一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法

1.本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法。


背景技术：

2.紫苏，又名桂荏、赤苏、青苏等，是多产于亚洲的一年生草本植物，也是我国传统的食药两用植物。紫苏作为一种油料作物，近年来因其籽粒中含有大量不饱和脂肪酸及多种生物活性成分而备受关注。紫苏籽榨油后饼粕中蛋白含量约28％-45％，其中赖氨酸、蛋氨酸的含量均高于大豆蛋白、杏仁和核桃蛋白，紫苏蛋白通过深加工后可作为食品的功能成分或营养补充剂，应用前景广阔。但由于紫苏蛋白溶解性和乳化性较低，导致国内外对紫苏蛋白应用受到极大限制，并且尚未见到有关提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的研究报道。
3.当前改善蛋白质功能性质的方法有物理改性、化学改性以及生物酶改性等。化学改性应用较为广泛，其中糖基化反应是提高蛋白质溶解性绿色有效的方法之一。研究发现，经糖基化之后的蛋白质不仅溶解性得到了提高，而且乳化性、起泡性和抗氧化性能都得到了不同程度的改善。因此，本发明提出了一种通过糖基化反应提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的方法，以期为紫苏蛋白的增值利用提供一定的理论依据和技术支撑。


技术实现要素：

4.本发明提供一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，目的是解决背景技术中存在的上述问题。
5.本发明提供的技术解决方案如下：
6.一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，所述糖基化方法包括以下步骤：
7.将一定量的紫苏蛋白(psmp)溶解于水中，搅拌至彻底溶解，得到第一溶液；
8.将一定量的糖加入所述第一溶液中，调节ph，搅拌至彻底溶解，得到第二溶液；
9.将所述第二溶液在一定条件下水合一段时间，得到第三溶液；
10.将所述第三溶液置于水浴锅中进行水浴一段时间，得到第四溶液；
11.将所述第四溶液冷却至室温，进行离心，取上清液干燥成粉末，得到紫苏蛋白糖基化产物。
12.进一步地，所述将所述第三溶液置于水浴锅中加热一段时间之前，还包括：
13.对所述第三溶液进行搅拌，直至所述第三溶液的温度达到室温。
14.进一步地，所述第一溶液中，所述紫苏蛋白的浓度为20-60mg/ml。
15.进一步地，所述第二溶液中，所述糖(w/v)为1-5％，且所述第二溶液的ph为8-12，所述糖选用果糖(fru)、葡聚糖(dex)或麦芽糊精(md)。
16.进一步地，所述将所述第二溶液在一定条件下水合一段时间，具体为：
17.将所述第二溶液放入冰箱内，在4℃的温度下水合，水合时间为10-14h。
18.进一步地，所述第三溶液水浴温度为60-100℃，时间为20-60min。
19.进一步地，所述将所述第四溶液冷却至室温，进行离心，取上清液干燥成粉末，具体为：
20.将所述第四溶液在冰水浴中冷却至室温，在4000r/min的条件下进行离心30min，取上清液进行冷冻干燥、喷雾干燥或者真空干燥。
21.进一步地，所述搅拌包括磁力搅拌。
22.进一步地，所述糖基化方法具体包括以下步骤：
23.将一定量的紫苏蛋白(psmp)溶解于水中，搅拌至彻底溶解，得到紫苏蛋白的浓度为40mg/ml的第一溶液；
24.将一定量的糖加入所述第一溶液中，调节ph为10，通过磁力搅拌30min直至所述糖彻底溶解，得到所述糖(w/v)为3％的第二溶液；
25.将所述第二溶液放入冰箱内，在4℃的温度下水合，水合时间为12h，得到第三溶液；
26.对所述第三溶液进行搅拌，直至所述第三溶液的温度达到室温；
