一种醋酸戈舍瑞林缓释微球及其制备方法和用途与流程

1.本发明涉及药物缓释领域，具体地涉及一种醋酸戈舍瑞林缓释微球及其制备方法和用途。


背景技术：

2.醋酸戈舍瑞林，是一种天然促性腺激素释放激素(gnrh)的合成类似物，较长时间使用可抑制脑垂体促黄体生成素的合成，引起男性血清睾酮、女性血清雌二醇下降，于停药后可恢复。目前，研发的植入剂适用于可用激素治疗的绝经前期及围绝经期妇女的乳腺癌、适用于可用激素治疗的男性前列腺癌，是前列腺癌药物去势治疗的主要选择之一。其还可用于缓解女性子宫内膜异位症的症状，包括减轻疼痛并缩小子宫内膜异位病灶。
3.通过生物可降解材料高分子聚合物作为骨架材料，将戈舍瑞林药物包裹成微球，可以作为一种缓控释制剂进行制备。醋酸戈舍瑞林常见的制备技术有乳化液挥发法、喷雾干燥法、相分离法等。
4.例如，中国专利申请cn104840429a公开了一种醋酸戈舍瑞林微球的制备方法，包括以下步骤：将醋酸醋酸戈舍瑞林加水配成药物溶液a；将plga加有机溶剂配成溶液b；将溶液a和溶液b混合超声形成初乳，初乳加入到用有机混合溶剂饱和过的pva水溶液中，均质乳化得复乳；将复乳室温搅拌1小时后升温至40℃-45℃保持1小时，再降温至10℃，过筛收集颗粒，冻干。
5.再例如，中国专利申请cn104910257a公开了一种醋酸戈舍瑞林的固相合成方法，包括：采用hbtu/dipea作为缩合体系，依次偶联fmoc-ser-oh、fmoc-trp-oh；将全保护裂解液按树脂重量的10倍加入相应体积的量将中间产物中的载体2-ctc resin去除，但保留所有侧链保护基；将全保护裂解液用dipea调成偏碱性并将盐酸氨基脲和pybop加入全保护裂解液中进行反应偶联，得到保留侧链保护基的戈舍瑞林肽溶液；将20％tfa/dcm的裂解液加入冰冻的乙醚中沉降获得白色固体粗肽；将白色固体粗肽真空抽干用甲醇溶解，加入甲酸铵和pa/c进行氢化反应去除肽序中侧链保护基。
6.上述制备方法得到的戈舍瑞林微球能够实现可持续释药。但是，微球均一性，载药量与包封率仍有待提高，同时上述方法也存在制备工艺复杂的问题。此外，目前仍需要解决现有制备方法得到的微球在释药过程中易产生突释现象的问题。


技术实现要素：

7.针对现有技术中存在的至少部分技术问题，发明人进行了深入研究，发现通过某些表面活性剂与戈舍瑞林结合后分散于脂溶性高分子聚合物中，同时采用特定制备方法能够得到具有优异缓释效果的醋酸戈舍瑞林缓释微球。具体地，本发明包括以下内容。
8.本发明的第一方面，提供一种醋酸戈舍瑞林缓释微球，其包括：1-50重量份的醋酸戈舍瑞林，0.01-2重量份的表面活性剂硬脂酸甘油单酯，15-200重量份的聚丙交酯和10-30重量份的药学上可以接受的辅料。
9.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球，其中，所述微球的粒径范围为1-150μm。
10.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球，其中，所述辅料包括甘露醇。
11.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球，其中，所述醋酸戈舍瑞林能够在超过90天的时间内释放，从而实现所述醋酸戈舍瑞林的缓释。
12.本发明的第二方面，提供第一方面所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其包括以下步骤：
13.(1)将醋酸戈舍瑞林与水混合，向其中加入表面活性剂硬脂酸甘油单酯溶解后，在液氮中迅速冷冻，随后进行冷冻干燥处理，得到结合体；
14.(2)使聚丙交酯高分子聚合物溶于有机溶剂，向其中加入所述结合体并搅拌溶解，得到混合物；
15.(3)对所述混合物进行雾化干燥，然后去除所述有机溶剂，添加药学上可接受的辅料混合进行冻干处理，得到所述醋酸戈舍瑞林缓释微球。
16.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其中，所述醋酸戈舍瑞林能够在超过90天的时间内释放，从而实现所述醋酸戈舍瑞林的缓释。
17.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其中，所述聚丙交酯高分子聚合物的粘度为0.15-0.25dl/g。
18.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其中，进行雾化干燥的物料进气压力为0.1-2.0mpa，进气速度2-150m3/min，物料流速20-200ml/min，进风温度为30-80℃。
