一种基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法

1.本发明涉及山银花中总黄酮的提取方法，具体涉及一种基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法。


背景技术：

2.山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。山银花味甘，性寒。归心、肺、胃经。山银花的主要成分是有机酸类、黄酮类类、皂苷类、挥发油类化合物。其中，总黄酮是主要活性成分之一。山银花具有较广泛的药理活性；其中黄酮类成分具有抑菌抗菌、抗病毒、抗氧化、解热、抗炎及保护肝脏等作用；黄酮类化合物能清除体内体外多种自由基，具有抗衰老和增加机体免疫力的作用；还对冠心病、心绞痛、高血压、高血脂等心血管疾病均有较好的疗效，而且其毒副作用小。
3.山银花中总黄酮的提取使用传统有机溶剂浸提的方法居多。赵佳利等用有机溶剂浸提方法探究不同时期山银花中总黄酮的提取率，在最优方法：提取时间20min，浸提温度80℃，液料比为1∶40条件下幼蕾期山银花总黄酮提取率为43.669mg/g(贵州师范大学学报(自然科学版)，2019,37(05)：24-28)。胡远艳等用有机溶剂乙醇提取，在提取时间60min，液料比1∶30，乙醇浓度70％的最优条件下得到山银花总黄酮的提取率为56.55mg/g(安徽农业科学,2012,40)24)：12007-12008)。
4.亚临界提取是利用亚临界流体作为萃取剂，亚临界流体是指将液体加热到沸点以上，再施加一定的压力使其保持在液体状态。此时流体的一些物理性质发生了改变。


技术实现要素：

5.发明目的：本发明的目的是提供一种得率高、绿色无污染的基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法。
6.技术方案：本发明所述的基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，包括如下步骤：
7.(1)山银花预处理：取花蕾部分，烘干至恒重；
8.(2)亚临界水提取：将预处理过后的山银花花蕾装入提取罐，加入水，密封好提取容器，打开加热开关加热，加压使水亚临界化，保温保压提取，提取结束打开提取容器阀门使内部蒸汽经过冷凝水冷却成液体，液体再经过冷却槽冷却，最终提取液进入收集容器保存。
9.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，液料比，即纯水和山银花之比为80∶1～110∶1ml/g。
10.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，提取时间为30～60min。
11.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，提取温度为110～140℃。
12.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，提取压力为0.5～2mpa。
13.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，提取容器为提取罐。
14.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，收集容器为收集罐。
15.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，冷凝水动力来源自冷凝水泵。
16.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，冷却槽的温度是0～25℃。
17.所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，所述步骤(2)中，加压是通过加压泵来增加压力。
18.亚临界水的极性会随着温度的升高而降低，这对于极性较低物质的提取有一定的帮助，此外，在高温高压状态下溶质饱和蒸汽压增大以及溶剂扩散速率增大，都有利于物质的提取。而且亚临界水作为一种亚临界提取溶剂，不光具有提取范围广泛，提取率高的优点，并且具有溶剂本身绿色无污染，易于与提取产品分离等特点。本专利在提取方法上进行了创新，使用绿色高效的亚临界方法进行提取，该方法改变了传统有机提取环境危害和价格昂贵的缺点。也为后续提取物的分离提纯创造了良好前提。本专利通过探究液料比、时间和温度等因素使山银花中总黄酮的提取率大大提高。
19.有益效果：本发明与现有技术相比，具有如下显著优势：本发明提取方法不使用任何有机溶剂，操作过程简单，结果显示总黄酮提取率从传统有机提取的58.73mg/g增加到89.41mg/g，实现了山银花中总黄酮的绿色高效提取。
附图说明
20.图1为酶标仪测得的总黄酮标准曲线；
21.图2为实施例3中得率与传统有机溶剂法得率对比图；
具体实施方式
22.如图1所示，使用酶标仪法，以不同浓度芦丁标准品测吸光度来绘制标准曲线，通过计算吸光度和浓度之间的关系得：a(吸光度)＝0.000569752c(浓度)+0.07206，利用上式用于计算提取出来的总黄酮的含量。
23.实施例1
24.精确称取干燥后的山银花20g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为58.34mg/g。
25.实施例2
26.精确称取干燥后的山银花17.78g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密
封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为65.91mg/g。
27.实施例3
28.精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为89.41mg/g。
29.采用传统有机溶剂萃取：精确称取干燥后的山银花1g，加入到圆底烧瓶，称量100ml 70％乙醇加入其中，将圆底烧瓶放入80℃的油浴中，加热搅拌回流50min。将加热后提取液用酶标仪测量得到的提取率为58.73mg/g。
30.两种提取液的酶标仪检测结果进行对比，提取率如图2所示。
31.实施例4
32.精确称取干燥后的山银花14.55g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为61.65mg/g。
33.实施例1～4的总黄酮提取率数据参见表1。
34.表1
[0035][0036]
对比表中数据可以看出，随着液料比的升高，总黄酮的提取率先升高，然后达到一个最大提取率的液料比100：1，再增大液料比出现略微减小趋势。所以，我们选择液料比为100∶1的条件作为最佳液料比。
[0037]
实施例5
[0038]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取30min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为71.86mg/g。
[0039]
实施例6
[0040]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取40min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为80.74mg/g。
[0041]
实施例7
[0042]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为89.41 mg/g。
[0043]
实施例8
[0044]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取60min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为82.16mg/g。
[0045]
实施例5～8的总黄酮提取率数据参见表2。
[0046]
表2
[0047][0048]
对比表中数据可以看出，随着提取时间的增加，总黄酮的提取率先增加，然后有所降低，这是由于随着时间的增加，总黄酮逐渐被提取出来，很快达到临界值。在提取时间达到50min时，总黄酮得率最高，随着提取时间的继续增加，总黄酮得率有所降低，这是因为总黄酮在长时间的高温下有部分发生了分解。所以可以得到结论，在提取时间为50min时，总黄酮提取率达到最大值。
[0049]
实施例9
[0050]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至110℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为57.81 mg/g。
[0051]
实施例10
[0052]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打
开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至120℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为61.32mg/g。
[0053]
实施例11
[0054]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为89.41 mg/g。
[0055]
实施例12
[0056]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至140℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为70.10mg/g。
[0057]
实施例9～12的总黄酮提取率数据参见表3。
[0058]
表3
[0059][0060]
对比表中数据可以看出，随着温度的升高，总黄酮的提取率先增大，然后达到一个临界温度后下降。这是因为，亚临界水的性质会随着水的温度的变化而变化，当温度增大时亚临界水极性减小，根据相似相溶原理，当减小到与黄酮相似时，提取率较大。当然，随着温度的提高，分子扩散速率也有所增加，溶剂对总黄酮的提取效率也随之增加。当温度达到130℃时，总黄酮提取率达到最高。当温度继续增加时，极性相似度降低，也可能由于温度过高，部分总黄酮分解，导致总黄酮的提取率有所下降。所以选取130℃作为最佳提取温度，此时总黄酮的提取率最大。
[0061]
实施例13
[0062]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到0.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为76.81 mg/g。
[0063]
实施例14
[0064]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1 mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为84.73mg/g。
[0065]
实施例15
[0066]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到1.5mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为89.41 mg/g。
[0067]
实施例16
[0068]
精确称取干燥后的山银花16g，放入提取罐中，加入纯水1600ml，将提取罐密封，打开搅拌，调至130r/min，打开加热器，加热至130℃，打开加压泵将提取罐内压力加到2mpa，保温保压提取50min。提取结束后，打开冷凝循环泵，用冷却水冷却从提取罐放出的蒸汽，再经低温冷却槽后进一步冷却，最终提取液进入接收罐，使用酶标仪测量得到的提取率为89.16mg/g。
[0069]
实施例13～16的总黄酮提取率数据参见表4。
[0070]
表4
[0071][0072]
对比表中数据可以看出，压力对提取的影响不如前三个因素大，随着压力的升高，总黄酮的提取率会有微小的增大然后趋于稳定，这是因为，当压力的升高时，溶质与溶剂分子间扩散速率加快，传质效率提高。最终趋于稳定说明提取达到平衡，压力影响相对较小。考虑到经济与安全因素，采用1.5mpa压力为最佳提取压力。