27.将所述第三溶液置于水浴锅中进行水浴，水浴温度为80℃，时间为40min，得到第四溶液；
28.将所述第四溶液在冰水浴中冷却至室温，在4000r/min的条件下进行离心30min，取上清液进行冷冻干燥，制备成粉末，得到紫苏蛋白糖基化产物。
29.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
30.本发明提供了一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，以果糖、葡聚糖和/或麦芽糊精为诱导物，对紫苏蛋白进行改性，通过美拉德反应生成紫苏蛋白糖基化产物。与psmp相比，紫苏蛋白糖基化产物的溶解性、热性能、起泡性、乳化性和持油力均得到显著提高，其中葡聚糖糖基改性产物p-dex表现出更加显著的起泡性和乳化性。sem的微观结构分析也进一步证实psmp和三种糖类的改性接枝，傅里叶红外和内源荧光光谱分析表明，蛋白质糖基化会改变蛋白质空间结构，为进一步阐明紫苏蛋白糖基化改性构效关系提供了依据。研究结果可为紫苏蛋白的合理开发和应用提供新思路，为紫苏蛋白的增值利用提供一定的理论依据和技术支撑。
附图说明
31.图1为本发明实施例中糖基化方法的制备流程图；
32.图2为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物的傅里叶红外光谱图；
33.图3为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物的荧光光谱图；
34.图4为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物的微观结构图，其中a、b、c、d分别表示的是psmp、p-fru、p-dex、p-md；
35.图5为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物dsc分析图；
36.图6为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物溶解性变化图；
37.图7为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物起泡性能图；
38.图8为本发明实施例中紫苏蛋白及其糖基化产物乳化性能图。
具体实施方式
39.为使本技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，下面所描述的实施例是本技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本技术实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
40.因此，以下结合附图提供的本技术实施例的详细描述旨在仅仅表示本技术的选定实施例，并非限制本技术要求保护的范围。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都属于本技术保护的范围。
41.需要理解的是，在本发明的实施方式的描述中，术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个所述特征。
42.本发明中，所采用的仪器与试剂如下：
43.试剂：l-亮氨酸(hplc≥98％)solarbio股份有限公司(中国北京)；β-巯基乙醇和邻苯二甲醛(opa)麦克林生化科技有限公司(中国上海)；福林酚试剂solarbio股份有限公司(中国北京)；mct油上海辰佳食品科技有限公司；硼砂天津市恒兴化学试剂制造有限公司。本研究中使用的其他化学试剂均为分析级。