19.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其中，步骤(1)处理后的醋酸戈舍瑞林粒径为0.1-1μm。
20.在某些实施方案中，根据本发明所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其中，所述微球的粒径范围为1-150μm。
21.本发明的第三方面，提供本发明第一方面所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球在制备用于治疗或改善性激素相关疾病的治疗剂中的用途。
22.本发明的技术效果包括：
23.(1)本发明对处方条件和制备工艺进行重现，制备了不同批次样品，比较了其理化性质，并验证了本发明的制备工艺的重现性。通过测定各批次微球载药量，包封率，释放度，稳定性等，对制备出微球的质量进行了评价，发现本发明的工艺条件制备出的微球理化性质稳定，质量优良，制备方法可靠。
24.(2)本发明对制备出的微球进行释放度、载药量、粒度、大鼠睾酮实验，结果表明其与原研醋酸戈舍瑞林微球一致，与以复乳法制备出的醋酸戈舍瑞林高分子聚合物pla微球(如原研诺雷得)相比，本发明中所制备微球极大地改善了药物的突释效应，提高了药品回收率。
25.(3)本发明解决了目前微球类药物由于多是蛋白质类大分子而易发生降解产生杂质，从而影响微球质量的缺陷。
26.(4)本发明中所制备出的微球，经过长期稳定性试验，理化性质基本稳定，微球的
外观形态，粒径分布等均没有受到影响。载药量保持稳定，戈舍瑞林微球含量没有太大改变，有关物质均符合限度要求，且稳定释放3个月及以上，符合释放度要求。
附图说明
27.图1为本发明的醋酸戈舍瑞林缓释微球的释放曲线。
28.图2-4为示例性的醋酸戈舍瑞林缓释颗粒的电镜图。
具体实施方式
29.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
30.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
31.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。
32.制备方法
33.本发明的一个方面，提供醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，本文有时也简称为“本发明的制备方法”，其为采用速冻混合冻干加喷雾干燥的方法。具体地，本发明的制备方法至少包括步骤(1)-(3)，下面进行详细说明。
34.本文中使用的术语“聚乳酸”或“聚丙交酯”或“pla”是可互换地使用，并且指的是包括得自乳酸的重复单元的聚(乳酸)聚合物。
35.本发明的制备方法中，物料比直接影响微球成型和微球释放度，由此制备得到的醋酸戈舍瑞林缓释微球的载药量、包封率高，药物释放适宜。优选地，基于制备缓释微球的原料总重量，醋酸戈舍瑞林为1-50重量份，表面活性剂硬脂酸甘油单酯为0.01-2重量份，高分子聚合物聚丙交酯为15-200重量份，药学上可接受的辅料为10-30重量份。还优选地，基于制备缓释微球的原料总重量，醋酸戈舍瑞林为5-30重量份，表面活性剂硬脂酸甘油单酯为0.7-1.5重量份，高分子聚合物聚丙交酯为45-180重量份，药学上可接受的辅料为10-15重量份。例如，基于制备缓释微球的原料总重量，醋酸戈舍瑞林为5重量份、8重量份、10重量份、12重量份、14重量份、16重量份、18重量份、20重量份、25重量份、30重量份；表面活性剂硬脂酸甘油单酯为0.7重量份、0.8重量份、0.9重量份、1.0重量份、1.2重量份、1.5重量份；高分子聚合物聚丙交酯为45重量份、80重量份、100重量份、120重量份、140重量份、160重量份、180重量份；药学上可接受的辅料为10重量份、11重量份、12重量份、13重量份、14重量份、15重量份，或上述数值范围内的任意数值。
36.本发明中，聚丙交酯的特性粘度会影响所制备微球的粒径、载药量和包封率，从而
影响药物缓释效果。本发明通过大量实验，发现所使用的聚丙交酯的粘度为0.15-0.25dl/g，优选0.15-0.24dl/g，例如0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24dl/g具有优异的缓释效果，而粘度值超过上述范围(例如pla3a的粘度为0.25-0.35dl/g，pla4a的粘度更大)则会影响缓释效果。特性粘度的测量可以采用本领域已知的粘度测量仪器进行测定，例如使用iv8000x系列全自动在线稀释型乌氏粘度仪进行测定。本发明中，聚丙交酯的黏均分子量不特别限定，可以为5000-70000，例如5000、7000、9000、10000、20000、40000、60000、70000，或上述数值范围内的任意数值。
