一种细胞器提纯器的制作方法

1.本实用新型属于生命科学中的细胞器领域，具体是一种细胞器提纯器。


背景技术：

2.细胞中的细胞器主要有：线粒体、内质网、中心体、叶绿体、高尔基体、核糖体、细胞核和染色体等。为了痕量、超纯度进行深入临床和基础研究，获得极高纯度细胞器非常必要。显微镜下分离并获得染色标记好的单个目标细胞器，是最理想的方法。目前分选细胞器的常用方法有差速离心、密度梯度离心(storrie b,madden ea.isolation of subcellular organelles.methods enzymol.1990；182:203-25.)、细胞器流式筛选(wampfler,p.b.,tosevski,v.,nanni,p.,spycher,c.,&hehl,a.b.(2014).proteomics of secretory and endocytic organelles in giardia lamblia.plos one,9(4),e94089.)、磁珠亲和分离、亲和层析分离、以及显微切割等，但是所有这些方法都不可避免地会有一定量的其他细胞器污染。并且需要大量的细胞。为了实现挑选纯净靶细胞器的目的，我们设计并制作了方便、经济选取细胞器的细胞器提纯器，能高效地完成目标细胞器样本的选取制备。克服了选取细胞器器械的3个关键问题：一是从细胞制备每类细胞器；二是每类细胞器的染色方法，三为细胞器提纯器的设计和制作。
3.每类细胞器可采用多种染色方法，比如有吉姆萨染液，dapi，hoechst 33258荧光染料等可对染色体染色，并通过带纹区分每号染色体、区别其它细胞器，从而可实现选取目标染色体。golgi体和线粒体也可以用各自特异性的染色加以标记、选取。目前只有通过显微切割设备选取单条染色体，设备昂贵，价格数百万元，并且选取效率也非常低。我们的选取器构造简捷，成本低廉、安全、对环境没有额外化学和噪音污染，操作简单，经过短期训练，选取效率高。优势比如其透明的玻璃细针选取管口，能在明场和荧光显微镜下确认目标细胞器(如染色体)已被选取进入管中；推移目标细胞器染色体也比较稳定高效；吸取含目标细胞器(如染色体)的液体量可有效控制等。