44.仪器：电子天平(jm-b5003)：余姚记铭称重校验设备有限公司；酸度计(pb-10)赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；超声波清洗器(sb25-12dtd)宁波新芝生物科技股份有限公司；酸度计(pb-10)上海美普达仪器有限公司；数显恒温水浴锅(hh-4)、数显集热式油浴磁力搅拌器(df-ii)、数显集热式磁力搅拌器(df
‑ⅱ
)金坛市杰瑞尔电器有限公司；超纯水制备系统(zycgf-iii-20t)四川卓越水处理设备有限公司；低速离心机(ctl550)湖南湘立仪器有限公司；涡旋震荡器(xw-80a)上海驰唐电子有限公司；分析型天平(hzk-fa210)华志(福建)电子科技有限公司；傅里叶红外光谱仪(thermo fisher nicolet in10)；dsc分析仪(mettler dsc3,switzerland)；场发射扫描电镜(sem)thermo scientific apreo 2s；荧光光谱(pl)fls-1000。
45.参阅图1.本发明提供了一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，该糖基化方法包括以下步骤：
46.步骤101、将一定量的紫苏蛋白(psmp)溶解于水中，搅拌至彻底溶解，得到第一溶液。
47.其中，第一溶液中，紫苏蛋白的浓度为20-60mg/ml。
48.步骤102、将一定量的糖加入第一溶液中，调节ph，搅拌至彻底溶解，得到第二溶液。
49.其中，第二溶液中，糖(w/v)为1-5％，且第二溶液的ph为8-12，糖可以选用果糖(fru)、葡聚糖(dex)或麦芽糊精(md)。搅拌采用磁力搅拌。
50.步骤103、将第二溶液在一定条件下水合一段时间，得到第三溶液。
51.其中，一定条件为：将第二溶液放入冰箱中，将冰箱的温度设置为4℃，然后过夜水合，水合时间为10-14h。
52.步骤104、将第三溶液置于水浴锅中进行水浴一段时间，得到第四溶液。
53.其中，进行水浴的条件为：水浴温度为60-100℃，时间为20-60min。
54.步骤105、将第四溶液冷却至室温，进行离心，取上清液干燥成粉末，得到紫苏蛋白糖基化产物。
55.可选的，将第三溶液置于水浴锅中加热一段时间之前，还包括：
56.对第三溶液进行搅拌，直至第三溶液的温度达到室温。搅拌选用磁力搅拌，搅拌时间设置为30min。
57.实施例1：
58.本实施例采用山西省中北大学晋中产业技术创新研究院试验基地的紫苏，上海阿拉丁生化技术有限公司生产的纯度≥99.0％的d-果糖；麦克林生化科技有限公司(中国上海)生产的葡聚糖(2000)和麦芽糊精进行紫苏蛋白糖基化实验。
59.本实施例提供了一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，该糖基化方法的具体步骤包括：
60.步骤201、将一定量的紫苏蛋白(psmp)溶解于水中，搅拌至彻底溶解，制备成紫苏蛋白的浓度为40mg/ml的紫苏蛋白溶液。
61.步骤202、将紫苏蛋白(psmp)一半用量的糖加入紫苏蛋白溶液中，调节ph为10，通过磁力搅拌30min直至糖彻底溶解，得到糖(w/v)为3％的紫苏蛋白-糖混合溶液；其中，糖分别选用果糖(fru)、葡聚糖(dex)和麦芽糊精(md)，制备得到三份紫苏蛋白-糖混合溶液。
62.步骤203、将制备的紫苏蛋白-糖混合溶液放入冰箱内，在4℃的温度下水合，水合时间为12h；
63.步骤204、对水合后的溶液进行磁力搅拌，搅拌30min，直至溶液的温度达到室温。
64.步骤205、将达到室温的溶液液置于水浴锅中进行水浴，水浴温度为80℃，时间为40min；
65.步骤206、将水浴后的溶液在冰水浴中冷却至室温，在4000r/min的条件下进行离心30min，取上清液进行冷冻干燥，制备成粉末，得到紫苏蛋白糖基化产物。