37.本发明的步骤(1)为醋酸戈舍瑞林精细化处理的步骤。该步骤与传统方法中使用醋酸戈舍瑞林溶液的方法不同，本发明的精细化处理手段包括使醋酸戈舍瑞林与表面活性剂的水溶液在低温下迅速冷却冻干，然后进行真空条件下干燥，最终得到颗粒。该颗粒中，醋酸戈舍瑞林与表面活性剂形成结合体。该结合体粒径为1-3μm，例如1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm。
38.本发明发现通过该步骤进行精细化处理后得到的颗粒，粒径在0.1-5微米之间，优选0.1-1μm，更优选0.1-0.9μm，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9μm的颗粒，此类粒径的颗粒能够很好地达到本发明所需的分散程度，进一步有利于药物缓释。
39.本发明的步骤(1)中，醋酸戈舍瑞林在水溶液中的浓度(g/ml)一般在0.5-50g/ml，优选0.6-10g/ml，还优选0.8-5g/ml，例如0.8、0.9、1、2、3、4、5g/ml。迅速冷却冻干(冷冻)的温度一般在-50℃以下，优选-60℃以下，更优选-70℃以下，例如-78℃。迅速冷却冻干是指醋酸戈舍瑞林和特定表面活性剂的水溶液经液氮处理的时间小于0.5h，优选小于20min，例如5s、10s、15s、30s、1min、5min、10min、15min、20min。与步骤(1)中迅速冷冻干燥处理不同的是，本发明还探究了在步骤(1)中使用非迅速冷冻干燥处理条件，即常规冷冻干燥下的药物缓释效果，其中常规冷冻干燥是指醋酸戈舍瑞林和特定表面活性剂的水溶液在冻干机中以高于-40℃，例如-30℃、-25℃、-20℃的温度处理一段时间，并且处理时间不低于0.5h，例如不低于1h、2h、3h。
40.本发明步骤(1)中使用的表面活性剂硬脂酸能够实现在水相中与醋酸戈舍瑞林结合，同时与接下来使用的脂溶性高分子聚合物结合。本发明通过实验发现特定表面活性剂具有优异的缓释效果，尤其是硬脂酸甘油单酯相较于其他表面活性剂，如脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵和卵磷脂在根据本发明的方法所制备的微球中具有优异的药物缓释效果。
41.本发明中，步骤(2)是将步骤(1)得到的结合体进一步与脂溶性高分子聚合物进行结合。在分散结合体之前，脂溶性高分子聚合物在有机溶液中的浓度(g/ml)需控制在0.05-10g/ml，优选0.08-5g/ml，还优选0.15-5g/ml，例如0.15、0.20、0.25、0.30、0.36、1、2、3、4、5g/ml。本发明发现在该浓度下醋酸戈舍瑞林与表面活性剂的结合体处于悬浮状态，从而更有利于所述结合体充分良好的分散。
42.本发明中，脂溶性高分子聚合物的孔隙不特别限定，只要其具有孔隙即可。本发明的孔隙特征包括孔隙率和孔隙大小，孔隙率和孔隙大小可根据实际需要进行调整，对此不特别限定。
43.本发明的制备方法中，用于溶解脂溶性高分子聚合物的溶剂不特别限定，可使用已知的溶剂，其实例包括但不限于氯化物溶剂、醇溶剂、四氢呋喃、丙酮和乙酸乙酯，氯化物溶剂优选为二氯甲烷。本发明可使用上述溶剂中的一种，也可以使用上述溶剂中的两种以
上的组合。
44.在步骤(2)中，优选地，在震荡和超声条件下进行分散，从而提高分散效果。震荡和超声的具体条件不特别限定，可由本领域技术人员自由设定，优选进行间歇性超声，从而防止温度过高。在示例性实施方案中，本发明使用超声波细胞粉碎机对混悬液进行粉碎操作，功率200瓦，超声20s间歇20s，工作10min。在另外的示例性实施方案中，使用混悬仪进行震荡，例如在混悬仪上进行高速混选20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混选3次后25℃振摇过夜。还优选地，在密封条件下进行步骤(2)，从而防止溶剂的过度挥发。
45.本发明中，步骤(3)为通过喷雾干燥进行混合物的雾化干燥处理，去除有机溶剂后与药学上可接受的辅料进行冻干处理。雾化干燥可以采用本领域已知的设备进行，例如喷雾干燥机。喷雾干燥时的进风温度在30-80℃之间，进风温度可以根据不同有机溶剂进行调整。优选地，有机溶剂为二氯甲烷时的进风温度为30-55℃，有机溶剂为丙酮时的进风温度为40-80℃，有机溶剂为乙酸乙酯时的进风温度为38-60℃。更优选地，有机溶剂为二氯甲烷时的进风温度为45℃、有机溶剂为丙酮时的进风温度为68℃、有机溶剂为乙酸乙酯时的进风温度为57℃。本发明通过研究发现，在此条件下干燥的颗粒在收集、除有机溶剂和分散时最优。