技术实现要素：

4.本实用新型提供一种细胞器提纯器，通过前端玻璃针结合后端持针装置(针柄)不仅可以推移贴壁染色体，而且也可以吸取已移动和悬浮的单个染色体。我们的细胞器提纯器的端口携带β角度，利于推移贴壁染色体；同时斜切端口的内径可以依据目标细胞器的大小进行选择；后端细胞器提纯器针柄便于拿捏，能提高操作稳定性；将单细胞器提纯器的软管密封，容易调节控制吸液量，提高选取效率。这些设计能满足提纯目标染色体效率，使得操作简便，成本低，实用性强。
5.为解决上述技术问题，本实用新型采用如下技术方案：一种细胞器提纯器，包括端口具β角度的前体、中间体和后体。其中所述的端口具β角度的前体，端口内径d细小切合相应的细胞器，具备一定的硬度和韧性可推移和吸取细胞器。中间体为持针装置，可分为硬管、连接管和软管，连接管上设有针柄，针柄能手捏固定。后体则是中间体延伸固接的软管，
密封后形成气囊管，通过手指挤压程度调节吸液量，提取细胞器。其中前体和中间体硬管可通过粘合形成牢固连接并密封；后体软管末端管口通过密封避免虹吸效应。
6.所述的提纯器端口具有β角度，采用玻璃材质管。具有良好的透明度，在倒置显微镜下，确保持续观察到培养皿内液面下管口推移目标染色体。前体端口内径多种尺寸和角度斜切口提纯器可供选择。在提取染色体过程中，将细胞器提纯器倾斜一定角度操作，使得带角度的斜切管口贴合培养皿底，可形成一定的密封效果，更易吸取到目标染色体。
7.作为优选，所述的前体端口角度β为0-90
°
。
8.作为优选，所述的前体端口角度β为30-60
°
。
9.作为优选，所述的前体端口内径d为1-100μm。
10.作为改进，所述的中间体管状持针装置附带捏耳，数量1-2片，捏耳面积70-200mm2，捏耳厚度1-10mm。捏耳可以手捏固定，保证操作的稳定性和可控性。
11.作为改进，所述的后体软管长度为0-15mm。有效软管长度可控制吸液量。设置软管末端密封结构，可以用食指挤压软管排出空气，当食指缓慢释放被挤压的软管时造成针管内负压吸取目标染色体，这也能方便控制吸取含目标染色体的液体量。
12.作为改进，所述的细胞器提纯器总长度为100-200mm，中间体连接管持针结构至前体端口距离为20-100mm。所述细胞器提纯器总长度主要与制备细胞器的载体大小和液面高度有关，既方便操作又尽可能减少操作时带来的各种细胞和微生物污染。
13.本实用新型的有益效果为：本实用新型提供了一种细胞器提纯器，所述提取装置，制作工艺相对简单，成本低，实用性强。细胞器提纯器操作简便，简单训练后能稳定高效地提取到目标细胞器。在亚细胞水平避免其它细胞器污染，为实现在极高纯度条件下研究细胞器的组成成分奠定基础。
附图说明
14.图1为本实用新型中实施例1的细胞器提纯器结构示意图。
15.图2是实施例1的细胞器提纯器前体与中间体硬管连接处放大后的侧面剖视图。
16.图中：1、前体；2、中间体；3、粘合密封；4、密封胶；11、前体端口；21、连接持针的捏耳；22、软管；23、硬管；d、前体端口内径；β、前体端口角度。
具体实施方式
17.下面结合本实用新型实施例的附图，对本实用新型实施例的技术方案进行解释和说明，但下述实施例仅为本实用新型的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出功能和结构创造性工作的前提下所获得的其他实施例，都属于本实用新型的保护范围。
18.如图1至图2所示的细胞器提纯器，包括用于包括端口具β角度的前体、中间体和后体。中间体，可分为硬管、连接管和软管，连接管上设有针柄。后体为中间体延伸固接的软管。其末端管口可密封胶密封。其中前体和中间体硬管可通过粘固密封胶连接固定和密封。
19.操作细胞器提纯器如下：在倒置显微镜下选取时，单独右手的拇指和中指先捏住细胞器提纯器针柄，然后无名指抵住在显微镜载物台上的光圈固定点，同时中指余侧抵住光圈固定点旁的突出旋钮上，则食指按压或挤压软管，排除空气，保持接近真空状态；准备
后，食指和拇指捏住细胞器提纯器针柄，将细胞器提纯器前体推移皿底贴壁的细胞器染色体，同时待推移完成后食指释放挤压或按压的软管，利用细胞器提纯器内低压的原理，吸取目标染色体。
20.实施例1
21.如图1、图2所示的细胞器提纯器，包括端口具β角度的前体1、中间体2和后体22及4。前体1与中间体2连接的硬管23、其连接处填充物为粘合密封胶3、后体软管22管口末端的密封胶4、以及中间体2连接管针柄捏耳21。
22.在本实施例中，所述的半密闭结构在提取细胞器过程中，便于直接按压或挤压软管22排出空气；当缓慢释放按压的软管22时，吸取液体中的目标细胞器，简便有效并可控制吸液量。
23.所述中间体2包含的连接管捏耳21。所述针柄捏耳21，为拇指和中指拿捏的主要部位，提高操作细胞器提纯器的稳定性。中间体硬管23，硬管为不锈钢材质，长度为3-10cm，利于操作时抵抗手指的拿捏力量，保证不被折断。一定的硬管长度，可提供无名指支撑点，辅助支持操作的稳定性，有利于保持细胞器提纯器的方向。前体玻璃管与中间体硬管粘合密封，可提高细胞器提纯器的部件组合的稳固性和密封性。稳固性可提供细胞器提纯器的有效推移细胞器的力度，同时维护整体结构的密封效果，消除微细玻璃管的虹吸作用。
24.所述前体1的端口11，选取时斜切端口β角度能造成皿底高度贴合，且管口内径非常小，利于快速吸取液体中的目标染色体，提高吸取效率。
25.所述细胞器提纯器长度为100-200mm。这一设置，使得细胞器提纯器针柄至最前端距离适合将手小鱼际肌固定在倒置显微镜光圈处，实现选取操作。
26.所述的中间体2，分为3部分。所述硬管23为不锈钢(sus304)，比较坚硬，可承受手指捏取的力量。所述连接管针柄及其捏耳21为丙烯晴-丁二烯-苯乙烯共聚物(abs)。所述连接管延伸为后体的软管22为聚氯乙烯(pvc)。
27.实施例2
28.本实施例与实施例一的区别在于：所述中间体连接管针柄的捏耳21有2片，在中间体连接管针柄的任何角度对称的2侧。
29.在本实施例中(未附图)，所述针柄的捏耳有2片，使得拇指和中指捏取更加稳定、可靠。
30.本实施例所述细胞器提纯器的其余结构及效果与实施例1一致，此处不再赘述。
31.实施例3
32.本实施例与实施例一的区别在于：所述后体的软管22和密封胶4，改进后体为弹性材质的半圆球或膜，与中间体连接管针柄固接。
33.在本实施例中(未附图)，所述具弹性半圆球/膜，食指按压更方便，更能够连续排出可变的空气容量，释放压力后，根据实际情况吸取足够的液体合目标细胞器，提高选取效率。
34.本实施例所述细胞器提纯器的其余结构及效果与实施例1一致，此处不再赘述。
35.实施例4
36.本实施例与实施例一的区别在于：所述后体的软管22和密封胶4，改进软管22为内置可调行程的自动弹起的密封活塞装置，增加吸取液体容量的精度。
37.在本实施例中(未附图)，所述将软管22更换为内置携有细致弹簧的密封活塞，类似微型泵注射器结构，微细弹簧替代弹性管。增加器械的精度和稳定性。
38.本实施例所述细胞器提纯器的其余结构及效果与实施例1一致，此处不再赘述。
39.最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本实用新型进行了详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本实用新型的具体实施方式而已，并不用于限定本实用新型的保护范围，凡在本实用新型的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