66.由于糖分别选用果糖(fru)、葡聚糖(dex)和麦芽糊精(md)，最终制备的紫苏蛋白糖基化产物有三种。
67.步骤201中的紫苏蛋白通过以下方式制备：
68.采用碱溶酸沉的方法提取紫苏蛋白，料液比1：10，ph为9.0碱溶水浴2h，离心取上清液，ph4.4酸沉10min后离心取沉淀，碱性溶液调节沉淀ph至中性，喷雾干燥得紫苏蛋白粉末。
69.通过opa法测定制备的紫苏蛋白糖基化产物中的游离氨基。以乙醇为溶剂配制opa溶液，取2ml与50ml四硼酸钠溶液(0.1m，ph9.5)、5ml的20％(w/w)sds以及0.2mlβ-巯基乙醇充分混合，定容至100ml。取样品0.3ml与2.7ml的opa充分混合反应5min，酶标仪微孔板计数器340nm处读数，以亮氨酸做标准曲线，所得结果如表1所示。
70.表1
[0071][0072]
果糖、葡聚糖和麦芽糊精分别与psmp通过不同方法发生糖基化反应之后的接枝度变化如表1所示，通过表1可以观察到在相同糖基化条件之下，不同分子量的糖与psmp的接枝程度均不同。其中p-md复合物的接枝度最高达到13.01％，而p-fru和p-dex复合物的接枝度与之相比稍次之分别是8.95％和10.58％。可以看出，对psmp来说高分子量的糖与其反应之后糖基化程度更高。这可能是在加热过程中，高分子量的糖能够为美拉德反应的发生提供更多的羰基，与紫苏蛋白的更多游离氨基发生羰胺缩合。
[0073]
实施例2
[0074]
将各样品溶液(蛋白含量2mg/ml)在紫外分光光度计420nm处检测，所得吸光度值表示糖基化产物的褐变程度，结果如表1所示。
[0075]
由表1可知三种不同的psmp糖基化复合物的褐变程度与对照组相比显著加深，这可能是高温和碱性条件的使得psmp和糖类迅速结合而生成的类黑精所导致的。三种p-碳水化合物复合物中，p-dex表现出最高的褐变程度达到0.448abs的吸光度值，与接枝度不同的是p-md比p-dex褐变程度略低p-fru最小，这可能是因为dex的分子量小于md造成的。
[0076]
实施例3
[0077]
称取实施例1中的紫苏蛋白糖基化产物和紫苏蛋白，使用ft-ir光谱仪在室温下分别记录其红外光谱。在记录500-4000cm-1
范围内的样品之前，对样品进行粉碎、压制，并与kbr混合，进行64次扫描，分辨率为4cm-1
。采用ominic软件对光谱进行自动基线校正，傅里叶去卷积，结果见图2。
[0078]
由图2可以发现，p-碳水化合物复合物的红外光谱图与psmp相比在3700cm-1-3200cm-1
波长范围内其透光率发生下降(即光谱吸收强度增加)，其中在3400cm-1
处p-fru的透光率下降程度最强。在此波长范围的透光率下降的原因是游离的-oh增多使得伸缩震动增强，这表明了蛋白质和碳水化合物发生糖基化反应后，碳水化合物的共价结合使得蛋白质引入了较多的-oh。而p-fru透光率最低的原因可能是在与蛋白质结合过程中结合位点多且fru的分子量少使得fru的引进数量较多，进而引入-oh数量多的原因。与此波长范围相似的1600cm-1-1000cm-1
范围内p-碳水化合物复合物也发生了透过率下降的现象，并且p-dex的透过率下降最为明显。
[0079]
实施例4
[0080]
取实施例1中制备而得的紫苏蛋白糖基化产物和紫苏蛋白，以10mm pbs为溶剂的样品(0.5mg/ml)在室温下扫描并采用荧光分光光度计(日立f-7100，日本)。激发波长设置为280nm，发射波长300-450nm，激发和发射间隙分别设置为2nm的宽度。分别收集每个样品的荧光发射光谱，所得结果如图3所示。
[0081]