46.此外，喷雾干燥时物料进气压力为0.1-2.0mpa，更为优选的喷雾压力为0.4mpa。喷雾干燥机进气速度为2-150m3/min，更为优选的进气速度为4m3/min。喷雾干燥机物料流速20-200ml/min，更为优选的速度为180ml/min。
47.本发明的步骤(3)中，在低温、负压下使得到的雾化干燥后的产物进一步从中除去残留有机溶剂。在示例性实施方案中，使用冻干机对浓缩液进行减压干燥处理，使样品中溶剂，例如二氯甲烷挥发，从而使其呈发泡状态，减压干燥所需的时间一般为10-30小时，优选15-25小时，例如24小时。
48.待有机溶剂去除完毕后，加入辅料的水溶液进行冻干处理。除非另有说明，否则本文提到的低温、冻干处理均可使用本领域已知的冻干设备，例如冻干机进行程序冻干。基于重量百分比，辅料在水溶液浓度为10-22％，优选为12-20％，还优选为12-18％，进一步优选为12-16％。术语“药学上可接受的辅料”指的是药学上可接受的材料、组合物或载体，如稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料，且该类药学上可接受的辅料参与将药剂从一个器官或身体的某一部位运载或运送至另一个器官或身体的另一部位。每种辅料必须是“可接受的”，即指其与配方的其他成分相容且不损害患者。在某些实施方案中，药学上可接受的辅料为多元醇，如甘露醇。本发明的微球制备中甘露醇的浓度范围是重要的，本文提及的浓度范围有利于使制备出的颗粒形态良好，确保体外药物释放良好。
49.本领域技术人员应理解，在上述步骤(1)-(3)前后，或这些任意步骤之间还可包含其他步骤或操作，例如进一步优化和/或改善本发明所述的方法。
50.经试验发现，本发明制备得到的醋酸戈舍瑞林颗粒理化性质基本稳定，微球的外观形态，粒径分布等均没有受到影响。载药量保持稳定，戈舍瑞林微球含量没有太大改变，有关物质均符合限度要求。90天时累积释放度高于90％，符合释放度要求。
51.醋酸戈舍瑞林缓释微球
52.本发明的另一方面方面，提供一种醋酸戈舍瑞林缓释微球，其根据本文所述的制备方法得到，其中，所述醋酸戈舍瑞林缓释微球包含1-50重量份的醋酸戈舍瑞林，0.01-2重
量份的表面活性剂硬脂酸甘油单酯，15-200重量份的聚丙交酯和10-30重量份的药学上可以接受的辅料。
53.优选地，本发明的所述缓释微球的粒径范围为1-150μm。所述缓释微球的平均粒径范围为10-50μm，优选15-50μm，更优选平均粒径范围为25-45μm。本发明的粒径是指通过粒度仪测定的值。
54.本发明醋酸戈舍瑞林缓释微球的示例性的施用方式包括植入或半植入、皮下注射、肌肉注射或静脉注射等。
55.用途
56.本发明的第三方面，提供醋酸戈舍瑞林缓释微球在制备用于治疗或改善性激素相关疾病的治疗剂中的用途。
57.本发明的治疗剂包含醋酸戈舍瑞林缓释微球和药学上可接受的辅料。本发明的醋酸戈舍瑞林缓释微球与现有缓释药物不同，其含有更低量，或基本上不含亲水性非活性成分，并且脂溶性高分子聚合物具有多孔结构或更高的孔隙率。
58.此外，本发明的醋酸戈舍瑞林缓释微球的组分存在相互作用关系，影响药物的缓释效果。例如，甘露醇的含量过低或过高时均倾向于引起副作用，例如在注射时引起溶血、水肿或疼痛感等。再例如，在醋酸戈舍瑞林含量过高时，会引起药物释放过快，特别是在施药早期更容易引起不良反应。此外，本发明的醋酸戈舍瑞林缓释微球中，物料比直接影响微球成型和微球释放度。例如，当醋酸戈舍瑞林投料量少时，载药量低，90天内累计释放度较低。当醋酸戈舍瑞林投料量过高，载药量达峰值后不再增加，包封率开始降低。
59.与传统醋酸戈舍瑞林缓释微球不同，本发明的醋酸戈舍瑞林缓释微球中脂溶性高分子聚合物为多孔性颗粒，孔隙率高，传统缓释微球制备时需将亲水药物溶于水相，本发明的组合物虽然使用亲水相来制备颗粒，但通过特定的冻干处理以及干燥，使得亲水物质的含量相对更少，甚至不含亲水物质，因此采用本发明的方法得到的颗粒具有改善的药物释放特性。优选地，亲水物质(水)占微球总重量的2％以下，还优选1％以下，进一步优选0.05％以下，如0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％以下。同时发明人还发现，通过本发明的方法得到的颗粒仍然具有优异的缓释特性，其原因可能在于脂溶性高分子聚合物为多孔结构，在将醋酸戈舍瑞林通过表面活性剂与脂溶性高分子聚合物结合，增强了醋酸戈舍瑞林的释放速率。
60.本发明中，用于醋酸戈舍瑞林缓释微球的治疗剂可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物，对此不特别限定。