技术特征：
1.一种基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)山银花预处理：取花蕾部分，烘干至恒重；(2)亚临界水提取：将预处理过后的山银花花蕾装入提取罐，加入水，密封好提取容器，打开加热开关加热，加压使水亚临界化，保温保压提取，提取结束打开提取容器阀门使内部蒸汽经过冷凝水冷却成液体，液体再经过冷却槽冷却，最终提取液进入收集容器保存。2.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，液料比，即纯水和山银花之比为80∶1～110∶1ml/g。3.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，提取时间为30～60min。4.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，提取温度为110～140℃。5.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，提取压力为0.5～2mpa。6.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，提取容器为提取罐。7.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，收集容器为收集罐。8.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，冷凝水动力来源自冷凝水泵。9.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，冷却槽的温度是0～25℃。10.根据权利要求1所述基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，加压是通过加压泵来增加压力。

技术总结
本发明公开了一种基于亚临界水提取山银花中总黄酮的方法，包括步骤：(1)山银花的预处理：取山银花初开花蕾，干燥至恒重；(2)亚临界水萃取：取一部分干燥花蕾与纯水一起加入提取罐，打开搅拌并加热到110～140℃，加压到0.5～2Mpa，在该压力和温度下保持30～60min，之后冷凝收集提取液。(3)提取液中总黄酮测定：将提取液稀释十倍用酶标仪测其吸光度，代入芦丁标曲中求得总黄酮提取率。本发明使总黄酮提取率从传统有机提取的58.73mg/g增加到89.41mg/g。本发明提取过程中仅使用亚临界水为溶剂，不涉及有机溶剂，减少污染，并且相对传统有机溶剂提取方法，提取率更高，提取过程更加环保，操作也更为简单。更为简单。更为简单。


技术研发人员：黄德春 陈浩 何沐姣 周翔 钱红亮 陈维 钟伊南
受保护的技术使用者：中国药科大学
技术研发日：2023.06.15
技术公布日：2023/8/1