如图3所示，各复合物和psmp在350nm附近显示出最大荧光强度，且各p-碳水化合物接枝物相较于对照psmp来说荧光强度均产生了淬灭，说明各p-碳水化合物接枝物结构发生了变化。此外，可以观察到的是，经碳水化合物修饰后的psmp接枝物与对照psmp相比发生了不同程度的荧光发射最大值λ的偏移。可以看到所有的p-碳水化合物结合物都发生了蓝移，荧光光谱的蓝移意味着psmp在与碳水化合物结合过程中，其所含的发色基团被用于和碳水化合物结合而减少，从而导致光谱蓝移。结构变化和光谱蓝移可能会影响接枝物的亲水和疏水性从而影响其他功能特性。三种接枝物中，p-dex发生了最大蓝移δ17nm，荧光淬灭程度最大，证明dex与psmp的相互作用中活性最大，糖基化效果最好。
[0082]
实施例5：
[0083]
称取实例1制备而得的紫苏蛋白糖基化产物和紫苏蛋白样品于导电胶，作真空喷金处理，采用场发射扫描电镜(sem)thermo scientific apreo 2s进行扫描，在不同放大倍数下观察样品的表面微观形态。测定结果如图4所示。
[0084]
psmp和psmp-碳水化合物复合物的sem图如图4所示。从图像中可以观察到，与psmp相比所有经碳水化合物修饰后的蛋白质结构发生展开并且变得更为平滑。反观psmp的sem图像，在相同的放大倍数(
×
500)的情况下更为粗糙和图形不规则，糖分子接入psmp分子链上，使蛋白质形态更薄，分子聚集能力降低。
[0085]
实施例6：
[0086]
称取实例1制备而得的紫苏蛋白糖基化产物和紫苏蛋白样品，用dsc分析仪对粉末状的蛋白质样品进行差示扫描量热(dcs)测试。之后，通过使用软件分析吸热曲线获得变性温度(td)、起始温度(tonset)和焓变(
△
h)，以分析蛋白质的热稳定性，测定结果如图5所示。
[0087]
由图5可以发现，与psmp相比经碳水化合物修饰后的蛋白质的初始变性温度(tonset)发生了不同程度的变化。除p-fru的tonset略低于psmp之外，其余几个物质的tonset大小顺序为p-dex》p-md》psmp，这可能是与物质本身的熔点有关，其中dex的熔点最高，所以经dex修饰后的蛋白质的初始变性温度增大。而psmp和p-碳水化合物均在80℃左右出现一个熔融峰，熔融峰所处的温度便是峰值熔化温度(tp)。tp常反映的是一个物质热形态转变的温度，在此也可以表示蛋白质的热性能。所有的p-碳水化合物复合物的tp值都显著高于未经修饰的psmp，其中p-fru的tp值最高达到83.46℃。这可能是由于蛋白质的变性其内部的共价键遭到破坏，而碳水化合物与其发生糖基化反应形成更为稳定的共价键使得其变性温度升高，热性能变好。
[0088]
同样的，焓变(
△
h)是反应蛋白质吸收和释放热量多少的一个值。如图5所显示，与psmp比p-碳水化合物的
△
h值都较低，大小顺序为：p-fru》p-dex》p-md，说明经碳水化合物修饰后的蛋白质在熔融时所需要吸收的热量减少了。通常较多的把
△
h和有序结构联系起来，而p-碳水化合物的
△
h降低也说明了蛋白质空间结构的展开需要更少的能量。
[0089]
实施例7：
[0090]
准确称取100mg实例1制备而得的紫苏蛋白糖基化产物和紫苏蛋白样品并加入5ml大豆油，漩涡震荡后置于150r/min的摇床内维持震荡状态1h。之后将各样品离心20min(1600rmp/min)，去除上清液记录此时离心管重量为a2，样品初始质量和空离心管的重量总和为a1。持油力以(a2-a1)与样品初始质量(100mg)之比表示，测定结果如表2所示。
[0091]
表2
[0092][0093]
持油力(hr)是指物质对脂肪和油脂类吸附和吸收作用的重要指标。psmp及其糖基化产物的hr如表2所示，可以发现经碳水化合物修饰后的蛋白质hr增强，并且随着碳水化合物分子量的增大hr逐渐增大。说明碳水化合物的分子量大小是影响羰基化后蛋白质hr的重要因素。
[0094]
实施例8：
[0095]