技术特征：
1.一种细胞器提纯器，包括端口具β角度的前体、中间体和后体，其特征在于：所述的端口具β角度的前体，端口内径d细小切合相应的细胞器，具备一定的硬度和韧性可推移和吸取细胞器；所述的中间体为持针装置，可分为硬管、连接管和软管，连接管上设有针柄，针柄能手捏固定；所述的后体则是中间体延伸固接的软管，密封后形成气囊管，通过手指挤压程度调节吸液量，提取细胞器；所述的前体和中间体硬管可通过粘合形成牢固连接并密封；所述的后体软管末端管口通过密封避免虹吸效应。2.根据权利要求1所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：所述的端口具β角度的前体为透明的玻璃材质管。3.根据权利要求1或2所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：前体端口角度β为0-90
°
。4.根据权利要求3所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：前体端口角度β为30-60
°
。5.根据权利要求1或2所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：前体端口内径d为1-0.1μm。6.根据权利要求1所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：所述的中间体附带捏耳，数量1-2片，捏耳面积70-200mm2，捏耳厚度1-10mm。7.根据权利要求1所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：后体软管为0-15mm。8.根据权利要求1所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：所述的提纯器总长度为100-200mm，中间体连接管针柄至前体端口距离为20-100mm。9.根据权利要求2或4或6或7所述的一种细胞器提纯器，其特征在于：提纯器总长度为100-200mm，中间体连接管针柄至前体端口距离为20-100mm。

技术总结
本发明涉及一种细胞器提纯器，包括端口具β角度的前体、中间体和后体，其特征在于：所述的端口具β角度的前体，端口内径d细小切合相应的细胞器，具备一定的硬度和韧性可推移和吸取细胞器；所述的中间体为持针装置，可分为硬管、连接管和软管，连接管上设有针柄，针柄能手捏固定；所述的后体则是中间体延伸固接的软管，密封后形成气囊管，通过手指挤压程度调节吸液量，提取细胞器。本实用新型提供了一种细胞器提纯器，所述提取装置，制作工艺相对简单，成本低，实用性强。细胞器提纯器操作简便，简单训练后能稳定高效地提取到目标细胞器。在亚细胞水平避免其它细胞器污染，为实现在极高纯度条件下研究细胞器的组成成分奠定基础。条件下研究细胞器的组成成分奠定基础。条件下研究细胞器的组成成分奠定基础。


技术研发人员：刘恒涛 李存玺
受保护的技术使用者：北京仁基源医学研究院有限公司
技术研发日：2023.02.03
技术公布日：2023/7/27