61.本发明中，性激素相关疾病包括但不限于子宫内膜异位症、子宫肌瘤、乳腺癌、前列腺癌、中枢性性早熟症等。
62.实施例1
63.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，二氯甲烷500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥
机，风速4m3/min，温度45℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
64.实施例2
65.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，丙酮500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度68℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
66.实施例3
67.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，乙酸乙酯500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度57℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
68.对照例1
69.取戈舍瑞林20g(10％)至1000ml西林中加纯化水200ml置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，二氯甲烷500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度45℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
70.对照例2
71.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后至冻干机中冷冻0.5-3h完全冻结后干燥(非速冻处理)。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，二氯甲烷500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度45℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
72.对照例3
73.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，丙酮500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度68℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
74.对照例4
75.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入卵磷脂1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2a)180g(90％)，乙酸乙酯500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度57℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
76.对照例5
77.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(3a)180g(90％)，二氯甲烷500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度45℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
78.对照例6
79.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(4a)180g(90％)，二氯甲烷500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度45℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
80.对照例7
81.取戈舍瑞林20g(100％)至100ml西林中加纯化水20ml充分溶解，再加入硬脂酸甘油单酯1g置振荡器震荡溶解后在液氮中迅速冷却结冰，迅速冷却时间小于20min，至冻干机