配制浓度1mg/ml的样品，1m的(m指摩尔浓度)naoh和hcl调节溶液ph值为5-9，将溶液在4000rmp转速之下离心20min。取上清液稀释一倍之后采用lowery法测定上清液中的蛋白含量，以牛血清蛋白含量绘制标准曲线进行参考。蛋白质溶解度表示为上清液中蛋白质含量占溶液总蛋白质含量的比率(％)，测定结果见图6。
[0096]
从图6中可知，psmp和p-碳水化合物接枝物的随着ph变化的溶解度的变化趋势相似，特别是在ph≥5.0到碱性条件的过程中变化规律基本相同。而接近等电点的时候溶解性不稳定可能因为碳水化合物的引入从而致使psmp的内部电荷发生偏移导致的。在ph 7.0和ph 9.0处，psmp的溶解度分别为88.45％和90.75％，而糖基化产物中最高的溶解度分别为96.41和97.56，可以看得出经过碳水化合物修饰的psmp糖基化产物的溶解性较对照psmp在中性和碱性条件下都得到明显改善。但随着ph条件逐渐酸化降低时，除p-dex的溶解度依旧比psmp的高之外，其余两个p-碳水化合物接枝物的溶解度逐渐降低且低于psmp。
[0097]
实施例9：
[0098]
配制蛋白质溶液(20mg/ml)过夜水合后，取样品溶液20ml置于量筒中，高速分散机15000r/min分散均质2min。分别记录均质前溶液体积为v1，均质后溶液体积为v2，均质放置30min后溶液体积为v3。分别以以下公式计算样品溶液的起泡性和泡沫稳定性，最终结果由图7所示。
[0099][0100]
如图7可以发现，总体上糖基化产物的起泡性能都高于未经修饰的psmp，这可能是由于蛋白质在美拉德反应过程中结构展开，导致疏水性基团暴露，从而疏水性和柔韧性增加造成的。除了疏水性外，溶解性也是影响蛋白质的起泡性能的因素，且p-dex的发泡能力最好。
[0101]
实施例10：
[0102]
准确称量psmp和紫苏蛋白糖基化产物样品以ph＝7.010mm磷酸缓冲液为溶剂溶
解，配制为0.2％(w/v)样品溶液。在500nm波长下测定样品溶液的吸光度值a0和静置10min后样品的吸光度值a10。乳化活性指数(eai)和乳液稳定性指数(esi)计算如下：
[0103]
eai(m2/g)＝2
×
2.303(a0×
n)/c
×
φ
×
10000)
[0104]
esi(min)＝10a0/a
0-a
10
[0105]
a0和a
10
分别是均质0min和10min后的乳液，n指的是稀释倍数，c为样品浓度，φ为乳液中油相的体积分数。
[0106]
如图8所示，与psmp相比糖基化产物的乳化活性指数(eai)和乳化稳定性指数(esi)都显著提高。其中，eai增加的原因可以从两个角度进行分析，一方面是因为p-碳水化合物复合物的疏水性降低溶解性的提高使得蛋白质的结构变得更加柔韧。柔性结构对乳化活性起到了促进作用，但具体机制尚未阐明还需要进一步研究。另一方面可能是由于蛋白质与碳水化合物高温条件下发生美拉德反应时蛋白质表面结构变松散表面活性提高，从而有助于蛋白质吸附到油水界面。
[0107]
本发明以果糖、葡聚糖和麦芽糊精为诱导物，对紫苏蛋白进行改性，通过美拉德反应生成糖基化产物。与psmp相比，糖基化产物的溶解性、热性能、起泡性、乳化性和持油力均得到显著提高，其中葡聚糖糖基改性产物p-dex表现出更加显著的起泡性和乳化性。sem的微观结构分析也进一步证实psmp和三种糖类的改性接枝，傅里叶红外和内源荧光光谱分析表明，蛋白质糖基化会改变蛋白质空间结构，为进一步阐明紫苏蛋白糖基化改性构效关系提供了依据。研究结果可为紫苏蛋白的合理开发和应用提供新思路，为紫苏蛋白的增值利用提供一定的理论依据和技术支撑。
[0108]
综上所述，本发明公开了一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，以果糖(fru)、葡聚糖(dex)和麦芽糊精(md)三种不同分子量的糖为诱导物，采用湿热法对紫苏蛋白(psmp)进行改性，制备三种不同的紫苏蛋白糖基化产物。本发明方法简单快捷，使用添加糖类改善紫苏蛋白的溶解性和乳化性，不仅为紫苏蛋白的市场应用提供新途径，也为糖类广泛应用增添新思路。该方法制备流程时间短、耗能少并且步骤简单，有效的解决了紫苏蛋白溶解性和乳化性较差的问题，具有很好的经济和社会效益。
