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤d中，所述去离子水、0.08mol/ml-0.12mol/ml氯化钠溶液、0.28mol/ml-0.32mol/ml氯化钠溶液和0.48mol/ml-0.52mol/ml氯化钠溶液的体积比1-1.2:1-1.2:1-1.2:1-1.2。9.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤d中，所述透析脱盐时截留分子量为3500da-3700da。10.如权利要求1所述的桑黄多糖的提取方法，其特征在于，步骤d中，所述透析脱盐的时间为24h-28h。

技术总结
本发明属于食药用菌多糖技术领域，具体公开一种桑黄多糖的提取方法。本发明提供桑黄多糖的提取方法，首先对桑黄子实体粉粹后脱脂，得桑黄粉；对桑黄粉进行热水浸提，醇沉，得到桑黄粗多糖；进一步对桑黄粗多糖进行聚酰胺柱层析，达到脱蛋白和脱色素的效果，得初级桑黄多糖；对所述初级桑黄多糖进行DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析纯化，得桑黄多糖。本发明提供的桑黄多糖的提取方法，提取率高，提取时间短，操作方便，获得的桑黄多糖得率高，具有极大的药用价值。药用价值。


技术研发人员：刘坤 殷九一 程华 孔泽娟 王纯 付鑫垚 陈潇阳
受保护的技术使用者：河北省科学院生物研究所
技术研发日：2023.05.12
技术公布日：2023/7/26