中冷冻干燥。向西林瓶中加入高分子聚合物pla(2.5a)180g(90％)，二氯甲烷500ml，密封塞封口，至混悬仪上高速混悬20min，转速7500rpm，冷却30min，重复混悬3次。提前设置喷雾干燥机，风速4m3/min，温度45℃，喷嘴压力0.4mpa，通针频率10次每分钟，预热半小时后开始喷料，喷料速度180ml/min，喷雾干燥结束后收集微球至冻干盘中，放入冻干机，在低温下负压除去残留有机溶剂，待有机溶剂清除完毕后加入甘露醇水溶液1l(15％)搅拌均匀，放入冻干机程序冻干，微球制备完毕。
82.表1实施例1-3以及对照例1-7中的微球制备组分及参数设置
[0083][0084]
测试例
[0085]
1.含量测定
[0086]
按照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录
ⅴ
d)测定。
[0087]
1.1色谱条件与系统适用性试验
[0088]
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(wakosil
‑ⅱ
3c
18
ar，50
×
4.6mm，3μm)；以三乙胺溶液(取三乙胺15.2g，加水800ml使溶解，用磷酸调节ph值至3.0，加水至1000ml，摇匀)-[乙腈-正丙醇(3：2)](17：3)为流动相，调节流速使醋酸戈舍瑞林峰的保留时间约为22分钟，检测波长为220nm，理论板数按醋酸戈舍瑞林峰计算应不低于4000。取醋酸戈舍瑞林对照品50mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；量取5ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；取5ml加1mol/l氢氧化钠溶液100μl，强烈振摇，置100℃烘箱中加热60分钟，迅速冷却，加稀磷酸50μl，强烈振摇，放至室温后，量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为(2-d-组氨酸)戈舍瑞林(约19分钟)和醋酸戈舍瑞林(约22分钟)，二者的分离度应不小于1.2。
[0089]
1.2测定法
[0090]
取装量差异项下混合均匀的内容物约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取醋酸戈舍瑞林对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
[0091]
1.3二氯甲烷残留
[0092]
取本品约0.45g，精密称定，置5ml量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取二氯甲烷适量，精密称定，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中含3.25μg的溶液，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法(中国药典2010年版二部附录viiip第三法)测
定。用聚乙二醇600为固定相，涂布浓度为20％，柱温为40℃，理论板数按二氯甲烷峰计算应不低于600。精密量取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别注入气相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含二氯甲烷不得过0.0033％。
[0093]
2.释放方法及检测方法
[0094]
分别取本品0.1g，精密称定，分别置于内容量为120ml的6个玻璃容器中，精密加入(使用经校正后的分注器)预先加热至48℃的溶出介质(取聚乙烯醇20g，加入800ml热水中，加热并搅拌使聚乙烯醇溶解后，加水至1000ml，作为溶液a。取聚山梨酯8010g，加水溶解使成1000ml，作为溶液b。取乳酸9g，加水溶解使成1000ml，作为溶液c。量取溶液a200ml、溶液b100ml和溶液c200ml，充分混匀后，加水至1000ml，摇匀)100ml，用胶栓密塞，用铝盖封盖，立即振摇使混悬，各容器以横倒状态固定，将其浸于48℃
±
1℃的水浴中，水平方向的振荡幅度约4cm，以每分钟125次振荡速度进行振荡，在振荡后的1-15天取样，用附有注射针(0.65
×
25mm)的注射器通过胶栓由各容器抽取混悬液1ml(如混悬液中的内容物沉降时，振荡均匀分散后抽取)，将混悬液立即离心(转速为3000转/分)10分钟，取上清液作为供试品溶液，照含量测定项下的方法，同法测定，计算释放量。结果如表2所示。