[0109]
以上所述，仅为本技术的最优具体实施方式，但本技术的保护范围并不局限于此，任何在本技术揭露的技术范围内的变化或替换，都应涵盖在本技术的保护范围之内。因此，本技术的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

技术特征：
1.一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，其特征在于，所述糖基化方法包括以下步骤：将一定量的紫苏蛋白(psmp)溶解于水中，搅拌至彻底溶解，得到第一溶液；将一定量的糖加入所述第一溶液中，调节ph，搅拌至彻底溶解，得到第二溶液；将所述第二溶液在一定条件下水合一段时间，得到第三溶液；将所述第三溶液置于水浴锅中进行水浴一段时间，得到第四溶液；将所述第四溶液冷却至室温，进行离心，取上清液干燥成粉末，得到紫苏蛋白糖基化产物。2.根据权利要求1所述的糖基化方法，所述将所述第三溶液置于水浴锅中加热一段时间之前，其特征在于，还包括：对所述第三溶液进行搅拌，直至所述第三溶液的温度达到室温。3.根据权利要求1所述的糖基化方法，其特征在于：所述第一溶液中，所述紫苏蛋白的浓度为20-60mg/ml。4.根据权利要求1所述的糖基化方法，其特征在于：所述第二溶液中，所述糖(w/v)为1-5％，且所述第二溶液的ph为8-12，所述糖选用果糖(fru)、葡聚糖(dex)或麦芽糊精(md)。5.根据权利要求1所述的糖基化方法，所述将所述第二溶液在一定条件下水合一段时间，其特征在于，具体为：将所述第二溶液放入冰箱内，在4℃的温度下水合，水合时间为10-14h。6.根据权利要求1所述的糖基化方法，其特征在于：所述第三溶液水浴温度为60-100℃，时间为20-60min。7.根据权利要求1-6任一所述的糖基化方法，所述将所述第四溶液冷却至室温，进行离心，取上清液干燥成粉末，其特征在于，具体为：将所述第四溶液在冰水浴中冷却至室温，在4000r/min的条件下进行离心30min，取上清液进行冷冻干燥、喷雾干燥或者真空干燥。8.根据权利要求7所述的糖基化方法，其特征在于：所述搅拌包括磁力搅拌。9.根据权利要求8所述的糖基化方法，其特征在于，所述糖基化方法包括以下步骤：将一定量的紫苏蛋白(psmp)溶解于水中，搅拌至彻底溶解，得到紫苏蛋白的浓度为40mg/ml的第一溶液；将一定量的糖加入所述第一溶液中，调节ph为10，通过磁力搅拌30min直至所述糖彻底溶解，得到所述糖(w/v)为3％的第二溶液；将所述第二溶液放入冰箱内，在4℃的温度下水合，水合时间为12h，得到第三溶液；将所述第三溶液置于水浴锅中进行水浴，水浴温度为80℃，时间为40min，得到第四溶液；将所述第四溶液在冰水浴中冷却至室温，在4000r/min的条件下进行离心30min，取上清液进行冷冻干燥，制备成粉末，得到紫苏蛋白糖基化产物。

技术总结
本发明公开了一种提高紫苏蛋白溶解性和乳化性的糖基化方法，以果糖(FRU)、葡聚糖(DEX)和麦芽糊精(MD)三种不同分子量的糖为诱导物，采用湿热法对紫苏蛋白(PSMP)进行改性，制备三种不同的紫苏蛋白糖基化产物。本发明方法简单快捷，使用添加糖类改善紫苏蛋白的溶解性和乳化性，不仅为紫苏蛋白的市场应用提供新途径，也为糖类广泛应用增添新思路。该方法制备流程时间短、耗能少并且步骤简单，有效的解决了紫苏蛋白溶解性和乳化性较差的问题，具有很好的经济和社会效益。很好的经济和社会效益。很好的经济和社会效益。


技术研发人员：李会珍 张志军 王丹
受保护的技术使用者：中北大学
技术研发日：2023.04.03
技术公布日：2023/8/4