[0095]
表2测试结果
[0096][0097]
释放曲线结果如图1所示，醋酸戈舍瑞林缓释颗粒的电镜图如图2-4所示。
[0098]
3.动物实验
[0099]
3.1动物与给药
[0100]
选6只雄性成年鼠(wistar或sprague-dawley)，分为两组，每组3只，按给药体积为0.05ml/100g，分别肌内注射给药1瓶，各组应在5分钟之内完成给药，以避免悬浮液中有沉淀生成。
[0101]
3.2样品的采集与储存
[0102]
于注射后24小时采血，然后每周采血12次，连续3个月(90天)。将动物轻度麻醉后，取静脉血0.5ml，制备血清待测(血清样品使用前冷冻保存)。
[0103]
3.3放射免疫测定法
[0104]
使用放射免疫分析法测定每个时间点血清样品中睾酮的浓度(ng/ml)。最后三个
时间点，每个时间点的平均值均不得过1ng/ml。结果如表3所示。
[0105]
表3动物实验结果
[0106][0107][0108]
尽管本发明已经参考示例性实施方案进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的示例性实施方案做多种调整或变化。权利要求的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。

技术特征：
1.一种醋酸戈舍瑞林缓释微球，其特征在于，包括：1-50重量份的醋酸戈舍瑞林，0.01-2重量份的表面活性剂硬脂酸甘油单酯，15-200重量份的聚丙交酯和10-30重量份的药学上可以接受的辅料。2.根据权利要求1所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球，其特征在于，所述微球的粒径范围为1-150μm。3.根据权利要求2所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球，其特征在于，所述辅料包括甘露醇。4.根据权利要求3所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球，其特征在于，所述醋酸戈舍瑞林能够在超过90天的时间内释放，从而实现所述醋酸戈舍瑞林的缓释。5.根据权利要求1-4任一项所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将醋酸戈舍瑞林与水混合，向其中加入表面活性剂硬脂酸甘油单酯溶解后，在液氮中迅速冷冻，随后进行冷冻干燥处理，得到结合体；(2)使聚丙交酯高分子聚合物溶于有机溶剂，向其中加入所述结合体并搅拌溶解，得到混合物；(3)对所述混合物进行雾化干燥，然后去除所述有机溶剂，添加药学上可接受的辅料混合进行冻干处理，得到所述醋酸戈舍瑞林缓释微球。6.根据权利要求5所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其特征在于，所述聚丙交酯高分子聚合物的粘度为0.15-0.25dl/g。7.根据权利要求6所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其特征在于，进行雾化干燥的物料进气压力为0.1-2.0mpa，进气速度2-150m3/min，物料流速20-200ml/min。8.根据权利要求7所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其特征在于，步骤(1)处理后的醋酸戈舍瑞林粒径为0.1-1μm。9.根据权利要求6所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球的制备方法，其特征在于，进行雾化干燥的进风温度为30-80℃。10.根据权利要求1-4任一项所述的醋酸戈舍瑞林缓释微球在制备用于治疗或改善性激素相关疾病的治疗剂中的用途。

技术总结
本发明公开一种醋酸戈舍瑞林缓释微球及其制备方法和用途。该缓释微球包括：1-50重量份的醋酸戈舍瑞林，0.01-2重量份的表面活性剂硬脂酸甘油单酯，15-200重量份的聚丙交酯和10-30重量份的药学上可以接受的辅料。本发明所制备的微球与原研醋酸戈舍瑞林一致，与以复乳法制备出的戈舍瑞林高分子聚合物PLA微球相比，本发明中所制备微球极大地改善了药物的突释效应，提高了药品回收率，同时稳定释放90天及以上，符合释放度要求。符合释放度要求。符合释放度要求。


技术研发人员：郭光明 王玉霞 李志刚
受保护的技术使用者：北京博恩特药业有限公司
技术研发日：2023.03.30
技术公布日：2023/8/4